Ce modèle de souris occlusion à deux vaisseaux de l’ischémie cérébrale-reperfusion peut étudier la pathophysiologie de la course. Ce modèle induirea un volume infarctus stable de la majeure partie du cerveau infiltrant des cellules immunitaires dans le cerveau ischémique et le déficit comportemental après ischémie-reperfusion cérébrale. Dans ce modèle, un infarctus est causé dans les zones corticales et le taux de mortalité est faible.
Puisque le modèle de reperfusion de MCAO de ligature exige craniotomy pour exposer la taille du MCA distal, la taille peut être facilement confirmée, et l’examen si le flux sanguin dans le MCAO distal est perturbé pendant la procédure est simple. Fournir aux souris un accès gratuit à l’eau et à la nourriture jusqu’à la chirurgie. Autoclave les outils chirurgicaux, et utiliser 70% d’éthanol pour assainir la table de chirurgie et de l’équipement.
Après avoir anesthésié une souris de huit à 12 semaines, assurez-vous qu’elle n’a pas de réflexe de pédale lorsqu’elle est testée à l’aide d’un pincement ferme des pieds. Utilisez de l’onguent vétérinaire pour prévenir la sécheresse oculaire pendant que la souris est sous anesthésie. Pour surveiller la pression artérielle, retirez d’abord les cheveux, puis utilisez un système de pression artérielle non invasive et un système de surveillance physiologique pour surveiller la température rectale et les gaz sanguins artériaux.
Injecter la souris sous-cutanée avec un antibiotique prophylactique. Ensuite, placez la souris en position supine sur le coussin chauffant. Pour exposer la peau, utilisez des tondeuses électriques pour raser la fourrure sur la région ventrale du cou et dans la région entre l’œil droit et l’oreille droite.
Dégagez la fourrure du corps de l’animal avec de la crème épilatrice et désinfectez le site chirurgical avec 70 % d’éthanol. Ensuite, coupez une incision médiane d’un centimètre de long au cou à l’aide de ciseaux d’iris. Avec des forceps d’iris, disséquez soigneusement l’artère carotide commune libre des nerfs de vague sans causer des dommages physiques, et emploiez des sutures de soie de 5-0 pour isoler l’artère.
Ensuite, utilisez des ciseaux d’iris pour faire une incision de 0,3 centimètre dans le cuir chevelu au milieu entre l’œil droit et l’oreille droite. À l’aide de micro ciseaux, couper le muscle temporalis pour exposer l’os zygomatique et squamosal. Placez la souris sous un microscope à disséquer stéréo et utilisez une micro foreuse pour créer un trou de deux millilitres directement au-dessus de l’artère cérébrale moyenne distale du côté droit.
Utilisez une suture 10-0 pour ligate le tronc du MCA distal droit et utilisez un clip d’anévrisme non traumatique pour occluser le CCA côté droit. Après la durée désirée de l’ischémie, retirez la suture et le clip d’anévrisme pour reconstituer le flux sanguin au MCA et au CCA. Utilisez un clip de suture pour sceller l’incision cutanée sur la tête et sceller les incisions cervicales de la peau avec de la colle chirurgicale.
Injecter la buprénorphine sous-cutanée pour soulager la douleur. Maintenez la température corporelle de l’animal à 36,5 plus ou moins 0,5 degré Celsius sur le coussin chauffant, et ne la laissez pas sans surveillance ou ne la retournez pas à la compagnie d’autres animaux tant qu’elle n’est pas complètement remise de l’anesthésie. Enfin, placez la souris dans la cage autoclave afin qu’elle puisse accéder librement à l’eau et à la nourriture une fois qu’elle a complètement récupéré.
Utilisez des ciseaux d’iris pour faire une incision dans la peau de la tête de la souris anesthésiée et décapitée pour exposer le crâne. Ensuite, utilisez des ciseaux de fonctionnement pour couper l’antérieur de l’os frontal, et avec des ciseaux d’iris, couper le crâne le long de la suture sagittale. Avec un rongeur osseux, repousser l’os frontal et pariétal, et exposer le cerveau.
Enlevez le cerveau et placez-le dans une matrice cérébrale de souris. Utilisez des lames de rasoir pour obtenir des tranches coronale de deux millilitres et placez-les dans des tubes de 50 millilitres remplis de cinq millilitres de 2 % de TTC. Lors de l’utilisation de la matrice cérébrale de la souris pour obtenir des tranches coronal, la taille de coupe devrait être la même dans différents cerveaux.
La taille de coupe affecte la taille des tranches de cerveau, qui affectent également le calcul de la taille d’infarctus. Tacher les tranches de cerveau avec 2%TTC et 1X PBS pendant 10 minutes à 37 degrés Celsius, puis rincer deux fois avec 10% de formaline. Fixer les tranches de cerveau en formaline de 10% à température ambiante pendant 24 heures.
Après avoir assécher les tranches de cerveau sur le papier de soie pour absorber l’excès de formaline, disposez-les sur une lame de plastique propre, les orientant de rostral à caudal, et couvrez-les avec une autre glissière en plastique propre. Scannez la diapositive à l’aide d’un scanner. Retournez la glissade et numérisez le revers.
Utilisez le logiciel ImageJ pour calculer la zone d’infarctus de chaque section, en ouvrant d’abord le fichier d’image et en mettant en place l’échelle de l’image. Ensuite, utilisez la sélection à main levée pour sélectionner la zone infarctus, et utilisez les régions d’intérêt gestionnaire roi pour mesurer la zone d’intérêt. Enfin, résumer les zones infarctus pour chaque section, et multiplier le résultat par l’épaisseur de la section pour estimer le volume total de l’infarctus, puis compléter l’analyse statistique telle que décrite dans le manuscrit.
L’augmentation de la durée d’ischémie pendant cette procédure de reperfusion de MCAO a produit différents degrés de volume infarctus ischémique-induit et de perte neuronale dans le cortex cérébral de la région droite de MCA. En outre, l’ischémie a diminué l’activité locomotrice de l’animal à 48 heures après la reperfusion de MCAO. Après l’ischémie cérébrale-reperfusion, une majeure partie des cellules immunitaires périphériques se sont infiltrées dans l’hémisphère ipsilateral du cerveau ischémique.
De plus, lorsque ce modèle d’occlusion à deux navires a été comparé au modèle MCAO, leurs volumes infarctus n’étaient pas significativement différents. La micro foreuse doit être soigneusement utilisée lors de la création d’un trou dans le crâne. Avec une action inappropriée, facile de provoquer des saignements du MCA.
Le MCA ne doit pas être endommagé, et le saignement doit être évité avant et après la procédure de ligature. L’occlusion MCA et l’état de reperfusion peuvent être vérifiés par le laser Doppler. Cette méthode peut confirmer l’état de la circulation sanguine du MCA.
