מיקרו-גיבלים מגנטיים, אקוסטיים ואופטיים-משולשים-רספונסיביים לטיפול בסרטן משולב של פוטוטותרמיה

Summary

מוצג כאן פרוטוקול לייצור מיקרו-פגזים עם ננו-חלקיקים (NSMs) המופגזים בתחמוצת ברזל באמצעות הרכבה עצמית, סינרגיה של תגובה מגנטית, אקוסטית ואופטית בפלטפורמה ננו-תרפיוטית אחת לטיפול בהיפרתרמיה מגנטית ובשילוב פוטותרמי לסרטן.

Abstract

אספקה מדויקת של סוכנים נגד סרטן שמטרתם לידה ממוקדת וחדירה עמוקה, כמו גם שחרור מבוקר באתר הגידול כבר מאותגר. כאן, אנו מייצרים מיקרו-חלקיקים המופגזים בתחמוצת ברזל (NSMs) באמצעות הרכבה עצמית, סינרגטיזציה של תגובה מגנטית, אקוסטית ואופטית בפלטפורמה ננו-תרמית אחת. חלקיקי תחמוצת ברזל משמשים הן כסוכנים מגנטיים והן כסוכנים פוטותרמיים. לאחר הזרקה תוך ורידי, NSMs יכול להיות מונחה מגנטית לאתר הגידול. אולטראסאונד מפעיל את שחרורו של חלקיקי תחמוצת ברזל, להקל על חדירה של חלקיקים עמוק לתוך הגידול בשל אפקט cavitation של microbubbles. לאחר מכן, היפרתרמיה מגנטית וטיפול פוטותרמי יכול להתבצע על הגידול לטיפול משולב בסרטן, פתרון להתנגדות לסרטן בשל הטרוגניות הגידול. בפרוטוקול זה בוצעו סינתזה ואפיון של NSMs כולל תכונות מבניות, כימיות, מגנטיות ואקוסטיות. בנוסף, היעילות נגד סרטן על ידי טיפול תרמי נחקרה באמצעות תרביות תאים במבחנה. אסטרטגיית הלידה המוצעת והטיפול המשולב טומנים במכינו הבטחה גדולה בטיפול בסרטן לשיפור יעילות הלידה והטיפול.

Introduction

סרטן הוא אחת המחלות הקטלניות ביותר, גרימת מיליוני מקרי מוות מדי שנה ברחבי העולם והפסדים כלכליים עצומים¹. במרפאות, טיפולים נגד נגד נגדים קונבנציונליים, כגון כריתה כירורגית, הקרנות וכימותרפיה עדיין לא יכולים לספק יעילות טיפולית משביעת רצון². מגבלות של מטפלים אלה הם תופעות לוואי רעילות גבוהות, שיעור הישנות גבוה ושיעור גרורות גבוה³. לדוגמה, כימותרפיה סובלת מיעילות המסירה הנמוכה של תרופות כימותרפיות דווקא לאתר הגידול⁴. חוסר היכולת של תרופות לחדור עמוק לתוך רקמת הגידול על פני המחסומים הביולוגיים, כולל מטריצה חוץ תאית ולחץ נוזלים ביניים גידול גבוה, אחראי גם על היעילות הטיפולית הנמוכה⁵. חוץ מזה, ההתנגדות לגידול מתרחשת בדרך כלל בחולים שקיבלו טיפול על ידי כימותרפיה אחת⁶. לכן, טכניקות שבהן מתרחשת אבלציה תרמית של הגידול, כגון טיפול פוטותרמי (PTT) וטיפול היפרתרמיה מגנטית (MHT), הראו תוצאות מבטיחות כדי להפחית את ההתנגדות לגידולים והתעוררו בניסויים קליניים^7,8,9.

PTT מפעיל אבלציה תרמית של תאים סרטניים על ידי פעולה של סוכני המרה פוטותרמיים תחת הקרנה של אנרגיית הלייזר. הטמפרטורה הגבוהה שנוצרה (מעל 50 °C (50 °F) מעורר נמק תא מלא¹⁰. לאחרונה, חלקיקי תחמוצת ברזל (IONPs) הוכחו להיות סוכן המרה פוטותרמי שניתן להפעיל על ידי אור כמעט אינפרא אדום (NIR)¹¹.  למרות מקדם ספיגת הטוחנת הנמוכה באזור האינפרא אדום הקרוב, IONPs מועמדים לטיפול פוטותרמי בטמפרטורה נמוכה (43 מעלות צלזיוס), טיפול מותאם כדי להפחית את הנזק שנגרם על ידי חשיפה לחום לרקמות רגילות וליזום חסינות antitumor מפני גרורות הגידול¹². אחת המגבלות של PTT היא עומק החדירה הנמוך של הלייזר. עבור גידולים עמוקים בישיבה, שדה מגנטי לסירוגין (AFM) המושרה חימום של חלקיקי תחמוצת ברזל, המכונה גם היפרתרמיה מגנטית, הוא טיפול אלטרנטיבי עבור PTT^13,14. היתרון העיקרי של MHT הוא החדירה הגבוהה של שדה מגנטי¹⁵. עם זאת, הריכוז הגבוה יחסית הנדרש של יונים נשאר חיסרון מרכזי עבור היישום הקליני שלה. יעילות המסירה של ננו-רפואה (או חלקיקים) לגידולים מוצקים בבעלי חיים הייתה 1-10% עקב סדרה של מכשולים כולל מחזור הדם, הצטברות וחדירה^16,17. לכן, אסטרטגיית משלוח IONPs מבוקרת וממוקטת עם היכולת להשיג חדירה גבוהה לרקמות היא עניין רב בטיפול בסרטן.

משלוח ננו-חלקיקים בתיווך אולטראסאונד הראה את יכולתו להקל על חדירת חלקיקים עמוק לתוך רקמת הגידול, בשל התופעה הנקראת cavitation microbubble^18,19. במחקר הנוכחי, אנו מייצרים מיקרו-יבלות IONPs המופגזות באמצעות הרכבה עצמית, סינרגטיזציה של תגובה מגנטית, אקוסטית ואופטית בפלטפורמה ננו-תרמית אחת. ה- NSM מכיל ליבת אוויר ומעטפת של חלקיקי תחמוצת ברזל, בקוטר של כ 5.4 מיקרומטר. NSMs יכול להיות מונחה מגנטית לאתר הגידול. אז שחרורו של יעונים מופעל על ידי אולטרסאונד, מלווה cavitation microbubble ומיקרו סטרים. התנע המתקבל מהמיקרו-סטרים מאפשר חדירה של יונים לרקמת הגידול. ניתן להשיג את ה- PTT וה- MHT על ידי הקרנת לייזר NIR או יישום AFM, או עם השילוב של שניהם.

Protocol

כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי הנחיות OG התרופות לטיפול בבעלי חיים ושימוש בחיות מעבדה. הפרוטוקולים פעלו בהתאם להנחיות ועדת האתיקה לחיות מעבדה של OG פרמצבטיקה.

1. סינתזה של מיקרו-חלוקים מופגזים ננו-חלקיקים (NSMs)

1. פזרו חלקיקים מגנטיים (Fe₃O₄, תחמוצת ברזל) במים דה-יונים כדי ליצור פתרון מלאי של 10 מ"ג/מ"ל.
2. מניחים את הצינור המכיל את פתרון IONPs במכונת ניקוי קולית במשך 20 דקות. קבל פתרון IONPs מפוזרים באופן אחיד לפני השימוש.
3. הוסף 150 μL של מים דהויונים, 150 μL של 10 mM נתרן דודסיל סולפט (SDS), ו 400 μL של פתרון מלאי של IONPs מהשלב 1.1. בצינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל.
4. תקן את ההומוגניזר עם פיגום באמבט קרח.
5. מניחים את צינור התערובת באמבט קרח ומניחים את הגשושית הומוגניזר בדיוק כדי להיות שקוע בתמיסת התערובת.
6. התאימו את מהירות ההומוגניזר ל-20,000 סל"ד והדליקו את ההומוגניזר למשך 3 דקות.
7. כבה את homogenizer ולהסיר את הצינור מאמבט הקרח.
8. מניחים את הצינור על מתלה הצינור לייצוב של 12 שעות בטמפרטורת החדר.
9. ספיחה NSMs הביא לקיר הצינור על ידי מגנט ולהסיר את supernatant. ואז לחדש עם 1 מ"ל של מים דה-יוניזציה טריים.
10. חזור על תהליך הכביסה במשך שלוש פעמים והשהה מחדש את NSMs ב-1 מ"ל של מים מזוקקים טריים.
11. העבר 10 μL של השעיית NSMs למגלשת זכוכית נקייה לאחר רועד מעט.
12. השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי בהגדלה של פי 20 כדי לדמיין את המורפולוגיה של NSMs. ודאו לצלם תמונות באזור אקראי.
13. מדוד את הקוטר של NSMs מהתמונות באמצעות גישה פתוחה Nano Measurer 1.2 תוכנה. תספור לפחות 200 מיקרו-נבלים.
    1. לחץ על "קובץ" ועל "פתח" כדי לבחור את קובץ התמונה לעיבוד. לאחר ייבוא התמונה, הקש על "הסרגל". צייר קו אדום באותו אורך כמו הסרגל.
    2. לאחר מכן לחץ על "הגדרות" | "סרגל" והזן את אורך הסרגל. צייר קווים באותם אורכים כמו הקטרים של המיקרו-יבלים הבודדים בתמונה. השלם את כל המדידות ולאחר מכן לחץ על "דווח" | " הצג דוח".

2. תגובה אקוסטית של NSMs

1. לדלל 200 μL של NSMs עם 800 מים deionized μL, ולאחר מכן להעביר לתוך צינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל כדי ליצור פתרון מלאי.
2. חבר את מחולל הפונקציה, המגבר, התאמת העכבות והמתמר הממוקד תוצרת בית. מקם את המתמר במרכז בתחתית הכיור הקובואידי המלאכותי וחבר את ההידרופון עם אוסצילוסקופ כדי לפקח על עוצמת אולטרסאונד היציאה (איור 1). מוסיפים מים דה-יון לכיור כדי לטבול את המתמר.
3. התאם את מחולל הפונקציות למצב הטאטוא, כוונן את טווח התדרים מ- 10 kHz ל- 900 kHz והגדר את המשרעת ל- 20 Vpp (שיא מתח). התאם את הכוח של אולטרסאונד ל 0.1% על ידי המגבר. משך הזמן של כל מחזור הוא 4 s עם מרווח זמן של 1 s.
4. הכן 1 mL NSMs דגימות פתרון מלאי בצינור ולתקן את הצינור עם פיגום על החלק העליון של מתמר ממוקד תוצרת בית. חבר את המגנט לתחתית הצינור ומשוך את ה- NSMs.
5. הפעל את הכוח של מחולל הפונקציה והמגבר. לכבות את מחולל הפונקציה לאחר יישום של 5 מחזורים (25 s) של אולטרסאונד. הסר את המגנט ולאסוף 1 מ"ל של הפתרון המכיל את IONPs שוחרר. מוסיפים 1 מ"ל של מים דה-יוניים לצינור הצנטריפוגה.
6. חזור על שלב 2.5. עד NSMs בצינור לקרוס לחלוטין.
7. לכמת את כל IONPs שוחרר על ידי ספקטרומטר פליטה אופטית פלזמה מצמיד אינדוקטיבית (ICP-OES) כפי שתואר קודם לכן¹³.

3. תגובה אופטית של NSMs

הערה: בעבודה זו, מערכת לייזר המכילה כוח לייזר 808 ננומטר ומצלמת הדמיה תרמית אינפרא אדום שתואר בעבר על ידי Xu et al. מנוצל²⁰.

1. הכנת מערכת לייזר
   1. הפעל את ספק הכוח של הלייזר ואפשר לו להתחמם במשך מספר דקות. תקן דיודה לייזר 808 ננומטר על דוכן תגמולים.
   2. כוון את קרן הלייזר לשלב הדגימה דרך סיב אופטי והתמקד בשלב הדגימה כדי להשיג נקודת אור בקוטר 6 מ"מ (בקוטר) על ידי עדשה קמרה.
   3. מדוד את תפוקת הכוח באמצעות מד כוח לייזר והתאם את העוצמה ל- 1 W /cm².
   4. תקן את מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא אדום על החצובה. הפעל את המצלמה ובדוק אם הוא עובד (למשל, נטר את אזור העניין הממוקד (ROI). כבה את ספק הכוח ואת מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא-אדום.
2. מדידה פוטותרמית בפתרון מימי
   1. הכן את דגימת 1 מ"ל בריכוז יונים שונים (1.05 מ"ג/ מ"ל, 1.35 מ"ג / מ"ל, 3.65 מ"ג / מ"ל, 5 מ"ג / מ"ל) בצינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל.
   2. מניחים את צינור העניין באזור הממוקד של קרן הלייזר ומתעדים את הטמפרטורה הבסיסית של המדגם.
   3. הפעל את כוח הלייזר ואת מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא אדום והקרין את הדגימה במשך 10 דקות ברציפות. במקביל, להקליט את הטמפרטורה בזמן אמת.
   4. כבה את כוח הלייזר ואת מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא אדום לאחר 10 דקות של הקרנה. המתן עד שהטמפרטורה של האזור תחזור לקו הבסיס.
   5. חזור על 3.2.2 עד 3.2.4 למדידה של דגימות אחרות.
      הערה: השתמש במים דה-יון ב 20 °C (70 °F) כפקד עבור המדידה photothermal.
3. מדידה פוטותרמית בתאים בתרבית
   הערה: תאי סרטן השד מורין (4T1) נבחרו כמודל לחקור את אפקט העיכוב על ידי טיפול פוטותרמי.
   1. להאכיל את התאים עם רוזוול פארק ממוריאל מכון-1640 (RPMI-1640) בינוני בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו 1% פניצילין. הגדר את סביבת הפולחן כ-37 °C (5°F) ו-5% CO₂.
   2. תרבית 4T1 תאים ב T25 צלוחיות ומעבר התאים ביחס 1:2 כאשר 90% מפגש הוא הגיע.
      הערה: ניתן להתאים את יחס תת-תרבות בהתאם לתנאי התא הספציפיים במעבדות שונות.
   3. הסר והשלך את מדיום התרבות. יש לשטוף את שכבת התא בתמיסת 1x PBS כדי להסיר את הסרום השיורי המכיל מעכב טריפסין.
   4. הוסף 2 מ"ל של פתרון טריפסין-EDTA (0.25%) לבקבוקונית לניתוק. לאחר מכן להוסיף 3 מ"ל של 1640 תאים בינוניים ושאפתנים על ידי צנרת בעדינות.
   5. לאסוף 5 מ"ל של השעיית התא צנטריפוגה ב 500 x g במשך 3 דקות.
   6. הסר את supernatant ולהוסיף 1 מ"ל של בינוני 1640 טרי כדי ליצור השעיית תא.
   7. הוסף 100 μL של השעיית התא לצלחת confocal המכיל 1 מ"ל של מדיום התרבות. ודא כי הריכוז של השעיית התא הוא 9 x 10⁵/mL, ואת ריכוז התא הסופי בצלחת קונפוקלי תרבות התא הוא 8.1 x 10⁴/mL.
   8. מניחים את צלחת הקונפוקלי של תרבית התא המחוסנת באינקובטור למשך 24 שעות.
   9. לדלל ריכוז שונה (1.05 מ"ג/מ"ל, 1.35 מ"ג/מ"ל, 3.65 מ"ג/מ"ל, 5 מ"ג/מ"ל) של דגימת IONPs כדי להפוך פתרון 1 מ"ל עם 1640 בינוני ללא סרום.
   10. שואפים את המדיום התרבותי מהצלחת הקונפוצלית ומוסיפים את הפתרון לדוגמה המוכן.
   11. תדליק את כוח הלייזר. למקד את קרן הלייזר במרכז המנה ולהתאים את כוח היציאה ל 1 W / ס"מ². הפעל את מצלמת ההדמיה התרמית אינפרא אדום, להקרין את התאים בצלחת הקונפוקלית במשך 10 דקות ברציפות. תעד את הטמפרטורה בזמן אמת עבור האזור הממוקד.
   12. כבה את מצלמת ההדמיה התרמית של הלייזר והאינפרא-אדום. מעבירים את המנה המוקרנת לאינקובטור לעוד 24 שעות.
   13. מוציאים ומשליכים את המדיום התרבותי, מוסיפים 1 מ"ל של מדיום התרבות הטרייה בצלחת הקונפוצלית. מוסיפים 5 μL של פתרון Calcein-AM (1 מ"ג / מ"ל) לתוך המנה.
   14. לדגור על צלחת הקונפוקלי ב 37 °C (5°F) ו 5% CO₂ במשך 15 דקות. יש לשטוף את שכבת התא עם פתרון PBS 1x פעמיים.
   15. התבונן וצלם את התאים על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי קונפוקלי עם אורך גל עירור של 488 ננומטר ואורך גל פליטה של 500-540 ננומטר.
   16. בחרו 5 אזורים בתמונות הקונפוקליות באופן אקראי וספרו את מספר תאי 4T1 החיים בכל אזור באופן ידני. לכמת את הכדאיות של תאי 4T1 על-ידי השוואת מספר התאים החיים בכל קבוצות הניסוי עם קבוצת הביקורת.
       הערה: השתמש במדיום 1640 ללא סרום ב-20 °C (70 °F) כפקד על המידה הפוטותרמית. השתמש במדגם ללא הקרנת לייזר כקבוצת בקרה של כדאיות התא.
4. מדידה פוטותרמית בוויו
   1. הכן 3 עכברים זכר ICR בן 8 שבועות עם משקל ממוצע של 25 ± 2 גרם.
   2. מוסיפים 2 גרם אבקת ג'לטין ל-20 מ"ל של מים מתובלים. מחממים את התמיסה ל 40 - 50 מעלות צלזיוס, להמיס את ג'ל ג'לטין לחלוטין כדי ליצור פתרון שקוף וברור.
   3. הוסף 100 מ"ג יון לפתרון מ 3.4.2.
   4. מחממים את הג'ל ל 40 – 50 °C (50 °F), מיד להזריק 500 μL של פתרון ג'לטין לתוך כרית השד הימני של העכבר.
   5. הפעל את כוח הלייזר ומקד את קרן הלייזר באזור העניין (כרית השד הימנית של העכברים). כוונן את עוצמת היציאה ל- 1 ואט/ס"מ^2. הפעל את מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא אדום, להקרין את אזור הריבית במשך 10 דקות ברציפות. תעד את הטמפרטורה של אזור העניין בזמן אמת.
   6. כבה את מצלמת ההדמיה התרמית של הלייזר והאינפרא-אדום.
   7. המת חסד עכברים על ידי חנק CO₂ ונקע חוליות צוואר הרחם או כל שיטה שאושרה על ידי ועדת המחקר בבעלי חיים של המכון.

4. מדידת היפרתרמיה מגנטית

הערה: כאן, מערכת היפרתרמיה מגנטית שתוארה בעבר על ידי וו ואח 'מנוצלת ^(21).

1. הכן מערכת היפרתרמיה מגנטית כוללת גנרטור שדה מגנטי לסירוגין (AFM) ומצלמת הדמיה תרמית אינפרא אדום.
   1. הפעל את הצ'ילר במשך 10 דקות ולאחר מכן כוח על מכונת חימום תדר רדיו מתון (כלומר, גנרטור AFM).
   2. הגדר את הפרמטרים של המכונה כדלקמן: תדירות (ו) = 415 kHz, עוצמת שדה מגנטי = 1.8 kA / m.
2. מדידת היפרתרמיה מגנטית בתמיסה מימית
   1. הכן 1 מ"ל של המדגם בריכוז IONPs שונים (1.05 מ"ג / מ"ל, 1.35 מ"ג / מ"ל, 3.65 מ"ג / מ"ל, 5 מ"ג / מ"ל) בצינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל.
   2. מניחים את הצינור במרכז סליל נחושת אינדוקציה מגנטי מקורר מים.
   3. הפעל את השדה המגנטי לסירוגין (AFM) ואת מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא-אדום. לגרום לדגימה במשך 10 דקות ברציפות ולרשום את הטמפרטורה בזמן אמת.
      הערה: המצלמה ממוקמת בחלק העליון של המדגם, ומספקת תצוגה חתך של המדגם.
   4. כבה את AFM ואת מצלמת הדמיה תרמית אינפרא אדום. המתן לטמפרטורת סליל הנחושת לחזור לקו הבסיס במשך 10 דקות.
      הערה: היזהרו בטמפרטורה גבוהה, הימנעו ממגע ישיר עם הידיים והמתינו לקירור לפני הסרת הדגימות.
   5. חזור על 4.2.2 עד 4.2.4 למדידה של הדגימות האחרות.
   6. כבה את מכונת חימום תדר הרדיו המתונה (AFM) ואת הצ'ילר.
      הערה: השתמש במים המהוגזמים במהירות של 20 °C (20 °F) כפקד על מדידת היפרתרמיה מגנטית.
3. מדידת היפרתרמיה מגנטית ב-vivo
   1. הכן 3 עכברים זכר ICR בן 8 שבועות עם משקל ממוצע של 25 ± 2 גרם.
   2. הכן 20 מ"ל של 10 % ג'ל ג'לטין המכיל 5 מ"ג / מ"ל פתרון IONPs.
   3. מחממים את ג'ל הג'לטין ל 40 - 50 °C (50 °F), מיד להזריק 500 μL של פתרון ג'לטין לתוך כרית השד הנכון של החיה.
      הערה: ניסויי היפרתרמיה הנגרמת מגנטית נערכו עם מכונת החימום באמצעות אותם פרמטרים כמו מבחן במבחנה.
   4. הפעל את השדה המגנטי לסירוגין (AFM) ואת מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא-אדום. מניחים את כרית השד הימנית של העכברים במרכז סליל נחושת אינדוקציה מגנטי מקורר מים.
   5. הפעל את מצלמת ההדמיה התרמית האינפרא אדום, דמיין את אזור העניין (כרית השד הימנית של העכברים) במשך 10 דקות ברציפות ותיעד את הטמפרטורה של אזור העניין בזמן אמת.
   6. כבה את מתג ההפעלה של המכונה ומצלמת הדמיה תרמית אינפרא אדום לאחר 10 דקות של אינדוקציה. המתן לטמפרטורת סליל הנחושת כדי לחזור לקו הבסיס במשך 10 דקות.
   7. חזור על 4.3.4 עד 4.3.6 למדידה של דגימות אחרות.
   8. כבה את מכונת חימום תדר הרדיו המתונה (AFM) ואת הצ'ילר.
      הערה: היזהרו בטמפרטורה גבוהה, הימנעו ממגע ישיר עם הידיים והמתינו לקירור לפני הסרת הדגימות.
   9. המת חסד עכברים על ידי חנק CO₂ ונקע חוליות צוואר הרחם או כל שיטה שאושרה על ידי ועדת המחקר בבעלי חיים של המכון.

תוצאות

המיקרו-פגזים הננו-חלקיקיים (NSMs) בעלי ההפגזה המשולשת המשמשים במחקר זה הוכנו על ידי תסיסה של התערובת של פעילי השטח וה-IONPs. ה- IONPs (50 ננומטר) התאספו בעצמם בממשק של ליבת נוזל וגז, כדי ליצור מעטפת מגנטית צפופה. המורפולוגיה של NSMs מוצגת באיור 1A. NSMs שנוצר הציג צורה כדורית ובקוטר ממוצע של 5.41 ± 1....

Discussion

כאן הצגנו פרוטוקול של ייצור מיקרו-חלקיקים המופגזים בתחמוצת ברזל (NSMs) באמצעות הרכבה עצמית, סינרגיה של תגובה מגנטית, אקוסטית ואופטית בפלטפורמה ננו-תרמית אחת. היונים נארזו בצפיפות סביב ליבת האוויר כדי ליצור מעטפת מגנטית, אשר ניתן לשלוט על ידי השדה המגנטי החיצוני עבור מיקוד. לאחר נמסר, שחרורו ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
808 nm laser power	Changchun New Industries Optoelectronics Tech	MDL-F-808-5W-18017023
Calcein-AM	Thermo Fisher SCIENTIFIC	C3099
Fetal bovine serum	Invitrogen	16000-044
Fluorescence Microscope	Olympus	IX71
Function generator	Keysight	33500B series	20 MHz, 2 channels with arbitrary waveform generation capability
Gelatin gel	Sigma	9000-70-8
Heating machine	Shuangping	SPG-06- II
Homemade focused transducer			Frequency=855, R-X=36.2W+5.8W, |Z|-θ=37W+8°
Homogenizer	SCILOGEX	D-160	8000-30000 rpm
Hydrophone	T&C	NH1000
ICR male mice	OG Pharmaceutical. Co. Ltd		8-week-old
Inductively coupled plasma optical emission spectrometry	PerkinElmer
Infrared thermal imaging camera.	FLIR	E50
Iron(II,III) oxide	Alfa Aesar	1317-61-9	50-100nm APS Powder
Laser power meter	Changchun New Industries Optoelectronics Tech
Oscilloscope	Keysight	DSOX3054T	Bandwidth 500 MHz, Sampling Rate 5 GS/S, 4 channels
RF Power Amplifier	T&C	AG1020	The signal source can also be connected to an external signal source. The gain can be adjusted from 0 to 100%. It has multiple functions such as frequency sweep, pulse, and triangle.
Roswell Park Memorial Institute-1640	KeyGEN BioTECH	KGM31800
Sodium dodecyl sulfate	Sigma	151-21-3