L’immunothérapie combinée à la chimiothérapie représente une approche novatrice pour développer un traitement efficace contre le cancer. Les principaux objectifs sont d’obtenir des effets synergiques, thérapeutiques, la dose et la réduction de la toxicité, et de minimiser ou de retarder l’induction de la résistance aux médicaments. Cependant, pour des raisons pratiques et éthiques, il n’est pas possible de déterminer le synergisme chez les patients. Ainsi, avant la combinaison directe dans les essais cliniques, des études de combinaison prenicaptor, in vitro, et/ou chez des animaux, devraient être réalisées pour obtenir la justification des études cliniques. Une méthode robuste simple pour la quantification du synergisme entre les médicaments est basée sur l’équation d’index de combinaison développée par Shouan Talale, comme illustré dans cette vidéo. En utilisant cette méthode, et sa simulation informatisée, nous prouvons ici, le synergisme entre monoclonal Anticorps 8B6, qui est spécifique pour l’antigène neuroblastome O-Acetyl-GD2 Ganglioside et le médicament chimiothérapeutique Topotecan sur les cellules neuroblastome. Brièvement, après avoir déterminé la dose effective 50 valeurs de chaque composé dans l’OMI humaine, 5 lignée cellulaire de neuroblastome, ces cellules ont été intubées avec des rapports équitables des deux composés, et les valeurs d’index de combinaison ont été calculées utilisant la simulation automatisée d’ordinateur. Nous avons ensuite confirmé ces résultats dans Vivo, dans un OMI, 5 tumeur xénographe modèle. Nous avons cultivé des cellules IMR-5 dans un flacon T75, nous les avons observées au microscope, pour vérifier la confluence cellulaire. Asperate milieu cellulaire de la fiole, laver avec 5 mL de PBS. Ajouter 3 mL de solution 0,05%EDTA/PBS. Remettre le flacon à l’incubateur pendant 3 minutes. Examiner la culture cellulaire au microscope pour le détachement cellulaire. Ajouter 10 mL de milieu cellulaire complet au flacon et transférer la suspension cellulaire dans un tube conique stérile de 15 mL. Centrifugeuse pendant cinq minutes à 300 g.Count cellules à l’aide d’un hémocytomètre. Retirer et jeter le surnatant. Suspendre à nouveau les cellules dans les puits à croissance complète Medium.Adjust le volume moyen pour obtenir la concentration finale de 100 000 cellules/mL.Seed 84 puits, 96 plaques de culture de puits avec 10 000 cellules chacune, soit 100 microlitres de suspension cellulaire. Incuber les cellules pendant 18 heures dans l’anticorps monoclonal Cell Incubator.Dilute dans 500 microlitres de Complete Growth Medium pour obtenir une solution de travail anticorps avec une concentration monoclonale d’anticorps 240 microgrammes par mL.Effectuer 5 illusions en série double comme indiqué dans le protocole. Diluer le médicament en 500 microlitres de milieu de croissance complet pour obtenir une solution de travail médicamenteuse avec une concentration finale de 120 nanomolaires. Effectuez 5, deux fois les illusions en série comme indiqué dans le protocole. Diluer de la même façon le médicament ainsi que des solutions anibodies monocones. Pour arriver à la concentration finale, transférez 50 microlitres de chaque solution médicamenteuses dans les puits correspondants, comme le montre cette disposition expérimentale. Incuber les cellules pendant 72 heures dans l’incubateur. Ajouter 10 microlitres de solution de reagent MTT dans chaque puits. Incuber à 37 degrés Celsius pendant 4 heures. Ajouter 100 microlitres de solution de lycine dans chaque puits à l’aide d’une pipette multicanal et bien mélanger au pipetage. Incuber à 37 degrés Celsius pendant 4 heures dans une chambre humidifiée. Débarrasser les absorbants à 570 et 620 nanomètres à l’aide d’un spectrophotomètre. Calculez la viabilité cellulaire comme suit. Calculez la fraction des valeurs affectées à l’aide de l’équation suivante. Exécutez le logiciel de simulation, cliquez sur le nouveau bouton d’expérience pour obtenir la fenêtre principale. Tapez le nom de l’expérience. Cliquez sur nouveau médicament unique. Tapez le nom. Tapez l’abréviation. Tapez l’unité de concentration de drogue. Entrez les données 1 dose et la valeur FA. Appuyez sur Enter.Repeat cette étape jusqu’à ce que tous les points de données sont entrés. Cliquez sur Finished.Follow les mêmes étapes pour entrer les points de données monoclonal anticorps. Cliquez sur New Drug Combo.Select médicament et anticorps monoclonaux. Sélectionnez Constant Ratio.Click OK. Tapez le nom. Tapez l’abréviation. Tapez le rapport monoclonal d’anticorps de drogue. Entrez les données 1 dose. Appuyez sur Enter.The programme calculera automatiquement les doses d’anticorps monoclonal 8B6 et combo. Entrez les données 1 valeur FA.Appuyez sur Enter.Repeat cette étape jusqu’à ce que tous les points de données sont entrés. Cliquez sur Finished.Then, cliquez sur Générer Report.Select médicament et anticorps monocoque, puis cliquez sur OK. Sélectionnez Combo, puis cliquez sur OK. Sélectionnez Header, CI Table et Summary Table, puis cliquez sur OK. Tapez le nom du fichier et l’analyse et cliquez sur enregistrer pour générer le rapport. Le rapport s’ouvre automatiquement dans son navigateur Web par défaut. Le rapport contient une section de tableau sommaire qui comprend le titre, la date, le nom final, la note de description, les paramètres m, Dm et r, la dose effective 50 pour l’agent utilisé comme monothérapie ou en combinaison, et le tableau d’index combiné pour chaque combinaison à la dose effective 50, 75, 90 et 95.A valeur de l’indice combiné inférieur à 1 indique le synergisme. Une valeur égale à une indique l’additivité. Une valeur supérieure à 1 indique l’antagonisme. Décongeler la matrice membranaire du sous-sol pendant la nuit en utilisant le flacon dans la glace dans un réfrigérateur de 4 degrés C avant utilisation. Tous les vêtements de culture, ou les médias en contact avec la métrique membranaire du sous-sol doivent être préchilled. Récoltez la culture IMR5. Transférer les cellules dans un tube conique de 15 mL et une centrifugeuse à 300 g pendant 5 minutes. Jeter le surnatant. Laver les cellules avec 15 mL de glace froide PBS deux fois. Préparer une suspension cellulaire pour 5 millions de cellules par mL dans le PBS glacé. Transférer la suspension cellulaire dans un microtube de 1,5 mL. Flacon de matrice de membrane de sous-sol pivotant. Ajouter 1 volume du réageni de matrice membranaire du sous-sol, mélangé par pipetting pour obtenir la suspension cellulaire de 2,5 millions de cellules par mL.Gardez la suspension cellulaire sur la glace. Raser le flanc de l’endroit où l’injection sera effectuée. Mélanger les cellules et dessiner soigneusement la suspension cellulaire dans une seringue de 1 mL montée avec une aiguille de 21 g. Vérifiez qu’il n’y a pas de bulles d’air dans la seringue. Désinfecter la zone d’inoculation des souris avec une solution antiseptique. Presser doucement la peau de la souris sur le flanc entre les doigts au site d’injection. Insérez l’aiguille exactement dans le dépliant. Ne placez pas l’aiguille profondément dans le tissu pour assurer l’injection sous-cutanée. Injecter 100 microlitres de suspension cellulaire IMR5 sous-cutanée. Faire pivoter la seringue pour éviter la propagation du liquide et retirer l’aiguille. Surveillez les souris pour le poids corporel et la croissance tumorale. Mesurer la longueur et la largeur de la tumeur avec un calibre. Calculer le volume tumoral à l’aide de cette formule. Commencez la thérapie lorsque les tumeurs ont atteint un volume moyen de 50 à 60 mm
