אספקה ​​אינטראנסלית של תאים בתאי גזע כדי גליובלסטומה במודל עכבר

Summary

תאי גזע הם מבטיחים לספקים טיפוליים לטיפול בגידולים במוח בשל הטרופיזם של הגידול הפנימי שלהם. לא פולשני אינטראנסלי תא גזע המסירה עוקף את מחסום דם מוח ומראה פוטנציאל חזק לתרגום קליני. מאמר זה מסכם את העקרונות הבסיסיים של אספקת תאי גזע אינראנסאלי במודל עכבר של גליומה.

Abstract

הטרופיזם הפנימי כלפי ממאירויות המוח גורם לתאי גזע כמובילים מבטיחים של תרופות טיפוליות נגד גידולים ממאירים. אספקת תאי גזע טיפוליים דרך התוואי הפנימי היא אסטרטגיה חלופית שהתגלתה לאחרונה, עם פוטנציאל חזק לתרגום קליני, בשל אופיו הלא פולשני בהשוואה להשתלה תוך גולגולתי או למסירה דרך נתיבי מערכת. העדר מחסום דם מוח מחזק עוד יותר את הפוטנציאל הטיפולי של תאי גזע העוברים כניסת מוח אינטראנסלית. מאמר זה מסכם את הטכניקות החיוניות המשמשות במחקר שלנו מתאר את העקרונות הבסיסיים של האסטרטגיה intranasal עבור משלוח תא גזע באמצעות מודל העכבר של xenografts גליומה תוך גולגולתי. אנו מדגימים את הפרוצדורות המותאמות שיוצרות תוצאות עקביות וניתנות לשחזור עם פרמטרים ניסיוניים מוגדרים מראש ומציעים הנחיות לגבי זרימת עבודה יעילה המבטיחה ביצוע יעיל ואקסימי אמיןתוצאה נטאלית. המאמר נועד לשמש בסיס להתאמה אישית ניסיונית נוספת המבוססת על היפותזה, סוגי תאי גזע, או פרטים ספציפיים.

Introduction

רעילות נמוכה, immunogenicity נמוכה, ואת המוח הטריפיזם המוחי הפנימי של תאי גזע אנושיים הם תכונות אטרקטיביות עבור משלוח של כלי רכב טיפולית ¹ . טיפולים המבוססים על תאי גזע חדשניים עבור גידולי מוח ממאירים הם חידושים מבטיחים שפותחו בשנים האחרונות, וההתאמה הפנימית של האסטרטגיה הטיפולית הזו מייצגת קפיצה לתרגום קליני, בכך שמנהל לא פולשני וחוזר על עצמו עשוי להפחית באופן דרמטי את המכשול עבור יישומי המטופל יכול להיות מותאם עבור שירותי המטופל ללא הרדמה כללית או שירות ממושך המטופל הקשורים הליכים כירורגיים פולשניים ^{1 , 2 , 3 , 4} .

אנחנו ואחרים חלוץ את המסלול הפנימי של העברת תאי הגזע לגידולים במוח והניחנו את עבודת הקרקע עבור חלק מעקרונות היסודשל מחקר translational באמצעות מודלים xenograft העכבר ^{2 , 3 , 4} , כמו גם נחקר ההגירה של תאי גזע ב vivo באמצעות הדמיה מגנטית הדמיה (MRI) נושאות מגיב ² . באמצעות חקירות ניסיוניות אלו, צברנו ניסיון רב והרכבנו תובנות כיצד לבנות בצורה הטובה ביותר אסטרטגיית הערכה קדם-קלינית איתנה באמצעות מודלים מבוססי-עכבר מבוססי-חולי של קסנוגרפט (PDX) של הדליומה הממאירה, תוך שמירה על החלטת החקירה לבדיקת פרטים מכניסטיים מתוחכמים של התופעות הביולוגיות המתוחכמות של כניסת המוח האינטראנסאלית של תאי גזע תרפויטיים הנשלחים אל חלל האף. כאן, אנו מתארים את העקרונות של פרוטוקול הפעלה סטנדרטית כדי להדגים את המצב הנוכחי של חקירות ניסיוני באמצעות מבוססת היטב האדם גזע עצביים גזע תאים HB1.F3.CD ^{5 , 6 , 7 , 8 , אשר ניתן לשנות בקלות להסתגל מודלים או אסטרטגיות ספציפיות הגידול באמצעות תאי גזע אנושיים כמו נושאות טיפולית.}

