A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
מטרת נייר זה סרט הדרכה היא לתאר כיצד לחשוף ולהסיר את מוח חזיר לאחר המוות ואת בלוטת יותרת מוח במצב שלם, מתאים לניתוח מקרוסקופית היסטולוגית עוקב.
חזירים הפכו פופולריים יותר ויותר מחקרים במדעי translational גדול חיה כתחליף מבחינה כלכלית והן מבחינה מוסרית כדי פרימטים לא אנושיים. גודל המוח הגדול של החזיר מאפשר שימוש הדמיה מוחית קליני קונבנציונלית והשימוש הישיר והבדיקה של נהלים נוירוכירורגיים וציוד מהמרפאה האנושית. ניתוח מקרוסקופית היסטולוגית בהמשך, לעומת זאת, דורש חשיפה שלאחר המוות של מערכת העצבים המרכזית חזיר (CNS) והסרת המוח עוקבות. זו אינה משימה קלה, כמו החזיר CNS הוא כמוסה על ידי גולגולת עבה, גרומה עמוד שדרה. מטרת נייר זה סרט הדרכה היא לתאר כיצד לחשוף ולהסיר את מוח החזיר לאחר מוות ואת בלוטת יותרת המוח במצב שלם, מתאימה לניתוח מקרוסקופית היסטולוגית עוקב.
מחקרים במדעי המוח Translational בחזירים הפכו פופולריים יותר ויותר במהלך שני העשורים האחרונים. גודלו של מוח החזיר מאפשר את שימוש הדמיה מוחית קליני קונבנציונלית והשימוש הישיר ובדיקה של נהלים נוירוכירורגיים וציוד מהמרפאה האנושית 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. בשנות ה 20 השנים האחרונות, חזירים, במיוחד minipigs (למשל, גטינגן Minipig), שימשו לבחון שיטות טיפול neuromodulatory, כגון השתלת תאי גזע; transfection וקטור ויראלי; גירוי מוחי עמוק מכוון מחלת פרקינסון, השמנה, דיכאון, אלצהיימר ומחלות 2, 6,= "Xref"> 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. זה כבר ואחריו בפיתוח גישות stereotaxic וכירורגים לתפעל את Minipig 3 CNS, 18, 19, 20, 21. השינויים CNS הנהיג הוערכו בבעלי חיים באמצעות דימות המוח (10 PET, 13, 22, 24 ו MR 23), cystometry 11, 12, 25, ניתוח הליכה17, נוירולוגיות הערכה 9, 17, ו לבדיקה שלאחר המוות מבוסס על היסטולוגיה וניתוח stereological 14, 15, 17, 26, 27, 31. עם זאת, ניתוח שלאחר המוות מחייב חשיפה וסרה של מוח החזיר, אשר אינה משימה קלה, כמו גולגולת עבה, גרמית ו dural סיבי מכסים המקיפים את מוח החזיר.
מטרת נייר זה סרט הדרכה היא לתאר כיצד מוח החזיר לאחר המוות ובלוטת יותרת המוח עלול להיחשף והוסרו במצב שלם ב 15-20 דקות באמצעות כלי כירורגיים הלא ממונע. וידאו ההדרכה ואיורי צילום להראות minipigs זכר (גיל: 6 חודשים, משקל גוף: 20-25 קילו) המשמש במחקר אנטומי על בלוטת יותרת מוח Minipig.
הרדמת euthanesia Animal בוצעה בהתאם "עקרונות של טיפול בבעלי חיים במעבדה" (מס 'פרסום NIH 86-23, מתוקן 1985) ואושר על ידי המועצה הדנית לאתיקת מחקר בבעלי החיים.
1. מכשירים
עריפת ראש 2.
הערה: הרדמה הושרה על ידי זריקה תוך שרירית של 5 מ"ל של midazolam (5 מ"ג / מ"ל) ו 5 מ"ל של קטמין (25 מ"ג / מ"ל). 5-10 דקות מאוחר יותר, כאשר החיה היה מורדמת, וריד האוזן היה cannulated ו ממנת יתר קטלנית (100 מ"ג / ק"ג ממשקל הגוף) של נתרן pentobarbital (200 מ"ג / מ"ל) ניתנה לווריד. כדי להבטיח כי בעל החיים מורדמים לגמרי, רפלקס הכאב interdigital נבדק כפי שמוצג על ידי Ettrup ואח. (2011) 20. euthanization Complete היה מובטח כמתוארהצהרת האתיקה מעל ואחריו זלוף transcardial עם 5 L של סליין איזוטוני, כפי שהוכח על ידי Ettrup ואח. (2011) 20. כל הנהלים הפגינו מבוצעות לאחר המוות, מניעת הצורך באמצעי הזהירות הדרושים הרווחה הרדמה לטווח ארוך הישרדות postprocedural.
