Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine expérimental de l’AVC, telles que la façon de réduire associé à ces modèles, et comment améliorer la reproductibilité. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet la re-perfusion via l’artère carotide commune, et ne dépend donc pas du cercle de Willis, qui peut varier anatomiquement entre les animaux, et peut donc contribuer à la variabilité observée dans les mesures expérimentales des résultats. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car les étapes de réparation des navires de la CCA sont difficiles à apprendre en raison de la difficulté technique qu’implique l’utilisation du mcellant pour s’assurer que la CCA est entièrement brevetée, après réparation.
Pour commencer, préparez et anesthésiez la souris selon le protocole de test. Ensuite, utilisez une lame de scalpel numéro 15 pour faire une incision de 1,5 cm en milieu de ligne sur le cou ventral exposé. En utilisant des techniques de dissection émoussée, rétractez doucement les glandes salivaires sur le côté, pour exposer la trachée.
Puis disséquer l’artère carotide commune, ou CCA, libre du tissu environnant et du nerf vagal. Après cela, passer deux petites sections d’une suture non insoluble 6-0 en dessous de la CCA, dorsale à la CCA, et ventral au nerf vagal. Dessinez une cravate en soie plus près du chirurgien et attachez-la lâchement autour du CCA.
Attachez ensuite lâchement une deuxième cravate en soie vers la bifurcation des artères carotides internes et externes. Ensuite, appliquez un clip microvasculaire juste au-dessus de la cravate distale, en veillant à ce que la bifurcation ne soit pas obstruée. Utilisez des ciseaux veineux micro pour faire un petit trou dans le CCA.
Insérez un micro filament en silicone 7-0 dans le CCA, et avancez-le vers le clip microvasculaire. Serrez ensuite la cravate distale pour attacher le filament en place. Et utilisez des supports de clip pour enlever le clip microvasculaire.
Ensuite, avancez le filament dans l’artère carotide interne, ou ICA. Une fois que la tête de filament passe la cravate distale, tirez la cravate plus serrée, pour empêcher la perte de sang. À l’aide de la cravate en soie distale, soulevez et tirez le CCA vers le côté extérieur du corps de la souris, et dirigez le filament vers le virage, après l’ouverture de l’artère pterygopalatine, ou PPA.
Une fois que le filament est en place, fixez-le en serrant davantage la cravate en soie distale. À la fin de la période MCAO, rétractez le filament jusqu’à ce que la tête de filament blanc soit clairement visible. Ensuite, desserrez la cravate distale CCA juste assez pour enlever la tête de filament la plupart du chemin, hors du navire.
Ensuite, retirez complètement la tête de filament du navire. Après cela, placez un clip microvasculaire en position horizontale, vers la bifurcation CCA, et à côté de la cravate distale. Ensuite, placez un autre clip sous la cravate proximale CCA, vers le chirurgien.
Utilisez soigneusement dumont 5 forceps pour enlever les deux cravates de soie. Et séchez la zone à l’aide de bourgeons de coton stériles. Ajouter ensuite les solutions de scellant Fibrinogen et Thrombin une et deux, dans une boîte de Pétri stérile.
En utilisant des ciseaux veineux micro et la technique de dissection émoussée, obtenir une mince tranche ventrale de muscle sternocleidomastoid. Ensuite, à l’aide de Dumont 5 forceps, prenez la garniture de tissu et mélangez-la uniformément à travers les solutions de scellant de Fibrinogen et de Thrombin. Ici, il est important de s’assurer que la garniture de tissu est assez grande pour couvrir l’incision de CCA.
Et une fois qu’il est mélangé entre les deux solutions, il doit être immédiatement placé sur l’incision, pour empêcher la surcoagulation et une mauvaise adhérence. Une fois mélangé entre les deux solutions, enlever le tampon de tissu à l’incision CCA. Placez la garniture de tissu à plat vers le bas sur l’incision avec la pression moyenne, et les forceps ouverts.
Retirez rapidement le clip microvasculaire distal, tout en maintenant le tampon de tissu en place. Ensuite, lentement soulager la pression de la garniture de tissu, permettant au sang de couler sous la zone d’incision. Maintenant, relâchez lentement et doucement la pression du clip microvasculaire proximal, puis retirez complètement.
L’enlèvement du clip supérieur permet à une petite quantité de sang d’activer le scellant. Une libération régulière du clip distal permet une augmentation progressive de la pression au site d’incision, l’activation plus loin et aider à prévenir une réparation échouée. Enfin, une fois que le navire est scellé, suture de la plaie avec des sutures insolubles 6-0.
Dans ce protocole, l’occlusion cérébrale moyenne d’artère, ou MCAO, a été exécutée sur 24 souris mâles adultes. Un évitement de la ligature d’ECA et de l’addition de l’analgésie a montré une tendance vers la perte de poids réduite à 48 heures après MCAO. Cinq minutes après l’enlèvement de filament, le flux sanguin cérébral régional a sensiblement augmenté dans la région de cerveau du MCA.
La perfusion a été maintenue jusqu’à la réparation du navire, avec une augmentation de la perfusion vers le territoire de la MCA, après la réparation des navires de la CCA. Ceci suggère que la réparation de CCA a permis la perfusion accrue de sang au territoire ischémique, comparée à la dépendance sur le cercle de Willis seul. Une IRM pondérée T2 a été utilisée pour déterminer les balayages totaux de LV et de DTI ont été employées pour déterminer le LV de noyau à 48 heures après MCAO.
Il n’y avait pas de différence significative entre ces deux groupes. Fait intéressant, il est intéressant de noter qu’une variabilité pour le VV total et le VV de base a été considérablement réduite dans le groupe de réparation de l’ACC. Notre analyse a indiqué que moins d’animaux par groupe de traitement seraient nécessaires pour démontrer une réduction de 30% de LV, suivant MCAO, utilisant la réparation de CCA, par rapport à la procédure ligature typique de CCA.
Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de s’assurer que le paquet de tissu est de taille suffisante pour couvrir l’incision cca. En outre, la vitesse est importante, pour empêcher le scellant sur-coagulant, avant de placer la garniture sur le CCA.