Protocol

כל בעלי החיים נהלים חייבים להיות מאושרים על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש (IACUC) או שווה ערך. אם קיימת אי ודאות לגבי הנהלים הספציפיים המתוארים כאן, אל תמשיך. להבהיר עם IACUC של המוסד וחבר צוות וטרינרי המיועד.

1. הבטחת סטריליות של תאים תרבותיים ועקבו עקרונות של טכניקות אספטי

1. בצע את נוהלי מעבדה סטנדרטיים בכל נהלי התרבות התא דרישות IACUC לבדיקת תאים ללא אישור מצב ללא הפתוגן לפני מתן כדי עכברים ^{9 , 10} .
2. בצע את דרישת NIH לאימות התא כדי להבטיח תוצאה לשחזור ¹¹ .
3. עקוב אחר ניתוח טכניקות אספטיות קטנות שהוקמו בכתב יד זה ⁴ .

2. הכנת תאים גליומה עבור ב ניסוי Vivo ^{2 , 4}

1. תאים של גליומה (GBM43, GBM6 ו- U87MG) בסרום המכיל בסרום (10% בסרום העובר של דולבקו), או במדיום חופשי בסרום (בינוני נוירובאסלי עם תוספי מזון B27, N2, הפרין, גורם לגדילה באפידרמיס [ EGF], גורם הגדילה הבסיסי fibroblast [bFGF], אנטיביוטיקה, ו- L- גלוטמין ¹² ), בתא humidified CO ₂ תרבות החממה.
   1. בדוק את כל שורות תאים באמצעות לוח העכבר העכבר לרוץ מספקי שירות מסחריים.
2. איסוף תאים חסיד על ידי הסרת בינוני תרבות. דגירה עם 0.05% טריפסין במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר (1 מ"ל של טריפסין עבור בקבוק T25, 2 מ"ל עבור בקבוק T75, בקנה מידה בהתאם עבור צלוחיות תרבות עם שטח הפנים גדול יותר) ולאחר מכן לשטוף תאים עם Ca ^{2 +} ו Mg ^{2 +} פוספט חינם שנאגרו מלוחים (PBS).
   1. הקש עלבקבוק כדי לסלק תאים מיד לנטרל עם עודף של המדיום המכיל בסרום (8 - 9 מ"ל). לאחר מכן להשתמש בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות כדי לשאוב את ההשעיה תא צינורות צנטריפוגה.
   2. צנטריפוגה תא ההשעיה ב XG 400 במשך 5 דקות. לשטוף את התא לפחות פעמיים עם 10 מ"ל של PBS על ידי צנטריפוגה חוזרת.
   3. איסוף תאים glioma גדל כמו כדורי הגידול במדיום חופשי בסרום באמצעות צנטריפוגה (אותה מהירות ומשך כאמור); לנתק את תא גלולה על ידי הדגירה ב 1 - 2 מ"ל של פתרון ניתוק התא ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות לפני שטיפה פעמיים עם 10 מ"ל של PBS על ידי צנטריפוגה (400 x 5xxx).
   4. Re- להשעות גליומה ב מלוחים סטרילית בריכוז של 50,000 - 200,000 תאים לכל 2.5 μL. מספרי תאים המשמשים להזרקה למוח העכבר תלויים בקצב הצמיחה שנקבע עבור כל שורה של תאי גליומה. הנה, להשתמש 25,000 ו 100,000 עבור GBM43 ו GBM6 החולה נגזר תאים סרטניים, בהתאמה.
   5. הכן כפליים את כמות nceמספר תא ssary להשתלה כדי להסביר את אובדן של שבר במהלך ההליך. מעבירים את ההשעיה תא להזרקה לצינור microcentrifuge סטרילית צינור במקום על הקרח. שמור תאים על הקרח במשך 2 שעות מקסימום במהלך ניתוחים, להכין אצווה חדשה אם ניתוחים מתמשכים מתוכננים.