איור 1: עריפת ראש Minipig. (א) צוואר חתך (חץ, זווית בלסת תחתונה,). (ב) חתך דרך רצועות atlantooccipital ואת חוט שדרה-מוקף ההדור (SC) בצומת craniocervical (C1, קשת קדמית של אטלס; OC, condyle העורפית). (ג) החלק האחורי של ארטיקולצית atlantooccipital הוא שוחרר על ידי רחבה כוחנית (חיצים) ברמת הסעיף. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
3. פתיחת גולגולת
איור 2: פתיחת גולגולת Minipig. (א) חשיפה של dorsoposterioפני גולגולת R, כולל ההסרה העורפית ואת השרירים זמניים. הסרת (B) של עצם העורף (CB, המוחון מכוסי דורא; OB, עצם העורף; OC, condyle העורפית; ו SC, חוט השדרה). (ג) פטיש ואזמל עצם משמשים לחדור הגולגולת קדמית ו להיכנס סינוס פרונטלי ברמה של העיניים. (ד) היקף סינוס פרונטלי (FS) משמש כדי להסיר את עצם הגולגולת העבה החיצוני (1), וחשף lamina עצם דק פנימי (2) המכסה את המוח הגדול. הסרה (E) של lamina העצם הדק, חשיפת המוח גדול מכוסי הדורה (חץ). (F) לבסוף, פטיש ואזמל עצם משמשים רוחבי לחבר את הקדמי ואת פתחי הגולגולת האחורית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
4. המוח removאל
איור 3: הסרת המוח Minipig. (א) פתיחת Dural עם מלקחיים כירורגיים וסכין הדור. (ב) יש להקפיד על מנת לחתוך את עלי dural לחלוטין (חץ), הממוקמים בין המוח הגדול לבין המוח הקטן. (ג) ראש החזיר ממוקם אנכי עבור ויזואליזציה טובה יותר של מבנים בבסיס גולגולת כדי כובד לסייע עקירה המיועדת של המוח. (ד) מבתר או אזמל עצם משמש כדי להקל את נורת חוש הריח על ידי סעיף בוטה מן דורא-covereבסיס גולגולת ד. (E) דיסקציה היא המשיכה בכיוון אחורי לאורך בסיס הגולגולת לחשיפת חתך של תצלובת הראייה (חץ), גבעול infundibular, ועצבים האוקולומוטורי. (F) שחרור המוח יושלם עם הסעיף של עצבי גולגולת הנמוכים כפי שהם יוצאים מן שטח הגחון של גזע המוח (III, עצב האוקולומוטורי; IV, עצב סליל; V, עצב trigeminal; ו- VI, עצב המצדיד). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
5. הסרת יותרת המוח
איור 4: הסרת יותרת המוח Minipig. (א) הפוסה יותרת המוח (*) מזוהה רצפת הגולגולת (1, נורת ריח; 2, תצלובת ראייה; ו PF, הפוסה גולגולתי אחורית). (ב) כיסוי dural (diagphragm sellar, (החץ)) הוא חרות רוחבי. (ג) בלוטת יותרת המוח (חץ) הוא שוחרר עם מבתר והרים מתוך הפוסה יותרת המוח. בר סולם (AC) = 10 מ"מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
כדי למנוע את חומר רקמות מהתייבשות, מומלץ לאחסן את המוח הוסר יותרת בצנצנת מלאה מקבע או סליין איזוטוני מייד לאחר ניתוח מקרוסקופי שבוצע. חומר הרקמות ניתן לאחסן מקבע במשך שנים, ואילו אחסון סליין איזוטוני, אפילו במקרר, יוביל ריקבון רקמה עם זמן.
רוב המחקרים במדעי מוח הניסיונות מבוצעים מינים של בעלי חיים קטנים, כגון עכברים וחולדות, שבו גישת CNS בהנחייתם א-עובי dural skull- ורזה. עם זאת, בחיות מעבדה גדולות כמו חזירים 1, 4, 8, כבשת 32, ו פרימטים לא אנושי, העובי ?...
החוקרים אין לחשוף.
המחברים מודים בהכרת תודה את הסיוע מיומן של גב 'Trine וו מיקלסן, גב' ליזה M. התאמה, וכך גם הצוות Påskehøjgaard. המועצה למחקר הרפואית הדנית, הקרן לונדבק, וקרן נובו נורדיסק כלכלית נתמכת במחקר.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Heavy Scalpel Handle #4 | FST (Fine Science Tools) | 10008-13 | Good for skin incision and soft tissue removal |
Non-Sterile Scalpel Blades #23 | FST | 10023-00 | |
Scalpel Handle #7 | FST | 10007-12 | Optimal for dural incision and precision work |
Non-Sterile Scalpel Blades #11 | FST | 10011-00 | |
Surgical Forceps | FST | 11024-18 | The tip of the surgical forceps ensure a firm grip |
Kerrison Bone Punch | Aesculap Neurosurgery | FF713R | Must be robust, bite size 3-5 mm |
Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | MD615 | Must be robust, bite size 15 x 5 mm |
Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | FO551R | Must be robust, bite size 25 x 15 mm |
Bone Chisel | Lawton | 67-0335 | The size of the chisel head should not exceed 20 mm |
Mallet (Hammer) | Millarco | 5624108 | Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm |
Micro-Scissor | FST | 14002-14 | |
Dissector | Aesculap Neurosurgery | OL165R | |
Göttingen minipigs | Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark | ||
Euthanimal | pentobarbital | ||
Ketamine | Pfizer | ||
Midazolam | Hameln Pharmaceuticals |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved