ורידי ארנב מודל האינטרפוזיציה מחקה ניתוח מחדש באמצעות שתלי וריד כדי להעריך את היפרפלזיה באמצעות לחץ דם עורקי

Summary

הפרוטוקול הנוכחי שואפת ניסויים ליצור היפרפלזיה של הוורידים ורידים על ידי הקרבת ורידים ללחץ דם עורקי לפיתוח אסטרטגיות להחליש את היפרפלזיה בתוך ורידים בעקבות ניתוח revascularization באמצעות שתלי וריד.

Abstract

למרות שתלי הווריד שימשו בדרך כלל שתלי אוטוולוגיים בניתוחים revascularization עבור מחלות איסכמי, הפנסיה ארוכת טווח נשאר עני בגלל ההאצה של היפרפלזיה של אינטימיות בשל החשיפה ללחץ דם עורקי. הפרוטוקול הנוכחי מיועד להקמת היפרפלזיה הורידים הניסיונית של הוורידים על ידי ורידים בעורק הצוואר של הארנב לעורקים העורק הצלעות. הפרוטוקול אינו דורש הליכים כירורגיים עמוק בתא המטען ואת היקף החתך מוגבל, אשר פחות פולשנית עבור בעלי חיים, המאפשר התבוננות ארוכת טווח לאחר השרשה. הליך פשוט זה מאפשר לחוקרים לחקור אסטרטגיות כדי להחליש את ההתקדמות של היפרפלזיה של אינטימיות של שתלי הווריד מושתל. באמצעות פרוטוקול זה, אנו דיווחו על השפעות התמרה של מיקרו-ארנה-145 (מיר-145), אשר ידוע לשלוט על הפנוטיפ של תאים שריר החלקה של כלי הדם (VSMCs) מן ההתרבות למצב הקונקטילה, לתוך שתלי וריד שנקטפו. אנו אישר את הנחתה של היפרפלזיה השכול של שתלי וריד על ידי התמרה מיר-145 לפני ניתוח השרשה באמצעות שינוי פנוטיפ של VSMCs. כאן אנו מדווחים על פלטפורמת ניסיוני פחות פולשנית כדי לחקור את האסטרטגיות שניתן להשתמש בהם כדי להחליש את היפרפלזיה של שתלי וריד בניתוחים revascularization.

Introduction

מספר החולים החווים מחלות איסכמי עקב טרשת עורקים הוא הולך וגובר ברחבי העולם¹. למרות ההתקדמות הנוכחית בטיפולים רפואיים וכירורגיים למחלות לב וכלי דם, מחלות לב איסכמי, כגון אוטם שריר הלב, נשארות גורם מרכזי לתחלואה ותמותה². יתר על כן, מחלות עורקים היקפיים המאופיינת זרימת הדם מופחתת לגפיים גורמת איסכמיה הגפיים קריטי, שבו כ 40% מהחולים לאבד את רגליהם בתוך 6 חודשים של אבחון, ואת שיעור התמותה הוא עד 20%³.

ניתוחים מרקתיים, כגון השתלת עורק כלילי (CABG) וניתוח מעקפים לעורקים היקפיים, הם אפשרויות טיפוליות מרכזיות למחלות איסכמי. המטרה של ניתוחים אלה היא לספק מסלול דם חדש כדי לספק זרימת דם מספקת לכיוון האתר המרוחק של stenotic או הנגעים הסגר של העורקים הטרשת עורקים. למרות בתוך שתלי העורקים האתרו, כגון עורקים פנימיים של החזה עבור CABG, הם מעדיפים כמו שתלי מעקף בגלל החזה הצפוי ארוך יותר, שתלי וריד, כגון ורידים באוטוולוגיים saphenous, משמשים בדרך כלל בשל נגישות גבוהה יותר וזמינות⁴. הנקודה החלשה של שתלי הווריד הוא שיעור הפטנטיות העניים בהשוואה לזה של שתלי עורק⁵ בשל היפרפלזיה השפני של מואצת הדלקת כאשר נתון לחץ עורקי, אשר מוביל למחלת השתל ורידים⁶.

מחלת השתל ורידים מתפתחת בשלושת השלבים הבאים: 1) פקקת; 2) היפרפלזיה שלמה של אינטימיות; ו 3) טרשת עורקים⁷. על מנת לטפל במחלת השתל ורידים, הרבה מחקרים בסיסיים בוצעו⁸. עד כה, אין אסטרטגיה פרמקולוגית מלבד תרופות נוגדות טסיות והפחתת שומנים באופן מומלץ עבור מניעה משנית לאחר ניתוח כלילית או היקפי ניתוחים בהנחיות האחרונות^9,10,11,12. לפיכך, כדי להתגבר על מחלת השתל ורידים, במיוחד היפרפלזיה של אינטימיות, הקמת פלטפורמה ניסיונית רלוונטית ללימודים נוספים נדרש.

היפרפלזיה של אינטיאל היא תופעה מסתגלת המתרחשת בתגובה לשינוי בסביבה, שם כלי דם חלקה שריר (VSMCs) מתרבים, לצבור, וליצור מטריצה מליבית ב intima. כתוצאה מכך, הוא מציג בסיס לשתל atheroma⁷. ב-hyperplastic intima, VSMCs לשאת התפשטות, וייצור במקום התכווצות, נקרא "שינוי פנוטימית"⁸. זהו יעד מחקר מרכזי לשלוט בפנוטיפ של VSMCs של שתלי הווריד כדי למנוע מחלות השתל ורידים, ומחקרים בסיסיים רבים נערכו בנושא זה⁸. עם זאת, מחקר קליני מבוקר אקראי שמטרתו להשיג שליטה פרמקולוגית של VSMC פנוטיפ הראו תוצאות מוגבלות¹³. יתר על כן, אין טיפולים סטנדרטיים כדי למנוע היפרפלזיה של אינטימיות. מחקר בסיסי יותר, כולל לימודי מודל בעלי חיים, הינו הכרחי.

כדי לקדם את המחקר בתחום זה, חשוב להקים מודל בעל חיים, המכיל את שתלי הווריד בלחץ דם עורקי, ומאפשר התבוננות ארוכת טווח. קררל ואח ' הקים דגם כלבי של השרשה של וריד העורק החיצוני לעורק הראשי¹⁴. Therafter אחר, מגוון של שתלי וריד המועסקים כדי לחקור את ההשפעות הפיזיולוגיות והפתולוגיים של שינויים בלחץ דם עורקי, כולל את העורק הנחותים של העורק מנופה לתוך בית החזה או האבי הבטן, או את הווריד saphenous חרט הירך לתוך מבנה של העורק^15,16,17. מודלים אלה נבנו בבעלי חיים גדולים יותר, כגון חזירים או כלבים, המתאימים לחקות מחלה של שתל ורידים בנרתיק קליני. עם זאת, הקמת מודל בעלי חיים שניתן להכין ללא טכניקות ניתוח מיוחד, בעלות נמוכה יותר יהיה אידיאלי עבור החוקרים מנסים לפתח אסטרטגיה טיפולית חדשה להחליש את היפרפלזיה העובר באמצעות VSMC פנוטיפ שליטה ב vivo. בתחילה, המיקום הפנימי של וריד הצוואר לתוך העורק הראשי בתוך ארנב הוצג בתחום של נוירוכירורגיה^18,19. לאחר מכן, הוא הוחל על מחקר על היפרפלזיה שלמה של "שמאל",^20,21. המודל הראשוני כולל מיקום בין ורידים בלבד, ובכך חוסך זמן. יתר על כן, מחקר שלאחר מכן הראה כי הכנת השתל וריד השפיעו גם על היפרפלזיה של ההרמה²². דייויס et al. העריכו את ההשפעה של פציעה קטטר בלון על היפרפלזיה של אינטימיות בתוך ורידי ארנב במודל הבינפוזיציה^23,24. למרות הבלון בלון פציעה בנוסף מיקום הווריד היה רלוונטי יותר להגדרה קלינית, מודל להתרבות יותר היה רצוי גם. לפיכך, ג'יאנג ואח ' בדק את ההשפעה של סביבות זרימה דיפרנציאליות על היפרפלזיה האלמינאל והקים הליך הארכה של הענף המרוחק כמודל שאינו מהווה²⁵. עם זאת, הם המועסקים טכניקת חפתים בזמן של השתל וריד התנוחה הבין כי נראה שונה ההשקה ביד תפור בסביבה הקלינית. בפרוטוקול הנוכחי, אנו מדווחים על שכפול, רלוונטי קלינית, והליך זמין באופן כללי להכנת מודל התנוחה הבין ורידי ארנב להעריך היפרפלזיה האינטימיות בלחץ דם עורקי.

