מדידה טרנסדרמלית של קצב סינון גלומרולרי בחזירונים מאווררים מכנית

Summary

קצב סינון גלומרולרי (GFR) הוא הסמן האידיאלי להערכת תפקוד הכליות. עם זאת, שיטת המדידה הסטנדרטית באמצעות הזרקת אינולין עם ניתוח דם ושתן סדרתי אינה מעשית. מאמר זה מתאר שיטה מעשית למדידת GFR באופן טרנסדרמלי בחזירונים.

Abstract

מדידה טרנסדרמלית של קצב סינון גלומרולרי (GFR) שימשה להערכת תפקוד הכליות בבעלי חיים מודעים. טכניקה זו מבוססת היטב מכרסמים כדי ללמוד פגיעה חריפה בכליות ומחלת כליות כרונית. עם זאת, מדידת GFR באמצעות המערכת הטרנסדרמלית לא אומתה בחזירים, מין עם מערכת כליות דומה לבני אדם. לפיכך, חקרנו את ההשפעה של אלח דם על GFR טרנסדרמלי בחזירים ילודים מורדים ומאווררים מכנית. אלח דם פולימיקרוביאלי הושרה על ידי קשירת cecal ונקב (CLP). מערכת מדידת ה-GFR הטרנסדרמלית המורכבת מחיישן פלואורסצנטי ממוזער הוצמדה לעורו המגולח של החזיר כדי לקבוע את המרווח של סיניסטרין מצומד פלואורסצין-איזותיוציאנט (FITC), עוקב GFR מוזרק תוך ורידי. התוצאות שלנו מראות כי לאחר 12 שעות לאחר CLP, קריאטינין בסרום עלה עם ירידה ב- GFR. מחקר זה מדגים, לראשונה, את התועלת של גישת ה- GFR הטרנסדרמלית בקביעת תפקוד הכליות בחזירים מונשמים מכנית, ילודים.

Introduction

הערכה מעשית וכמותית של תפקוד הכליות היא מדידת קצב הסינון הגלומרולרי (GFR), המספרת עד כמה הכליות מסננות דם על סמך עקרון הסילוק¹. שיטה מוקדמת יותר למדידת GFR כרוכה בהזרקה תוך ורידית של תרכובות אקסוגניות כגון אינולין או סיניסטרין, ביצוע מדידות סדרתיות של רמות פלזמה/שתן כדי לזהות את הסילוק שלהן ^2,3. שיטה זו מסורבלת, ודורשת איסוף סדרתי של דגימות פלזמה ושתן⁴. חלופה היא מדידה של מוצרים מטבוליים אנדוגניים הסופיים כגון קריאטינין. עם זאת, זה גוזל זמן, ולפעמים, לא מדויק, כפי שהוא לא רק מסונן על ידי glomerulus אלא גם מופרש על ידי tubules ^5,6. יתר על כן, רמת קריאטינין מושפעת ממין, גיל, תזונה ומסת שריר ^7,8,9.

מדד מדויק יותר, זעיר פולשני ונפוץ יותר של GFR הוא השימוש בצגי GFR טרנסדרמליים, המודדים GFR בזמן אמת בבעלי חיים ^4,10. סיניסטרין, סמן כלייתי אקסוגני מסיס מאוד ומסונן באופן חופשי, מסומן בפלואורסצאין-איזותיוציאנט (FITC). תרכובת מצומדת זו מוזרקת לווריד, וניתן להעריך את תפקוד הכליות בזמן אמת מבלי לאסוף דגימות דם ושתן¹¹. השימוש במדידת GFR טרנסדרמלית אומת במכרסמים 12, כלבים¹³ וחתולים¹⁴, אך לא בחזירים.

מיני חזירים חולקים מספר מאפיינים אנטומיים ופיזיולוגיים עם בני אדם, מה שהופך אותם לבעלי חיים אידיאליים לחקר מחלות אנושיות שונות¹⁵. השימוש בחזירים במחקר ביו-רפואי תרגומי הפך לפופולרי יותר ויותר ומועדף על פני מודלים של מכרסמים משום שהוא מחקה את הפיזיולוגיה והפתופיזיולוגיה האנושית¹⁶. חזירי ילודים מעניינים בהבנת המנגנונים של מחלות ייחודיות לחולי ילדים¹⁷. יתר על כן, ההתקדמות האחרונה בהשתלת איברים מחזיר לאדם מעלה דחף להרחיב את כלי האבחון לניסויים פרה-קליניים וקליניים 18,19,20,21. מאמר זה, לראשונה, מספק מדריך לשימוש במכשיר הטרנסדרמלי במדידת GFR בחזירים ילודים.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

הנהלים נכתבו על פי תקנים לאומיים לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של המרכז למדעי הבריאות של אוניברסיטת טנסי (UTHSC).

