Cette méthode de validation et d’évaluation de l’exactitude de l’injection constitue une étape importante de contrôle de la qualité et une étape cruciale dans les études sur les animaux pour faciliter les injections cohérentes et reproductibles des veines de la queue. L’évaluation de l’injection par imagerie par fluorescence immédiatement après son traitement offre l’avantage de déterminer si votre agent est entré dans la circulation sanguine dans sa quantité prévue. L’injection de veines de queue est une manipulation pratique qui bénéficie d’une démonstration visuelle et qui peut être améliorée en observant le dégagement de l’agent injecté du site d’injection.
La démonstration de la procédure avec Muzamil Saleem sera Brooke Deal, une doctorante de mon laboratoire. Avant l’injection de veines de queue, placez un animal anesthésié latéralement dans un imageur de fluorescence proche infrarouge avec le site d’injection sur la queue exposé pour établir une ligne de base de fluorescence. Une fois l’image acquise, transférez l’animal sur le banc chirurgical en position couchée et dilater la vascularisation de la queue en le plongeant dans de l’eau chaude.
Après environ une minute, orientez la queue de sorte que le côté latéral est en vue. La veine latérale de la queue doit sembler de couleur foncée. Stériliser la longueur de la veine avec des tampons d’alcool.
Placez la queue latéralement et insérez un côté biseauté de l’aiguille de calibre 25 à 27 vers le haut et parallèlement à la queue levée dans la veine latérale sélectionnée de la queue à partir de la région des vertèbres coccygéales distales de la queue et en se déplaçant plus proximalement si le placement approprié de l’aiguille échoue au besoin. Dans une insertion réussie d’aiguille, le flashback de sang devrait être observé dans le bord de l’aiguille. Si aucun flashback n’est apparent, déplacez lentement la pointe de l’aiguille sans l’enlever de la queue pour trouver l’insertion veineuse.
Lorsque l’aiguille a été correctement placée, insérez une seringue avec le matériau injectable dans le bord de l’aiguille et pressez le piston pour livrer le contenu dans la veine. Alternativement, un cathéter avec un indicateur de flux sanguin peut être utilisé. Un flashback rapide dans le segment indicateur du cathéter sera observé après un placement correct.
Une légère pression arrière peut alors être utilisée pour extraire le sang dans la seringue pour confirmer le placement approprié dans le vaisseau avant l’injection. Encore une fois, aucune résistance ne se fera sentir. Une fois que tout le matériel a été livré, retirez l’aiguille et appliquez une pression avec une gaze stérile pendant au moins une minute pour assurer la coagulation.
Marquez le site d’injection avec un stylo pour vous assurer que le site d’injection sera visible sur le canal de lumière blanche de l’image acquise. Pour évaluer le signal de fluorescence post-injection au site d’injection, retournez l’animal au stade d’imagerie proche infrarouge et orientez l’animal sur son côté latéral pour exposer le site d’injection sur la queue latérale pour l’imagerie comme démontré. Pour analyser la fluorescence du site d’injection de base et post-injection, des régions d’intérêt peuvent être dessinées dans le logiciel d’imageur proche infrarouge sur la queue près du site d’injection avant et autour de la zone de fluorescence après l’injection de veine de queue.
Les injections administrées avec succès démontreront des niveaux presque aussi bas de signal fluorescent avant et après l’injection. Les images dans lesquelles la fluorescence est visible sur toute la longueur de la queue ne sont pas acceptables et doivent être retirées de l’analyse. Toutes les techniques moléculaires comportementales, chirurgicales ou ex vivo peuvent être exécutées normalement après cette procédure.
Cette technique fournit un contrôle de la qualité pour une injection de veine de queue, révélant le dégagement rapide par le flux sanguin veineux de l’agent correctement injecté, ou la mise en commun au site d’injection si la veine est manquée. Le reagent utilisé dans cette méthode n’est pas dangereux, cependant, les précautions appropriées devraient être prises si l’agent à base de fluorescence est incorporé avec une matière dangereuse.
