JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מטרת פרוטוקול זה היא לזהות מטבוליטים פנוליים בפלזמה באמצעות שיטת ספקטרומטריה כרומטוגרפיה-מסה ממוקדת למחצה.

Abstract

קבוצה של 23 קשישים קיבלה ארוחות פונקציונליות (משקה ומאפין) שפותחו במיוחד למניעת סרקופניה (אובדן מסת שריר הקשורה לגיל). דגימות פלזמה נלקחו בתחילת ההתערבות ולאחר 30 ימים של צריכת הארוחות הפונקציונליות. כרומטוגרפיה אולטרה-גבוהה ממוקדת למחצה בשילוב עם ניתוח מסה דו-מושבית (UPLC-MS/MS) בוצעה כדי לזהות תרכובות פנוליות והמטבוליטים שלהן. חלבוני פלזמה היו מזורזים עם אתנול והדגימות היו מרוכזות ו resuspended בשלב הנייד (1:1 acetonitrile: מים) לפני הזרקה למכשיר UPLC-MS / MS. ההפרדה בוצעה עם עמודת שלב הפוך C18 , ותרכובות זוהו באמצעות המסה הניסיונית שלהם, הפצה איזוטופית, ודפוס שבר. תרכובות עניין הושוו לאלה של מאגרי נתונים וספרייה ממוקדת למחצה פנימית. תוצאות ראשוניות הראו כי המטבוליטים העיקריים שזוהו לאחר ההתערבות היו חומצה פנילצטית, גליציטין, 3-הידרוקסיפנילוולרית, וגומיסין M2.

Introduction

סרקופיניה היא הפרעת שלד מתקדמת הקשורה לאובדן מואץ של שרירים באוכלוסייה המבוגרת. מצב זה מגביר את הסיכון לנפילות ומוביל לפעילות מוגבלת של חיי היומיום. סרקופיניה קיימת בכ-5%-10% מהאנשים מעל גיל 65 וכ-50% מבני 80 ומעלה1. לא אושרו תרופות ספציפיות לטיפול בסרקופיניה, ולכן מניעה עם פעילות גופנית ותזונה מאוזנת היטב חשובה 1,2. התערבויות תזונתיות עם מזונות שפותחו במיוחד מועשרים בחלבון חלב וחומצות אמינו חיוניות הראו תוצאות חיוביות במניעת סרקופניה2. במחקרים אחרים, המחברים כללו ויטמינים ונוגדי חמצון, כמו ויטמין E ואיזופלבונים, בתזונה, הגדלת היתרונות לרווח שרירים על המותניים והירכיים3.

ברוסימום עליקסטרום סובה (בספרדית: Brosimum alicastrum Sw. ) הוא עץ הגדל באזורים הטרופיים של מקסיקו. זה כבר נצרך על ידי תרבויות המאיה בשל הערך התזונתי הגבוה שלה4. זהו מקור טוב של חלבון, סיבים, מינרלים, ונוגדי חמצון פנוליים, כגון חומצה כלורוגנית5. מאז זה יכול להיות טחון לאבקה ומשמש במוצרי אפייה או נצרך משקאות, מחקרים אחרונים העריכו את השילוב של קמח זרעי רמון (RSF) לתוך מזונות שונים כדי לשפר את הערך התזונתי שלהם. משקה בטעם קפוצ'ינו בתוספת RSF פותח, שהיה עשיר בסיבים תזונתיים והיה בו יותר מ-6 גרם חלבון למנה, והיה מקובל מאוד על הצרכנים; לכן, זה נחשב חלופה פוטנציאלית לעמידה בדרישות תזונתיות מיוחדות6. במחקר מעקב, RSF שימש גם כדי לנסח מאפין ומשקה חדש עשיר בחלבון, סיבים תזונתיים, micronutrients, ונוגדי חמצון פנוליים. המאפין והמשקה שימשו בהתערבות תזונתית לקשישים, שצרכו את שני המוצרים פעמיים ביום במשך 30 יום. לאחר תקופה זו, המצב התזונתי והסרקופי של המשתתפים השתפר, ואת התוכן הפנולי הכולל של פלזמה גדל7. עם זאת, הקביעה של סך התרכובות פנוליות בפלזמה בוצעה על ידי שיטה ספקטרופוטומטרית, ולכן זיהוי של תרכובות פנוליות בפועל שנקלטו לא היה אפשרי; יתר על כן, שיטה זו אינה ספציפית לחלוטין עבור תרכובות פנוליות, ולכן כמה הערכת יתר עלולה להתרחש8.

זיהוי וכימות של תרכובות פנוליות הנספגות לאחר צריכת מזונות עשירים בנוגדי חמצון אלה היא משימה קשה אך יש צורך להדגים את הפעילות הביולוגית של פיטוכימיקלים אלה. הזמינות הביולוגית של רוב התרכובות הפנוליות נמוכה; פחות מ -5% מהם ניתן למצוא ללא שינוי מבני בפלזמה. תרכובות פנוליות עוברות מספר ביוטרנספורמציות, כגון מתילציה, סולפונציה או גלוקורונידציה, המתבצעות על ידי enterocytes ו hepatocytes9. תרכובות פנוליות הן גם biotransformed על ידי המיקרוביוטה לתוך קטבוליטים חיידקיים שעשויים להפעיל את ההשפעות המועילות שלהם בגוף לאחר נספג לתוך פלזמה10. לדוגמה, חומצה פנילאצטית היא תוצר של טרנספורמציה חיידקית של פלבנואידים ופרואנתוציאנידינים אוליגומריים, אשר יכול לעכב עד 40% של חיידקים (Escherichia coli) הידבקות בדרכי השתן לאחר צריכת חמוציות11.

המגוון המבני של תרכובות פנוליות טבעיות, הוסיף למגוון של המטבוליטים שלהם ואת הזמינות הביולוגית הנמוכה שלהם, עושה את הזיהוי שלהם בפלזמה אפילו יותר מאתגר. פרופיל מטבולומי, באמצעות פלטפורמות ניתוח ספקטרוסקופיות כמו תהודה מגנטית גרעינית (NMR) וספקטרוסקופיית מסה טנדם (MS/ MS), היא כנראה הגישה הטובה ביותר להשגת מטרה זו; למרבה הצער, הציוד אינו נגיש בקלות, ופיתוח פרוטוקולי ניתוח עדיין מוגבל12. מספר מחקרים דיווחו על טרשת נפוצה /טרשת נפוצה בשילוב עם מערכת הפרדה (כגון כרומטוגרפיה נוזלית) כאסטרטגיה להפחתת המורכבות של ספקטרום המסה במחקרים מטבולומיים. ההקדמה האחרונה של שיטות הפרדה של כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד (UPLC) צמצמה את זמן הניתוח והגדילה את הרזולוציה והרגישות בהשוואה לפרוטוקולים נוזליים קונבנציונליים בעלי ביצועים גבוהים, כך שמערכות UPLC-MS/MS התקבלו במהירות באופן נרחב על ידי קהילת חילוף החומרים האנליטית13. בדרך זו, כמה מחקרים חקרו מטבוליטים פנוליים וזיהו נגזרות glucuronidated מחומצה caffeic, קוורצטין, וחומצה פרולית, כמו גם נגזרות sulfonated מחומצה סירינגית וניל בפלזמה של אנשים לאחר צריכת חמוציות14. פרוטוקולים קודמים התכוונו למצוא תרכובות פנוליות ומטבוליטים פנוליים ביופלואידים כגון פלזמה. פרוטוקולים אלה התבססו על זיהוי וכימות על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) יחד עם גלאי UV-vis15. עם זאת, פרוטוקולים כאלה דורשים שימוש בסטנדרטים אותנטיים כדי להעריך זיהוי מוחלט וכימות מדויק. מגוון רחב של מחקרים זיהו את המטבוליטים הנפוצים ביותר ביופלוידים (צורות זועפות, glucuronidated ומתילציה) על ידי UPLC-MS ו UPLC-MS / MS; עם זאת, חלק גדול של מטבוליטים חיידקיים לא דווח בשל היעדר מסדי נתונים המכילים את המידע המלא שלהם16. זיהוי מטבוליט מסובך על ידי העלות והזמינות המסחרית של תקני מטבוליט. לכן, האסטרטגיה הטובה ביותר עשויה להיות לא ממוקדת או חצי ממוקדת ניתוח מטבוליטים MS / MS, אשר מסתמך על השימוש במידע תכונה מולקולרית (m / z, מסה מדויקת מונואיסטופית, הפצה איזוטופית, ודפוס פיצול) כדי לקבוע את הזהות הכימית ומשווה אותו עם מסדי נתונים מקוונים זמינים באופן חופשי המכילים מטבוליטים פוליפנול מזוהים ביופלוידים לאחר צריכת פוליפוליפנול-richts12 . מסדי הנתונים החשובים ביותר המשמשים במחקרי UPLC-MS/MS לזיהוי תרכובות פנוליות והמטבוליטים שלהם הם מסד הנתונים של מטבולום אנושי (HMDB), ספריית ליפידבלסט, ספריית METLIN, ומאגרי מידע משלימים אחרים, כגון PubChem, ChemSpider, ו- Phenol Explorer17.

במחקר הנוכחי פותחה שיטת UPLC-MS/MS ממוקדת למחצה לניתוח דגימות הפלזמה של קבוצת הקשישים המעורבים במחקר צריכת המאפינס והמשקאות המכיל RSF7. נתונים ממאגרי מידע מקוונים שונים בחינם של מטבוליטים פלזמה נאספו ושולבו במסד נתונים מיוחד. מסד נתונים זה ניתן לגשת באופן אוטומטי על ידי תוכנת הציוד כדי לזהות את המטבוליטים פוליפנולי בחמש דגימות פלזמה לפני ואחרי ההתערבות התזונתית 30 יום. זה נעשה כדי לזהות את התרכובות הפנוליות העיקריות, או המטבוליטים שלהם, כי הם נספגים מן מזונות פונקציונליים מנוסחים במיוחד שנועדו למניעת סרקופיניה.

Protocol

דגימות הפלזמה המשמשות בפרוטוקול זה נאספו במחקר קודם בעקבות כל ההנחיות האתיות ואושרו על ידי ועדת האתיקה והביואתיקה המוסדית (CIEB-2018-1-37) מאוניברסיטת אוטונומה דה סיודאד חוארז. הפרוטוקול המלא לחילוץ וזיהוי של תרכובות פנוליות ומטבוליטים בפלזמה על ידי UPLC-MS/MS מיוצג באיור 1.

figure-protocol-402
איור 1: ייצוג סכמטי של מיצוי וזיהוי של תרכובות פנוליות ומטבוליטים בפלזמה בשיטת UPLC-MS/MS הממוקדת למחצה. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

1. הכנה לדוגמה

  1. לאחסן את דגימות הפלזמה ב -80 °C (80 °F) עד לניתוח.
  2. להפשיר את דגימות הפלזמה בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות.
    הערה: ניתן להניח את הדגימות באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי להאיץ את התהליך (5 דקות).
  3. מניחים 200 μL של דגימת פלזמה במיקרוטוב 2 מ"ל ומערבבים עם 1,000 μL של אתנול טהור. מערבולת דגימת הפלזמה עבור 30 s.
    הערה: יש להשתמש תמיד בכפפות בעת עבודה עם דגימות פלזמה.
  4. צנטריפוגה המדגם ב 6,580 x g במשך 5 דקות. לאחר צנטריפוגה, לאסוף את supernatant עם micropipette או פיפטה פסטר ומניחים אותו microtube חדש. לאחסן את supernatant ב 4 °C (65 °F).
  5. מערבבים את הכדור מהשלב הקודם עם 1,000 μL של 100% אתנול, מערבולת עבור 30 s, ולאחר מכן צנטריפוגה ב 6,580 x g במשך 5 דקות.
    הערה: הכדור הוא ארוז מאוד צריך להיות resuspended היטב כדי להבטיח מגע בין המדגם ואתנול טהור. מומלץ להשתמש במיקרופיפט כדי לשטוף את הכדור עם אתנול.
  6. לאחר צנטריפוגה, לאסוף את supernatant ולערבב עם supernatant שהושג בעבר משלב 1.4. במיקרו-טיוב של 2 מ"ל.
  7. הסר אתנול מן המדגם באמצעות חנקן טהור (99.997%) ב 135 פסאיי. שמור את המחט 1 ס"מ מן החלק העליון של microtube כדי למנוע אובדן מדגם לשטוף עד המדגם יבש. אין צורך בחום כדי לאדות את האתנול.
    הערה: זרימת החנקן חייבת להיות נמוכה כדי למנוע אובדן מדגם. לאחר האתנול מיובש, לשמור על זרימת החנקן לפחות 5 דקות כדי להבטיח יובש מדגם. ניתן להשהות את הפרוטוקול בשלב זה; יש לאחסן דגימות בטמפרטורה של -20 °C (60 °F). הימנע מאחסון הדגימות במשך יותר מ 12 שעות.
  8. Resuspend את הדגימות היבשות ב 100 μL של תערובת של אצטוניטריל: מים בשיעור של 50:50 (v:v).
  9. לסנן את המדגם דרך קרום מזרק ניילון 0.45 מיקרו מיקרו מיקרו 0.45 מיקרו.
    הערה: ניתן לאחסן את הדגימות בבקבוקון בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס לפני הניתוח. אחסן את הדגימות עבור לא יותר מ 8 שעות. מומלץ להזריק את הדגימות למערכת UPLC מיד לאחר הסינון.

2. ניתוח UPLC-MS/MS

  1. הזרקו 3 μL של דגימה על UPLC המצויד בעמודה דו-פאזית הפוכה C18 (50 מ"מ x 2.1 מ"מ; 1.8 מיקרומטר). הגדר את טמפרטורת הדגימה האוטומטית ב 20 °C (50 °F) ואת התרמוסטט עמודה ב 25 °C (60 °F). הזרקו כל דגימה בשלושה עותקים.
  2. השתמש 0.1% (v:v) חומצה פורמית במים כמו ממס A, ו 100% אצטוניטריל כמו ממס B. הגדר את קצב הזרימה ב 0.4 mL / min ותוכנית הדרגתית כדלקמן: 0-1 דקות 10% B, 1-4 דקות 30% B, 4-6 דקות 38% B, 6-8 דקות 60% B, 8-8.5 דקות 60% B, 8.5-9 דקות 10% B (טבלה 1).
  3. הגדר את ספקטרומטר המסה ליינון מצב שלילי. השתמש חנקן כגז ייבוש ב 340 °C (50 °F) וקצב זרימה של 13 L/ min. הגדר את לחץ nebulizer ב 60 פסאיי. הגדר את מתח הנימים ב- 4,000 V, את מתח הפיצול על 175 V ואת מתח הרחפן ב- 65 V. השתמש באנרגיית התנגשות ב- 20 V (טבלה 2).
  4. סרוק את המסות בין יחס טעינה של 100-1100 מסה לטעינה (m/z) ועבור MS/MS, סרוק מסות בין 50-1000 מ'/ז ' (טבלה 2). הגדר רכישת נתונים למצב MS/MS אוטומטי. השתמש במסת הייחוס הבאה: 119.036 ו- 966.0007.
זמן (דקה)ממס A (0.1 % חומצה פורמית במי HPLC)ממס B (100 % אצטוניטריל)
0 ל-19010
1 עד 47030
4 עד 66238
6 עד 84060
8 עד 8.54060
8.5 עד 99010

טבלה 1: שיפוע פאזה נייד המשמש להפרדה של תרכובות פנוליות על ידי UPLC.

מצב יינוןשלילי
גז ייבושחנקן בטמפרטורה של 340 °C (65 °F), קצב זרימה 13 L/min
לחץ נבולייזר60 פסאיי
מתח נימי175 V
מסות סריקת טרשת נפוצה100-1100 מ'/ז'
מסות סריקה של MS/MS50-1000 מטר/z

טבלה 2: פרמטרי יינון עבור ניתוח MS/MS.

3. בניית מסד נתונים

  1. חפש תרכובות פנוליות, מטבוליטים פנוליים, או תרכובות אחרות של עניין בספרות המדעית.
  2. פתח את תוכנת ניהול מסדי הנתונים הכלולה במערכת UPLC. בחר | קובץ ספריית מתחם מסד נתונים אישי חדש (PCDL) | צור PCDL חדש. בחר את סוג ה- PCDL: מטבולומיקה של LC/ MS. הגדר שם עבור ה- PCDL. לאחר מכן בחר צור.
  3. בסרגל הכלים, בחר PCDL ולאחר מכן באפשרות אפשר עריכה . לאחר מכן לחץ על לחצן חפש תרכובות .
    הערה: מכיוון שמדובר ב- PCDL חדש, תוצאות הטבלה יהיו ריקות. פעולה זו תשתנה לאחר הוספת תרכובות חדשות ל- PCDL.
    1. הוסף תרכובות לספריית מתחם מסד הנתונים האישי המיוחד על-ידי העתקתן מהספרייה הכללית של המכשיר. פתח את מסד הנתונים הקיים של המכשיר הכלול בתוכנת ניהול מסדי הנתונים. לחץ על הלחצן חפש תרכובות. באפשרות חיפוש יחיד , הזן את קריטריוני החיפוש המורכבים כדי למצוא את דריבית הריבית.
      הערה: ניתן למצוא תרכובות לפי שם, נוסחה מולקולרית, מסה מדויקת וזמן שמירה.
    2. בטבלת התוצאות המורכבות, בחר את דריבית הריבית. כדי לבחור יותר ממתחם אחד, לחץ על המתחם הראשון, החזק את מקש CTRL לחוץ ולאחר מכן לחץ על כל דריבית עניין. לאחר מכן, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על כל התרכובות המסומנות ובחר צרף ל- PCDL.
    3. בחלון החדש, חפש ובחר את קובץ מסד הנתונים האישי המיוחד. סמן את התיבות כלול ספקטרום עבור תרכובות אם קיים ולכלול מידע ניידות יון עבור תרכובות אם קיים. לחץ על לחצן צרף . בתיבת הדו-שיח החדשה, בחר כן כדי לבדוק את התרכובות החדשות שנוספו. בחר לא כדי להמשיך לחפש תרכובות עניין נוספות.
  4. אם תרכובות העניין אינן זמינות בספריה הכללית של המכשיר, הוסף תרכובות חדשות באופן ידני.
    1. פתח את מסד הנתונים האישי המיוחד. לאחר הפתיחה, בצע את שלב 3.3. בחרו באפשרות 'עריכת תרכובות '. לחץ על לחצן הוסף חדש .
    2. בחלק העליון של החלון, השלם את המידע עבור המתחם החדש. מלא את הנוסחה, השם, שם IUPAC, מספר CAS, מזהה Chemspider ומזהים אחרים.
    3. השתמש במידע הזמין בספריות המקוונות החינמיות (Chemspider, PubChem ו- Phenol Explorer) כדי למלא את המידע עבור דריבית העניין החדשה. לאחר שתסיים, לחץ על הלחצן שמור כחדש כדי לשמור את המידע המורכב החדש במסד הנתונים האישי המיוחד.
      הערה: בעת הוספת מידע מספריות בחינם, הקפד לכלול את המידע המורכב ללא נוכחות של כלוריד או יוני יודיד. זה עשוי לשנות את המסה המדויקת ואת הנוסחה המולקולרית של מתחם העניין.
  5. חזור על התהליך עם כל תרכובות העניין כדי להשלים את מסד הנתונים האישי המיוחד.

4. ניתוח נתונים

  1. השתמש בתוכנת המנהל האיכותי של המכשיר כדי לזהות את התרכובות הפנוליות והמטבוליטים הפנוליים הקיימים בדגימות.
  2. פתח את הקובץ לדוגמה. בחלונית Chromatogram, בחר הגדר כרומטוגרמה וחלץ את כרומטוגרמה היון הכוללת (TIC), את כרומטוגרמה היון המופקת של MS (EIC) ואת ה- EIC של MS/ MS. בחר באפשרות שילוב הכרומטוגרמה.
  3. בחלונית 'חיפוש תרכובות ', בחרו 'חפש לפי אפשרויות נוסחה'. בחלון החדש, בחר מקור נוסחה ולאחר מכן באפשרות מסד נתונים/ספריה . מצא את מסד הנתונים האישי שנוצר בעבר ולחץ על פתח.
  4. בחר באפשרות התאמת נוסחאות והגדר עמידות להתאמת מסה של 5 חלקים למיליון (ppm).
    הערה: ניתן להגדיר עמידות התאמה שונה של מסות במהירות של 10 עמודים לדקה; הבדל זה תלוי בספקטרומטר המסה המשמש.
  5. בחר באפשרות יונים שליליים ובחר בתיבת הדו-שיח -H בלבד. באפשרות 'תוצאות ', סמנו את תיבות הדו-שיח 'חלץ EIC', 'חלץ ספקטרום נקי', 'חלץ ספקטרום גולמי' וכלול תיבות הדו-שיח 'מבנה '.
  6. בחרו באפשרות 'מסנני תוצאות '. מארק להזהיר אם הציון הוא ולהגדיר את משחק הניקוד ב 80.00%. מארק אל תתאים אם התוצאה היא וקבע את הציון על 75.00%.
    הערה: ניתן לשנות את ציוני ההתאמה/לא תואמים לערכים נמוכים יותר במידת הצורך. פעולה זו תפחית את דיוק הזיהוי.
  7. לחץ על מצא תרכובות על ידי נוסחה כדי לזהות תרכובות של עניין במדגם.

תוצאות

תהליך שלב אחר שלב לזיהוי מטבוליטים פנוליים באמצעות ניתוח UPLC-MS/MS הממוקד למחצה, במצב שלילי, של דגימות פלזמה מתואר באיור 2. ראשית, הכרומטוגרמה הכוללת של היון (TIC) מתמצית פנוליקים פלזמה (המתקבלת לאחר משקעי חלבון של דגימת הפלזמה הכוללת) הושגה באמצעות התוכנה האיכותית ש?...

Discussion

זיהוי וכימות של פיטוכימיקלים ביואקטיביים הנספגים לאחר צריכת תוסף מזון או מזון חיוניים להדגמה והבנה של היתרונות הבריאותיים של תרכובות אלה ואת המזונות המכילים אותם. בעבודה הנוכחית פותחה שיטת UPLC-MS/MS, שמטרתה רק זיהוי של התרכובות הפנוליות העיקריות והמטבוליטים שלהן שהגדילו את הריכוז בפלזמה ל?...

Disclosures

כל המחברים מצהירים שאין ניגוד אינטרסים.

Acknowledgements

המחברים אסירי תודה על התמיכה הכספית של CONACYT, מקסיקו (CB- 2016-01-286449), ו- UACJ-PIVA (פרויקטים 313-17-16 ו 335-18-13). OAMB רוצה להודות CONACYT למלגת הדוקטורט שלו. תמיכה טכנית ממשרד ייצור המולטימדיה של UACJ מוכרת בהכרת תודה.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrileTediaAl1129-001LC Mass spectrometry
AutosamplerAgilent TechnologiesG4226A1290 Infinity series
C18 reverse phase columnAgilent Technologies959757-902Zorbax Eclipse plus C18 2.1x50 mm, 1.8 μm; Rapid resolution HD
CentrifugeEppendorf5452000018Mini Spin; Rotor F-45-12-11
Column compartment with thermostatAgilent TechnologiesG1316C1290 Infinity series
Diode Array Detector (UV-Vis)Agilent TechnologiesG4212B1260 Infinity series
Electrospray ionnization sourceAgilent TechnologiesG3251BDual sprayer ESI source
Formic acidJ.T. Baker0128-02Baker reagent, ACS
Mass Hunter Data AcquisitionAgilent TechnologiesG3338AA
Mass Hunter Personal Compound Datbase and Library ManagerAgilent TechnologiesG3338AA
Mass Hunter Qualitative AnalysisAgilent TechnologiesG3338AA
Microcentrifuge tubeBrandBR780546Microcentrifuge tube, 2 mL with lid
Pure ethanolSigma-AldrichE7023-1L200 proof, for molecular biology
Q-TOF LC/MSAgilent TechnologiesG6530B6530 Accurate Mass
Quaternary pumpAgilent TechnologiesG4204A1290 Infinity series
Syringe filterThermo Scientific44514-NN17 mm, 0.45 μm, nylon membrane
ThermostatAgilent TechnologiesG1330B1290 Infinity series
VialAgilent Technologies8010-0199Amber, PFTE red silicone 2 mL with screw top and blue caps
Vial insertAgilent Technologies5183-2089Vial insert 200 μL for 2mL standard opening, conical
WaterTediaWL2212-001LC Mass spectrometry

References

  1. Morley, J. E., Anker, S. D., von Haehling, S. Prevalence, incidence, and clinical impact of sarcopenia: facts, numbers, and epidemiology-update 2014. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. 5 (4), 253-259 (2014).
  2. Cruz-Jentoft, A. J., Sayer, A. A. Sarcopenia. The Lancet. 393 (10191), 2636-2646 (2019).
  3. Beaudart, C., et al. Nutrition and physical activity in the prevention and treatment of sarcopenia: systematic review. Osteoporosis International. 28 (6), 1817-1833 (2017).
  4. Ozer, H. K. Phenolic compositions and antioxidant activities of Maya nut (Brosimum alicastrum): Comparison with commercial nuts. International Journal of Food Properties. 20 (11), 2772-2781 (2017).
  5. Subiria-Cueto, R., et al. Brosimum alicastrum Sw. (Ramón): An alternative to improve the nutritional properties and functional potential of the wheat flour tortilla. Foods. 8 (12), 1-18 (2019).
  6. Martínez-Ruiz, N., Torres, L. E. J., del Hierro-Ochoa, J. C., Larqué-Saavedra, A. Bebida adicionada con Brosimum alicastrum sw.: Una alternativa para requerimientos dietarios especiales. Revista Salud Pública y Nutrición. 18 (3), 1-10 (2019).
  7. Rodríguez-Tadeo, A., et al. Functionality of bread and beverage added with brosimum alicastrum sw. Seed flour on the nutritional and health status of the elderly. Foods. 10 (8), 1-21 (2021).
  8. Muñoz-Bernal, &. #. 2. 1. 1. ;. A., et al. Nuevo acercamiento a la interacción del reactivo de Folin-Ciocalteu con azúcares durante la cuantificación de polifenoles totales. TIP Revista Especializada en Ciencias Químico-Biológicas. 20 (2), 28-33 (2017).
  9. Luca, S. V., et al. Bioactivity of dietary polyphenols: The role of metabolites. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 60 (4), 626-659 (2020).
  10. Kawabata, K., Yoshioka, Y., Terao, J. Role of intestinal microbiota in the bioavailability and physiological functions of dietary polyphenols. Molecules. 24 (2), (2019).
  11. de Llano, D. G., Moreno-Arribas, M. V., Bartolomé, B. Cranberry polyphenols and prevention against urinary tract Infections: Relevant considerations. Molecules. 25 (15), (2020).
  12. Alsaleh, M., et al. Mass spectrometry: A guide for the clinician. Journal of Clinical and Experimental Hepatology. 9 (5), 597-606 (2019).
  13. Wang, X., Sun, H., Zhang, A., Wang, P., Han, Y. Ultra-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry as a sensitive and powerful technology for metabolomic studies. Journal of Separation Science. 34 (24), 3451-3459 (2011).
  14. Feliciano, R. P., Mills, C. E., Istas, G., Heiss, C., Rodriguez-Mateos, A. Absorption, metabolism and excretion of cranberry (poly)phenols in humans: A dose response study and assessment of inter-individual variability. Nutrients. 9 (3), (2017).
  15. Mateos, R., Goya, L., Bravo, L. Uptake and metabolism of hydroxycinnamic acids (chlorogenic, caffeic, and ferulic acids) by HepG2 cells as a model of the human liver. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 54 (23), 8724-8732 (2006).
  16. Rodriguez Lanzi, ., Perdicaro, C., Antoniolli, D. J., Piccoli, A., Vazquez Prieto, M. A., Fontana, A. Phenolic metabolites in plasma and tissues of rats fed with a grape pomace extract as assessed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Archives of Biochemistry and Biophysics. , 28-33 (2018).
  17. Hou, Y., He, D., Ye, L., Wang, G., Zheng, Q., Hao, H. An improved detection and identification strategy for untargeted metabolomics based on UPLC-MS. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 191, 113531 (2020).
  18. Nagy, K., et al. First identification of dimethoxycinnamic acids in human plasma after coffee intake by liquid chromatography-mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1218 (3), 491-497 (2011).
  19. Marmet, C., Actis-Goretta, L., Renouf, M., Giuffrida, F. Quantification of phenolic acids and their methylates, glucuronides, sulfates and lactones metabolites in human plasma by LC-MS/MS after oral ingestion of soluble coffee. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 88, 617-625 (2014).
  20. McCord, J., Strynar, M. Identifying per-and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow. Journal of Visualized Experiments. 2019 (146), 1-15 (2019).
  21. Muñoz-Bernal, &. #. 2. 1. 1. ;. A., et al. Phytochemical characterization and antiplatelet activity of Mexican red wines and their by-products. South African Journal of Enology and Viticulture. 42 (1), 77-90 (2021).
  22. Muñoz-Bernal, &. #. 2. 1. 1. ;. A. Enriquecimiento de un vino tinto con un extracto de compuestos fenólicos provenientes de orujo de uva: bioaccesibilidad, análisis sensorial y respuesta biológica. Universidad Autónoma de Ciudad Juárez. , (2021).
  23. Low, D. Y., et al. Data sharing in PredRet for accurate prediction of retention time: Application to plant food bioactive compounds. Food Chemistry. , 357 (2021).
  24. Sánchez-Patán, F., et al. Gut microbial catabolism of grape seed flavan-3-ols by human faecal microbiota. Targeted analysis of precursor compounds, intermediate metabolites and end-products. Food Chemistry. 131 (1), 337-347 (2012).
  25. Zhang, X., Sandhu, A., Edirisinghe, I., Burton-Freeman, B. M. Plasma and urinary (poly)phenolic profiles after 4-week red raspberry (Rubus idaeus L.) intake with or without fructo-oligosaccharide supplementation. Molecules. 25 (20), (2020).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

182

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved