Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH R01 HL109420 à WM et AHA 9320033N à LY.

allogreffe de la souris et syngénéique modèle de transplantation de greffe Toutes les études sur les animaux ont été approuvés par l&#39;Institutional Animal Care et comités de l&#39;utilisation de l&#39;Université de Yale. Pour le modèle d&#39;allogreffe, les segments de l&#39;aorte thoracique du mâle, semaine 4-5 ancien WT (C57BL/6J) ou souris IFN-yR-KO sont interposés dans l&#39;aorte abdominale du récipiendaire féminine, 8-12 semaine WT aide d&#39;un bout à la fin de microchirurgie technique d&#39;anastomose (voir prochaine pour plus de détails). Pour le modèle de greffe syngénique, des segments de aorte thoracique de Male, 4-5 semaines vieilles souris WT ont été intercalés dans la aorte abdominale du mâle, 8-12 semaine IFN-γR1-KO en utilisant une technique de microchirurgie anastomose de bout en bout. Après 1 semaine après l&#39;opération, les animaux ont été inoculés avec iv Ad5.CMV-souris IFN-γ ou Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) à 1 x 10 9 PFU. Sérum de souris IFN-γ ont été mesurés par ELISA (eBioscience) à 1 et 5 semaines après l&#39;administration de l&#39;adénovirus. Certains animaux ont reçu BrdU(Sigma-Aldrich) à 100 mg / kg sc pendant 2 semaines avant le sacrifice. End-to-end microchirurgie technique d&#39;anastomose (vidéo sera prise pour cette partie): 1. Procédure de donateurs <ol><li> Anesthésier les souris donneuses avec injection intrapéritonéale de kétamine (50 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg). </li><li> Après s&#39;être assuré une anesthésie adéquate, placer les souris donneuses sous le microscope opératoire à X8-30 grossissement sur un plateau dans une position couchée, et utiliser un tampon à l&#39;iode et un tampon à l&#39;alcool pour la préparation de la paroi thoracique. </li><li> Inciser la paroi antérieure du thorax par les nervures et le diaphragme afin d&#39;exposer le coeur. </li><li> Ouvrez l&#39;oreillette droite, injecter 10 ml d&#39;héparine (100 U / ml) solution saline dans le ventricule gauche pour chasser les souris en utilisant une seringue de 10 ml avec une aiguille de calibre 25. </li><li> Réséquer le cœur et les poumons pour exposer toute la longueur de l&#39;aorte thoracique. </li><li> Disséquer l&#39;aorte thoracique soigneusement afin de minimiser le traumatisme direct, tout en recueillante identifier, ligaturer et diviser les branches de bois à l&#39;aide de 11-0 suture près de l&#39;aorte. </li><li> Une fois l&#39;aorte thoracique est libre de tissu environnant, l&#39;accise l&#39;ensemble aorte thoracique pour une transplantation. </li><li> Rincer l&#39;extrémité coupée de l&#39;aorte du donneur avec une solution saline héparine (100 U / ml), et le ranger dans la même solution sur la glace (jusqu&#39;à 6 heures) jusqu&#39;à la transplantation. </li></ol> 2. Procédure de destinataire <ol><li> Injecter les souris receveuses avec le kétoprofène ip (5 mg / kg) pour l&#39;analgésie, et thenanesthetize les souris avec de la kétamine ip (50 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg). Les souris receveuses sont profondément anesthésiés dans les 10 minutes pour une durée de 60-90 minutes. Pendant l&#39;opération, le niveau de l&#39;anesthésie est évaluée toutes les 15 min en pinçant la paroi abdominale antérieure ou pied à l&#39;aide de pinces. Si l&#39;animal réagit aux stimuli nocifs à tout moment pendant l&#39;intervention chirurgicale, une dose supplémentaire de kétamine et de xylazine (1/4 ou 1/3 de la dose initiale) sera administré par SC ou IM </li><li> Après s&#39;être assuré une anesthésie adéquate, raser la fourrure dans la paroi abdominale antérieure avec un rasoir électrique, nettoyer la peau en utilisant Prep Pad d&#39;iode et Pad Prep alcool, couvrir les yeux à l&#39;aide pommade ophtalmique. Pendant la