Notre approche permet de minimiser les maladies invasives dans le traitement du syndrome de Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser en combinant la vaginoplastie laparoscopique et le prélèvement d’ovocytes pour de futurs traitements de fertilité. Les principaux avantages de notre approche sont la nécessité d’une anesthésie unique et la résolution de l’impossibilité d’un prélèvement d’ovocytes transvaginaux chez les jeunes patientes Rokitansky. La procédure sera démontrée par Diana Delprato, gynécologue senior de notre unité d’infertilité et par Alessandra Alteri et Greta Cermisoni, deux embryologistes cliniques seniors de notre laboratoire de procréation assistée.
Commencez la stimulation ovarienne contrôlée le jour 14 à partir du jour de la chirurgie. Surveiller la réponse ovarienne par échographie transabdominale en série et mesures concomitantes de l’œstradiol et de la progestérone. Établir un pneumopéritoine avec une technique ouverte.
Placez un trocart ombilical de 10 millimètres pour l’insertion du laparoscope et trois trocarts de cinq millimètres dans les quadrants inférieurs, central, droit et gauche. Sous vision laparoscopique, utilisez une aiguille à lumière unique de calibre 17 reliée à une pompe d’aspiration, comme couramment utilisé pour le prélèvement transvaginal à travers les trocarts central et gauche pour la ponction de l’ovaire droit et gauche, respectivement. Soulevez et maintenez les ovaires avec une pince laparoscopique pour faciliter l’exposition des follicules.
Lorsque vous aspirez plusieurs follicules proches les uns des autres, retenez la pointe de l’aiguille dans l’ovaire pour réduire le nombre de fois que le cortex ovarien est transpercé et le risque inhérent de saignement. Disséquer le péritoine en soulevant et en incisant le brin péritonéal transversalement entre les deux cornes utérines rudimentaires, puis en étendant l’incision latéralement, antérieurement et postérieurement. Exposer la fossette vaginale sur l’approche périnéale et effectuer une incision en forme de H et créer un espace néo-vaginal par dissection nette et contondante de l’espace vésico-rectal.
Ensuite, tirez vers le bas les marges péritonéales disséquées jusqu’au bord du vestibulum vaginal. Sutures interrompues de position dans polydioxanone synthétique résorbable 3-0 pour l’anastomose vestibulaire péritonéale. Commencer une suture de corde coulissante dans un monofilament synthétique absorbable 2-0 polydioxanone dans chaque hémibassin du péritoine mobilisé au-dessus de la vessie avec transfixion conjonctive du ligament rond, de l’isthme tubaire, du ligament utéro-ovarien et de la feuille péritonéale latérale.
Ensuite, inclure dans les deux sutures la face latérale du mésorectum et la face antérieure de la séreuse rectale immédiatement en dessous de la jonction rectosigmoïde. Enfin, placez une gaze enduite de paraffine dans le néovagin recouvert de péritoine. Recueillir les aspirations folliculaires dans des tubes à fond rond de 10 millimètres maintenus au chaud dans un incubateur portable et les transporter immédiatement au laboratoire d’embryologie avec un temps de transport d’environ 10 minutes.
Au fur et à mesure que tous les complexes ovocytaires cumulus sont collectés, placez-les dans le plat à quatre puits contenant le milieu de fécondation et étiquetez le couvercle et le fond avec des données relatives à l’identité du patient. Incuber à 37 degrés Celsius dans une atmosphère contrôlée contenant 6% de dioxyde de carbone et 5% d’oxygène. S’assurer qu’une double vérification de la procédure est effectuée par un deuxième membre du personnel du laboratoire.
Effectuer l’élimination des cellules corona cumulus dans les 38 heures suivant le déclenchement de l’ovulation. Placer les complexes ovocytaires cumulus dans le puits central contenant l’enzyme pour disperser les cellules du cumulus avec une pipette Pasteur en verre, en pipetant doucement la solution contenant les complexes ovocytaires cumulus de haut en bas pendant 30 secondes maximum. Déplacez les ovocytes vers le deuxième plat central contenant uniquement un milieu tamponné HEPES, en veillant à déplacer une quantité minimale de l’enzyme.
Retirez les cellules corona restantes à l’aide de pipettes de dénudage dont le diamètre intérieur est décroissant. Évaluer le stade de maturation des ovocytes, en séparant les ovocytes de métaphase II. Transférer les ovocytes de la métaphase II dans une boîte de Petri de culture FIV de 60 millimètres contenant neuf gouttes de milieu de culture unique continu recouvert de six millimètres d’huile minérale.
Incuber à 37 degrés Celsius dans une atmosphère contrôlée contenant 6% de dioxyde de carbone et 5% d’oxygène. Remplissez une boîte de refroidissement jusqu’au sommet avec de l’azote liquide frais et couvrez jusqu’à ce qu’elle soit utilisée pour minimiser la dispersion et l’évaporation. Utilisez une pipette de stripper d’un diamètre intérieur de 170 micromètres pour éviter d’endommager les ovocytes pendant la manipulation.
Agiter délicatement chaque flacon de solution d’équilibre, de solution de vitrification et de solution de lavage pour mélanger le contenu avant utilisation. Préparez le couvercle d’une boîte de Petri de 60 millilitres avec une goutte de 50 microlitres de solution de lavage. Placez les gouttes juste avant utilisation pour limiter l’évaporation du milieu.
Prenez le plat d’ovocytes de l’incubateur et transférez les ovocytes de métaphase II avec un volume minimal de milieu de la boîte de culture dans les 50 microlitres de solution de lavage. Distribuer des gouttes de 50 microlitres de la solution de lavage deux, de la solution d’équilibration un et de la solution d’équilibration deux à proximité immédiate et transférer les ovocytes de la solution de lavage des gouttes un dans la solution de lavage des gouttes deux. Fusionner la goutte de solution d’équilibre un à la solution de lavage deux et attendre deux minutes le mélange spontané des deux solutions.
Ensuite, fusionnez la goutte de solution d’équilibre deux avec les gouttes précédemment fusionnées et laissez reposer deux minutes supplémentaires. Enfin, fusionnez une nouvelle goutte de 100 microlitres de solution d’équilibration trois aux gouttes précédemment fusionnées et laissez reposer une minute supplémentaire. Placez les ovocytes dans une goutte de 100 microlitres de solution d’équilibre quatre pendant 10 minutes.
Distribuer deux gouttes de 50 microlitres de solution de vitrification et une de 100 microlitres de solution de vitrification. Déplacez les ovocytes séquentiellement dans les trois gouttes de solution de vitrification pendant 60 secondes afin que les ovocytes restent dans chaque goutte pendant environ 20 secondes. Lorsqu’il reste environ 10 secondes avant la fin des 60 secondes d’incubation, placez le cryodispositif sous le microscope.
Transportez les ovocytes à l’extrémité de la pipette et placez-les sur le cryodispositif avec le minimum de solution de vitrification. Aspirer l’excès de solution de vitrification, en laissant les ovocytes recouverts d’une fine couche de solution de vitrification. Plongez le cryodispositif directement dans l’azote liquide et déplacez-le rapidement.
Gardez l’appareil dans de l’azote liquide et couvrez-le avec un couvercle de protection. Les procédures laparoscopiques concomitantes de prélèvement d’ovocytes et de vaginoplastie ont été combinées avec succès chez toutes les patientes. En moyenne, 11,4 ovocytes 5,4 ont été prélevés et 9,6 ovocytes de 4,3 M2 ont été cryo-conservés.
Le temps opératoire moyen total était de 114 17 minutes. La perte de sang peropératoire était insignifiante chez tous les patients et aucun événement indésirable peropératoire n’a été observé. Le troisième jour post-opératoire, les patients ont commencé à utiliser quotidiennement des dilatateurs et ont reçu leur congé le jour 6.0 1.0.
Une aspiration prudente des follicules dans l’ovaire est recommandée, en accordant une attention particulière à la mobilisation automatique des ovaires afin d’assurer un accès et une récupération optimaux.
