Модель мыши трансплантации селезенки предлагает большие возможности для выявления роли клеток селезенки в регуляции местных и системных иммунных реакций при воспалительных заболеваниях. Основным преимуществом этого протокола является то, что с помощью конгенных мышей трансплантация селезенки позволяет проверить судьбу, долговечность и функцию клеток селезенки. Перед началом процедуры поместите стерильную одноразовую драпировку над хирургической платформой и подтвердите отсутствие реакции на щепотку ноша в анестезированной донорской мыши.
Бритье волос со всей области живота и поместите мышь на стерильную хирургическую платформу под операционным микроскопом при увеличении от 6 до 10X. Стерилизовать открытые кожи с алкоголем подготовки площадку и обеспечить конечностей с хирургической лентой. Введите брюшной полости через три-четыре сантиметра средней линии вертикального разреза кожи от лобков до процесса ксифоида.
Прижигать сосуды кожи и расширить разрез на боковой живот с обеих сторон для достижения лучшего воздействия. Используя стерильный ватный тампон, переместите кишечник на правый фланг живота, чтобы разоблачить селезенку и использовать стерильную низкотеморную прижигание, чтобы прижигать короткую желудочную вену, прикрепленную к селезенке. Поместите кусок стерильной марли, пропитанной 37 градусов по Цельсию солевой раствор над селезенкой, чтобы держать его влажным и отделить и мобилизовать портал вены из ткани поджелудочной железы.
Ligate ветви портала вены, как попродемонстрировано. Поместите шов вокруг портала вены дистальной от селезенки и перевернуть селезенку в правую сторону, чтобы разоблачить аорты и селезенки артерии на целиакии ствола. Вскрыть и мобилизовать аорты целиакии splenic артерий и место шва вокруг аорты проксимальной целиакии.
Ввись 100 международных единиц гепарина в нижняя кава вены или IVC, чтобы гепаринизировать все тело. Через три минуты, ligate печеночных и желудочных артерий в аорты проксимальной целиакии. Трансект портала вены и perfuse всего тела с 10 миллилитров четыре степени Цельсия гепаринизированный солевой раствор от брюшной аорты дистальной целиакии ствола.
Соберите пересадку селезенки и блок с сопутской аорты целиакии splenic сегмента в портале вены вместе с сегментом селезенки вены и небольшая часть ткани поджелудочной железы. Затем сохранить трансплантат в пять миллилитров четыре степени по Цельсию солевой раствор. Введите получателя живота через разрез средней линии после хирургической области готовится, как это для донора и удалить реципиент родной селезенки путем лигатирования селезенки и артерии.
Обложка тканей кишечника с 37 градусов по Цельсию пропитанной марлей и тщательно переместить кишечник в левую сторону. Вскрыть и лигат поясничных ветвей инфраренальной аорты в IVC и перекрестного зажима инфраренальной аорты в IVC с двумя четырьмя миллилитров микрососудистыми зажимами. Поместите 11-0 нейлоновый шов через инфраренальной аорты и втягивать сосуд, чтобы создать эллиптической аортотомии с микросхемами.
Используйте 30 калибровочных игл для прокола IVC для создания эллиптической венозомии и расширения отверстия до длины донорской вены портала. Промыть аорту и IVC с 500 микролитров гепаринизированного солевого раствора, чтобы очистить интралюминальной крови или сгустков крови от сосудов и место донора селезенки трансплантата в правом фланге живота получателя. Тщательно определите донорскую аорта манжету и портвейную вену.
Подтвердив, что сосуды не скручены, накройте селезенку четырехградусным солевым раствором, пропитанным марлей. Используя два 11-0 пребывания швы, подключить донора аортальной манжеты к проксимальной и дистальной вершины аортотомии реципиента и сделать анастомоз с двумя-тремя укусами непрерывного 11-0 нейлоновых швов между донорской аортальной манжеты и передней стенки реципиента аортотомии. Поверните пересадку селезенки на левую сторону реципиента и сделайте анатомоз между донорской аортальной манжетой и задней стенкой реципиента аортотомии.
Выполните венозный анатомоз между донорской вены портала и реципиента IVC с четырьмя-пятью укусами непрерывных швов с каждой стороны. Шов задней стенки в сосуде люмена, а затем закрыть переднюю стенку, используя тот же шов. Завершите анатомоз узлом, расположенным на нижнем углу за пределами IVC.
Теперь отпустите зажимы сосуда и используйте стерильный ватный тампон, чтобы тампонировать кровотечение до тех пор, пока цвет селезенки не будет восстановлен. Закройте брюшную полость с 5-0 синтетическим абсорбируемым швом Vicryl в непрерывном картине и закройте слой кожи с швом 5-0 нейлона в прерванном картине. Затем ввимите 250 микролитров теплого солевого подкожно в четыре отдельных места и согреете мышь в 30-градусном температурном инкубаторе в течение первых нескольких часов после операции с мониторингом до тех пор, пока животное не обретет достаточное сознание для перевода в домашнюю клетку.
Гематоксилин и эозин селезенки изотрансплантатов дней один и семь после трансплантации показывает, что архитектура селезенки изографов остается неизменным в течение первой послеоперационной недели. Цитометрический анализ потока для исследования миграции донорских клеток селезенки после трансплантации показывает, что примерно 50% клеток селезенки являются донорами, полученными в один день после трансплантации, и примерно 46% являются реципиентами. Через семь дней после трансплантации, донор полученных лейкоцитов приходится около 32% от общего числа клеток селезенки в то время как получатель производных клеток увеличилось примерно до 53%Донор splenic лейкоцитов также мигрировали в лимфатические узлы, кровь и костный мозг уже в первый день и поддерживаются по крайней мере день семь генерации уникальной химеры ценный для исследования торговли сленоцитами.
Использование генетически модифицированных стук-в мышей в качестве доноров селезенки позволит исследование роли селезенки клеток, полученных посредников или ключевых сигнальных путей в процессах заболевания. Эта модель может быть мощным инструментом для изучения механизмов популяций клеток селезенки в ответ на патогенные микроорганизмы, травмы, воспаление или отторжение трансплантата.
