La inmunoterapia combinada con la quimioterapia representa un enfoque innovador para desarrollar una terapia eficiente en el cáncer. Los principales objetivos son lograr efectos sinérgicos, terapéuticos, reducción de dosis y toxicidad, y minimizar o retrasar la inducción de la resistencia a los medicamentos. Sin embargo, por razones prácticas y éticas, no es posible determinar el sinergismo en los pacientes. Por lo tanto, antes de la combinación directa en ensayos clínicos, se deben llevar a cabo estudios combinados de Prenicaptor, in vitro y/o en animales, para obtener la justificación de los estudios clínicos. Un método robusto simple para la cuantificación del sinergismo entre fármacos se basa en la ecuación de índice de combinación desarrollada por Shouan Talale, como se ilustra en este video. Usando este método, y su simulación computarizada, evidenciamos aquí, el sinergismo entre Monoclonal Anticuerpo 8B6, que es específico para el antígeno del neuroblastoma gangliosido O-acetil-GD2 y el fármaco quimioterático Topotecan en las células del neuroblastoma. Brevemente, después de determinar la dosis efectiva 50 valores de cada compuesto en la IMO humana, 5 línea celulares de neuroblastoma, estas células fueron intubadas con proporciones equitativas de los dos compuestos, y los valores del índice de combinación se calcularon utilizando la simulación por computadora automatizada. A continuación confirmamos estos resultados en Vivo, en un modelo xenograbado de 5 tumores de la OMI. Cultivamos células IMR-5 en un matraz T75, las observamos bajo un microscopio, para comprobar la confluencia celular. Medio de célula asperado del matraz, lavar con 5 ml de PBS. Añadir 3 ml de solución 0.05%EDTA/PBS. Vuelva a colocar el matraz en la incubadora durante 3 minutos. Examine el cultivo celular bajo un microscopio para el desprendimiento celular. Añadir 10 ml de medio celular completo al matraz y transferir la suspensión celular a un tubo cónico estéril de 15 ml. Centrifugar durante cinco minutos a 300 g.Contar células usando un hemocicómetro. Retire y deseche el sobrenadante. Re suspenda las células en el medio de crecimiento completo.Ajuste el volumen medio para obtener la concentración final de 100,000 células/ml.Semilla 84 pozos, placa de cultivo de 96 pozos con 10.000 células cada una, que es 100 microlitros de suspensión celular. Incubar células durante 18 horas en la Incubadora Celular.Diluir anticuerpo monoclonal en 500 microlitros de Complete Growth Medium para obtener una solución de trabajo de anticuerpos con una concentración de anticuerpos monoclonales de 240 micro-gramos por mL.Realizar 5 delirios seriales dobles como se indica en el protocolo. Diluir el fármaco en 500 microlitros de Complete Growth Medium para obtener una solución de trabajo farmacológico con una concentración final de 120 nanomolares. Realice 5 delirios seriales dobles como se indica en el protocolo. Diluir de la misma manera el medicamento más soluciones de anibodies monoclonales. Para llegar a la concentración final, transfiera 50 microlitros de cada solución farmacológica en los pozos correspondientes como se muestra en este diseño experimental. Incubar las células durante 72 horas en la incubadora. Agregue 10 microlitros de solución de reactivo MTT en cada pozo. Incubar a 37 grados centígrados durante 4 horas. Agregue 100 microlitros de solución de lycine a cada pozo utilizando una pipeta multicanal y mezcle bien pipeteando. Incubar a 37 grados centígrados durante 4 horas en una cámara humidificada. Deslícelo a los absorbentes a 570 y 620 nanómetros usando un espectrofotómetro. Calcule la viabilidad de la celda de la siguiente manera. Calcule los valores afectados por la fracción utilizando la siguiente ecuación. Ejecute el software de simulación, haga clic en el nuevo botón de experimento para obtener la ventana principal. Escriba el nombre del experimento. Haga clic en un nuevo medicamento individual. Escriba el nombre. Escriba la abreviatura. Escriba la unidad de concentración de drogas. Introduzca los datos 1 dosis y valor FA. Pulse Intro.Repetir este paso hasta que se introduzcan todos los puntos de datos. Haga clic en Finished.Follow en los mismos pasos para introducir puntos de datos de anticuerpos monoclonales. Haga clic en Nuevo medicamento Combo.Seleccione anticuerpos farmacológicos y monoclonales. Seleccione Ratio constante.Haga clic en Aceptar. Escriba el nombre. Escriba la abreviatura. Escriba la relación de anticuerpos monoclonales del medicamento. Introduzca los datos 1 dosis. Pulse Enter.The programa calculará automáticamente las dosis de Monoclonal Anticuerpo 8B6 y combo. Introduzca el valor de datos 1 FA.Pulse Intro.Repetir este paso hasta que se introduzcan todos los puntos de datos. Haga clic en Finished.Then, haga clic en Generate Report.Select drug and monoclonal antibody y, a continuación, haga clic en OK. Seleccione Combo y, a continuación, haga clic en Aceptar. Seleccione Encabezado, Tabla de CI y Tabla de resumen y, a continuación, haga clic en Aceptar. Escriba el nombre de archivo y el análisis y haga clic en Guardar para generar el informe. El informe se abre automáticamente en el navegador web predeterminado. El informe contiene una sección de tabla de resumen que incluye el título, la fecha, el nombre final, la nota de descripción, los parámetros m, Dm y r, la dosis efectiva 50 para cualquiera de los agentes utilizados como monoterapia o en combinación, y la tabla de índice de combinación para cada combinación a la dosis efectiva 50, 75, 90 y 95.A valor del índice de combinación menor que 1 indica sinergismo. Un valor es igual a uno indica aditividad. Un valor mayor que 1 indica antagonismo. Descongelar la matriz de membrana del sótano durante la noche sumergiendo el vial en hielo en un refrigerador de 4 grados C antes de usarlo. Todo el desgaste del cultivo, o los medios que entran en contacto con la métrica de membrana del sótano deben ser prequillantados. Cosechar la cultura IMR5. Transfiera las células a un tubo cónico de 15 ml y centrífuga a 300 g durante 5 minutos. Deseche el sobrenadante. Lave las células con PBS helado de 15 ml dos veces. Preparar una suspensión celular para 5 millones de células por ml en PBS helada. Transfiera la suspensión celular a un microtubo de 1,5 ml. Vial de matriz de membrana del sótano giratorio. Añadir 1 volumen del reactivo de matriz de membrana del sótano, mezclado por pipeteo para obtener la suspensión celular de 2,5 millones de células por ml.Mantener la suspensión celular sobre hielo. Afeitar el flanco de donde se realizará la inyección. Mezcle las células y extraiga cuidadosamente la suspensión celular en una jeringa de 1 ml montada con una aguja de 21 g. Compruebe que no haya burbujas de aire en la jeringa. Desinfectar el área de inoculación de los ratones con una solución antiséptica. Apriete suavemente la piel del ratón en el flanco entre los dedos en el lugar de la inyección. Inserte la aguja exactamente en el pliegue de la piel. No coloque la aguja profundamente en el tejido para asegurar la inyección subcutánea. Inyectar 100 microlitros de suspensión celular IMR5 por vía subcutánea. Gire la jeringa para evitar que el líquido se propague y retire la aguja. Monitoriza a los ratones para detectar el peso corporal y el crecimiento del tumor. Mida la longitud y la anchura del tumor con un calibre. Calcule el volumen del tumor utilizando esta fórmula. Iniciar la terapia cuando los tumores hayan alcanzado un volumen promedio de 50 a 60 mm