הערה: חזירונים בקבוצת הניסוי נתונים לקשירת צקאל ולנקב, בעוד שקבוצת הבושה עוברת רק פתיחת הבטן ללא קשירת צקאל או נקב. חזירונים בשתי הקבוצות נשמרים תחת הרדמה במשך 12 שעות לאחר ההליך כדי לאפשר מספיק זמן לאלח דם ופגיעה חריפה בכליות (AKI) כדי להתרחש בקבוצת הניסוי. מדידת GFR טרנסדרמלית תתרחש בשעה 8 שעות לאחר ההליך ובסך הכל 12 שעות.

1. אספקת חזרזיר ודיור

1. זהה חוות חזירים מקומית שיכולה לספק חזירונים ילודים בגילאי 3-5 ימים. תזמן את הלידה בתחילת השבוע כדי להשלים את הניסוי לפני כל חזירונים הם מעל 7 ימים.
   הערה: הספק סיפק שלושה עד חמישה חזרזירים בימי שני לניסוי זה; עד יום שישי, החזירונים היו עוברים את הניסוי. שימוש באותו המין ובגיל קרוב לגיל דומה הוא חיוני כדי למנוע גורמים מבלבלים.
2. עם הגעתו של החזרזיר, ודא שיש לו זיהוי אישי (למשל, תג אוזן ורשומה הכוללת משקל וגיל).
3. אחסן את החזירונים ביחידה לטיפול בחיות מעבדה (LACU) תחת השגחתו של וטרינר מורשה. בעלי החיים שוכנים כקבוצה בדיר מרווח עם רצפת בטון מוצקה שנשטפת בקלות במים כדי לשמור על תברואה טובה.
4. הוסיפו רהיט כמו כדור כבד כדי לאפשר העשרה וגירוי סביבתיים.
5. ודא שה-LACU מספק תנאים סביבתיים אופטימליים, כולל המרכיבים העיקריים הבאים: תברואה, תזונה, בקרת טמפרטורה, אוורור ומחזור יום-לילה על ידי שליטה בתאורה.
6. בקשו מהווטרינר לבדוק את החזרזיר מדי יום, כולל מדידת משקל, כדי ליידע את החוקר אם חזרזיר כלשהו נראה חולה, מה שעשוי לחייב הרחקה מהניסוי.
7. השאירו את החזירונים לפחות יום אחד כדי להתאקלם לסביבה, אשר מסייע למזער את הלחץ.

2. הכנה טרום ניתוחית

1. הכן את התחנה הכירורגית לפני תחילת הניסוי. זה כולל כרית חימום, קטטרים, מכונת הנשמה, צינור אנדוטרכאלי, מלח הפריני ושקית של נוזל צלצול לקטט.
   הערה: חזירונים הם בעלי יכולת ויסות תרמית ירודה והם נוטים להיפותרמיה אשר משנה את המודינמיקה^22,23. לכן, חיוני לאפשר מספיק זמן לכרית החימום להתחמם.
2. מכינים 10 מ"ג/מ"ל של α-כלורלוז על ידי ערבובו עם מי מלח בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס עד שהתערובת צלולה. אין לחמם את התמיסה יתר על המידה כדי למנוע התגבשות של התרופה עם הקירור. מסננים עם מסנן מזרק (גודל 0.22 מיקרומטר) לפני מתן חזירונים.
3. הכינו תרופת הרדמה על בסיס משקל בעלי חיים - קטמין: 20 מ"ג/ק"ג וקסילזין: 2.2 מ"ג/ק"ג. יש להשתמש α-כלוראלוס (5 מ"ל/ק"ג) לשמירה על הרדמה.
   הערה: α -כלורלוז משמש בשל הקלות במתן IV בהשוואה לשאיפת כלורם
   הרדמה, כמו האחרון דורשים מכונת הרדמה ומערכת נבלות מתאימה כדי להיות מועבר באמצעות צינור endotracheal.