3. השתלת תוך גולגולתי ליצור מודלים עכבר Xenograft ( איור 1 א ) ^{2 , 4 , 13}

1. לפני יום הניתוח, לעקר את כל כלי ניתוח ב החיטוי, ולהכין את כל טיפול שלאחר ואחרי טיפול בבעלי חיים לכל פרוטוקול מאושר IACUC. לעקר את מסגרת stereotaxic וציוד היקפי כדי להבטיח תנאי aseptic תוך, ובכך למזער סיבוכים.
2. ארגן את אזור הפעולה כדי למזער את העומס ואת האפשרות של זיהום.
3. השמלה בציוד מגן אישי מתאים(PPE) לפי דרישת IACUC.
4. הגדרת התאוששות שלאחר הניתוח התאורה המתאימה. ודא כי הרדמה ומשככי כאבים מוכנים טרי באמצעות ריאגנטים שלא חלפו. הגדרת המתאים הגוף תחזוקת חום מכשירים לכל פרוטוקול מאושר IACUC.
5. כדי לקבוע את המטופל האנושי הנגזרות xenografts התאים האנושיים לבדיקת משלוח intranasal של NSCs אנושיים, להשתמש מינים עכבר immunocompromised כגון nu / nu עכבר אתימי של כל מין בגיל 6 שבועות בערך.
6. להרדים את החיה בהתבסס על משקל הגוף באמצעות ריאגנטים שאושרו, כלומר באמצעות הזרקה תוך-עינית (IP) של תערובת של קטמין (50-100 מ"ג / ק"ג, התייעץ עם IACUC מוסדי לטווח מינון מאושר) ו- xylazine (5-10 מ"ג / Kg; להתייעץ IACUC מוסדיים על טווח מינון שאושר) ב 200-250 μL מלח סטרילית, או באמצעות הרדמה isoflurane 4-5% באמצעות מכשיר שאיפה.
   1. ודא החיה הגיעה המטוס הרדמה כירורגית בY אצבע לפני צלקת העור. החל ג 'ל עיניים סטריליות מספיק כדי להבטיח את מצב לחות של הקרניות של החיה.
7. לעקר את הגולגולת באמצעות מגבונים חוזרים חוזרים לסירוגין של betadine ו אלכוהול איזופרופיל לכל Pritchett-Corning et al. ¹⁴ .
8. ספק את החתך טרום החתך על ידי הזרקת SC של Buprenex (0.05 - 2 מ"ג / ק"ג) לפני החתך באמצעות להב כירורגי.
9. השתמש מעוקל כותנה מעוקל נוטה לעזור המוסט בעת חשיפת הגולגולת; השתמש מי חמצן 3% כדי להקל על דימום מקרי.