chirurgie, les techniques d&#39;asepsie suivants seront utilisés pour les opérations, y compris le nettoyage de la table d&#39;opération avec 10% de javel, le port de gants stériles et en utilisant des instruments de microchirurgie stérilisés (instruments stérilisés à la vapeur pour le début de l&#39;opération, puis verre chaud perle stérilisé instruments entre plusieurs opérations, etc.) </li><li> Placez les souris receveuses sous le microscope opératoire à un grossissement de X8-30 sur un plateau dans une position couchée. </li><li> Inciser la paroi abdominale à partir de la ligne médiane à xiphoïde pubis, et la propagation de la paroi abdominale en dehors à l&#39;aide d&#39;un micro-enrouleur pour exposer la cavité abdominale. </li><li> Rentrez les intestins haut et envelopper avec de la gaze humidifiée avec une solution saline. Les souris receveuses se refroidir par la perte de HEAt par les intestins extériorisés. Il est important de maintenir la chaleur animale. Toutefois, le conseil de chauffage n&#39;est pas utilisé pendant la chirurgie que l&#39;hypothermie modérée est bénéfique dans la prévention des lésions de la moelle pendant l&#39;occlusion du flux sanguin aortique ainsi que, il ya transfert de chaleur inefficace avec le flux sanguin absent dans la moitié inférieure du corps de la souris. </li><li> Déplacez les organes reproducteurs inferiorly, envelopper les domaines de l&#39;abdomen de souris receveuses avec de la gaze de solution saline solution humidifié, et l&#39;utiliser pour rentrer le rectum à droite de l&#39;abdomen. Les tissus exposés sont irrigués régulièrement avec une solution saline lors de la transplantation. </li><li> Disséquer carrément un segment d&#39;aorte entre le navire rénale proximale et distale bifurcation aortique et se séparer de la veine cave inférieure (VCI) soigneusement. </li><li> Identifier et ligaturer toutes les petites branches provenant de ce segment de l&#39;aorte abdominale à l&#39;aide 11-0 Polyamide monofilament suture. </li><li> Clampage du segment isolé d&#39;unaorte bdominal l&#39;aide de deux pinces vasculaires approximativement 5 mm d&#39;intervalle, un à chaque extrémité. </li><li> Transect l&#39;aorte abdominale entre les pinces à l&#39;aide de micro-ciseaux pointus pour créer des sites anastomotiques. </li><li> Réséquer un petit segment de l&#39;aorte abdominale (jusqu&#39;à 0,4 mm de longueur) d&#39;une extrémité de coupe de l&#39;aorte sectionnée destinataire pour s&#39;adapter à la prothèse aortique de donneur. </li><li> Rincer les segments aortiques entre les pinces en utilisant une solution saline héparinée pour enlever le sang résiduel. Les segments de l&#39;aorte entre les pinces et le greffon aortique de donneur sont irrigués périodiquement (100 U / ml) solution saline héparine (jusqu&#39;à 40 ml / kg) au cours de l&#39;anastomose. </li><li> Sectionner les deux côtés de l&#39;aorte du donneur avec des micro-ciseaux pointus afin de créer un greffon de segment de 2,5 mm de longueur pour la transplantation. </li><li> Placer la prothèse aortique de donneur en position orthotopique, anastomose extrémité proximale et distale du donneur de greffe à proximale et distale extrémité coupée du destinataire de l&#39;aorte abdominale, respectivement, avec une fin-tmotif o-end en utilisant 11-0 Polyamide monofilament suture. </li><li> Pour les sutures continues, placer les sutures de séjour à 3 et 9 heures premièrement. Entre deux sutures de séjour de chaque côté de la greffe, s&#39;anastomosent les deux bords coupés à 3-4 points de suture à l&#39;aide des sutures de course, et nouer les sutures de course pour rester sutures avec un double nœud. Comme les deux couches de fermeture sont continues, le risque de déhiscence est augmentée. Le greffon aortique donneur doit être d&#39;une longueur appropriée pour relier proximale et distale extrémité coupée du destinataire de l&#39;aorte abdominale. </li><li> Pour les sutures interrompues, de construire quatre anastomose à 3 et 9 heures dans les deux côtés de la greffe d&#39;une part, et anastomoser deux bords coupés à 3-4 points entre deux sutures de séjour de chaque côté de la greffe. </li><li> Relâcher la pince distale pour permettre l&#39;écoulement rétrograde en greffe, identifier les sites de saignement et de faire des points supplémentaires dans les 3 minutes. </li><li> Après avoir vérifié l&#39;hémostase satisfaisante, relâchez la pince proximale. </li><li> Confirmer la perméabilité du greffon selon la présence d&#39;une pulsation vigoureuse dans la greffe et le segment adjacent proximale de l&#39;aorte abdominale natif, en particulier dans le segment adjacent distale de l&#39;aorte abdominale et l&#39;artère mésentérique inférieure. Considérez thrombose dans des sites anastomotiques si la pulsation diminue au bout de quelques minutes après le rétablissement de la circulation sanguine. </li><li> Retourner les intestins dans la cavité abdominale. </li><li> Suturer fermer la paroi abdominale en utilisant 5-0 Nylon suture dans la couche musculaire et la couche de peau, respectivement. </li><li> Placez les souris receveuses dans une cage propre sur le dessus d&#39;un coussin chauffant, et d&#39;attendre 1-2 heures pour les souris à reprendre conscience et se remettre de l&#39;anesthésie. Il est important de maintenir la chaleur animale adéquate lors de la récupération. Gardez les souris dans la cage chaud et au sec avant sillage des animaux de l&#39;anesthésie. </li><li> Évaluer la fonction motrice des membres inférieurs après récupération de la souris, et encore le deuxième jour. Une chirurgie de transplantation réussie sera confirmée if aucun dysfonctionnement des membres postérieurs est observée chez les souris receveuses de la deuxième journée. </li><li> Administrer les souris receveuses au kétoprofène dans l&#39;eau potable (5 mg / kg / j = 27 ug / ml dans l&#39;eau potable) pendant 48 heures. Si des souris receveuses souffrent de douleur non soulagée par les analgésiques postopératoires comme en témoigne la perte de mobilité, absence de toilettage, anormale bottes posture, etc, ils seront euthanasiés. Les animaux seront euthanasiés à la fin des points prédéfinis après 1-60 jours. </li></ol> Analyse Graft greffons artériels dans allogreffe ont été achetés à 4 semaines et greffes dans le modèle de greffe syngénique ont 6 semaines après l&#39;opération (5 semaines après l&#39;infection virale) et analysés par les techniques histologiques standard pour Elastica-van Gieson (EVG) coloration, hématoxyline et l&#39;éosine (HE) coloration et immunofluorescence. Les photos ont été prises à l&#39;aide d&#39;un système de microscope immunofluorescence (Zeiss). Le comptage des cellules des noyaux entouré par immunomarquage positif a effectuered à fort grossissement et une moyenne de 5 sections pour chaque greffon. Les mesures de surface greffés de la lumière (à l&#39;intérieur de l&#39;endothélium), intima (entre la limitante élastique endothélium et interne, IEL), les médias (entre l&#39;IEL et limitante élastique externe, anguille), épaisseur de paroi (entre la limitante élastique endothélium et externe) et tout navire (à l&#39;intérieur de l&#39;anguille) ont été calculés à partir de 5 sections de série, 150 um d&#39;intervalle pour chaque greffon, en utilisant l&#39;analyse d&#39;image assistée par ordinateur et NIH image 1.60 ( <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/nih-image</a> ). L&#39;analyse statistique Toutes les données sont exprimées en moyenne ± SEM. À deux queues, des tests t appariés et une analyse ANOVA à deux voies ont été effectuées en utilisant le logiciel Prism (GraphPad Software). Différences avec P &lt;0,05 ont été considérées pour indiquer la signification statistique.

<ol>
	<li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis.">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li><li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection.">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li><li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li><li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart.">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allograft+arteriopathy:+pathogenesis+update.">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+vascular+disease:+immune+response+meets+the+vessel+wall.">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li><li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts:+role+of+interferon-gamma.">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li><li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts.">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li><li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients.">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li><li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells.">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li><li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+some+females+reject+males?+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection.">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li><li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy.">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li><li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis.">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li><li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes.">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li><li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy.">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li><li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation.">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li><li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries.">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li><li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+vascular+rejection:+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models.">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li><li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells.">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li><li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-&#947;-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion.">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-&#947;-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li></ol>

Nous n&#39;avons rien à révéler.

Les protocoles décrits sont axés sur les modèles GA souris. Les procédures peuvent être appliquées à d&#39;autres modèles de transplantation de greffons. Ces modèles comprennent xénogreffe humanisée (c. segments d&#39;artère coronaire de l&#39;homme interposés dans le aortes infra-rénale de souris immunodéficientes), et le rejet aigu souris modèle GA (soit une aorte de souris d&#39;une souche génétique dans un autre destinataire de souche génétique). Nos modèles de souris décrites...

Arteriosclerois greffés (GA), également appelés vasculopathie d&#39;allogreffe, est une lésion pathologique qui se développe au fil des mois ou des années dans les organes transplantés caractérisées par diffus, une sténose circonférentielle de l&#39;ensemble de l&#39;arborescence vasculaire du greffon 7. Les stades précoces peuvent provoquer des sténoses excentriques et focal qui sont plus évidentes dans les artères, ce qui ressemble davantage sténoses observées dans l&#39;athérosclérose conventionnel. La perte de la lumière des vaisseaux greffés résulte de l&#39;expansion intimale due à l&#39;infiltration de cellules et les macrophages T hôte et en particulier à l&#39;accumulation de matrice extracellulaire et le muscle lisse en forme de cellules provient de greffon, l&#39;hôte ou les deux 5, 13, 19, qui est insuffisamment compensée par le remodelage vasculaire vers l&#39;extérieur. En allogreffes cardiaques, les lésions les plus cliniquement significatifs sont ceux dans les artères coronaires épicardiques et intramyocardique. En fin de compte, GA des artères coronaires provoquer une insuffisance cardiaque ischémique. GA est la principale cause de gr cardiaque tardperte arrière. Les sténoses de GA s&#39;arrêtent pas aux lignes de suture, impliquant fortement la réponse de l&#39;hôte à alloantigènes greffés dans sa pathogénie et qui nous conduit à classer GA comme une forme de rejet chronique 3. Cependant, d&#39;autres formes de lésions artérielles peuvent augmenter le risque de GA, soit par l&#39;augmentation de la charge nette de blessure ou en intensifiant et / ou la modulation de la réponse allo-immune. La cellule (CE) paroi endothéliale des artères greffe est conservé dans GA humaine et les régions les plus superficielles de l&#39;intima à côté de la doublure CE est le site le plus fortement infiltré par dérivée de l&#39;hôte IFN-γ-production des cellules T et les macrophages 11; dans certains patients GA est associé avec le développement de allo-anticorps donneur-spécifiques qui se lient au greffe CE 16, mais les vaisseaux montrent peu de signes de la nécrose fibrinoid qui est caractéristique de rejet humoral aigu 11. L&#39;élément le plus critique de GA pathogénie est l&#39;la prolifération des cellules musculaires lisses, comme au sein de l&#39;intima, si ce processus peut être arrêté, GA est peu probable pour progresser. Les travaux antérieurs de notre groupe avait montré que intimas des segments des artères coronaires humaines interposés dans la aorte sous-rénale de souris immunodéficientes développer en réponse à lymphocytes T humains par transfert adoptif allogéniques pour le donateur de l&#39;artère et que ce processus pouvait être inhibée par la neutralisation humain IFN- γ 18. En outre IFN-γ exogène humaine pourrait causer intimale (et médiane) des cellules musculaires lisses (CMLV) prolifération vasculaire dans ces greffons artériels en l&#39;absence de lymphocytes T humains 15, 17. (Il est important de noter que l&#39;homme et la souris IFN-γ ne traversent pas les espèces, en excluant les effets indirects sur l&#39;hôte de la souris dans ce système expérimental.) Ces modèles humanisés de souris ont l&#39;avantage de récapituler les cellules T humaines / interactions cellulaires vasculaires et l&#39;intima lésions sont largement composées de cellules humaines (c.-à-greffe dérivé),comme cela a été observé dans des échantillons cliniques, mais ils ne récapituler pas entièrement la situation clinique parce qu&#39;ils ignorent le rôle des macrophages de l&#39;hôte et éventuellement d&#39;autres types cellulaires impliqués dans les lésions de transplantation clinique. Un modèle classique de la souris de ce processus pourrait théoriquement remédier à ce problème, en complément des limites du modèle humanisé en impliquant le système immunitaire de l&#39;hôte complet et offrant l&#39;avantage supplémentaire de permettre l&#39;alimentation des approches génétiques de souris à appliquer à l&#39;AG. Les deux modèles de souris plus largement utilisés impliquent la transplantation cardiaque hétérotopique et l&#39;artère orthotopique transplantation 1. Les lésions qui se développent dans les artères de greffes cardiaques hétérotopiques sont en grande partie constitués de cellules de l&#39;hôte, probablement d&#39;origine de la moelle osseuse, tandis que les cellules intima des artères dans les greffes cardiaques humaines sont en majorité d&#39;origine du greffon 5, 13, 19. Il s&#39;agit d&#39;une distinction importante qui a conduit à développer des modèles alternatifs de souris. Interposition d&#39;une aorte de souris d&#39;une souche à un autre destinataire de la souche de souris est encore plus limitée de modèle pour le rejet chronique chez l&#39;homme parce que la réponse à médiation cellulaire de rejet aigu dans ce modèle de souris élimine complètement toutes les cellules vasculaires dérivées du donneur de la greffe à l&#39;intérieur de deux, trois, 19 semaines. Par conséquent, les modifications ultérieures vu dans le segment de vaisseau interposé sont uniquement une réponse des cellules hôtes qui ont repeuplées le décellularisé navire échafaudage, créant une situation très artefact d&#39;une pertinence limitée comme un modèle pour les changements dans les vaisseaux greffés qui se produisent dans la clinique. Nous avons récemment développé deux nouveaux modèles de souris pour contourner ces problèmes 21. Le premier modèle comporte l&#39;interposition d&#39;un segment de vaisseau à partir d&#39;une souris mâle dans une femelle receveuse de la même souche pure (C57BL/6J). Le deuxième modèle consiste à interposer un segment d&#39;artère d&#39;un type C57BL/6J donneur de souris sauvage dans une souris hôte de la même souche et le sexe qui n&#39;a pas la receptor IFN-γ pour (IFN-yR-KO), suivie par l&#39;administration d&#39;IFN-γ souris (envoyé par infection du foie de souris avec un vecteur adénoviral. Ici, nous décrivons les protocoles détaillés et les avantages de nos modèles GA de souris.