3. הרדמה

1. בצע אינדוקציה של הרדמה בדיר החזירים, סביבה מוכרת עבור חזירונים, כדי למנוע מתח מופרז.
2. בחר בעדינות את החזרזיר על ידי הרגליים האחוריות ולתת קטמין: 20 מ"ג / ק"ג וקסילזין: 2.2 מ"ג / ק"ג לתוך הרגל האחורית בשריר semimembranosus / semitendinosus, באמצעות מחט 23 G 3/4.
3. יש להמתין מספר דקות עד שהתרופות ייכנסו לתוקף. בדוק את רמת ההרדמה המתאימה על ידי וידוא כי החיה רגועה מספיק כדי להיות חסר תנועה, עם אובדן רפלקס palpebral וטון הלסת כדי לאפשר תחבורה קלה ובטוחה לתחנת הניתוח. להעריך את רפלקס palpebral על ידי נגיעה בפינה הפנימית של העין; היעדר מצמוץ מצביע על הרדמה נאותה.

4. טרכאוסטומיה

הערה: ניסוי זה אינו הישרדותי, ולכן מבוצעת טרכאוטומיה כדי ליצור נתיב אוויר לאוורור מכני. טרכאוסטומיה היא הליך מהיר וקל, בניגוד לאינטובציה אנדוטרכאלית, שהיא מאתגרת בחזירונים בהתחשב באנטומיה של הראש ודרכי הנשימה העליונות^{שלהם 24,25}. בנוסף, laryngospasm הוא דיווח נפוץ במהלך אינטובציה, וכתוצאה מכך תקופה ממושכת של היפוקסיה ו hypercarbia שעלול לפגוע בתוצאות²⁶.

1. מקם את החזרזיר בשכיבה הגבית. זהה את סחוס בלוטת התריס על ידי מישוש הבולטות של סחוס בלוטת התריס אשר מרגיש מוצק. יש לעקר את האזור באמצעות פובידון-יוד ו-70% אתנול לפני מריחת וילון סטרילי.
2. באמצעות להב כירורגי, לבצע חתך קו אמצע גחון של 2-3 ס"מ נחות מהקצה הקאודאלי של סחוס בלוטת התריס.
3. באמצעות המוסטאט יתוש מעוקל, מנתחים בבוטות את הרקמות והשרירים התת-עוריים העיליים (סטרנוהיואידאוס וקולי עורי) עד שממחישים את קרום בלוטת התריס ואת טבעות קנה הנשימה הראשונות. בעת ניתוח, יש להיזהר כדי להימנע מפגיעה בכלי דם כלשהם.
4. קבל תצוגה ברורה של קרום cricothyroid וטבעות קנה הנשימה²⁴, ולאחר מכן להשתמש זוג מלקחיים ארוכים מערבל זווית ישרה כדי לרומם את המבנים.
   1. עם זוג מספריים קטנים, לעשות חתך קטן בקרום cricothyroid או טבעת קנה הנשימה הראשונה. להאריך את החתך אופקית ל ~ 0.5 ס"מ כדי לעבור צינור אנדוטרכאלי 3.0 מ"מ.
   2. הכנס את הצינור לסימן 5 ס"מ. ודא הרחבת חזה דו-צדדית וצלילי נשימה לפני אבטחת הצינור.
5. מעבירים סרט טבור סביב קנה הנשימה כדי לאבטח אותו במקומו. סרט נוסף משמש להצמדת הצינור לבסיס הלסת.
6. הפעל את מכונת ההנשמה, חבר את הצינור האנדוטרכאלי וגלגל את הידיות הספציפיות (למשל. ידיות SIMV, ידיות PEEP וכו ') כדי לבחור את הגדרות הבסיס הבאות. מצב בקרת לחץ: אוורור מכני מסונכרן לסירוגין (SIMV); לחץ השראה שיא (PIP) - 15; לחץ סופי חיובי (PEEP) - 5; שיעור- 20; I-time - 0.6. לאחר ניתוח גז הדם הראשון, יש להתאים את הגדרות מכונת ההנשמה בהתאם לתוצאות גז הדם, במטרה לשמור על חמצון ואוורור נאותים.

5. קנולציה של כלי הירך

1. להקים את דרכי הנשימה ואת האוורור, לפני החלפת תשומת הלב לכלי הירך לגישה ורידית וניטור לחץ דם פולשני. עורק הירך מזוהה על ידי תחושת דופק בחריץ שבין שרירי הסרטוריוס והגרסיליס, וניתן למצוא את הווריד רק מדיאלי לעורק.
2. בזמן שהחזרזיר שוכב בתנוחת משענת גב, לעקר את אזור המפשעה באמצעות פובידון-יוד ואתנול, ולהחיל וילון בגודל מתאים.
3. השתמש בלהב כירורגי כדי ליצור חתך אורכי של 3-4 ס"מ, החל באופן גולגולתי בקמט המפשעתי ונמשך באופן דיסטלי לאורך תעלת הירך.
4. החל דיסקציה בוטה וחדה, באמצעות מלקחיים מעוקלים יתושים ומספריים, בהתאמה, כדי לנתח עד לרמה של צרור נוירו-וסקולרי הירך. ניתן למצוא את הצרור עמוק בגוף שריר הגרציליס²⁷. לנתח את עורק הירך ואת הווריד במהלך 2-3 ס"מ כדי לאפשר cannulation. ליגייט ענפי צד קטנים במידת הצורך.
5. יש למרוח עניבת משי 3.0 הן על העורק והן על הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של הווריד כדי להחיל את המתיחה. קושרים את תפר המשי הדיסטלי הן על הווריד והן על העורק, וקושרים את כלי הדם.
6. החל מווריד הירך, לשמור על מתיחה דיסטלית ופרוקסימלית על קשרי המשי ולאחר מכן להשתמש זוג מספריים מיקרו כדי ליצור venotomy.
7. לאחר מכן, השתמש בקטטר פיק ורידים כדי לפתוח את כלי הדם תוך החדרת קטטר פוליאוריתן שנמדד מראש בקוטר פנימי x קוטר חיצוני של 0.86 מ"מ x 1.32 מ"מ. לאחר ההחדרה, קושרים את תפר המשי הפרוקסימלי 3.0 כדי לקבע את הקטטר. יש לשטוף את הצנתר עם 3 מ"ל של תמיסת מלח הפרית (1 U/mL). פתרון זה יכול להיעשות על ידי הוספת 0.5 מ"ל של הפרין ל 50 מ"ל של מלוחים רגילים.
8. הכנס קטטר לחץ דם פולשני באותה גישה לעיל כדי ליצור ארטריוטומיה ולהעביר את הקטטר.
   הערה: שמירה על מתיחה דיסטלית ופרוקסימלית חיונית כדי למזער את אובדן הדם בעת גישה לעורק.
9. לאחר אבטחת הצנתרים, יש לכסות את האתר בגזה ספוגה במי מלח, ובמידת הצורך לתפור את העור באמצעות תפר משי 3.0 למניעת זיהום.

