Cette étude a été financée par une subvention d&#39;équipe des IRSC CTP # 82946, une subvention des IRSC # 102741 MOP, ainsi que d&#39;une chaise # 216684 Canada et la Fondation Strauss. ER a été soutenue par une bourse de recherche du cœur du Canada et la Fondation des maladies.

Occlusion transitoire Artère cérébrale moyenne (MCAO) 1. Procédure chirurgie (Figure 1) Occlusion transitoire de l&#39;artère cérébrale moyenne (tMCAO) est réalisée sur 2 - à 3 mois mâle C57BL / 6 souris (22-28g). Ce protocole a été approuvé par le soin des animaux de bioéthique de l&#39;IRCM comité. Outils chirurgicaux sont stérilisés par autoclavage (121 ° C à 15 psi pendant 60 minutes). Entre chaque animal, ils ont été stérilisés à l&#39;aide de la chaude stérilisateur à billes (15 sec). Table d&#39;opération et d&#39;autres équipements sont désinfectés à l&#39;aide d&#39;éthanol à 70%. Deux heures avant la chirurgie, les souris ont été analgesized avec la buprénorphine (0,03 mg / kg BWIP). Figure 1A. <ol><li> Profondément anesthésier les souris avec l&#39;isoflurane 5%, puis de maintenir l&#39;anesthésie à l&#39;isoflurane 2,5%. Température corporelle des souris est maintenue constante au cours de la chirurgie avec un coussin chauffant. </li><li> Désinfecter la fourrure et skdans l&#39;éthanol à 70% ou Betadine. Depuis rasage produit fragment communiqué cheveux, microabrasions et l&#39;inflammation qui peut avoir une incidence sur la physiopathologie course, nous n&#39;avons pas raser la fourrure de la souris. </li><li> Faire une incision médiane du cou et tirez doucement en dehors des tissus mous. </li><li> Sous un microscope stéréo (Stemi 2000, Zeiss), une dissection est réalisée afin d&#39;exposer la trachée et de rétracter les muscles pour localiser l&#39;artère carotide. </li><li> L&#39;artère carotide commune gauche (CCA) est soigneusement disséquée des tissus environnants et le CCA est temporairement fermé par une suture temporaire (1) en utilisant une suture de soie 5-0 coupé en 20 segments mm. Un grand soin doit être exercé pour ne pas nuire au nerf vagal. </li><li> Séparer la bifurcation de l&#39;artère carotide interne gauche commune (ICA) et externe artère carotide commune (CEA). Suture permanent (2) est placé autour de l&#39;ECA, comme distalement que possible, et un autre fil de suture temporaire légèrement serré (3) est placé sur le CEA distale de l&#39;bifurcation. </li><li> Fixez le gauche ICA (4) à l&#39;aide d&#39;une pincette inverse d&#39;action pour éviter les saignements. Un grand soin doit être exercé pour ne pas nuire au nerf vagal. </li><li> Découpez un petit trou dans la CEA (5) entre permanents (2) et temporaires (3) points de suture. </li></ol> Figure 1B. <ol start="9"><li> Introduire un 12 mm de long 6-0 siliconé (environ 9-10mm est revêtue de silicium) suture monofilament (Doccol Corporation) dans le CEA (6), couper complètement le CEA distale de la suture permanente et inverser le dispositif d&#39;occlusion dans la LSA . La suture est étroitement lié autour du monofilament pour prévenir les saignements et les pinces inverse d&#39;action sont supprimés. </li><li> L&#39;obturateur est introduit pour obturer l&#39;origine de la MCA dans le cercle de Willis. Arrêter son insertion autour de 9-10 mm au-delà de la bifurcation de la CEA et de l&#39;ACC. L&#39;obturateur est bloqué et ne peut plus bouger. Il faut prendre soin de ne pas pénétrer dans l&#39;artère ptérygopalatine. La suture (3) sur le CEA est tightly liée à fixer le monofilament en position. </li><li> Fermer la peau avec un système de fermeture Autoclip plaie. </li><li> Injecter 1 ml de solution saline sous-cutanée et placez la souris sous une lampe à infrarouge de chauffage pendant toute la période post-occlusion (60 min). </li></ol> 2. Restauration du Moyen débit sanguin cérébral Artère Avant reanesthesia, le neuroscore peut être vérifiée pour évaluer le succès de la chirurgie. <ol><li> Anesthésier les souris comme décrit précédemment et enlever les autoclips. </li><li> Ouvrir légèrement la suture (3) sur la CEA pour permettre le retrait monofilament et la reperfusion sanguine. </li><li> Permanente attacher le fil de suture temporaire sur le CEA pour éviter la perte de sang. Le monofilament est conservé pour être réutilisé. </li><li> Retirez la suture temporaire (1) sur le CCA pour permettre la recirculation du sang. </li><li> Fermer la plaie. Les souris doivent recevoir une autre solution saline sous-cutanée de 1 ml. </li><li> Placez la souris sous la lampe chauffante infrarouge pendant 1 heure. Après avoir vérifié que l&#39;animal ne reprenne la mobilité, la souris est ramené à sa cage et à gauche sous le coussin chauffant et serviettes pour 72 heures. Notez que seule la moitié de la cage est placée sur le coussin chauffant pour permettre souris pour choisir leur environnement. Parce que la perte de poids post-opératoire est généralement observé, de la nourriture en purée est placé dans une boîte de Pétri pour l&#39;encourager à manger. Douze heures après la chirurgie, les souris ont reçu une dose de buprénorphine (0,03 mg / kg BWIP). </li></ol> 3. Opération Sham Pour les opérations fictives, toutes les procédures sont identiques, sauf que l&#39;obturateur n&#39;est pas insérée. 4. Neuroscore Les déficits neurologiques permettre l&#39;évaluation de la réussite de tMCAO juste après la reperfusion et plus tard l&#39;estimation du degré de gravité de la blessure. Les déficits neurologiques sont marqués comme précédemment décrit 5 &lt;/ Sup&gt; et effectuée à 1, 24, 48 et 72 heures après la reperfusion. Un élargissement échelle de six points est utilisé: <ul><li> 0: normal. </li><li> 1: légère encerclant le comportement avec ou sans rotation incompatibles quand ramassé par la queue, &lt;50% des tentatives pour faire pivoter vers le côté controlatéral. </li><li> 2: légère cohérente encerclant,&gt; 50% des tentatives pour faire pivoter vers le côté controlatéral. </li><li> 3: conforme forte et immédiate encerclant, la souris occupe une position de rotation pour plus de 1-2 secondes, avec son nez presque atteint sa queue. </li><li> 4: rotation sévère progresse en barrique, la perte de la marche ou réflexe de redressement. </li><li> 5: comateux ou moribond. </li></ul> 5. La coloration crésyl violet (figure 2) Après perfusion solution de PBS, les cerveaux sont rapidement congelés dans l&#39;isopentane et conservés à -80 °C. cerveaux de souris peut également être perfusés avec du paraformaldéhyde 4% (PFA) selon les études immunohistochimiques prévues. Cryostat les coupes coronales de coupes de cerveau (17 um) sont effectuées. Une partie de chaque 30 est collecté sur la même lame pour avoir une blessure cérébrale représentant. Pour la quantification du volume, 2 lames sont colorées par coloration au violet de crésyl et un système d&#39;analyse d&#39;image (Scion Corporation, Frederick, MD) a été utilisé pour évaluer la lésion. Le volume préjudice a été calculé en unités arbitraires (pixels), et exprimée en pourcentage de l&#39;controlatéral non lésé zone pour chaque section. Autres diapositives sont conservées à -80 ° C pour les études d&#39;immunohistochimie. Alternativement, PFA-fixe cerveau peut être coupé à 30-50 um en utilisant vibratome et le volume de l&#39;infarctus mesurée tel que recommandé par Han et al. (2009) 6.

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	<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. B. r. a. i. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=infarction+is+not+reduced+in+SOD-1+transgenic+mice+after+a+permanent+focal+cerebral+ischemia.">infarction is not reduced in SOD-1 transgenic mice after a permanent focal cerebral ischemia.</a> Neuroreport. 5, 293-296 (1993).</li><li>Yang, G., Chan, P. H., Chen, J., Carlson, E., Chen, S. F., Weinstein, P., Epstein, C. J., Kamii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenic+mice+are+highly+resistant+to+reperfusion+injury+after+focal+cerebral+ischemia.">Human copper-zinc superoxide dismutase transgenic mice are highly resistant to reperfusion injury after focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 25, 165-170 (1994).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+stroke+model+guidelines+for+preclinical+stroke+trials+(1st+edition.">Rodent stroke model guidelines for preclinical stroke trials (1st edition.</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li><li>Jiang, S. X., Lertvorachon, J., Hou, S. T., Konishi, Y., Webster, J., Mealing, G., Brunette, E., Tauskela, J., Preston, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlortetracycline+and+demeclocycline+inhibit+calpains+and+protect+mouse+neurons+against+glutamate+toxicity+and+cerebral+ischemia.">Chlortetracycline and demeclocycline inhibit calpains and protect mouse neurons against glutamate toxicity and cerebral ischemia.</a> J. Biol. Chem. 280, 33811-33888 (2005).</li><li>Han, R. Q., Ouyang, Y. B., Xu, L., Agrawal, R., Patterson, A. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li></ol>

Les auteurs n&#39;ont pas de conflits d&#39;intérêts à déclarer. Production et le libre accès à cet article est sponsorisé par Zeiss, Inc

Différents modèles d&#39;AVC ont été développés pour simuler les conséquences d&#39;AVC chez les patients. Le choix du modèle de course dépend de la question biologique. Le modèle intraluminale MCAO imite l&#39;un des types les plus communs de l&#39;AVC ischémique chez les patients et est moins invasive et plus cohérent que le modèle de Tamura 4,7. C&#39;est un modèle très intéressant pour les analyses de la mort neuroprotection, neurorepair et cellulaire. Le succès du modèle intraluminale dépend de nombreux facteurs tels que le sexe des animaux, l&#39;âge et le poids, la température, l&#39;anesthésie et le moment de la chirurgie, qui doivent être contrôlés. Les propriétés physiques de l&#39;obturateur (diamètre de pointe, la longueur, la forme et la fexibilité) sont essentielles à la cohérence de la MCAO 4. Ici, nous utilisons le long de 12 mm 6-0 monofilament revêtu de silicium sur 9-10 mm de Doccol Corporation. Le grand avantage de ce monofilament est de réduire les hémorragies sous-arachnoïdiennes et parce que sa longueur couvrait tout l&#39;ICAlongueur, le débit sanguin résiduel qui provient des artères communicantes antérieure et postérieure du cercle de Willis et PPA, est empêchée et la variabilité des baisses des volumes d&#39;infarctus (15% de la variabilité dans nos mains) 8. Le fil de suture de la DPA diminue également la variabilité du volume d&#39;infarctus 9. L&#39;étendue de la lésion cérébrale qui suit tMCAO peut être évaluée de différentes façons. Les déficits neurologiques peuvent être mesurés comme précédemment mentionné. Cependant, il est difficile d&#39;avoir une mesure efficace de cette façon. L&#39;étendue de l&#39;infarctus est généralement effectuée par coloration TTC. Plus récemment, des techniques de résonance magnétique sont également utilisés, une technologie particulièrement intéressante pour les traitements neuroprotecteurs. Pour comprendre les mécanismes cellulaires sous-jacents impliqués dans la course comme neurorepair, la mort cellulaire ou la prolifération cellulaire, l&#39;étude de différents marqueurs par immunohistochimie est essentiel et très instructif. Ainsi, notre protocol de préparations section du cerveau a le grand avantage de permettre à ces analyses, et réduit le nombre de souris utilisées. En outre, Tureyen et al. 10 ont signalé qu&#39;il existe une bonne corrélation entre les taches violet de crésyl et TTC.

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Description</strong</td&gt;<td<strong&gt; Société</strong</td&gt;<td<strongNuméro de catalogue&gt;</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Microscope stéréoscopique</td&gt;<td&gt; Zeiss</td&gt;<td&gt; Stemi 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fibre-Light Illuminator à haute intensité</td&gt;<td&gt; Dolan-Jenner Industries Inc</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdSystème d&#39;anesthésie&gt; pour l&#39;isoflurane</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; L&#39;isoflurane</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdCouverture chauffante&gt;</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Lampe de chauffage infrarouge</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ultra fine pince à épiler, style 5</td&gt;<td&gt; Sciences microscopie électronique</td&gt;<td&gt; 78320-5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ciseaux Vannas 3 Bord de coupe mm, droite</td&gt;<td&gt; Sciences microscopie électronique</td&gt;<td&gt; 72932-01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Style de LA-1 et MPF-1 Toutes les lames lisses</td&gt;<td&gt; Sciences microscopie électronique</td&gt;<td&gt; 77926-5S</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pincettes action négative, le style KOPINC 5</td&gt;<td&gt; Sciences microscopie électronique</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Dissection Ciseaux 5 1/2 &quot;Straight</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Autoclip Kit de démarrage</td&gt;<td&gt; Harvard appareil</td&gt;<td&gt; 34-0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD Autoclip plaies Syst clôture., 9mm de long, 100/pqt</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5-0 suture</td&gt;<td&gt; Harvard appareil</td&gt;<td&gt; 517763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Suture monofilament matériau PDS II violet, 5-0, RB-1; Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12 mm de long 6-0 suture monofilament siliconé</td&gt;<td&gt; Doccol Corporation</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Seringes 1ml</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 14 à 823-2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Aiguilles 26G1 / 2</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt; Souris</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining

L&#39;AVC est la troisième cause de mortalité et la première cause d&#39;invalidité dans le monde. Ischémiques comptes course pour environ 80% de tous les AVC. Cependant, le thrombolytique activateur tissulaire du plasminogène (tPA) est le seul traitement de l&#39;AVC ischémique aigu qui existe. Cela conduit les chercheurs à développer plusieurs modèles d&#39;AVC ischémiques dans une grande variété d&#39;espèces. Deux grands types de modèles de rongeurs ont été développés: des modèles d&#39;ischémie cérébrale globale ou une ischémie cérébrale focale. Pour simuler un accident ischémique cérébral chez les patients chez lesquels environ 80% thromboses ou embolique se produire sur le territoire de l&#39;artère cérébrale moyenne (ACM), l&#39;occlusion intraluminale de l&#39;artère cérébrale moyenne (MCAO) modèle est tout à fait pertinent pour les études de temps. Ce modèle a été développé chez le rat par Koizumi et al., En 1986 1. En raison de la facilité de manipulation génétique chez la souris, ces modèles ont été développés dans ce 2-3 espèces. contenu &quot;&gt; Ici, nous présentons le MCA transitoire occlusion procédure C57/BL6 souris. études antérieures ont rapporté que les propriétés physiques de l&#39;occlusion tels que diamètre de la pointe, la longueur, la forme et la flexibilité sont essentiels pour la reproductibilité du volume de l&#39;infarctus 4. Ici, un monofilaments de silicium commerciaux revêtus (Doccol Corporation) ont été utilisés. Un autre grand avantage est que ce monofilament réduit le risque d&#39;induire des hémorragies sous-arachnoïdiennes. Utilisation du stéréomicroscope Zeiss Stemi 2000, le silicium monofilament revêtu a été introduit dans l&#39;artère carotide interne (ACI) via une réduction de l&#39;artère carotide externe (CEA) jusqu&#39;à ce que le monofilament obture la base de la MCA. flux sanguin a été restaurée 1 heure plus tard par l&#39;élimination du monofilament pour imiter la restauration du flux sanguin après lyse d&#39;un caillot dans thromboembolique humains. L&#39;étendue de l&#39;infarctus cérébral peut être évalué par une première partition neurologiques et par la mesure du volume de l&#39;infarctus.Souris ischémiques ont ainsi été analysés pour leur score neurologique à différents post-reperfusion fois. Pour évaluer le volume de l&#39;infarctus, coloration avec du chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) était habituellement réalisée. Ici, nous avons utilisé une coloration violet de crésyl, car il offre la possibilité de tester de nombreux marqueurs essentiels par immunohistochimie. Dans cette vidéo, nous présentons la procédure MCAO; scores neurologiques et l&#39;évaluation du volume de l&#39;infarctus par coloration au violet de crésyl.

L&#39;évaluation neuroscore confirme le succès de tMCAO post-AVC et détermine l&#39;efficacité de la tMCAO post-reperfusion. Dans nos mains, toutes les souris soumises à la procédure intraluminale présenté au moins une légère curling cohérente (neuroscore 2) et les déficits neurologiques sont généralement stables jusqu&#39;à 72 heures. La plupart des souris présentent une légère curling cohérente (neuroscore 2). Souris présentant absence de curling sont exclus de l&#39;étude. Cependant, l&#39;évaluation neuroscore ne nous permet pas de faire la distinction entre les souris avec un hippocampe blessés et ceux qui ont un hippocampe intact. Aucune mortalité n&#39;a été observée au cours de la chirurgie d&#39;un jour, ce qui suggère que les hémorragies sous-arachnoïdiennes n&#39;a pas eu lieu. Lorsque hémorragie sous-arachnoïdienne est identifié dans une souris, celle-ci est systématiquement exclus de l&#39;analyse. L&#39;utilisation du silicium revêtu de monofilament de Doccol Corporation, qui est plus lisse que préparés à la maison monofilaments, augmente le succès detMCAO et réduit les hémorragies sous-arachnoïdiennes. Mortalité entre 24 h et 72 h est de 14% dans ce modèle, comme c&#39;est généralement rapportés pour 60 min d&#39;occlusion. La mortalité observée est probablement due à un volume de l&#39;infarctus important dans cette souche de souris. Une forte reproductibilité lésion a également été observée (écart-type est de 15%), ce qui est très intéressant pour étudier les molécules neuroprotectrices où leur effet (s) peuvent être dissimulés par la variabilité du modèle. Pour évaluer l&#39;étendue des lésions cérébrales à la suite tMCAO, nous avons opté d&#39;utiliser une coloration violet de crésyl (figure 2) plutôt que TTC afin d&#39;avoir une grande quantité de matériel à tester des marqueurs pertinents 6. L&#39;étendue de la lésion est relativement uniforme. Cependant, nous avons remarqué que chez certaines souris, l&#39;hippocampe a été blessé (environ 30% des souris). Il est intéressant de noter que la coloration crésyl violet peut être appliqué jusqu&#39;à 1 semaine plus tard. Dans la littérature, le pourcentage d&#39;infarctus cérébral varie d&#39;unétudier à l&#39;autre. Il dépend du choix de la souche de souris, l&#39;anesthésie, l&#39;épaisseur des coupes de cerveau, le monofilament utilisé, ou la coloration utilisée 6, 7. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> Figure 1. Schéma de l&#39;occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne avec siliconé monofilament intraluminale. Un schéma. Simplifié de cerveau de souris et les artères cérébrales montrant sutures successives et le clip de préparer l&#39;introduction de siliconé monofilament. B. La position du monofilament à travers le cercle de Willis est représenté. Le monofilament est introduit dans ICA via la CEA pour occlure la base du MCA ACA, artère cérébrale antérieure;. BA, basilaire artère; CCA, l&#39;artère carotide commune; C. Willis, cercle de Willis; CEA, carotide externe artery, ICA, artère carotide interne; MCA, l&#39;artère cérébrale moyenne, ACP, l&#39;artère communicante postérieure; APP, artère ptérygopalatine. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. Représentant des coupes coronales de cerveau de souris colorées au violet de crésyl après 72 heures post-reperfusion. Zone de l&#39;infarctus (principalement le striatum, le cortex et les zones adjacentes du cerveau) apparaît en blanc (non colorées par crésyl violet). Le volume des blessures (partie blanche, l&#39;hémisphère droit) a été délimitée et exprimée en pourcentage de l&#39;controlatéral non lésé zone (hémisphère gauche).

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Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Le modèle de milieu intraluminal occlusion cérébrale chez la souris est présentée ici. L&#39;étendue de l&#39;infarctus cérébral est évaluée par un score neurologique et coloration au violet de crésyl, une alternative à la coloration TTC, offrant le grand avantage de tester en parallèle de nombreux marqueurs d&#39;intérêt.