Protocol

הערה: כל ההליכים המנתחים שבוצעו על בעלי חיים צריכים להתבצע בהתאם למדריך לטיפול ולשימוש בבעלי חיים מעבדתיים (www.nap.edu/catalog/5140.html) או בהנחיות אתיות מתאימות אחרות. על הפרוטוקולים להיות מאושרים על ידי ועדת הרווחה במוסד המתאים לפני שתמשיך.

1. הכנת בעלי חיים

1. רכישה של זכר ארנבים לבנים יפניים (או ארנבים עם גודל גוף שווה ערך) במשקל 2.7 ק ג.
2. Acclimate הארנבים לשבוע 1 באור 12 שעות – מחזור כהה ולהאכיל הארנב רגיל האוכל הצ לפני ההליך.

2. הרדמה ובעלי חיים

הערה: כל ההליכים הבאים יש לבצע בתנאים אספטי. השדה כירורגי והתקנים צריך להיות מחוטא עם 10% povidone-פתרון יוד, 70% אלכוהול, או מתחם אמוניום מצוי לפני השימוש.

1. הפנטוברביטל ארנב בעירוי של נתרן (25 מ"ג/ק"ג) באמצעות הווריד האורירירי.
2. לאחר שהבטחת כי הארנב איבד את כוחה, להעביר אותו לשולחן הפעלה, ולהגדיר אותו במצב פרקדן. כסו את האף והפה. עם מסיכת הרדמה התחל את הניהול של הרדמה כללית עם האינהלציה של 0.7 – 1.0% isofלוריאן-מיקס חמצן.
   הערה: אם הארנב מתחיל לנוע, התפרצות הזמן הזמנית של האדם עד 2% תהיה יעילה.
3. חתוך את הפרווה על הצוואר ועל הכתף באמצעות קוצץ שיער חשמלי. לאחר חיטוי המשטח על ידי ריסוס 70% אתנול או פתרון אנטיספטי אחר, לגלח את שאר השיער באזור צוואר הרחם עם תער. לחטא את השדה כירורגי עם 10% povidone-יוד וניהול לידוקאין הידרוכלוריד (3 מ"ג/ק"ג) תת-עורי כמו הרדמה מקומית.
   הערה: בדוק את התנועה החוזרת של קנה הנשימה. שימו לב לכיוון הווריד. ועורק הצוואר כאשר שיעורי הנשימה והאריחים יורדים, יש לשקול ירידה זמנית בניהול ההרדמה. ניטור הרוויה חמצן מעורית ושיעור הדופק הוא גם מועיל.
   הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן.

3. קציר של וריד הצוואר

הערה: יש להשתמש בהרדמה מקומית (כגון לידוקאין) לפני ביצוע חתך העור.