<table border="1" >
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of the Reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>C57BL/6J (H-2b)</td>
 <td>Jackson Laboratories 
 (Bar Harbor, ME)</td>
 <td>000664</td>
 <td>Donor (5 weeks) 
 Recipient (8-12weeks)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine Hydrochloride Injection </td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-2053</td>
 <td>Storage Solution(50 mg/ml) 
 Working Solution(5 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td> Xylazine Sterile Solution</td>
 <td>Lloyd Inc.</td>
 <td>NADA# 139-236</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution(1 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen</td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution-oral 
 (0.027 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heparin Sodium</td>
 <td>Sagent Pharmaceticals</td>
 <td>NDC 25021-400</td>
 <td>Storage Solution(1000 U/ml) 
 Working Solution(100 U/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride)</td>
 <td>CareFusion</td>
 <td>AL4109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.9% Sodium Chloride Injection</td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-4888-10</td>
 <td>To prepare the anesthetic </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum Ophthalmic Ointment </td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>NDC 17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine Prep Pads </td>
 <td>Triad Disposables, Inc.</td>
 <td>NDC 50730-3201-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alcohol Prep Pads</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>NDC 68599-5805-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MZ95</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Scissors</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5693</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spring Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>15009-08</td>
 <td>To transect the aorta of donor or recipient </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Narrow Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>14088-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle Holder/Forceps</td>
 <td>MICRINS</td>
 <td>MI1542</td>
 <td>To hold the needle</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>11254-20</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11251-35</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Standard Pattern Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11000-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>13011-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LANCASTER Eye Speculum</td>
 <td>Zepf Medical Instruments</td>
 <td>42-1209-07</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Vascular Clip</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-6472</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Clip Applying Forceps With Lock</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5440</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Polyamide Monofilament Suture</td>
 <td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
 <td>Cat #T4A10Q07</td>
 <td>10-0 suture, Needle=70 microns</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Monofilament Nylon Suture</td>
 <td>Syneture 
 (Covidien)</td>
 <td>SN-1956</td>
 <td>6-0 suture</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-Woven Songes</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>Reorder No. 94442000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309659</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>3 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309657</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309604</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18G 1 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305196</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25G 7/8, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305124</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hearting Pad</td>
 <td>Sunbeam</td>
 <td>Z-1228-001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>9854-500</td>
 <td></td>
 </tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 2. Specific reagents and equipment.</td>
</tr>
 </tbody>
</table>