Modèle murin d&#39;MCAO intraluminale: Évaluation infarctus cérébral par coloration au violet de crésyl

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

mouse-model-intraluminal-mcao-cerebral-infarct-evaluation-cresyl

Research

JoVE Journal

Medicine

62.8K vues.  Clinical Research Institute of Montreal. Le modèle de milieu intraluminal occlusion cérébrale chez la souris est présentée ici. L'étendue de l'infarctus cérébral est évaluée par un score neurologique et coloration au violet de crésyl, une alternative à la coloration TTC, offrant le grand avantage de tester en parallèle de nombreux marqueurs d'intérêt.

Vidéo: Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Modèle murin d&#39;occlusion artère cérébrale moyenne

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

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Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminale Occlusion Artère cérébrale moyenne (MCAO) Modèle pour l&#39;AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez la souris

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Système optimisé pour la surveillance de la perfusion cérébrale chez le rat des maladies du intraluminale occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolique Artère cérébrale moyenne occlusion (MCAO) pour AVC ischémique avec homologues caillots sanguins chez les rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated death 1. Common sites of metastatic spread include lung, lymph node, brain, and bone 2. Mechanisms that drive metastasis are intense areas of cancer research. Consequently, effective assays to measure metastatic burden in distant sites of metastasis are instrumental for cancer research. Evaluation of lung metastases in mammary tumor models is generally performed by gross qualitative observation of lung tissue following dissection. Quantitative methods of evaluating metastasis are currently limited to ex vivo and in vivo imaging based techniques that require user defined parameters. Many of these techniques are at the whole organism level rather than the cellular level 3-6. Although newer imaging methods utilizing multi-photon microscopy are able to evaluate metastasis at the cellular level 7, these highly elegant procedures are more suited to evaluating mechanisms of dissemination rather than quantitative assessment of metastatic burden. Here, a simple in vitro method to quantitatively assess metastasis is presented. Using quantitative Real-time PCR (QRT-PCR), tumor cell specific mRNA can be detected within the mouse lung tissue.

This protocol describes how to use quantitative Real-time PCR (QRT-PCR) to detect tumor cell specific mRNA representing metastasis within the mouse lung tissue.

Évaluation des métastases pulmonaires chez la souris tumeur mammaire modèles par PCR quantitative en temps réel

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, standardized battery of neonatal mouse motor tests. These tests can validate injury or disease models, determine treatment efficacy and/or assess motor behaviors in new transgenic strains. This paper presents a series of neonatal motor tests to evaluate general motor function, including ambulation, hindlimb foot angle, surface righting, negative geotaxis, front- and hindlimb suspension, grasping reflex, four limb grip strength and cliff aversion. Mice between the ages of post-natal day 2 to 14 can be used. In addition, these tests can be used for a wide range of neurological and neuromuscular pathologies, including cerebral palsy, hypoxic-ischemic encephalopathy, traumatic brain injury, spinal cord injury, neurodegenerative diseases, and neuromuscular disorders. These tests can also be used to determine the effects of pharmacological agents, as well as other types of therapeutic interventions. In this paper, motor deficits were evaluated in a novel neonatal mouse model of cerebral palsy that combines hypoxia, ischemia and inflammation. Forty-eight hours after injury, five tests out of the nine showed significant motor deficits: ambulation, hindlimb angle, hindlimb suspension, four limb grip strength, and grasping reflex. These tests revealed weakness in the hindlimbs, as well as fine motor skills such as grasping, which are similar to the motor deficits seen in human cerebral palsy patients.

Presented is a concise battery of mouse neonatal motor tests. Using these tests, neonatal motor deficits can be demonstrated in a variety of neonatal motor disorders. By having a standardized set of tests, results from different studies can be compared, allowing for better and accurate reporting between groups.

Une batterie de tests de moteur dans un modèle de souris néonatale de paralysie cérébrale

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

Intraluminale Drug Delivery à la souris fistule artério-endothélium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

Induction et Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations dans le modèle murin

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Mesure de la contractilité isométrique de l’artère mésentérique de souris à l’aide de fil myographie

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

Modèle de souris de deux vaisseaux Occlusion d’ischémie-reperfusion cérébrale

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...