איסוף ומדידת מגשרי ביוכימיים Exudate פצע בפצעי ניתוח

Summary

מאמר זה מספק תיאור מפורט וחזותי של מתודולוגיה לאיסוף ומדידת מתווכים דלקתיים וnociceptive יוכימיים באתר פצע הניתוח לאחר לידה בניתוח קיסרי. מבדק אנושי זו נעשה שימוש כדי לקבוע קשר בין הפצע וריכוזים ציטוקינים בסרום ושינויים בסמים בתיווך בציטוקינים, כמוקינים ופצע neuropetides.

Abstract

אנו מתארים מתודולוגיה שבאמצעותו אנו יכולים לאסוף ולמדוד מתווכים דלקתיים וnociceptive יוכימיים באתר פצע הניתוח. איסוף סמנים ביוכימיים ספציפיים לאתר חשוב להבין את הקשר בין הרמות בסרום ופצע ניתוחי, לקבוע כל קשר בין שחרורו מתווך, כאב, שימוש במשככי כאבים ותוצאות אחרות של עניין, ולהעריך את ההשפעה של מתן תרופה מערכתית והיקפי על פצע ניתוח ביוכימיה. מתודולוגיה זו יושמה לנשי בריאות העוברות ניתוח קיסרי אלקטיבי בהרדמה בעמוד שדרה. יש לנו נמדדנו exudate פצע ומתווכי סרום באותם מרווחי זמן כציוני כאב של המטופל וצריכת משככי כאבים לתקופה של עד 48 שעות לאחר לידה בניתוח קיסרי. שימוש במתודולוגיה זו היינו מסוגל לזהות מתווכים ביוכימיים שונים, כולל גורם צמיחה עצבית (NGF), פרוסטגלנדין E2 (PG-E2) חומר P, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8,IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNFα, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 ו-MIP 1β. מחקרים החלימו אסיי לפצע הניתוח האנושי הזה לא מצאו מתאם בין פצע וריכוזים ציטוקינים סרום או פרופיל זמן שחרורם (J Pain 2008;. 9 (7) :650-7) ¹ אנחנו גם תעדנו את התועלת של הטכניקה לזיהוי. שינויים בסמים בתיווך בתוכן ציטוקינים פצע (Anesth Analg 2010; 111:1452-9). ²

Introduction

לאחר חתך ניתוחי, תושב והעברה בתאים דלקתיים לשחרר ציטוקינים פרו ואנטי דלקתיים, prostanoids, נוירופפטידים וכמוקינים שחשובים לייזום ושמירה על כאב. ^3,4 היכולת לאסוף סמנים ביוכימיים ספציפיים לאתר הוא קריטי כדי לקבוע קשר בין הרמות בסרום ופצע ניתוחי, להבין את מערכת יחסים המורכבת בין שחרור מתווך וכאב כירורגי, וכדי להיות מסוגל להעריך את ההשפעה של שני תרופות היקפיות מערכתי ועל הביוכימיה פצע ניתוח. המחקרים התמקדו במדידות מערכתיות של מתווכים ביוכימיים ולא שקלו שחרור אתר ספציפי. ^5,6 מדידות סרום של ציטוקינים וכמוקינים לא יכול להיות שיקוף של אירועי פצע ניתוח מקומיים ביוכימיים ומצביעים על מענה מערכתי גלובלי לפגיעה כירורגית בלבד. מאמר זה מספק תיאור חזותי מפורט וייחודי של מתודולוגיה זו שהיה אשוחרח הפניה בשנת 2008 בכתב העת של כאב. ¹ מטרת מאמר יופיטר זה היא לספק תיאור חזותי ייחודי ומשופר של השיטות.

Protocol

1. מחקר הפרוטוקול

• לקבל את אישור מועצה לביקורת מוסדי והסכמה מדעת בכתב.
• בחר אוכלוסייה כירורגית מתאימה להתנהלות מחקר. מתודולוגיה זו יושמה רק לפצעי ניתוח קיסרי אבל פצעים כירורגיים ביותר יהיו מתאימים.
• שקול קריטריוני הכללה והדרה להשתתפות המחקר שלך. חולים ונהלים עם שיעורים גבוהים של זיהום פצע ניתוח לא יכולים להיות מתאימים.
• סטנדרטיזציה וניהול הרדמה לאחר ניתוח לכל החולים כדי למנוע ערפלנים פוטנציאליים.

2. אוסף המתווך יוכימית nociceptive ודלקתי

• הכנס ב-Q PainBuster עם ON-Q SilverSoaker (I-Flow, בלייק פורסט, קליפורניה) לשכבה התת עורית ממש לפני סגירת הפצע (שכבות רקמות אחרות יכולות להיחשב). מערכת שיכוך כאב PainBuster ב-Q ברציפות מספקת המלוחה רגילה בשיעור של 2 מ"ל / שעה. המוביל יכול להיות מסרקלעצמה עם או בהשוואה לתרופות בעלי עניין כגון הרדמה מקומית ונוגדי דלקות שאינן סטרואידים.
• לשלב ברזלים סטנדרטיים משולש למערכת זו כדי לאפשר לשאיפה של exudate פצע בנקודתי זמן שצוינה. העירוי המתמשך מונע מקטטר קרישה ומשפר את האמינות של המערכת להפקת דגימות exudate. אם השאיפה של exudate קשה (כ 5% ממקרים), שקלו דוחפים בעדינות מעל הפצע, שינוי מיקומו של הנושא (למשל, יושב או שוכב חולם שטוח), שימוש בסומק מלוח מ"ל נורמלי 0.5-1 או נסיגה 1-2 סנטימטר קטטר.
• בנקודתי זמן שצוינו על ידי הפרוטוקול (למשל, 1, 4, 6, 24, ו 48 שעות לאחר ניתוח קיסרי), לשאוב ולסגת 1 מ"ל של exudate פצע. העברת exudate לתוך כוס המכילה פוליאתילן 30 μl של מעכב proteinase. יש לנו להשתמש אינהיביטור proteinase השלם (רוש Bioscience, פאלו אלטו, קליפורניה) למטרות שלנו.
• באותם מרווחי זמן שצוינו על ידי פרוטוקול המחקר, לאסוף 10 מ"ל של דם. יש לנו להשתמש צינור איסוף דם המכיל ליתיום הפרין; במוסד שלנו זה הוא צינור זכוכית ירוק כיפה. הוסף 300 μl נוסף של מעכב proteinase לתוך דגימות הדם.
• בתוך שעות 1 מתוך אוסף, לשים דוגמאות על קרח וצנטריפוגה בסל"ד 3000 למשך 10 דקות.
• הסר supernate ומקום סרום ופצע בצינור סטנדרטי microcentrifuge ולאחסן ב -20 ° C.

3. ניתוח assay

• לאחר שכל exudate המחקר ודגימות סרום נאספים ונשמרים, להפשיר ולנתח הדגימות באותו הזמן.
• אנחנו מדדנו את ציטוקינים וכמוקינים באמצעות immunoassay זמנית. הטכניקה זמנית חיסוני assay מאפשרת לנו assay analytes רב מ( 50 μl) דגימות נפח קטנות. זמנית לייצר תוצאות דומות לאלו שהושגו עם אליסה. יש לנו להשתמש במערכת 17-Bio-Plex PlexTM (BioRad, Hercules, CA) עבור הניתוח שלנו. בדיקה זו היא מסוגלת למדוד נימק גורם גידול α (TNFα), אינטרפרון α (INFα), אינטרלוקין 1β (IL-1β), אינטרלוקין 2 (IL-2), 4 אינטרלוקין (IL-4), אינטרלוקין 5 (IL-5 ), 6 אינטרלוקין (IL-6), 7 אינטרלוקין (IL-7), 8 interleukin (IL-8), אינטרלוקין (IL-10), אינטרלוקין 12 (IL-12), אינטרלוקין 13 (IL-13), אינטרלוקין 17 (IL-17), גורם granulocyte מושבת מגרה (G-CSF), גורם מעורר מושבת granulocyte-מקרופאג (GM-CSF), חלבון chemoattractant monocyte 1 (MCP-1) וחלבון דלקתי macrophage 1 (MIP-1β). גורם גדילה עצבית נמדד עם DY256 נוגדן NGF ידי הוספתו לצלחת 17-Plex עם ערכת הצימוד האמין Bio-Plex.
• כדי להבטיח ניתוח באיכות טובה, כל מדידה צריכה להיעשות בשני עותקים. עקומות סטנדרטיות עבור כל אנליטי נוצרות באמצעות analytes ההתייחסות סופק על ידי היצרן (בריכוזים של 0.20, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 עמ '/ מ"ל ​​בתוספתתקן אפס למלח הרגיל). עקומות סטנדרטיות כלולות בכל ריצה וריכוזי מדגם מחושבים עם תוכנת מנהל Bio-Plex.
• החומר P ופרוסטגלנדין אי -2 נמדדו באמצעות ערכות ELISA מאוד רגישות. יש לנו להשתמש Assay עיצובים, Inc (אן ארבור, מישיגן) בניתוח זה. לבצע ניתוח בשני עותקים בהתאם למפרט של היצרן.

תוצאות

השימוש במתודולוגיה זו היינו מסוגל לזהות את כל המתווכים ביוכימיים המתוארים לעיל, למעט IL-5 בexudate פצע ופלזמה. ^1,2 כמה ציטוקינים נוספים שלא זוהו בפלזמה (IL-4, IL-17, TNFα, INFγ , GM-CSF). כמובן הפעם ¹ של ציטוקינים וכמוקינים שנמדדו במחקרים שדווחו היו עקביים, והגיע אל רמה בתוך כ...

Discussion

מתודולוגיה זו שתוארה לעיל נמצאה להיות רגיש מספיק כדי לזהות מתווכים דלקתיים וnociceptive יוכימיים בexudate פצע. דגימה בנקודתי זמן שונים-גם אפשרה לנו להתבונן בשינויים של מתווכים אלה לאורך זמן. ^1,2 אנחנו לא מודעים לכל בדיקה אחרת אדם כירורגית פצע שיכול סדרתי למדוד את פרופיל ...