Le modèle de souris de la transplantation de rate offre une grande occasion de découvrir le rôle des cellules de rate dans la régulation des réponses immunitaires locales et systémiques dans la maladie inflammatoire. Le principal avantage de ce protocole est qu’en utilisant des souris congéniques, la transplantation de rate permet de vérifier le sort, la longévité et la fonction des cellules de la rate. Avant de commencer l’intervention, placez un drapé stérile jetable sur la plate-forme chirurgicale et confirmez l’absence de réponse au pincement des pieds chez la souris donneur anesthésiée.
Rasez les cheveux de toute la région abdominale et placez la souris sur une plate-forme chirurgicale stérile sous un microscope d’opération à un grossissement de 6 à 10X. Stériliser la peau exposée avec un tampon de préparation à l’alcool et fixer les membres avec du ruban chirurgical. Entrez dans l’abdomen par une incision verticale de trois à quatre centimètres de peau médiane du pubis au processus xyphoïde.
Cautériser les vaisseaux cutanés et étendre l’incision à l’abdomen latéral des deux côtés pour obtenir une meilleure exposition. À l’aide d’un coton-tige stérile, déplacez les intestins vers le flanc droit de l’abdomen pour exposer la rate et utilisez une cautérisation stérile à basse température pour cautériser la veine gastrique courte attachée à la rate. Placez un morceau de gaze stérile imbibé de salin de 37 degrés Celsius au-dessus de la rate pour le garder humide et séparé et mobiliser la veine portail du tissu pancréatique.
Ligate les branches de la veine portail comme démontré. Placez une suture autour de la veine portail distale de la veine splénique et retournez la rate sur le côté droit pour exposer l’aorte et l’artère splénique sur le tronc coeliaque. Disséquer et mobiliser les artères cœliaques aortiques et placer une suture autour de l’aorte proximale à l’artère coeliaque.
Injecter 100 unités internationales d’héparine dans le véna cava inférieur ou IVC pour hépariniser tout le corps. Après trois minutes, ligate les artères hépatiques et gastriques dans l’aorte proximale à l’artère coeliaque. Transect la veine portail et perfuser tout le corps avec 10 millilitres de quatre degrés Celsius saline héparinée de l’aorte abdominale distal au tronc coeliaque.
Recueillir la greffe de rate et bloquer avec le segment cœliaque cœliaque aortique associé dans la veine portail avec le segment de la veine splénique et une petite partie du tissu pancréatique. Puis préserver la greffe en cinq millilitres de quatre degrés Celsius salin. Entrez dans l’abdomen receveur par incision de midline après que la zone chirurgicale soit préparée comme elle est pour le donneur et enlevez la rate indigène de destinataire en ligating la veine et l’artère spléniques.
Couvrez les tissus intestinaux d’une gaze trempée de 37 degrés Celsius et déplacez soigneusement l’intestin vers le côté gauche. Disséquer et ligater les branches lombaires de l’aorte infrarenale dans l’IVC et serrer l’aorte infrarenale dans l’IVC avec deux pinces microvasculaires de quatre millilitres. Placez une suture en nylon 11-0 à travers l’aorte infrarenale et rétractez le récipient pour permettre la création d’une aortotomie elliptique avec des microscisseurs.
Utilisez une aiguille de calibre 30 pour percer l’IVC pour créer une venotomie elliptique et étendre l’ouverture à la longueur de la veine portail donneur. Rincer l’aorte et l’IVC avec 500 microlitres de solution saline héparinée pour dégager le sang intraluminal ou les caillots sanguins des vaisseaux et placer la greffe de rate du donneur dans le flanc droit de l’abdomen receveur. Identifiez soigneusement la manchette aortique du donneur et la veine portail.
Après avoir confirmé que les vaisseaux ne sont pas tordus, couvrez la greffe de rate d’une gaze saline de quatre degrés Celsius. En utilisant deux sutures de séjour de 11-0, reliez le brassard aortique de donneur au sommet proximal et distal de l’aortotomie de destinataire et faites une anastomosis avec deux à trois morsures des sutures continues de nylon 11-0 entre le brassard aortique de donneur et la paroi antérieure de l’aortotomie de destinataire. Tournez la greffe de rate sur le côté gauche du receveur et faites l’anastomose entre la manchette aortique du donneur et la paroi postérieure de l’aortotomie receveur.
Effectuez l’anastomose veineuse entre la veine portail du donneur et l’IVC receveur avec quatre à cinq morsures de sutures continues de chaque côté. Suture de la paroi postérieure à l’intérieur du navire lumen d’abord, puis fermer la paroi antérieure à l’aide de la même suture. Complétez l’anastomose avec un nœud placé sur le coin inférieur à l’extérieur de l’IVC.
Maintenant, relâchez les pinces du navire et utilisez un coton-tige stérile pour tamponner le saignement jusqu’à ce que la couleur de la rate soit récupérée. Fermez l’abdomen avec une suture vicryl absorbable synthétique 5-0 dans un modèle continu et fermez la couche de peau avec une suture en nylon 5-0 dans un modèle interrompu. Injectez ensuite 250 microlitres de solution saline chaude sous-cutanée dans quatre endroits distincts et réchauffez la souris dans un incubateur à température contrôlée de 30 degrés Celsius pendant les premières heures suivant l’opération avec surveillance jusqu’à ce que l’animal ait repris suffisamment conscience pour être transféré dans la cage d’origine.
L’hématoxyline et l’éosine de la rate isogreffes jours un et sept après la transplantation révèle que l’architecture des isogreffes de la rate reste intacte au cours de la première semaine postopératoire. L’analyse cytométrique de flux pour étudier la migration de cellules de rate de donateur après transplantation démontre qu’approximativement 50% des cellules de rate sont donatrices dérivées un jour après transplantation et approximativement 46% sont destinataires dérivés. Sept jours après la transplantation, les leucocytes dérivés du donneur représentent environ 32 % du total des cellules de la rate, tandis que les cellules dérivées du receveur ont augmenté jusqu’à environ 53 % les leucocytes spléniques du donneur ont également migré dans les ganglions lymphatiques, le sang et la moelle osseuse dès le premier jour et sont maintenus au moins jusqu’au septième jour, générant une chimère unique précieuse pour la recherche sur le trafic de splenocytes.
L’utilisation de souris knock-in génétiquement modifiées comme donneurs de rate permettra d’investigation des rôles des médiateurs dérivés des cellules de la rate ou des voies de signalisation clés dans les processus de la maladie. Ce modèle pourrait être un outil puissant pour explorer les mécanismes des populations de cellules de rate en réponse aux agents pathogènes, aux dommages, à l’inflammation, ou au rejet de greffe.
