Ce protocole aide à établir des modèles ATC et HNSCC PDX qui reflètent mieux l’hétérogénéité tumorale, la diversité moléculaire et prédisent les résultats cliniques. La technique est simple à utiliser, a un taux de réussite élevé et peut également convenir à d’autres modèles PDX. Cette technique peut être étendue au dépistage de la sensibilité aux médicaments anticancéreux pour guider le traitement personnalisé des patients atteints de cancer.
Une personne qui n’a jamais effectué cette technique peut rencontrer des difficultés et il est recommandé de prêter attention à chaque détail du schéma. Après avoir obtenu des échantillons tumoraux ATC et HNSCC dans un tube à centrifuger de 50 millimètres contenant une solution HTK stérile, désinfectez-les avec de l’alcool à 75%. Utilisez des pinces ophtalmiques stérilisées pour transférer le tissu tumoral dans une boîte de Petri de six centimètres remplie de solution saline et coupez-les en petits morceaux à l’aide d’une lame.
Ensuite, transférez les morceaux dans une nouvelle boîte de Petri de six centimètres contenant la solution saline et enveloppez-la d’un film d’étanchéité. Placez le plat emballé dans une glacière, transportez-le dans la salle des animaux exempte d’agents pathogènes avec des ciseaux, des pinces et des aiguilles d’inoculation. Après avoir anesthésié la souris, retirez les poils du thorax latéral droit et désinfectez la zone avec de l’alcool à 75%.
Utilisez des ciseaux pour faire une incision de deux millimètres au milieu du thorax latéral droit. Avec une pince, prenez le tissu de la boîte de Petri et placez-le dans l’aiguille du trocart. Tenez la souris et resserrez la peau au site de ponction.
Insérez le trocart avec la pièce tumorale dans l’incision à l’espace sous-cutané, puis déplacez-vous vers l’arrière de l’épaule et poussez le noyau du trocart. Pour réserver le tissu restant à l’aide d’une gaze stérile, retirez la solution saline de la surface de la tumeur, en veillant à ce qu’elle ne soit pas trop humide. Mettez quatre à six morceaux de tissu dans un tube de cryoconservation cellulaire de deux millilitres et ajoutez un millilitre de solution de cryoconservation dans le tube.
Ensuite, placez le tube dans une boîte de refroidissement à gradient et congelez-le à moins 80 degrés Celsius pendant la nuit. Enfin, transférez-le à l’azote liquide. Pour réanimer les tumeurs du modèle PDX, utilisez des étriers Vernier pour mesurer la longueur et la largeur de la tumeur sous-cutanée une fois par semaine.
Calculez le volume tumoral et dessinez la courbe de croissance tumorale. Ensuite, à l’aide de ciseaux, coupez la peau de souris euthanasiée entourant la tumeur. Retirez la tumeur avec une pince et placez-la dans une boîte de Pétri.
Effectuer la transplantation tumorale jusqu’à la cinquième génération de souris, comme démontré précédemment. Sélectionnez le tissu tumoral d’une souris modèle ATC PDX de génération P5. Coupez-le en deux à quatre morceaux de millimètres cubes.
Inoculez ces pièces par voie sous-cutanée comme démontré précédemment, à l’arrière droit d’une souris BALB/c femelle nue de quatre à six semaines. Lorsque la tumeur se développe de 50 à 150 millimètres cubes, divisez les souris en trois groupes. Après avoir administré du lenvatinib, du cisplatine et un témoin deux fois par semaine, mesurez le poids corporel de la souris.
Mesurez également le volume tumoral. L’analyse de corrélation montre que le taux de réussite de la construction du modèle ATC PDX ne dépendait pas de l’âge, du sexe, du diamètre de la tumeur, du grade tumoral et de la différenciation. Le taux de prise tumorale dans la construction du modèle HNSCC PDX a démontré que le degré de différenciation était associé au taux de réussite du modèle, tandis que les autres paramètres n’affectaient pas le taux de prise tumorale.
Les courbes de croissance tumorale pour chaque modèle PDX ont montré que les échantillons ATC ont été transmis de manière stable à la génération P3, tandis que deux cas d’échantillons HNSCC n’ont pas réussi à former des tumeurs après être passés à la génération P1. Le taux de croissance tumorale de la génération P0 pour la plupart des modèles PDX était relativement plus lent que pour les passages ultérieurs, probablement en raison de l’adaptation du microenvironnement de la souris. L’examen histopathologique a démontré que les tumeurs PDX conservent les caractéristiques morphologiques des tumeurs primaires.
Le traitement par lenvatinib a significativement inhibé la croissance tumorale et a montré un poids tumoral inférieur dans le modèle ATC PDX par rapport au groupe témoin. De plus, les souris traitées au lenvatinib n’ont pas présenté de changements perceptibles dans leur poids global. Un dosage excessif de cisplatine a entraîné une toxicité importante, comme en témoigne la perte de poids et même la mort.
Les tumeurs fraîches doivent être lavées plusieurs fois avec une solution saline normale avant d’être coupées en morceaux. Le mélange par des échantillons tumoraux biopsiés avec et leur inoculation entraînera probablement la formation de tumeurs. Ce modèle peut être utilisé pour la recherche en biologie tumorale, le dépistage de médicaments, la thérapie personnalisée.
