화학요법과 결합된 면역 요법은 암에 있는 능률적인 치료를 개발하는 혁신적인 접근을 나타냅니다. 주요 목표는 시너지 효과를 달성하는 것입니다, 치료 효과, 복용량 및 독성 감소, 최소화 하거나 약물 저항의 유도를 지연. 그러나, 실용적이고 윤리적인 이유로, 환자에서 시너지 효과를 결정하는 것은 불가능합니다. 따라서, 임상 시험에서 직접 조합하기 전에, Prenicaptor 조합 연구, 시험관 내 및/또는 동물에서, 임상 연구에 대한 근거를 얻기 위하여 실행되어야 한다. 약물 간의 시너지 효과를 정량화하기 위한 간단한 견고한 방법은 이 비디오에서 설명한 바와 같이 슈안 탈랄레가 개발한 조합 지수 방정식을 기반으로 합니다. 이 방법을 사용하여, 그리고 그것의 전산화 된 시뮬레이션, 우리는 여기에서 증거, 모노 클로노날 항체 8B6 사이의 시너지 효과, 이는 O-아세틸-GD2 강교 측 신경 모세포종 항원과 신경 모세포종 세포에 화학 요법 약물 Topotecan에 대한 특정. 간략하게, 인간 IMO에서 각 화합물의 유효 용량 50 값을 결정한 후, 5 신경모세포종 세포주, 이들 세포는 두 화합물의 공평한 비율로 삽관되었고, 조합 지수 값은 자동화된 컴퓨터 시뮬레이션을 사용하여 계산하였다. 우리는 다음으로 생체, IMO, 5 종양 xenographed 모형에서 이 결과를 확인했습니다. 우리는 T75 플라스크에서 IMR-5 세포를 성장, 현미경으로 그들을 관찰, 세포 합류를 확인. 플라스크에서 세포 배지를 아스피레이트하고 PBS 5mL로 세척합니다. 0.05%EDTA/PBS 솔루션3mL를 추가합니다. 플라스크를 인큐베이터에 3분간 반납합니다. 세포 분리를 위한 현미경의 밑에 세포 배양을 검사합니다. 플라스크에 완전한 셀 배지 10mL를 추가하고 세포 현탁액을 멸균, 15mL 원추형 튜브로 옮킨다. 혈청계를 사용하여 300 g.Count 세포에서 5분 동안 원심분리기. 상체를 제거하고 폐기합니다. 완전한 성장 배지에서 세포를 다시 일시 중단합니다.중간 부피를 조정하여 100, 000 세포/mL.Seed 84 우물, 96 개의 잘 배양 플레이트10, 000 세포, 즉 세포 현탁액의 100 마이크로리터입니다. 세포 인큐베이터에서 18시간 동안 세포를 배양합니다.완전한 성장 매체의 500 마이크로리터에 단일 클론 항체를 희석하여 mL당 240 마이크로 그램의 단일 클론 항체 농도를 가진 항체 작동 용액을 얻습니다.프로토콜에 표시된 바와 같이 5 개의 2 배 연속 망상을 수행합니다. 최종 농도 120 나노 몰러약물 작업 용액을 얻기 위해 완전한 성장 매체의 500 마이크로 리터에서 약물을 희석. 프로토콜에 표시된 대로 5배, 2배 의 직렬 망상을 수행합니다. 약물플러스 단클론 애니바디 솔루션과 동일한 방식으로 희석합니다. 최종 농도에 도달하려면 이 실험 레이아웃에 표시된 대로 각 약물 솔루션의 50 마이크로리터를 해당 우물에 전달합니다. 인큐베이터에서 72시간 동안 세포를 배양합니다. 각 웰에 10마이크로리터의 MTT 시약 솔루션을 추가합니다. 섭씨 37도에서 4시간 동안 배양하세요. 멀티채널 파이펫을 사용하여 100마이크로리터의 리신 용액을 각 웰에 넣고 파이펫팅으로 철저히 섞습니다. 가습실에서 섭씨 37도에서 4시간 동안 배양합니다. 분광광계를 사용하여 570 및 620 나노미터에서 흡수를 제거하십시오. 셀 생존 가능성을 다음과 같이 계산합니다. 다음 방정식을 사용하여 영향을 받는 값의 분수를 계산합니다. 시뮬레이션 소프트웨어를 실행하고 새 실험 버튼을 클릭하여 주 창을 가져옵니다. 실험 이름을 입력합니다. 새 단일 약물을 클릭합니다. 이름을 입력합니다. 약어를 입력합니다. 약물 농도 단위를 입력합니다. 데이터 1 용량 및 FA 값을 입력합니다. Enter.Repeat 이 단계를 모든 데이터 요소가 입력할 때까지 반복합니다. 완료를 클릭합니다.동일한 단계를 따라 단일 클론 항체 데이터 포인트를 입력합니다. 신약 콤보를 클릭합니다.약물 및 단일 클론 항체를 선택합니다. 상수 비율을 선택합니다.확인을 클릭합니다. 이름을 입력합니다. 약어를 입력합니다. 약물 단일 클론 항체 비율을 입력합니다. 데이터 1 용량을 입력합니다. Enter.이 프로그램은 자동으로 단일 클론 항체 8B6 및 콤보의 복용량을 계산합니다. 데이터 1 FA 값을 입력합니다.Enter.Repeat 이 단계를 모든 데이터 요소가 입력할 때까지 반복합니다. 완료.다음을 클릭, 보고서 생성을 클릭합니다.약물 및 단일 클론 항체를 선택 한 다음 확인을 클릭합니다. 콤보를 선택한 다음 확인을 클릭합니다. 헤더, CI 테이블 및 요약 테이블을 선택한 다음 확인을 클릭합니다. 파일 이름과 분석을 입력하고 저장을 클릭하여 보고서를 생성합니다. 보고서는 기본 웹 브라우저에서 자동으로 열립니다. 이 보고서에는 제목, 날짜, 최종 이름, 설명 주, m, Dm 및 r 파라미터, 단독 요법 또는 조합으로 사용되는 제제에 대한 유효 용량 50, 유효 용량 50, 유효 용량 50, 75, 90 및 95.A 조합 인덱스 값이 1 미만인 시너지 효과를 나타내는 요약 표 섹션이 포함되어 있습니다. 값은 첨가도를 나타냅니다. 값이 1보다 큰 값은 적대감을 나타냅니다. 사용 전에 4도 C 냉장고에 얼음에 유리병을 침수하여 하룻밤 지하 멤브레인 매트릭스를 해동하십시오. 지하 막 메트릭과 접촉하는 모든 문화 복 또는 미디어는 미리 냉각되어야 합니다. 문화 IMR5를 수확하십시오. 세포를 15mL 원문 관및 원심분리기로 5분 동안 300g으로 옮긴다. 상부체를 폐기합니다. 15mL 얼음 차가운 PBS로 셀을 두 번 세척하십시오. 얼음-차가운 PBS에서 mL당 5백만 개의 세포에 대한 세포 현탁액을 준비합니다. 세포 현탁액을 1.5 mL 마이크로튜브로 전송합니다. 회전 지하 막 매트릭스 유리병. mL.100만 세포의 세포 현탁액을 얻기 위해 파이펫팅에 혼합된 지하 막 매트릭스 시약 1부(셀 서스펜션)를 얼음 위에 보관한다. 주사가 수행 될 곳의 측면을 면도. 세포를 혼합하고 셀 서스펜션을 21g 바늘로 장착된 1mL 주사기에 조심스럽게 그립니다. 주사기에 기포가 없는지 확인하십시오. 방부제 용액으로 마우스의 접종 부위를 소독합니다. 주입 부위의 손가락 사이에 마우스 피부를 부드럽게 짜냅니다. 바늘을 스킨폴드에 정확히 삽입합니다. 피하 주사를 보장하기 위해 조직에 바늘을 깊숙이 두지 마십시오. IMR5 세포 현탁액의 100 마이크로리터를 피하로 주입하십시오. 주사기를 회전하여 액체 확산을 방지하고 바늘을 철회하십시오. 체중과 종양 성장을 위해 마우스를 모니터링하십시오. 구경으로 종양의 길이와 폭을 측정합니다. 이 수식을 사용하여 종양 부피를 계산합니다. 종양이 50~ 60mm의 평균 부피에 도달하면 치료를 시작하세요.