10. השתמש במקלדת כף יד חשמלי מופעל על ידי סוללה (פחות מ 1 מ"מ רוחב) כדי ליצור חור בר ב 2 מ"מ לרוחב, שמאלה או ימינה, כדי קו האמצע, ו 2 מ"מ מאחורי ברגמה (מיקום קואורדינטות יכול להיות מותאם אישית מבוסס על מודל הגידול המיועד למחקר מסוים).
11. הר החיה למסגרת stereotaxic כדי appropriatE יציבה הראש, כך המזרק המילטון מוכנס מוכנס הוא ניצב על פני השטח של הגולגולת סביב החור בר. הקפד לוודא כי המטוס הרדמה של בעל חיים הוא במצב טוב על ידי צובט הבוהן. בדוק את קצב הנשימה כדי לוודא כי החיה אינה תחת לחץ כאב במהלך השלבים הבאים.
    * אנו לא מדגישים מיקומי בר אוזן משום:
    1. יש לנו predrilled חור בור כדי למקם את המחט, ולכן, קואורדינטות הגולגולת מדויק הם מיותרים;
    2. תעלות האוזן עכבר שביר, ואת המיקום המדויק באוזן של סורגי האוזן דורש אימון מעורב יותר שאינו רלוונטי למטרה שלנו. הסיכון לנזק לתעלות האוזן מורין עולה על היתרונות של מיקום מדויק;
    3. תמיכה בלחי הרבה יותר קל לבצע ומסוגלת להשיג את אותן רמות של יציבות ראש העכבר ואיזון במהלך המיקום. זה יתרון נוסף עבור ניתוחי זמן מרובים רגישים כדי להבטיחהשלמת במועד עם כדאיות התא טוב.
12. השתמש את הכפתורים מסגרת stereotaxic למקם את קצה מזרק שטוח קצה החור בר, ולאחר מכן להוריד אותו לאט עד 3 מ"מ מתחת למשטח דורה. נסוג 0.5 מ"מ כדי לשמור על קצה המחט ב 2.5 מ"מ מתחת לדורה.
13. להזריק 2.5 μL של תאים דליומה preloaded על פני תקופה של 1 דקות. בואו המחט לשמור על מעמדה עוד 1-2 דקות לפני לאט, במשך 1 דקות, לסגת את המחט מתוך המוח וטיפול כדי למזער את תא backflow. החל שעווה סטרילית עצם כדי למנוע outgrowth הגידול הגולגולתי.
14. סגור את הפצע באמצעות נירוסטה פצע קליפים (7 מ"מ). לספק זריקה תת עורית (sc) של 1 מ"ל של תמיסה רינגר סטרילי הנקי (מראש מחומם ל 37 מעלות צלזיוס), ומניחים את החיה בתא התאוששות אשר באמצע הדרך על כרית חימום.
15. החזירו את החיות למעמד המאוורר ברגע שהן חוזרות לניידות, ועוקבות אחרי טיפול שגרתי שלאחר הטיפול כדי להבטיח את פעולתן H התאוששות.

4. ויוו הדמיה פליטת אור (BLI) של גידול הגידול ( איור 1 ב ) ¹⁵

הערה: החולה נגזר התאים הדליומה משתנים להביע בלוציפראז גחלילית. זה מאפשר לנו לעקוב אחר התקדמות הגידול לאחר השתלת תוך גולגולתי.

1. תן לבעלי חיים הזרקת ה- IP של D- לוציפרין, מלח אשלגן (150 מ"ג / ק"ג) 10 דקות לפני הפגישה הדמיה.
2. מיד מקום חיות בחדר חמצן isoflurane מחוממת אושרה על ידי IACUC.
3. מקום חיות בתוך החדר מחומם (37 מעלות צלזיוס) הדמיה ללכוד את האות BLI באמצעות הגדרות תוכנה (לפרטים, ראה הוראות היצרן).

5. מוח כולו הקרנה ( איור 1 ג ) ^{2 , 4 , 13}

> הערה: כדי להגביר את ההעברה של hNSCs נמסר intranasally לגידולים במוח, הקרנה מוח שלם של עכברים הנושאים xenografts הגידול תוך גולגולתי ניתן להשתמש ⁴ .

1. השתמש הזרקת ה- IP של תערובת קטמין ו xylazine (50-100 מ"ג / ק"ג ו 5-10 מ"ג / ק"ג בהתאמה, להתייעץ IACUC מוסדיים טווח מינון מאושר) עם מטוס הרדמה תת כירורגית כדי לגרום באופן בינוני הרדמה לעכברים.
2. השתמש במגש מדגם למקם את העכברים בתוך החדר בין עופרת חוסם בלוקים, המאפשר חשיפה רק ראש הנתיב קרינה ( איור 2 ).
3. תן עכברים עם אישור חיובי BLI של הגידול הגידול (בדרך כלל ביום 7-8 לאחר השתלת תאים הדליומה) מנה יומית של 2 GY של הקרנה במשך 5 ימים רצופים. בצע הערכה של BLI של הגידול לאחר מינון ההקרנה האחרון.

6. שינוי גנטי של תאי גזע עצביים אנושיים (NSCs, Figur3 א) ⁴

1. לשמור על NSCs אנושיים (לשכפל HB1.F3.CD) ^{6 , 7} ב מדיום DMEM עם 10% FBS ו 1% פניצילין סטרפטומיצין ב 37 ° C חממה humidified תחת 95% בחדר החדר 5% CO ₂ ( ^N NSCs).
2. בצע overexpression גנטי של קולטנים chemotaxic, כגון CXC מוטיב chemokine קולטן 4 (CXCR4), ב hNSC ידי התמרה עם קידוד lentivirus עבור CXCR4 האדם.
   1. כאשר NSCs הם ליד confluency 75-80%, להוסיף את lentivirus CXCR4 למדיום התרבות יחד עם polybrene (8 מיקרוגרם / מ"ל), ו דגירה של 8 שעות או לילה.
   2. החלף וירוס המכיל בינוני בינוני טרי המכיל blasticidin ב 4 מיקרוגרם / מ"ל ​​לבחירה חיובית של תאים transduced.
   3. לאמת את רמת הביטוי CXCR4 ב hNSCs שונה ( ^CXCR4 NSCs) באמצעות cytometry זרימה באמצעות נוגדנים נוגדי CXCR4 ו נוגדנים תואמים isotype ו viכמותי RT-PCR באמצעות זוג primers הגברה CXCR4 ו glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) cDNAs ⁴ .
   4. יצירת בקרת NCCs וקטורית ( ^VC NSCs) באמצעות אותה אסטרטגיה, עם RFP מחליף את הגן CXCR4, ולאמת באמצעות מיקרוסקופיה או cytometry זרימה בשל נוכחות של הקרינה RFP.

7. תנאים מוקדמים היפוקסיים של NSCs אנושיים ( איור 3 א ) ⁴

1. צלחת NSCs תרבותי T75 תרבות צלוחיות כפי שתואר לעיל עד confluency 90% הוא הגיע.
2. מקום תא התרבות צלוחיות בתוך תא CO ₂ humidified / חממה עם מתוחזקת 1% O ₂ רמות במשך 24 שעות, באמצעות אספקת גז N ₂ נשלט על ידי מד זרימה אוטומטי מובנית. תאים אלה נקראים ^H NSCs. בקרת NSCs ^N מתוארים בשלב 7.1.

8. טוען של הוNSCs אדם עם וירוס Oncolytic ( איור 3B -3H ) ⁵

1. 8.1.Infect ^N NSCs, NSCs, ^VC NSCs, ^CXCR4 NSCs עם 50 adnovirus שכפול מותנה (CRAD) -S-pk7 חלקיקים נגיפיים / תא ^{4 , 16} .
2. 8.2.After 2 שעה של הדגירה בטמפרטורת החדר עם תקופתיים הקשה, לשטוף תאים שלוש פעמים עם התקשורת כדי להסיר חלקיקים נגיפיים מאוגדים להשעות תאים מלוחים סטריליים להזרקה.
   זהירות: לבצע את כל הווירוס הקשורים בתהליכים חוץ גופית תרבות במתקנים עם הייעוד ברמה biosafety המתאים, כגון BSL2. ציוד מגן אישי מתאים צריך להיות משוחק על ידי חוקרים המטפלים בווירוס oncolytic לכל הנחיות המוסד לבעלי חיים מוסדיים ^{4 , 16} .

9. טעינת תאי גזע עם מיקרוN-size תחמוצות ברזל Paramagnetic (MPIO) עבור מעקב ויוו באמצעות הדמיה תהודה מגנטית (MRI, איור 3B -3H ) ²

1. כדי לתאי גזע תאים, להוסיף MPIOs לתרבויות תא גזע ב confluency ~ 80%, בנוכחות מגיב transfection עבור הדגירה לילה. היעילות של תיוג תא גזע (NSCs ⁴ או MSCs ² ) עם MPIOs (פלאש אדום מצומדות) נקבע על ידי cytometry הזרימה.
2. כדי להמחיש הגירה תא גזע והפצה במוחם של בעלי חיים גליומה, לרכוש גם מרובה פרוסה ברזולוציה גבוהה T2 משוקלל רכישה מהירה עם שיפור הרפיה ספין הד תמונות מרובה פרוסה T1 משוקלל מהיר זווית נמוכה זריקה (FLASH) sequences הד הדרגתי כדי להעריך את המבנה באמצעות שני מטוסים העטרה ו צירית של המוח העכבר ² .

10. Intranasal משלוח של NSCs טיפולית ( דמויות 1D ותרשים 3D ) ^{2 , 4}

1. תרבות לאסוף NSCs ( ^N NSCs, NSCs, NCs ^VC , ו ^CXCR4 NSCs) על פי פרוטוקול המתואר בסעיף 3.
   זהירות: כל ההליכים בבעלי חיים הקשורים NSCs נטען OV חייב להתבצע במתקנים עם הייעוד ברמה biosafety המתאים, כגון מתקני BL2 או BSL2.
2. להרדים עכברים באמצעות הזרקת ה- IP של תערובת קטמין ו xylazine על פי שלב 3.6.
3. מקום עכברים על וילון נקי פונה כלפי מעלה עם כרית חימום מתחת לשמור על טמפרטורת הגוף. התאם כרית מרופד עשוי מגבות נייר מגולגל עם קלטות כדי להבטיח את זווית זקוף של הנחיריים כאשר הניח מתחת לראש העכבר.
   הערה: Hyaluronidase מראש הטיפול (סך של 100 U כמו ארבע חיסונים חוזרים על 5 דקות אינטרוולים, 3 μL בכל נחיריים) של האף eביתית תוארה בעבר ^{2 , 17} .
4. באמצעות micropipette, לוותר 2 μL ההשעיה NSC לנחיריים של העכבר. ראייה לאשר את השאיפה של טיפה לפני המעבר העכבר הבא. המספר הכולל של תאים נמסר ניתן לקבוע על ידי המשתמש; להשתמש 62,500-125,000 תאים / μL, כך 0.5-1 מיליון תאים ניתן להעביר 4 ​​x 2 מינונים μL.
5. השתמש טיימר כדי להבטיח 5 דקות intervals בין כל ההשעיה תא הממשל, עד 4 פעמים.
6. אפשר לבעלי חיים להשיב את התנועה בתא התאוששות, עם עמדת שכיבה לאורך כל הזמן.

11. ניתוח הישרדות ( איור 3E )

1. הזן את נתוני משך ההישרדות של בעלי חיים בתוכנות סטטיסטיות, ובצע השוואות סטטיסטיות תוך שימוש במבחן log-rank עם ערכי החשיבות הבאים: * p < 0.05, ** p <0.01, *** p <0.001.

12. אוסף רקמות והיסטולוגיה / אימונוציטוכימיה אימות של תאי גזע בתאי גזע פנימיים ^{2 , 4}

1. בנקודת הסיום של המחקר, להרדים עכברים באמצעות פרוטוקולים אישרה IACUC. נוהג סטנדרטי הוא באמצעות חדר זרימה בשליטה CO ₂ להקריב את החיות כמו האסטרטגיה המתת חסד העיקרי ואחריו exsanguination ידי קיבוע זלוף.
2. מיד לאחר הקורבן, לבצע זלוף intracardiac עם PBS על החיה כדי להבטיח חיסול שאריות דם כלי הדם ואת שימור רקמות לניתוח היסטולוגית שלאחר מכן.
3. מניחים את החיה CO _2- מורמן על גבי משטח סופג במצב שכיבה, להמשיך עם laparotomy לחשוף את שריר הסרעפת, אשר גזור יחד עם כלוב הצלעות, כדי לחשוף את הלב.
4. אחרי אמאהמלך ניק על אטריום ימין באמצעות זוג מספריים לנתיחה, להאיץ את exsanguination עם 3-5 מ"ל של הזרקת PBS דרך החדר השמאלי על השיא. הזרק קר paraformaldehyde 4% (PFA) למחזור באמצעות מזרק; עוויתות שרירים היקפיים לספק אישור חזותי כי אין חסימה העיקרי במחזור זה ימנע קיבעון רקמות תקין.
5. כירורגי להסיר את הראש של הפגר ולשמור בצינור 50 מ"ל צנטריפוגה 4% PFA ב 4 ° C במשך הלילה. לשנות את הפתרון סוכרוז 30% למחרת היום לנתיחה רקמת המוח עוד 24 שעות מאוחר יותר.
6. הטמיעו את רקמות המוח במתחם אוקטובר והקפאה של פלאש על איזופנטן על קרח יבש. ביצוע cryosectioning של בלוק רקמה כתוצאה לייצר 10-20 סעיפים רקמות מיקרומטר עבור יישומים היסטולוגיה ו immunocytochemistry.

תוצאות

הן היפוקסית מראש טיפול ( איור 4 א ) ⁴ ו overxion CXCR4 ( דמויות 4B ו 4 ג ) ^{4 באופן} משמעותי upregulate נוכחות קרום התא של קולטני CXCR4 כפי שהוכח על ידי cytometry הזרימה. הגידול הטרופי שהראה NSCs (חיצים כחולים), מוצג היסט...

Discussion

למרות שהמסלול התוך-עיני של אספקת התרופות נבדק באופן נרחב עבור מולקולות קטנות, ננו-רפואה ותרכובות חלבון כאחד, היישום של תאי גזע טיפוליים עבור מיקוד אינטראנסלי של הגידול במוח הוא חדש מאוד בספקטרום של תרפיית הגידול במוח תחת פיתוח ^{2 , 3 ,<...}

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Stereotaxic frame	Kopf Instruments	Model 900
Hypoxic Cell Culture Incubator	ThermoFisher Scientific	VIOS 160i
Cell culture supplies (Plastics)	ThermoFisher Scientific	Varies	Replaceable with any source
Legend Micro 21R Refrigerated Microcentrifuge	ThermoFisher Scientific	75002490	Replaceable with any source
Bench centrifuge Sorvall ST16R	ThermoFisher Scientific	75004240	Replaceable with any source
Micro syringe 702N 25 µl (22S/2"/2)	Hamilton Company	80400	Flat tip
Sample Tray for Irradiator	Best Theratronics	A13826	To set up mice protection with lead shield
Leica DMi8 Microscope	Leica Microsystem		Custom setup
Leica CM1860 UV cryostat	Leica Microsystem		Custom setup
Exel International Insulin Syringe	ThermoFisher Scientific	14-841-31
Corning Phosphate Buffer Saline	Corning Cellgro/ThermoFisher	21-031-CV
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Corning Cellgro/ThermoFisher	11965-084
Trypsin 0.05%	Corning Cellgro/ThermoFisher	25300054
Hyaluronidase from bovine testes	MilliporeSigma	H3506