6. שמירה על הרדמה, נוזלים וגז דם

1. עקוב אחר עומק ההרדמה לאורך כל הניסוי, תוך שימוש בטונוס הלסת וברפלקס הפלפברלי, ותן α-כלורלסטון, תוך ורידי, לפי הצורך כדי לשמור על החיה תחת הרדמה עמוקה. יש להשתמש במינון העמסה ראשוני של 50 מ"ג/ק"ג, ו-20 מ"ג/ק"ג לבולוסים נוספים.
2. יש להחדיר צלצול לקטט בקצב של 4 מ"ל/ק"ג/שעה לאורך כל הניסוי כנוזל תחזוקה. לדוגמה, אם משקל חזרזיר הוא 3 ק"ג, אז שיעור עירוי נוזלים הוא 12 מ"ל / שעה.
3. לניתוח גז ליד המיטה, ציירו דגימת דם עורקית במזרק גז דם שעבר הפרינציה והציגו את הדגימה למכונת האנליזה. בחר את האפשרות גז דם עורקי, והמתן ~ 2-3 שניות עבור המנתח להציג את מחט לצייר דם.
   1. בזהירות להחדיר את המחט לתוך הקצה של המזרק המכיל את דגימת הדם. המתן עד שהמנתח ישאף את המדגם הנדרש וימשוך את המזרק. אפשר למכונה לנתח את גז הדם ולהציג את התוצאות.
   2. בהתבסס על התוצאות, התאם את מכונת ההנשמה כדי לשמור על ה- pH בין 7.35--7.45, לחץ חלקי של פחמן דו חמצני (PCO2) בין 35-45 מ"מ כספית, ולחץ חלקי של חמצן (PaO2) בין 80-150 מ"מ כספית. ההגדרות משתנות בהתאם לסוג מכונת ההנשמה, אך כרוכות במידה רבה בהגדלה או הפחתה של קצב הנשימה באמצעות ידיות מתאימות כדי לפצות על היפוקסיה ו/או היפרקפניה.
4. למשוך 3 מ"ל של דם לתוך צינור ירוק בהיר (ליתיום הפרין). צנטריפוגה הדגימה ב 2000 xגרם במשך 15 דקות, נשמר ב 4 מעלות צלזיוס כדי לחלץ פלזמה. לאחר השלמתו, ניתן לנתח את הפלזמה באופן מיידי לרמת קריאטינין בסרום עם מנתח הכימיה שליד המיטה או לאחסן אותה בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס לניתוח מאוחר יותר.
5. נטר את הטמפרטורה ברציפות באמצעות מדחום בדיקה רקטלי וכוונן את טמפרטורת כרית החימום כדי לשמור על טמפרטורת חזרזיר בין 101 ל -103 מעלות פרנהייט.

7. קבוצת ניסוי; קשירה וניקוב cecal (CLP) ^25,28,29

הערה: עבור חזירונים בקבוצת הניסוי, בצע CLP כדי לגרום לאלח דם פולימיקרוביאלי²⁸ ולנטר את החיה במשך 12 שעות לאחר הניתוח כדי לאפשר מספיק זמן לאלח דם חמור. הקלטת GFR טרנסדרמלית מתחילה ב-8 שעות לאחר קשירת cecal כדי לאפשר 4 שעות של הקלטה.

1. השתמש בלהב כירורגי כדי ליצור חתך אנכי פרמדיאני שמאלי של 5-6 ס"מ, שכן הצקום בחזירים טמון בפאוסה³⁰ השמאלית. לנתח את שכבות דופן הבטן, הימנעות מפגיעה בכלי הדם האפיגסטריים השטחיים.
2. לאחר נטיית שכבת הצפק, השתמש במשענת כדי לשפר את הגישה למבנים תוך-בדומינליים.
3. זהה את המעי הגס הספירלי ברביע השמאלי העליון של הבטן. עקבו אחר המעי הגס הספירלי, באופן קדמוני ודורסלי, כדי לאתר את הצקום. האילאום נראה מצטרף למעי הגס הספירלי בבסיס הצקום.
4. ליגייט של הצקום פשוט דיסטלי לצומת האיליאוקלי (איור 1).
5. באמצעות מחט 18 גרם, לעשות שבעה נקבים cecum ו extrude צואה לתוך אזור הצפק.
6. סגרו את הבטן בשכבות עם תפר משי 3.0 באמצעות תפרים פשוטים מופרעים או רציפים. ניתן להשתמש במהדק גם לסגירת שכבת העור, אם קיימת.

8. קבוצת שאם

1. בצע את השלבים 7.2-7.4 כנ"ל. לאחר זיהוי הצקום, החזירו אותו ללא מגע וסגרו את דופן הבטן באופן דומה.
2. עקוב אחר חזירונים בקבוצת הבושה במשך 12 שעות כדי למנוע כל הטיה מבלבלת המיוחסת לחשיפה ממושכת להרדמה.

9. הגדרת התקן GFR טרנסדרמלי

1. לאחר 8 שעות של קשירת cecal, להתכונן ליזום מדידה transdermal של GFR.
2. השתמש בתוכנת שירות MB גרסה 3.0 כדי להתאים את קצב הדגימה בהתקן GFR. בקצרה, חבר את התקן ה- GFR הטרנסדרמלי לתוכנת המחשב באמצעות מחבר ה- USB. פתח את התוכנה, לחץ על התחבר והתאם את התזמון ל-4000 אלפיות השנייה. לחץ על כתוב כדי לשמור את ההגדרות.
   הערה: זה נותן עד 6 שעות של זמן דגימה כולל. בחזירים, GFR transdermal הושלם תוך 4 שעות. עבור ניסויים הדורשים דגימה של עד 12 שעות, בחר באפשרות 8000 אלפיות השנייה.
3. חבר את כתמי ההדבקה הדו-צדדיים עם חלון שקוף למכשיר. חבר את ההתקן לצד אחד, וודא שהדיודה פולטת האור מכסה את החלון השקוף כדי לאפשר זיהוי מעקב.
4. לגלח את האזור מעל קיר החזה לרוחב. חברו את הסוללה למכשיר והדביקו מיד את מדבקת הדבק עם המכשיר במקומו וודאו שהוא מאובטח היטב (איור 2). מכיוון שהחזירונים מורדמים עמוק, ייתכן שלא יהיה צורך להחזיק את המכשיר במקומו.
   הערה: מדבקת הדבק לבדה מספיקה לאבטחה. עם זאת, בהליכים שבהם בעלי החיים יעברו מניפולציה, יהפכו לפעילים או שבהם ההרדמה עלולה להיות משובשת, ייתכן שיהיה חשוב למרוח סרט. תחבושת עשויה להיות גם גישה חלופית³¹.
5. נדרשת הקלטה בסיסית של 3-5 דקות לפני מתן FITC-sinistrin.

10. הכנה והזרקת FITC-sinistrin

1. הכינו תערובת של FITC-sinistrin עם תמיסת מלח לריכוז סופי של 50 מ"ג/מ"ל. המינון הניתן לחזרזיר הוא 20 מ"ג/ק"ג. FITC-sinistrin מסופק בצורת אבקה.
   הערה: ניתן לתת את ה- FITC-sinistrin גם דרך קטטר ורידי היקפי המוחדר לווריד האוריקולרי. זה חיוני כדי להשיג רמת שיא גבוהה על ידי מתן FITC-sinistrin כמו בולוס דחיפה דרך קטטר ורידי וריד הירך.
2. הצמידו את המזרק עם התרופה לצד אחד של זין עצירה תלת-כיווני וסומק מלוח בצד השני של זין העצירה. דחפו את ה-FITC-sinistrin ומיד לאחר מכן עם בולוס מלח של 5 מ"ל לפני שתסגרו את הזין התלת-כיווני לווריד החזרזיר.

11. הקלטת GFR טרנסדרמלית

1. שמור את המכשיר מחובר חזרזיר במשך 4 שעות. במהלך תקופה זו, שמור את החזרזיר תחת הרדמה באמצעות מינונים לסירוגין של α-כלורלוז בריכוז של 20 מ"ג / ק"ג כדי למנוע כל חפץ תנועה.
2. בתום 4 שעות, הסר את המכשיר ונתק מיד את הסוללה.

12. מדידת GFR

1. חבר את התקן ה- GFR הטרנסדרמלי למחשב באמצעות מחבר ה- USB שסופק על ידי הספק.
2. פתח את תוכנת הקריאה כדי לאחזר נתונים מההתקן. שמור את הנתונים הגולמיים על-ידי לחיצה על הרצף: התחבר, קרא, שנה שם ושמור. כפי שהונחה במדריך, לעבד ולהעריך את הנתונים השמורים בתוכנת הניתוח.
3. בקצרה, פתח את התוכנה ver. 3.0 וייבא את הנתונים. התאם את מיקומי ההסטה, ההתחלה והסיום באמצעות הסמנים האוטומטיים. הסר חפצים במידת הצורך, ולחץ על התאם. פעולה זו נותנת קריאה המציגה את אישור FITC-sinistrin תוך דקות (t1/2). t1/2 משמש לאחר מכן לחישוב tGFR^32,33 כדלקמן:
   
   הערה: בהתייעצות עם היצרן, מקדם ההמרה המשמש לחזירים הוא 20 (מה שמעיד על כך ש-20% ממשקל הגוף הוא שטח חוץ-תאי), לעומת 21.33 בעכברים (tGFR ב-mL/min) ו-14,616.8 בעכברים (tGFR ב-μL/min). הסיבה לכך היא ש-GFR נמדד במדויק כפונקציה של נוזל חוץ-תאי^34,35, אשר בתורו תלוי במשקל הגוף ³⁶.

13. המתת חסד של חזרזיר

1. לאסוף 3 מ"ל של דם לאחר 12 שעות של CLP לניתוח ביוכימי נוסף.
2. להרדים את חזרזיר על ידי מתן 0.2 מ"ל / ק"ג של תערובת מעורבת מראש של 20% נתרן pentobarbital ו Phenytoin נתרן תוך ורידי.
3. קצור את הכליה הימנית למחקר היסטופתולוגי לפני לקיחת חזרזיר לחדר המתים.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

בחלק זה, אנו מציגים לראשונה, את הנתונים המייצגים מהשימוש ב- GFR טרנסדרמלי בחזירים ילודים. השתמשנו במודל קשירת צקאל ודיקור שהוכח בעבר כמפחית את תפקוד הכליות²⁸. בהתאם לכך, שיערנו כי בחזירי CLP שלנו, צריכה להיות ירידה חריפה ב- GFR המתאים ל- AKI, ויש לזהות זאת במכשיר ה- GFR הטרנסדרמלי כזמן פי?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

מאמר זה מתאר צעדים מעשיים לקביעת תפקוד הכליות בחזירים באמצעות צגי GFR טרנסדרמליים ממוזערים ו- FITC-sinistrin במודל של חזיר ילודים מונשם ומורדם. מאמרים קודמים קבעו פרוטוקולי GFR טרנסדרמליים ניסיוניים במכרסמים^11,12,14, אך לא קיימים פרוטוקולים בחזירים....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alpha - Chloralose	Sigma-Aldrich	C0128-25G	Used for maintanining anesthesia
Black braided silk  3-0	Surgical Specialties	SP117	Silk tie for blood vessel traction and ligation
Centrifugation machine AccuSpin 8C	Fischer Scientific	75-008-821	Used to extract plasma from whole blood sample
Endotracheal Tube 3.0 uncuffed	Progressive Medical International	1109021995	Inserted through tracheostomy
FITC-Sinistrin 1.0 g	MediBeacon Inc.	FTCF S001	Store at room temp and protect from light
GEM Premier 3000 Blood gas analyzer	Instrumentation Laboratory	5700	For bedside blood gas analysis
Heating Pad medium size 20 in x 29 in	Adroit Medical Systems	V029	Connects to heat therapy pump
HTP-Heat Therapy Pump	Adroit Medical Systems	HTP	Allows you to set temperature as needed.
IDEXX Catalyst One	IDEXX Laboratories	89-92525-00	Plasma creatinine analysis
Invasive blood pressure catheter 3.5Fr	Millar	SPR-524	Inserted in femoral artery
IV adminstration set with flow regulator	True Care	TCRTCBINF033G	Used to connect IV fluid bag to vein catheter
Ketamine	Covetrus	68317	Used for induction of Anesthesia
MediBeacon analysis software version 3.0	MediBeacon Inc.	N/A	Software program used for analysing data to obtain sinistrin clearance half life and curve
Millex-GV Syringe Filter Unit 0.22 µm	Millipore Sigma	SLGVR33RS	Syringe filter for chloralose injection
Neonate/Infant Ventilator	Sechrist Millennium	20409	Connected to air supply to provide ventilation through endotracheal tube
Phenobarbital Sodium + Phenytoin Sodium (Euthasol)	Covetrus	72934	Used for euthanasia
Ringer Lactate 500 mL bag	Baxter	2B2323Q	Maintanence fluid infusion
Sterile Gloves	Henry Schein	104-5920	Used by operator during surgery
Sterile Gown	Halyard Health	95021	Used by operator during surgery
Steril Towel	Medline	42131704	Used as drape to maintaine sterile field when operating
Suture 3-0 silk reverse cutting needle	Ethicon	NC1842168	Used for suturing abdominal wall layers
Transdermal Mini GFR Monitor	MediBeacon Inc.	TDM004	Battery and USB connector included in package
Transdermal monitor adhesive patch	MediBeacon Inc.	PTC-SM001	Doubl sided adhesive patch for GFR probe
Umbilical Tape 1/8 in x 20 yds	Fisher Scientific	NC9303017	To secure endotracheal tube
Venous Catheter size PE/5	Micro medical tubing	BB31695	For femoral vein cannulation
Xylazine	Covetrus	61035	Used for induction of anesthesia