Bien qu’il y ait eu des études sur la perte auditive induite par le bruit, aucune n’a enregistré la méthode de manière aussi détaillée, ce qui en fait une procédure importante. Cette méthode a effectivement causé une perte auditive induite par le bruit chez la souris et observe les changements réels du seuil auditif par ABR. Un modèle animal de perte auditive induite par le bruit est utile pour que les scientifiques comprennent parfaitement le mécanisme de la perte auditive induite par le bruit et optimisent par la suite les stratégies de traitement correspondantes.
Dian-Shiue Lee, une étudiante très talentueuse de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Pour préparer la cage pour les souris expérimentales, utilisez une cage de piège à rats et coupez quatre morceaux de planches de plastique ondulé dans des tailles appropriées, en les faisant tenir dans la cage. Pour éviter que les souris ne se fassent couper les pieds par la grille en maille, placez deux des morceaux en bas et à l’arrière, respectivement.
Placez les deux autres pièces perpendiculairement imbriquées l’une avec l’autre, pour diviser l’espace à l’intérieur de la cage en quartiers Ouvrez le logiciel d’application CLIO. Déplacez le curseur sur l’icône du haut-parleur et cliquez sur TwoSin. Entrez et modifiez la valeur de Fréquence 1 à 1 000 hertz, Fréquence 2 à 6 000 hertz, puis cliquez sur OK pour commencer à lire le son.
Sous l’onglet Leq, remplacez dBV par dBSPL. Après avoir réglé l’heure sur l’interface du logiciel, cliquez sur le bouton triangle vert pour lire le son. Placez un microphone devant le haut-parleur à une distance de 8,5 centimètres pour calibrer le niveau de bruit.
Ajustez le niveau de bruit à 125 décibels SPL-A et surveillez en continu pendant au moins trois minutes pour vous assurer que le niveau de bruit est suffisamment stabilisé. Utilisez un générateur, un analyseur et un amplificateur pour créer et contrôler le bruit. Placez quatre souris noires C57 6J mâles dans la cage, une pour chaque quartier, pour l’exposition au bruit.
Assignez au hasard les souris à chaque quartier pendant l’exposition au bruit. Placez un microphone sur le dessus de la cage pour surveiller le niveau de bruit pendant l’exposition au bruit. Placez le boîtier devant le haut-parleur dans un boîtier insonorisé, en veillant à ce que le haut-parleur soit positionné à 8,5 centimètres de la cage.
Exposez les souris au bruit à des fréquences d’un kilohertz et de six kilohertz en continu pendant six heures par jour, pendant cinq jours consécutifs. Mesurez les seuils d’audition des souris les 6e et 13e jours en mesurant l’ABR. Utilisez un système de test ABR commercial, spécialement conçu pour les petits animaux pour les mesures ABR, et maintenez l’animal sous anesthésie générale.
Placez des électrodes à aiguille sous-cutanée de 12 millimètres au sommet derrière le pavillon de l’oreille gauche, et de retour près de la queue, pour mesurer le seuil auditif. Après avoir placé le haut-parleur à un centimètre de l’oreille gauche de l’animal, présentez des stimuli acoustiques à l’aide du haut-parleur. Choisissez Sine Wave pour les stimuli et 10 k pour l’échelle de la fenêtre.
Tournez le bouton de fréquence pour obtenir la fréquence souhaitée des stimuli acoustiques. Ajustez l’intensité du stimulus en tournant le bouton AMLP sur le générateur de fonctions. Obtenez l’intensité de stimulus souhaitée en tournant le bouton AMLP sur une tension appropriée calculée à partir de l’étalonnage.
Collectez les mesures ABR sous une série d’intensités de stimulus de 10 à 100 décibels SPL, avec une taille de pas de 10 décibels. Marquez le niveau minimal d’intensité de stimulus qui pourrait donner lieu à une vague V discernable comme seuil ABR. Sacrifiez les souris après les mesures ABR et récoltez les cochlées des souris euthanasiées.
Immédiatement après la récolte des tissus, immergez-les dans du formaldéhyde à 10% pour la fixation et laissez-les reposer pendant au moins huit heures à quatre degrés Celsius. Utilisez l’EDTA pour la décalcification, comme décrit dans le texte. Placez les cochlées dans une boîte de Petri remplie de PBS.
Pour la coloration des tissus, coupez l’organe en forme de spirale de Corti, ou OC, en trois sections: le tour basal, le tour du milieu et le tour apical. Sous un microscope à dissection à un grossissement de 8x à 35x, enlever les structures osseuses qui comprennent scala vestibuli, scala tympani et modiolus des cochlées décalcifiées, et obtenir les tissus mous, y compris le CO. Une augmentation significative du seuil auditif a été observée à 12 kilohertz, 24 kilohertz et 32 kilohertz un jour après l’exposition au bruit. La récupération partielle de l’audition a eu lieu une semaine après l’exposition au bruit, mais les seuils d’audition étaient encore élevés de plus de 30 décibels à toutes les fréquences par rapport aux groupes témoins.
Dans cette étude, l’audition était plus endommagée aux hautes fréquences. Une différence significative a été observée dans le seuil d’audition entre le groupe témoin et le groupe expérimental les 6e et 13e jours, à 12 kilohertz et 32 kilohertz. Une perte de cellules ciliées externes a été systématiquement observée dans les images microscopiques acquises à partir des souris NIHL, par rapport à celles des souris témoins.
Alors que les cellules ciliées internes sont restées intactes dans toutes les images, les cellules ciliées externes dans les tours basaux et moyens de l’OC ont été gravement endommagées. En revanche, les cellules ciliées externes dans le tour apical étaient presque intactes. L’étape la plus importante de ce protocole comprend l’exposition au bruit, la mesure de l’ABI, la récolte de la cochlée.
Cette procédure peut être appliquée pour étudier l’effet de l’exposition au bruit à différentes fréquences sur la perte auditive en utilisant différents types de sons.
