Le test de vitesse locomotrice planaire est un moyen d’évaluer rapidement les effets stimulants et possibles de sevrage pour une variété d’agents biologiques modificateurs qui pourraient affecter la motilité. Cet essai est facilement contrôlé et fournit une méthode simple et accessible pour générer des données comportementales fiables, même dans les milieux de recherche les plus élémentaires. Puisque le système nerveux planaire a un cerveau rudimentaire centralisé, une symétrie bilatérale et des systèmes analogues de neurotransmetteur, les études comportementales utilisant ces organismes offrent des perspicacités précliniques dans les réponses vertébrées possibles.
Les expériences peuvent être davantage affectées par des modificateurs physiologiques des voies, des médicaments ou même des planaires génétiquement modifiés pour donner un aperçu des mécanismes biologiques associés. Il est important d’avoir le planaire afin que les transferts entre les conteneurs ne les stressent pas et de normaliser les courbes de la ligne de grille entre les membres du laboratoire. La meilleure façon d’obtenir des résultats cohérents de cette expérience d’essai de comportement, est de voir comment les utilisateurs expérimentés les ont exécutés.
Après avoir mis en place une culture planaire, nourrir les vers ad libitum sur un horaire régulier deux fois par semaine d’œufs durs biologiques hachés ou de foie de bœuf biologique mélangé pendant une à deux heures. Après l’alimentation, retirer toute l’eau souillée du récipient et utiliser un pinceau à aquarelle plat pour transférer les débris alimentaires et la boue adhérant au récipient à une serviette en papier. Utilisez de l’eau de source fraîche et des tourbillons ou de l’agitation doux pour déloger les planariens et décamper les vers dans un récipient propre.
Faites glisser une pointe de pipette à alésage large sous tous les planaires qui restent adhérents à l’ancien contenant pour faciliter leur transfert vers le nouveau plat et pour décanter soigneusement l’eau de transfert. Ensuite, couvrez les planariens dans le nouveau récipient avec de l’eau de source fraîche. Pour effectuer un test de vitesse locomotrice planaire, assurez-vous d’abord que les planaires affamés de cinq à dix jours sont entièrement formés avec des têtes et des queues complètes et pigmentées.
Si les planaires sont prêts à placer une boîte de Pétri propre de 10 centimètres de diamètre sur un morceau de papier de grille prélaminé avec 0,5 centimètre carrés par groupe expérimental et ajouter 20 millilitres d’eau de source intacte pour le groupe témoin ou 20 millilitres d’eau de source contenant la concentration appropriée du produit naturel testé à chaque plat. Placez une caméra au-dessus du plat préparé de stimulation de vitesse locomotrice et ajoutez cinq à 10 millilitres d’eau de source intacte ou d’eau de source contenant la concentration appropriée du composé expérimental dans un récipient d’accoutumation de taille appropriée. Ensuite, utilisez un petit pinceau à aquarelle propre pour transférer doucement un planaire du récipient de culture au récipient d’habituation préparé et permettre au planaire de s’habituer à la solution dans le récipient pendant deux minutes.
La recherche permettra aux planaires de se déplacer sur la brosse et de soulever soigneusement les animaux sans les forcer. À la fin de la période d’accoutumation, utilisez la brosse pour transférer soigneusement le planaire au centre du plat préparé de stimulation de vitesse locomotrice contenant la même solution que le récipient d’accoutumation et démarrer la caméra pour enregistrer 10 à 11 minutes de mouvement du planaire. Pour tester les effets du sevrage à la fin de la période d’accoutumabilité, rincez le planaire dans un plat de cinq centimètres contenant de l’eau de source seulement.
Avant de transférer le ver au centre du plat à vélocité locomotrice préparé contenant de l’eau de source fraîche et de commencer la caméra à enregistrer 10 à 11 minutes de mouvement. La configuration de la caméra permet une vue claire du planaire et du papier de grille et permet une évaluation précise de l’évolution de l’animal pendant toute la durée de l’expérience. La collecte de données devrait inclure le nombre total de lignes de grille franchies ainsi que le nombre total cumulatif de lignes franchies par minute de l’expérience.
Pour normaliser les résultats de chaque essai, les courses de vitesse locomotrice planaire peuvent être calculées et tracées au fur et à mesure que le nombre de boîtes franchies par rapport à la progression du ver de contrôle correspondant. Comme point de référence, les planaires dans l’eau de source couvrent généralement environ 25 boîtes en trois minutes. Une gamme de concentrations de reagent d’essai peut être examinée pour déterminer la motilité planaire en réponse aux composés d’essai d’intérêt.
Les données sur le sevrage peuvent être évaluées en quantifiant le nombre de lignes de réseau franchies dans l’eau de source par rapport au contrôle de l’eau de source après que les animaux aient été habitués au produit de biomoulation examiné. Les planaires de contrôle des eaux de source se déplacent sur les lignes de grille pendant toute la durée de l’expérience. Parfois cependant, les planaires d’essai cessent de franchir les lignes de grille pendant l’essai avec des comportements qui sont caractéristiques pour le produit testé.
Cela donne à penser qu’une méthode d’analyse différente pourrait être nécessaire. De tels cas peuvent être suivis et les données peuvent être illustrées comme le pourcentage du nombre total d’animaux exposés à une concentration particulière de reagent. Il est essentiel de manipuler le planaire afin qu’ils ne soient pas endommagés lors du transfert entre les plats.
Après avoir déterminé les effets des différentes concentrations d’un produit naturel, des modificateurs de voies biologiques peuvent être ajoutés pour observer tout changement dynamique aux résultats initiaux. Le test de vitesse locomotrice planaire a été utilisé pour tester la stimulation et le sevrage à l’aide d’agents pharmacologiques connus. Nous avons adapté le système pour étudier ces mêmes concepts avec des produits naturels.