1. לפני חתך העור, ניהול enrofloxacin מניעתי (5 מ"ג/ק"ג) תת-עורי. עבור כאבים, ניהול 0.05 מ"ג/ק"ג של בופרנורפין תת-עורי פעמיים ביום במשך 3 ימים.
   הערה: כדי למנוע ירידה בטמפרטורת הגוף, ניקוי כירורגי של אתר החתך יכול לשמש במקום ריסוס הגוף של בעל החיים עם 70% אתנול.
2. אינסה 50 – 60 מ מ של אזור צוואר הרחם עם אזמל כירורגי longitudinally. במיומנות לנתח את רקמות תת עורית וfascia לחשוף קטע 20-30 מ"מ של וריד העורק. ליגייט את כל הענפים של הווריד החשוף עם התפרים משי 4-0.
3. מניחים תפר משי 2-0 סביב ורידי העורק הפנימי והחיצוני כדי לבצע הארכה מיד לאחר לצמצם את הווריד העורק בשלב הבא.
4. הגדר את קיר הורידים (כ 1 מ"מ) של הצד המרוחק של הווריד. הכנס צנתר 2-בלון צרפתי מתוך לחתוך לכיוון הצד הטוב ביותר של הווריד. לישער את תפר המשי 2-0. באתרים האלה של ורידי העורק
5. מנפח את הבלון עם 0.2 mL של אוויר. באמצעות שלושה מעברים. של הצנתר לקילוף אנדותל
   הערה: הליך זה נחשב שווה ערך ל-distension של שתל וריד ספנובי בניתוחים האנושיים, הגורמים לקילוף אנדותל.
6. . ליגייט הקצה הטוב ביותר של הווריד . חותכים את הווריד לקציר
   הערה: הבחנה בזהירות את הקצה המרוחק והטוב ביותר של הווריד הנקצרו, משום שהחיבור לעורק צריך להתבצע בצורה הפוכה (כלומר, הקצה המרוחק של הווריד צריך להיות מרוח לקצה העורקי של העורק). למשל, החדרת קטטר ורידי מהצד מסוים יעבוד כסמן.
7. עבור מניפולציות טיפוליות עבור הווריד וריד שנקטפו, לטפל הווריד שנקטפו עם שיטות שנועדו לכל שאלה מחקר (למשל, החשמל²⁶ או טבילה ישירה עם פתרונות²⁷ עבור התמרה מיקרורונאס לתוך הוורידים).
   הערה: לפרוטוקול זה, שתלי הווריד ספוגים בתמיסת מלח מוזרמת פוספט, בקרת מיקרואורנה ומיקרוארנה-145. הפרוטוקול יכול להיות מושהה כאן.

4. הצבת העורק הראשי על ידי וריד הצוואר שנקטפו

1. לחשוף קטע 20-30 מ"מ של עורק הראש המסיללי צלעות. הפרידו את העורק בזהירות. מהווריד והעצב הסמוך ליגייט את כל הענפים של הווריד החשוף עם תפר משי 4-0.
2. מנהל הפארין נתרן באופן פנימי (200 IU/ק"ג). המתן 3 – 4 דקות.
3. הדק את הקצה הראשי והחלק המרוחק. של העורק עם מלחציים כירורגיים חותכים את העורק באמצע, בין התפסים. הכנס מתמיסת מלח רגילה לתוך העורק הראשי של העורק באופן מבוקר ו קרוב כדי קרוב את העורק.
   הערה: עורק הראש של הארנב נוטה להתכווץ. בחרו אתר מנופח היטב כאתר ההשקה.
4. אנסטוז הווריד הנקצרו אל העורק בצורה הפוכה לקצה.
   1. הכנס את הצנתר 20 G ורידי לתוך הווריד שנקטפו מן המרוחק אל הכיוון הטוב ביותר כדי לשמור את לומן הורידים פתוח במהלך ההשקה המרוחק.
   2. Anastomose הקצה הראשי של הווריד עד לקצה המרוחק של העורק באמצעות 8-0 פוליפרופילן הפריעו לתפרים. מניחים שני הסטיצ'ים עוגן באתר ובאתר הנגדי. הוסף את הסטיצ'ים בצד העליון של קו ההשקה בין העוגן.
   3. הפוך את העורק ואת הווריד שתל הפוך. הוסף סטיצ'ים על החלק הנותר של קו ההשקה.
   4. . הסירו את הקטטר מהווריד הצמד את שתל הווריד והדקתו. לעורק הראש העורק לוודא ששתל הווריד. מתרחב בהדרגה
   5. אנסטוז הקצה המרוחק של הווריד לקצה העורקי הראשי באמצעות 8-0 פוליפרופילן הפריעו לתפרים. מנורת העורק כדי לבדוק את. הדימום מאתרי ההשקה הוסף תפרים עבור הומוקיפאון, במידת הצורך.
      הערה: דחיסה עדינה של האתר המדמם עם גזה והמתנה עשויה להיות מספיקה עבור הומוקיפאון. בדקו את ההתרחבות המיידית ואת ההתפשטות החזקה של שתל הווריד לאחר הנטייה הקרובה. אם זה לא נצפתה, שקול שלבים חוזרים 4.4.2 – 4.4.3
5. ליגייט עורק הראש הפנימי עם תפר משי 4-0 לדמות במצב נגר עני וכלה להקל על היפרפלזיה הקשר של אינטימיות.
6. . נקה את הפצע בתמיסת מלח סגור את הפצע באמצעות 3-0 polyglactin 910, שכבה על ידי שכבה.

5. הליכים שלאחר הניתוח

1. לסיים את ההרדמה ולהסיר את מסיכת ההרדמה לאחר בדיקת הנשימה הספונטנית של החיה. בדוק את התנאים של בעלי החיים לעתים קרובות עד שהוא מתאושש מהרדמה.
2. השאר את החיה מופרדת מחיות אחרות עד שיחזור לתפקוד הנשימתי. התמיכה בנשימות ידנית, במידת הצורך. אל תחזיר את בעל החיים לקבוצה גדולה יותר עד להחלמה מלאה.
3. בדקו את צריכת המזון והמים לאחר ההתאוששות מההרדמה וספקו תמיכה תזונתית מתאימה. ניהול משככי כאבים (למשל, בופרינורין 0.05 – 0.2 מ"ג/ק"ג תת-עורי 2x ביום במשך 3 ימים) ולבדוק סימנים של אי נוחות או כאב.

תוצאות

איור 1A מראה תמונה מייצגת של היפרפלזיה מוצלחת של אינטימיות ב 2 שבועות לאחר ניתוח אינטרפוזיציה הורידים (הפאנל העליון). הפאנל התחתון מציג את ההשפעות הטיפוליות של מיקרוארנה-145-שנטען פולי (חומצה לקטית-שיתוף-משותף) חלקיקי חלקיקים שהנחתה את היפרפלזיה השפעה (הפאנל התחתון).

Discussion

הפרוטוקול הנוכחי נועד לספק פלטפורמה ניסיונית כדי לבחון התערבויות מולקולריות או גנטיות שונות עבור VSMCs כדי לשלוט על הפנוטיפים מן ההתרבות למצב הקונקטילה, ולאחר מכן החליש את ההתקדמות של היפרפלזיה הvivo של הורידים ורידים. באמצעות מודל זה, הכנו בהצלחה היפרפלזיה לאחר שבועות שבועיים לאחר הניתוח (

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% Povidone-iodine solution	Nakakita	872612	Surgical expendables
2-0 VICRYL Plus	Johnson and Johnson	VCP316H	Surgical expendables
4-0 Silk suture	Alfresa pharma	GA04SB	Surgical expendables
8-0 polypropylene suture	Ethicon	8741H	Surgical expendables
Cefazorin sodium	Nichi-Iko Pharmaceutical	6132401D3196	Antibiotics
Fogarty Catheter (2Fr)	Edwards Lifesciences LLC	E-060-2F	Surgical expendables
Heparin	Nipro	873334	Anticoagulant
Intravenous catheter (20G)	Terumo	SR-OT2051C	Surgical expendables
Isoflurane	Fujifilm	095-06573	Anesthesia
Lidocaine hydrochloride	MP Biomedicals	193917	Anesthesia
Pentobarbital sodium	Tokyo Chemical Industry	P0776	Anesthesia