mouse models for graft arteriosclerosis

Arteriosclerois greffés (GA), également appelés vasculopathie d&#39;allogreffe, est une lésion pathologique qui se développe au fil des mois ou des années dans les organes transplantés caractérisées par diffus, une sténose circonférentielle de l&#39;ensemble de l&#39;arborescence vasculaire du greffon. L&#39;élément le plus critique de GA pathogénie est la prolifération des cellules musculaires lisses, comme au sein de l&#39;intima. Quand un segment d&#39;artère coronaire humaine est intercalé dans la aorte sous-rénale de souris immunodéficientes, les intimas pourraient être développer en réponse à lymphocytes T humains par transfert adoptif allogénique pour le donateur de l&#39;artère ou exogène humain IFN-γ en l&#39;absence de cellules T humaines. Interposition d&#39;une aorte de souris d&#39;une souche dans un autre destinataire de la souche de souris est limitée comme un modèle pour le rejet chronique chez l&#39;homme, car la réponse de rejet à médiation cellulaire aigu dans ce modèle de souris élimine complètement toutes les cellules vasculaires dérivées du donneur de la greffe dans les deux-trois semaines. Nous avons récemment développé deux nouveaux mOuse modèles de contourner ces problèmes. Le premier modèle comporte l&#39;interposition d&#39;un segment de vaisseau à partir d&#39;une souris mâle dans une femelle receveuse de la même souche pure (C57BL/6J). Le rejet de greffe dans cette affaire est dirigée uniquement contre les antigènes mineurs d&#39;histocompatibilité codées par le chromosome Y (présent chez l&#39;homme, mais pas la femelle) et la réponse de rejet qui s&#39;ensuit est assez indolent de préserver les cellules musculaires lisses dérivées du donneur pendant plusieurs semaines. Le deuxième modèle comprend l&#39;interposition d&#39;un segment d&#39;artère d&#39;un type C57BL/6J donneur de souris sauvage dans une souris hôte de la même souche et le sexe qui n&#39;a pas le récepteur de l&#39;IFN-γ, suivi par l&#39;administration de souris IFN-γ (envoyé par l&#39;infection de la souris foie avec un vecteur adénoviral. Il n&#39;ya pas de rejet dans ce cas comme donneur et souris receveuses sont de la même souche et le sexe, mais les cellules musculaires lisses des donateurs prolifèrent en réponse à la cytokine tandis que les cellules dérivées de l&#39;hôte, manquant de récepteurs pourcette cytokine, sont insensibles. Par rétrocroisant changements génétiques dans le donneur de navire, les deux modèles peuvent être utilisés pour évaluer l&#39;effet de gènes spécifiques sur la progression GA. Ici, nous décrivons des protocoles détaillés pour nos modèles GA de souris.

Modèle souris allogreffe artériosclérose (GA): Dans ce modèle, une aorte du donneur masculin est transplanté dans récipiendaire féminine afin que l&#39;hôte induit réponses T allo-immunes à médiation cellulaire alloréactives contre un antigène mineur de Y (l&#39;antigène d&#39;histocompatibilité mineure HY spécifiques au mâle) exprimé sur le greffon 12, et à son tour des cellules T IFN-γ produite lecteurs VSMC prolifération 20 comme on l&#39;observe dans d&#39;...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models for Graft Arteriosclerosis at JoVE.com

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Nous décrivons les protocoles de nos arteriosclerois de greffe de souris (GA) des modèles qui impliquent interposition d&#39;un segment de vaisseau de la souris sur un receveur de la même souche consanguine. Par rétrocroisant changements génétiques dans le donneur de navire, le modèle permet d&#39;évaluer l&#39;effet de gènes spécifiques sur GA.

Les modèles de souris pour l&#39;artériosclérose Graft

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K vues.  Yale University School of Medicine. Nous décrivons les protocoles de nos arteriosclerois de greffe de souris (GA) des modèles qui impliquent interposition d'un segment de vaisseau de la souris sur un receveur de la même souche consanguine. Par rétrocroisant changements génétiques dans le donneur de navire, le modèle permet d'évaluer l'effet de gènes spécifiques sur GA.

Vidéo: Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

MRI and PET in Mouse Models of Myocardial Infarction

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ideal model for testing novel therapeutic strategies.
In vivo magnetic resonance imaging (MRI) gives excellent views of the heart noninvasively with clear anatomical detail, which can be used for accurate functional assessment. Contrast agents can provide basic measures of tissue viability but these are nonspecific. Positron emission tomography (PET) is a complementary technique that is highly specific for molecular imaging, but lacks the anatomical detail of MRI. Used together, these techniques offer a sensitive, specific and quantitative tool for the assessment of the heart in disease and recovery following treatment.
In this paper we explain how these methods are carried out in mouse models of acute myocardial infarction. The procedures described here were designed for the assessment of putative protective drug treatments. We used MRI to measure systolic function and infarct size with late gadolinium enhancement, and PET with fluorodeoxyglucose (FDG) to assess metabolic function in the infarcted region. The paper focuses on practical aspects such as slice planning, accurate gating, drug delivery, segmentation of images, and multimodal coregistration. The methods presented here achieve good repeatability and accuracy maintaining a high throughput.

We describe how to perform MRI and PET imaging of the mouse heart. The protocol is tailored to assess treatment efficacy in models of myocardial infarction and heart failure.

IRM et la TEP dans les modèles de souris de l&#39;infarctus du myocarde

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ...

Recherche

Médecine

Production of Apolipoprotein C-III Knockout Rabbits using Zinc Finger Nucleases

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins (HDL). It has been recognized that high levels of plasma ApoCIII constitutea risk factor for cardiovascular diseases (CVD). Elevated plasma ApoCIII level often correlates with insulin resistance, obesity, and hypertriglyceridemia. Invaluable knowledge on the roles of ApoCIIIin lipid metabolisms and CVD has been obtained from transgenic mouse models including ApoCIII knockout (KO) mice; however, it is noted that the metabolism of lipoprotein in mice is different from that of humans in many aspects. It is not known until now whether elevated plasma ApoCIII is directly atherogenic. We worked to develop ApoCIII KO rabbits in the present study based on the hypothesis that rabbits can serve as a reasonablemodelfor studying human lipid metabolism and atherosclerosis. Zinc finger nuclease (ZFN) sets targeting rabbit ApoCIIIgene were subjected to in vitro validation prior to embryo microinjection. The mRNA was injected to the cytoplasm of 35 rabbit pronuclear stage embryos, and evaluated the mutation rates at the blastocyst state. Of sixteen blastocysts that were assayed, a satisfactory 50% mutation rate (8/16) at the targeting site was achieved, supporting the use of Set 1 for in vivo experiments. Next, we microinjected 145 embryos with Set 1 mRNA, and transferred these embryos to 7 recipient rabbits. After 30 days gestation, 21 kits were born, out of which five were confirmed as ApoCIII KO rabbits after PCR sequencing assays. The KO animal rate (#KO kits/total born) was 23.8%. The overall production efficiency is 3.4% (5 kits/145 embryos transferred). The present work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits. These ApoCIII KO rabbits are novel resources to study the roles of ApoCIII in lipid metabolisms.

Recent development in gene targeting tools makes production of knockout (KO) rabbits possible. In the present work, we generated five Apolipoprotein (Apo) C-III KO rabbits using Zinc Finger Nucleases (ZFN). This work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits.

La production de lapins de Knockout apolipoprotéine C-III à l&#39;aide de zinc nucléases doigt

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

Implantation de veine cave inférieure interposition de greffe en modèle de souris

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Souris Transplantation rénale: Les modèles de rejet des allogreffes

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal systems. HFUS has the ability to detect structures as small as 30 &#181;m, a property that has been utilized for visualizing superficial lymph nodes in rodents in brightness (B)-mode. Combining power Doppler with B-mode imaging allows for measuring circulatory blood flow within lymph nodes and other organs. While HFUS has been utilized for lymph node imaging in a number of mouse&#160; model systems, a detailed protocol describing HFUS imaging and characterization of the cervical lymph nodes in mice has not been reported. Here, we show that HFUS can be adapted to detect and characterize cervical lymph nodes in mice. Combined B-mode and power Doppler imaging can be used to detect increases in blood flow in immunologically-enlarged cervical nodes. We also describe the use of B-mode imaging to conduct fine needle biopsies of cervical lymph nodes to retrieve lymph tissue for histological&#160; analysis. Finally, software-aided steps are described to calculate changes in lymph node volume and to visualize changes in lymph node morphology following image reconstruction. The ability to visually monitor changes in cervical lymph node biology over time provides a simple and powerful technique for the non-invasive monitoring of cervical lymph node alterations in preclinical mouse models of oral cavity disease.

This protocol describes the application of high-frequency ultrasound (HFUS) for imaging mouse cervical lymph nodes. This technique optimizes visualization and quantification of cervical lymph node morphology, volume and blood flow. Image-guided biopsy of cervical lymph nodes and processing of lymph tissue for histological evaluation is also demonstrated.

Haute fréquence imagerie par ultrasons de souris cervicales ganglions lymphatiques

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.

We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.

Modèle murin de rejet vasculaire allo-induite et Transplant artériosclérose

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies have suggested that nerves may also modulate skin disorders including atopic dermatitis, psoriasis and cancer. Here, we describe protocols for testing the requirement for nerves in maintaining a cutaneous mechanosensory organ, the touch dome (TD). Specifically, we discuss methods for genetically labeling, harvesting and visualizing TDs by whole-mount staining, and for performing unilateral surgical denervation on mouse dorsal back skin. Together, these approaches can be used to directly compare TD morphology and gene expression in denervated as well as sham-operated skin from the same animal. These methods can also be readily adapted to examine the requirement for nerves in mouse models of skin pathology. Finally, the ability to repeatedly sample the skin provides an opportunity to monitor disease progression at different stages and times after initiation.

This article includes detailed protocols for genetic labeling of mouse skin, surgical denervation, skin biopsy and visualizing labeled epithelia by whole-mount &#946;-galactosidase staining. These methods can be used to test the requirement for nerves in mouse models of normal and pathological skin.

Cutaneous dénervation chirurgicale: une méthode pour tester l&#39;exigence de nerfs dans les modèles murins de la maladie de la peau

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Vein Interposition Modèle: un modèle approprié pour étudier Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Utilisation d’une biopsie chimique pour l’évaluation de la qualité de la greffe

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Near Infrared Photoimmunotherapy for Mouse Models of Pleural Dissemination

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination model can be used for the evaluation of treatment methods for intrathoracic diseases such as lung cancer or malignant pleural mesothelioma.
Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is a recently developed cancer treatment strategy that combines the specificity of tumor-targeting antibodies with toxicity caused by a photoabsorber (IR700Dye) after exposure to NIR light. The efficacy of NIR-PIT has been reported using various antibodies; however, only a few reports have shown the therapeutic effect of this strategy in an orthotopic model. In the present study, we demonstrate an example of efficacy evaluation of the pleural disseminated lung cancer model, which was treated using NIR-PIT.

Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is an emerging cancer therapeutic strategy that utilizes an antibody-photoabsorber (IR700Dye) conjugate and NIR light to destroy cancer cells. Here, we present a method to evaluate the antitumor effect of NIR-PIT in a mouse model of pleural disseminated lung cancer and malignant pleural mesothelioma using bioluminescence imaging.

Photoimmunothérapie proche infrarouge pour des modèles murins de dissémination pleurale

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination ...