نموذج الماوس من زرع الطحال يوفر فرصة كبيرة للكشف عن دور خلايا الطحال في تنظيم الاستجابات المناعية المحلية والجهازية في الأمراض الالتهابية. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أنه باستخدام الفئران congenic، زرع الطحال يجعل من الممكن للتحقق من مصير وطول العمر، ووظيفه خلايا الطحال. قبل البدء في العملية، ضع ستارة معقمة يمكن التخلص منها على المنصة الجراحية وتأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع في فأر المتبرع المُجرّد.
حلق الشعر من منطقة البطن بأكملها ووضع الماوس على منصة جراحية معقمة تحت مجهر التشغيل في التكبير 6 إلى 10X. تعقيم الجلد المكشوف مع وسادة إعداد الكحول وتأمين الأطراف مع الشريط الجراحي. أدخل البطن عن طريق شق الجلد العمودي المتوسط من العانة إلى عملية الإكسيفويد من ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات.
الكي الأوعية الجلدية وتوسيع شق إلى البطن الجانبي على كلا الجانبين لتحقيق التعرض أفضل. باستخدام مسحة القطن العقيمة، قم بتحريك الأمعاء إلى الجناح الأيمن من البطن لفضح الطحال واستخدام الكي العقيم منخفض الحرارة لتكويد الوريد المعدة القصير المرفق بالطححال. ضع قطعة من الشاش العقيم المنقوعة بملوحة 37 درجة مئوية فوق الطحال لإبقائها رطبة ومنفصلة وتعبئة الوريد البوادي من أنسجة البنكرياس.
Ligate فروع الوريد المدخل كما هو موضح. وضع خياطة حول الوريد بوابة من الوريد الزلي والوجه الطحال إلى الجانب الأيمن لفضح الشريان الأورطي والشريان الزبال على جذع الاضطرابات الهضمية. تشريح وتعبئة الشرايين السيلية الأبهرية السلية ووضع خياطة حول الشريان الأورطي إلى الشريان الاضطرابات الهضمية.
حقن 100 وحدة دولية من الهيبارين في الكافا فينا السفلي أو IVC ل heparinize الجسم كله. بعد ثلاث دقائق، ligate الشرايين الكبدية والمُهدية في الشريان الأبهري القريبة إلى الشريان الاضطرابات الهضمية. Transect الوريد المدخل و perfuse الجسم كله مع 10 ملليلتر من أربعة درجة مئوية heparinized المالحة من الشريان الأورطي البطن إلى جذع الاضطرابات الهضمية.
جمع الكسب غير المشروع الطحال وكتلة مع الجزء المرتبط السيلية الأبهري في الوريد المدخل جنبا إلى جنب مع الجزء من الوريد السليك وجزء صغير من أنسجة البنكرياس. ثم الحفاظ على الكسب غير المشروع في خمسة ملليلتر من الملحية درجة أربع درجة مئوية. أدخل البطن المتلقي عن طريق شق منتصف بعد يتم إعداد المنطقة الجراحية كما هو للمتبرع وإزالة الطحال الأصلي المتلقي عن طريق ربط الوريد splenic والشريان.
غطي أنسجة الأمعاء بالشاش المنقوع بـ37 درجة مئوية، واحرك الأمعاء بعناية إلى الجانب الأيسر. تشريح وligate الفروع القطنية من الشريان الأورطي infrarenal في IVC وعبر المشبك الشريان الأورطي في IVC مع اثنين من المشابك الأربعة المليلتر microvascular. وضع خياطة النايلون 11-0 من خلال الشريان الأبهر في الرخوية والتراجع عن السفينة للسماح بإنشاء الشريان الأورطي البيضاوي مع microscisors.
استخدام إبرة قياس 30 لاختراق IVC لخلق فينومي بيضاوي الشكل وتمديد فتح لطول الوريد بوابة المانحة. دافق الشريان الأورطي و IVC مع 500 ميكرولترات من محلول ملحي heparinized لمسح الدم داخل الأمعاء أو جلطات الدم من الأوعية ووضع الكسب غير المشروع الطحال المانح في الجناح الأيمن من البطن المتلقي. تحديد بعناية الكفة الأبهري المانحة والوريد المدخل.
بعد التأكد من أن الأوعية ليست ملتوية، وتغطي الكسب غير المشروع الطحال مع أربع درجات مئوية المالحة الشاش المنقوع. باستخدام اثنين من خياطة البقاء 11-0، وربط الكفة الأبهري المانحة إلى قمة قريبة وهضم من الشريان الأورطي المتلقي وجعل anastomosis مع اثنين إلى ثلاثة لدغات من خياطة النايلون المستمر 11-0 بين الكفة الأبهر المانحة والجدار الأمامي من الشريان الأورطي المتلقي. بدوره الكسب غير المشروع الطحال إلى الجانب الأيسر من المتلقي وجعل anastomosis بين الكفة الأبهري المانحة والجدار الخلفي من الشريان الأورطي المتلقي.
إجراء osistomosis الوريدي بين الوريد بوابة المانحة والمتلقي IVC مع أربع إلى خمس لدغات من الغرز المستمر على كل جانب. خياطة الجدار الخلفي داخل تجويف السفينة أولا ثم إغلاق الجدار الأمامي باستخدام نفس خياطة. أكمل الورم الدرقي مع عقدة وضعت في الزاوية السفلى خارج IVC.
الآن الافراج عن المشابك السفينة واستخدام مسحة القطن العقيمة لتدبير النزيف حتى يتم استرداد لون الطحال. أغلق البطن مع خياطة 5-0 الاصطناعية فيكريل قابلة للامتصاص في نمط مستمر وإغلاق طبقة الجلد مع خياطة النايلون 5-0 في نمط توقف. ثم حقن 250 ميكرولترات من الحارة المالحة تحت الجلد في أربعة مواقع منفصلة ودفء الماوس في 30 درجة مئوية درجة الحرارة التي تسيطر على حاضنة للعمليات بعد الساعات الأولى مع الرصد حتى الحيوان قد استعاد الوعي الكافي لنقل إلى القفص المنزلي.
Hematoxylin وeosin من الطحال isografts أيام واحد وسبعة بعد زرع يكشف عن أن الهندسة المعمارية من الأيزوجرافت الطحال لا تزال سليمة خلال الأسبوع المنطوق في مرحلة ما بعد الأول. تحليل تدفق الخلايا الخلوية للتحقيق في الهجرة خلية الطحال المانحة بعد زرع يدل على أن ما يقرب من 50٪ من خلايا الطحال هي المانحة مشتقة في يوم واحد بعد زرع وحوالي 46٪ هي المتلقية مشتقة. سبعة أيام بعد زرع, المانحة الكريات البيض المشتقة تمثل ما يقرب من 32٪ من مجموع خلايا الطحال في حين أن الخلايا المشتقة المتلقي زادت ما يصل إلى ما يقرب من 53٪ الكريات البيض المانحة splenic هاجر أيضا إلى الغدد الليمفاوية, الدم, ونخاع العظام في وقت مبكر من اليوم الأول ويتم الاحتفاظ بها إلى اليوم السابع على الأقل توليد الكيميرا قيمة فريدة من نوعها للبحث عن الاتجار splenocyte.
استخدام الفأرة المعدلة وراثيا في طرق في والمتبرعين الطحال سوف تسمح التحقيق في أدوار الخلايا الطحالية المشتقة أو مسارات إشارات رئيسية في عمليات المرض. يمكن أن يكون هذا النموذج أداة قوية لاستكشاف آليات مجموعات خلايا الطحال استجابة لمسببات الأمراض أو الإصابة أو الالتهاب أو رفض الزراعة.
