Lorsqu’une entreprise chimique veut mettre sur le marché un nouveau produit chimique ou un autre matériau, elle doit fournir les données d’une série de tests d’écotoxicité. Le test d’algues est l’un des trois tests obligatoires qui doivent être effectués. Le test d’algues souffre du fait qu’il est assez difficile à effectuer.
Pour cette raison, nous avons développé la plate-forme de test LEVITATT. Le LEVITATT utilise la lumière LED pour éviter les problèmes de production excessive de chaleur. En outre, il assure un champ de lumière uniforme.
Il a une taille compacte, ce qui signifie que vous n’avez pas besoin de beaucoup d’espace pour effectuer le test des algues, mais en même temps, il permet d’utiliser suffisamment de volume d’échantillon pour effectuer l’analyse chimique et la caractérisation avant, pendant et après les essais. Ceci est particulièrement important lorsque vous testez des nanomatériaux. Cette vidéo démontrera l’utilisation de LEVITATT pour les tests de toxicité des algues des nanomatériaux et d’autres substances difficiles.
La démonstration se compose des quatre étapes suivantes. Tout d’abord, décrire les composants du LEVITATT. La deuxième étape consiste à préparer la solution pour les médias de croissance des algues.
Et la troisième étape consiste à donner un aperçu de la procédure de la façon d’effectuer un test de toxicité des algues. La dernière étape consiste à mesurer l’augmentation de la biomasse algale par fluoromètre. Le LEVITATT peut être placé dans l’armoire à température contrôlée de la pièce.
Cela permet une température stable tout au long de l’exposition. La configuration est placée sur un shaker orbital pour permettre la rotation des échantillons pendant l’essai. L’essai est effectué en flacons de scintillation de 20 millilitres contenant un milieu d’exposition de quatre millilitres.
Un bouchon à vis avec un trou percé permet l’échange de CO2 avec l’air pendant l’exposition. La source LED est prise en sandwich entre deux feuilles de plastique et située au centre de chaque boîtier. Le placement crée un champ lumineux homogène et minimise l’ombrage entre les échantillons.
Chaque enveloppe est montée avec des pinces et peut contenir jusqu’à cinq échantillons. La taille compacte minimise l’espace nécessaire à l’expérience. Pour préparer les solutions de stock, peser la quantité appropriée de chaque composé.
La solution de stock se compose de divers sels essentiels à la croissance des algues. Lorsque la quantité appropriée de sels a été pesée, ils sont dilués avec de l’eau ultra-pure. Les solutions de stock sont stérilisées soit par filtrant ou autoclaving.
Après stérilisation, les solutions de stock peuvent être stockées dans l’obscurité à quatre degrés Celsius. Préparez une série de concentrations d’exposition. Le facteur entre les concentrations d’exposition ne doit pas dépasser 3,2.
Le volume approprié d’algues à croissance exponentielle est ajouté à chaque concentration d’essai. La densité cellulaire finale devrait être d’environ 10 000 cellules algales par millilitre. Il est essentiel que la pré-culture se développe de façon exponentielle pour répondre aux critères de validité du test.
Les flacons de mesure sont mélangés pour permettre une répartition homogène des algues et des composés avant l’échantillonnage. Les échantillons sont versés dans des beakers, et quatre millilitres sont canaltés en flacons de scintillation de 20 millilitres. Les flacons de scintillation sont maintenant plafonnés.
Pipette 0,4 millilitre de chaque concentration. Ajouter 1,6 millilitre d’acétone pour perturber la paroi cellulaire et libérer la chlorophylle à la phase liquide. Chaque flacon de verre est maintenant proche pour éviter l’évaporation de l’acétone pendant le stockage.
Les flacons de scintillation plafonnés sont maintenant distribués au hasard dans le LEVITATT et incubés pendant 72 heures. Mesurer l’intensité lumineuse et la température au début et à la fin de l’incubation afin d’assurer le respect des lignes directrices souhaitées. Le sous-échantillonnage se fait à intervalles de 24 heures en faisant passer 0,4 millilitres de chaque flacon de scintillation dans des flacons de verre.
Ajouter 1,6 million d’acétone pour perturber la paroi cellulaire et libérer la chlorophylle à la phase liquide. Après l’ajout d’acétone, visser les couvercles hermétiquement et laisser les échantillons dans l’obscurité jusqu’à l’analyse. Utilisez un fluoromètre pour quantifier la biomasse de l’échantillon acquise tout au long de la période d’essai.
Les réglages sur le fluoromètre devraient être de 420 nanomètres comme longueur d’onde d’excitation et d’une longueur d’onde d’émission de 671 nanomètres. Chaque échantillon est mesuré trois fois, et les valeurs relatives sont notées. Les valeurs relatives du fluoromètre sont utilisées pour calculer le taux de croissance qui sera utilisé pour d’autres traitements de données.
Utilisez un logiciel statistique pour adapter une courbe de régression non lignear aux données calculées sur le taux de croissance. Un exemple d’une courbe de régression non ligneaire pourrait être un log-logistic de fonction viable. L’intervalle de confiance de 95% associé est affiché à côté de l’ajustement du modèle.
Des valeurs de concentration régulièrement efficaces telles que 10, 20 et 50 % inefficaces sont utilisées pour signaler le résultat d’un test d’écotoxicité. En conclusion, le LEVITATT fournit une plate-forme compacte pour les essais de toxicité des algues de produits chimiques réguliers conformes aux lignes directrices normalisées internationales. En outre, la configuration fournit une plate-forme robuste pour tester les substances difficiles qui interfèrent avec le passage de la lumière vers l’algue, comme les nanomatériaux ou les substances colorées.
