JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה יעילה לאופטימיזציה של טכנולוגיית העיבוד של Tiebangchui המעובדת עם יין שעורה הררי המבוססת על משטח תגובה של תכנון Box-Behnken בשילוב עם שיטת האנטרופיה.

Abstract

עיבוד של אתנו-תרופות רעילות הוא בעל משמעות רבה ליישום קליני בטוח שלהם. לפיכך, יש להתייחס למגבלות העיבוד המסורתי, ושיטת העיבוד של אתנו-תרופות צריכה להיות סטנדרטית באמצעות שיטות מחקר מודרניות. במחקר זה, טכנולוגיית העיבוד של תרופה טיבטית נפוצה Tiebangchui (TBC), השורש המיובש של מטוטלת Aconitum Busch, מעובד עם יין שעורה הררי היה אופטימלי. תכולת אלקלואיד דיאסטר-דיטרפנואיד (DDA) (אקוניטין, 3-דאוקסיאקוניטין, 3-אצטילאקוניטין) ואלקלואיד מונואסטר-דיטרפנואיד (MDA) (בנזואילאקונין) שימשו כמדדי הערכה, ומקדם המשקל של כל מדד הערכה נקבע בשיטת האנטרופיה.

מבחן הגורם הבודד ועיצוב Box-Behnken שימשו לחקירת השפעת היחס בין יין שעורה הררי לבין TBC, עובי פרוסת TBC וזמן עיבוד. הניקוד המקיף בוצע על פי המשקל האובייקטיבי של כל מדד שנקבע בשיטת האנטרופיה. תנאי העיבוד האופטימליים של TBC עם יין שעורה הררי היו כדלקמן: כמות יין שעורה הררי היא פי חמישה מזו של TBC, זמן השריה של 24 שעות, ועובי TBC של 1.5 ס"מ. התוצאות הראו כי סטיית התקן היחסית בין מבחן האימות לערך החזוי הייתה פחות מ-2.55% וטכנולוגיית העיבוד האופטימלית של TBC המעובד עם יין שעורה הררי היא פשוטה, ישימה ויציבה, ולכן יכולה לספק סימוכין לייצור תעשייתי.

Introduction

Tiebangchui (TBC), השורש המיובש של מטוטלת Aconitum Busch, הוא תרופה טיבטית ידועה ותועד לראשונה בספר הרפואה הטיבטי הקלאסי "ארבע טנטרה רפואית"1,2. על פי "תקני התרופות של משרד הבריאות של הרפובליקה העממית של סין (רפואה טיבטית)", TBC יעיל בסילוק קור, הקלה על כאבים, פיזור רוח והלם מרגיע, והוא משמש בדרך כלל לטיפול בדלקת מפרקים שגרונית במרפאות 3,4,5.

TBC מכיל בעיקר אלקלואידים, כולל אלקלואידים דיאסטר-דיטרפנואידים רעילים מאוד (DDAs), ואלקלואידים מונואסטר-דיטרפנואידים רעילים במידה בינונית (MDAs)6,7,8. רכיבים כימיים אלה הם חומרים פעילים בעלי השפעות רפואיות אך רעילים. אחד המרכיבים הפעילים והרעילים המפורסמים ביותר, אקוניטין, גורם להרעלה כאשר הוא עולה על 1 מ"ג9. לכן, שימוש לא נכון או מופרז ב-TBC עלול לגרום להרעלה ואף למוות, ושימור הרעילות והיעילות של TBC חיוני ליישום קליני בטוח שלה10,11.

עיבוד הוא שיטה יעילה לניקוי רעלים מ-TBC. על פי ספרי רפואה טיבטית עתיקה, עיבוד עם יין שעורה הררי הוא דרך יעילה להחליש רעילות ולשמר את היעילות של TBC. TBC מושרה ביין שעורה הררי, מאוחסן ללילה אחד, מיובש ומתווסף לתרופות12. עם זאת, טכנולוגיית העיבוד הספציפית והגורמים המשפיעים הפוטנציאליים מדווחים לעתים רחוקות, ותהליך העיבוד המסורתי מסתמך לעתים קרובות על ניסיון וחסר שיטות סטנדרטיות. לפיכך, יש צורך בשיטות מדעיות וטכנולוגיות מודרניות לייעול ותקינה של תהליך העיבוד.

שיטת התכנון Box-Behnken משמשת לחקירת אינטראקציות בין גורמים שונים והשפעתן על ניקוד מקיף באמצעות התאמת פולינום ריבועית. עיצוב זה מאפשר תצפית אינטואיטיבית של תנאים אופטימליים כבר בשימוש נרחב בתחום הרוקחות13. לדוגמה, שיטת התכנון Box-Behnken, המבוססת על שיטת האנטרופיה, ביצעה אופטימיזציה מוצלחת של טכנולוגיית העיבוד של מוקפצים עם חומץ של Curcuma Longa Radix14. במחקר זה, תכנון ניסויי משטח התגובה Box-Behnken בשילוב עם שיטת האנטרופיה שימש לאופטימיזציה של טכנולוגיית העיבוד של TBC המעובד עם יין שעורה הררי. טכנולוגיית העיבוד הממוטבת צפויה להבטיח בקרת איכות ושימוש קליני בטוח.

Protocol

במחקר זה, טכנולוגיית העיבוד של TBC המעובדת עם יין שעורה הררי עברה אופטימיזציה עם עיצוב Box-Behnken בשילוב עם שיטת האנטרופיה. תכני DDA ומד"א שימשו כמדדי הערכה, ומקדם המשקל של כל מדד הערכה נקבע בשיטת האנטרופיה.

1. הכנה ניסיונית

  1. הכינו יין שעורה הררי15.
    1. קח 500.00 גרם של אורז שעורה שחור highland ולהוסיף פי חמישה את כמות המים. מבשלים את האורז עד שהמים הנותרים נספגים (~ 2 שעות). יוצקים אותו, מחכים עד שהטמפרטורה יורדת ל 37 מעלות צלזיוס, מוסיפים 4 גרם של Jiuqu (ראה טבלת חומרים), מערבבים היטב, אוטמים את הפחית, עוטפים את המיכל בצמר גפן, ונותנים לו להתבשל במשך 7 ימים.
    2. מוסיפים 300 מ"ל מים ביום השביעי ואוטמים שוב. ביום השמיני מתחילים להוציא את היין ומחליפים ב-300 מ"ל מים לאחר מכן. אוטמים ותסיסים ליום אחד, לוקחים את היין ומוסיפים שוב 300 מ"ל מים. חזור על הליך זה שלוש פעמים ושלב את המשקאות החריפים.
    3. מביאים לרתיחה, מנמיכים את האש לרתיחה וממשיכים לבשל עד שהמים הנותרים נספגים.
  2. כדי להכין מוצרים מעובדים, לשקול במדויק את TBC במיכל, להוסיף יין שעורה highland, ולהשרות במשך יום אחד. לאחר מכן, יבש בתנור ייבוש חשמלי בטמפרטורה קבועה.
    הערה: טמפרטורת הייבוש צריכה להיות פחות מ 40 ° C כדי למנוע שינויים בהרכב אלקלואיד.
  3. הכן פתרון לדוגמה לבדיקה.
    1. שקלו במדויק אבקת מוצר מעובדת TBC (2 גרם) בצלוחית חרוטית, הוסיפו תמיסת אמוניה 40% ובצעו מיצוי בעזרת אולטרסאונד עם ממיסים מעורבים איזופרופנול-אתיל אצטט (1:1) (50 מ"ל) (הספק: 200 W; תדר: 40 קילוהרץ; טמפרטורה: 40°C) למשך 30 דקות.
      הערה: להכנת תמיסת 40% אמוניה, יש להעביר 40 מ"ל אמוניה לבקבוק נפח של 100 מ"ל ולאחר מכן לדלל במים טהורים.
    2. התאם את התמיסה המופקת למשקל המקורי על-ידי הוספת תערובת איזופרופנול-אתיל אצטט (1:1 v/v).
    3. מעבירים במדויק את התמיסה המופקת (25 מ"ל) לבקבוק בעל תחתית עגולה להתאוששות הממס בלחץ מופחת עד לייבוש.
    4. לבסוף, להעביר 0.05% חומצה הידרוכלורית תמיסת מתנול להמיס את השאריות משלב 1.3.3 בבקבוק נפחי 5 מ"ל ולדלל עם 0.05% מתנול הידרוכלוריד תמיסה. סנן את התמיסה דרך מסנן ממברנה מיקרו-נקבובית בגודל 0.22 מיקרומטר לפני הזרקתה למערכות הכרומטוגרפיה הנוזלית (HPLC) בעלות הביצועים הגבוהים.
      הערה: הכינו 0.05% מתנול חומצה הידרוכלורידית על ידי הוספת 0.05 מ"ל חומצה הידרוכלורית לצלוחית נפחית של 100 מ"ל, ולאחר מכן דללו במתנול.
  4. הכינו תמיסה סטנדרטית במשקל 5.18 מ"ג בנזואילאקונין, 13.13 מ"ג אקוניטין, 10.05 מ"ג 3-דאוקסיאקוניטין, ו-10.09 מ"ג 3-אצטילקוניטין במדויק, ולאחר מכן הניחו את המוצקים בבקבוק נפחי של 5 מ"ל בנפרד. לדלל עם 0.05% מתנול הידרוכלוריד פתרון.

2. מצב כרומטוגרפי

  1. הגדר את התנאים הכרומטוגרפיים כפי שמוצג בטבלה 1 עבור HPLC. פירוט המכשירים בהם נעשה שימוש מופיע בטבלת החומרים.

3. בדיקת הסתגלות המערכת

  1. טווח ליניאריות
    הערה: ראשית, השתמשנו ב-HPLC כדי לקבוע את אזורי השיא של בנזואילקוניטין, אקוניטין, 3-דאוקסיאקוניטין, ו-3-אצטילקוניטין בדגימה, ולאחר מכן קבענו באופן אקראי את אזור השיא של ריכוז ידוע אחד של תמיסה סטנדרטית. לאחר מכן, השווינו את ההבדל בין שני אזורי שיא (תמיסת דגימה ותמיסה סטנדרטית) כדי להעריך את הריכוז של בנזואילקוניטין, אקוניטין, 3-דאוקסיאקוניטין ו-3-אצטילקוניטין בדגימות שונות, ולאחר מכן התאמנו את התמיסה הסטנדרטית לטווח ליניארי כדי לכלול את ריכוז הדגימה בעקומה. ריכוזי העקומה הסטנדרטיים מוצגים בטבלה 2.
    1. הכינו תמיסות ייחוס של בנזואילקוניטין המכילות 1.036 מ"ג/מ"ל, 0.518 מ"ג/מ"ל, 0.2072 מ"ג/מ"ל, 0.1036 מ"ג/מ"ל ו-0.0518 מ"ג/מ"ל.
    2. הכינו תמיסות ייחוס של אקוניטין המכילות 1.313 מ"ג/מ"ל, 0.5252 מ"ג/מ"ל, 0.2626 מ"ג/מ"ל, 0.1313 מ"ג/מ"ל ו-0.05252 מ"ג/מ"ל.
    3. הכינו תמיסות ייחוס 3-deoxyaconitine המכילות 1.005 מ"ג/מ"ל, 0.5025 מ"ג/מ"ל, 0.201 מ"ג/מ"ל, 0.1005 מ"ג/מ"ל ו-0.402 מ"ג/מ"ל.
    4. הכינו תמיסות ייחוס 3-אצטילקוניטין המכילות 0.2018 מ"ג/מ"ל, 0.1009 מ"ג/מ"ל, 0.04036 מ"ג/מ"ל, 0.02018 מ"ג/מ"ל ו-0.01009 מ"ג/מ"ל.
    5. חקור את הלינאריות של כל תרכובת על ידי התוויית שטח השיא לעומת ריכוז ההזרקה.
  2. כדי לבצע את בדיקת הדיוק, הזריק 10 μL מכל תמיסת ייחוס למערכת HPLC שש פעמים ביום והשתמש באותם תנאי HPLC המתוארים בשלב 2.1 כדי להפעיל את הדגימות רשום את אזור השיא של כל רכיב.
  3. בצע בדיקת יציבות תוך יומית על ידי הזרקת 10 μL של תמיסת הדגימה המוכנה באמצעות שלב 1.3 וקבע את אזורי השיא לאחר 0 שעות, 2 שעות, 4 שעות, 8 שעות, 14 שעות, 12 שעות ו- 24 שעות16.
  4. בצע בדיקת שחזור על ידי לקיחת שש דגימות של אותה אצווה של TBC כדי להכין את פתרון דגימת הבדיקה, בהתאם לשלב 1.3. הזריקו 10 μL מכל דגימה למערכת HPLC והפעילו את הדגימות כמתואר בשלב 2.1.
  5. בצע את בדיקת ההתאוששות כדי להעריך את דיוק השיטה. הוסף 100% מהתמיסה הסטנדרטית של כל רכיב מדד (בנזואילקוניטין, אקוניטין, 3-דאוקסיאקוניטין, ו-3-אצטילאקוניטין) בתמיסת הבדיקה כדי לחשב את שיעור ההתאוששות, בהתאמה. לדוגמה, מכיוון שתכולת הבנזוילקוניטין היא 0.1524 מ"ג/מ"ל בדגימת TBC, שקול במדויק 0.1524 מ"ג תקני בנזואילקוניטין והוסף לדגימת TBC, ולאחר מכן הכן את תמיסת דגימת הבדיקה בהתאם לשלב 1.3. הפעל דוגמאות אלה עם אותם תנאי HPLC המתוארים בשלב 2.1. חשב את קצב ההתאוששות באמצעות משוואה (1):
    figure-protocol-5107(1)
    כאן, A היא כמות הרכיב (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine, או 3-acetylaconitine) שיש למדוד בתמיסת הדגימה, B היא כמות התקן שנוסף (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine, או 3-acetylaconitine), ו- C הוא הערך הנמדד של התמיסה המכילה את התמיסה הסטנדרטית ואת הפתרון לדוגמה (ראה טבלה 3). עיין בשלב 2.1 לקבלת התנאים הכרומטוגרפיים לביצוע השלבים לעיל. שיעור ההחלמה משקף את מידת האובדן של רכיב היעד (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine, או 3-acetylaconitine) במהלך ניתוח המדגם; ככל ששיעור ההתאוששות גבוה יותר, כך אובדן רכיב היעד נמוך יותר.

4. בדיקת גורם יחיד של TBC מעובד עם יין שעורה הררי

הערה: היחס בין יין שעורה הררי לבין TBC, עובי פרוסת TBC וזמן השריה ישפיעו על המסת רכיבים רעילים יותר (אקוניטין, 3-דאוקסיאקוניטין ו-3-אצטילקוניטין) ב-TBC במהלך עיבוד TBC עם יין שעורה הררי17. מבחן הגורם הבודד ועיצוב Box-Behnken שימשו לחקר ההשפעה של היחס בין יין שעורה הררי ל-TBC, עובי פרוסת TBC וזמן ההשריה.

  1. בצע את מבחן תוספת יין השעורה ההררי (A) על ידי הגדרת חמש קבוצות של בדיקות, כל אחת עם 30 גרם TBC, כאשר כמות יין שעורה הררית היא פי שניים, שלושה, ארבעה, חמישה ושישה מכמות TBC במתכון. זמן ההשריה הוא 12 שעות, והפרוסות בעובי 1.0 ס"מ18.
    הערה: כל קבוצה של אותו מבחן מצב צריכה להיות מעובדת בשלוש קבוצות מקבילות.
  2. בצע את בדיקת זמן ההשריה (B) על ידי הגדרת חמש קבוצות של בדיקות, כל אחת עם 30 גרם TBC. זמני ההשריה הם 12 שעות, 24 שעות, 36 שעות ו-48 שעות. כמות יין השעורה ההררי גדולה פי חמישה מזו של TBC, והפרוסות בעובי 1.0 ס"מ19.
    הערה: כל קבוצה של אותו ניסוי מצב צריכה להיות מעובדת בשלוש קבוצות מקבילות.
  3. בצע את בדיקת עובי החיתוך (C) על ידי הגדרת חמש קבוצות של בדיקות, כל אחת עם 30 גרם TBC. הפרוסות בעובי 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 ו-2.5 ס"מ, זמן ההשריה הוא 24 שעות, וכמות יין השעורה ההררי גדולה פי חמישה מזו של TBC20.
    הערה: כל קבוצה של אותו ניסוי מצב צריכה להיות מעובדת בשלוש קבוצות מקבילות.
  4. שקלול מדויק של מוצרים מעובדים עבור כל קבוצת בדיקה כדי להכין פתרון מדגם בדיקה בהתאם לשלב 1.3. קבע את אזור השיא של כל דגימה על ידי HPLC והשתמש בעקומה הסטנדרטית כדי להעריך את כמויות מד"א ו- DDA. בעקומה הסטנדרטית, y הוא שטח השיא ו- x הוא התוכן. התוכן של מד"א הוא בנזואיל אקוניטין, ותכולת ה-DDAs היא הסכום של אקוניטין, 3-דאוקסיאקוניטין ו-3-אצטילאקוניטין.
  5. השתמש בתכולת ה-DDAs הכוללת ובתכולת מד"א כמדדי הערכה, וקבע את מקדם המשקל של כל מדד הערכה ואת הניקוד הכולל בשיטת האנטרופיה (סעיף 5).
    זהירות: TBC הוא רעיל, ולכן יש לנקוט אמצעי הגנה במהלך העיבוד.

5. שיטת אנטרופיה לחישוב הניקוד הכולל

הערה: אנו משתמשים בנתוני הניסוי של מבחן עובי החיתוך במבחן הגורם היחיד כדוגמה כדי להמחיש בפירוט את תהליך החישוב. אנו משתמשים באזור השיא של הרכיבים בכל מדגם בטבלה משלימה S1 ובעקומה הסטנדרטית בטבלה 2 כדי לחשב את התוכן של מד"א ו- DDAs (ראה טבלה משלימה S2). במשוואה הליניארית, y הוא שטח השיא ו- x הוא התוכן. במחקר זה, MDA רעיל בינוני (benzoylaconitine) שימש כאינדיקטור חיובי, ואת התוכן הכולל של DDAs (aconitine, 3-deoxyaconitine, ו 3-acetylaconitine) עם רעילות גבוהה שימש כאינדיקטור שלילי. התוכן של מד"א הוא בנזואיל אקוניטין, ותכולת ה-DDAs היא הסכום של אקוניטין, 3-דאוקסיאקוניטין ו-3-אצטילאקוניטין. לכל מדגם שני מדדי הערכה: i = 1,2,...,n ו- j = 1,2,... מ21.

  1. השתמש במשוואה (2) כדי לתקנן את התוכן של מד"א22.
    figure-protocol-8803(2)
    כך figure-protocol-8918
    הערה: Xij הוא הערך של מחוון j-th של מדגם i-th. Xij* הוא הערך הסטנדרטי של Xij. לדוגמה, i = 3 ו- j = 1, X31 מייצג את הערך של המחוון הראשון של המדגם השלישי, והוא figure-protocol-9216 הערך הסטנדרטי של המחוון הראשון במדגם השלישי. מוצגים בטבלה משלימה S3. figure-protocol-9391
  2. השתמש במשוואה (3) כדי לתקנן את התוכן הכולל של DDAs23.
    figure-protocol-9588(3)
    figure-protocol-9700
    הערה: כאן, i = 3, j = 2, מייצג את המחוון השני של המדגם השלישי. figure-protocol-9855 הוא הערך הסטנדרטי של המחוון השני במדגם השלישי. figure-protocol-9991 מוצגים בטבלה משלימה S3.
  3. השתמש במשוואות (4) ו- (5) כדי להגדיר את ערך האנטרופיה (Hj) של כל מחוון23.
    1. חשב את ההסתברות של ניסוי j-th תחת מחוון הערכה i-th Pij באמצעות משוואה (4).
      figure-protocol-10385(4)
      למספר 3,
      figure-protocol-10510
      figure-protocol-10603
      הערה: ערכי ההסתברות עבור המחוון הראשון והמחוון השני של המדגם השלישי הם 0.2374 ו- 0.2812, בהתאמה. figure-protocol-10793 מוצגים בטבלה משלימה S3.
    2. חישוב אנטרופיית המידע Hj.
      figure-protocol-10984(5)
      figure-protocol-11097
      figure-protocol-11190
      הערה: H 1 היא האנטרופיה של האינדיקטור הראשון (MDAs) ו-H2 היא האנטרופיה של האינדיקטור השני (DDAs) במבחן עובי החיתוך.
  4. השתמש במשוואה (6) כדי לחשב את משקלי המחוון (Wj)23.
    figure-protocol-11557 (6)
    figure-protocol-11671= 33.3%
    figure-protocol-11771= 66.7%
    הערה: Wjהוא מקדם המשקל של כל מדד. בבדיקת עובי החיתוך, מקדם המשקל של האינדיקטור החיובי (MDAs) והאינדיקטור השלילי (DDAs) הוא 33.3% ו-66.7%, בהתאמה.
  5. השתמש במשוואה (7) כדי לחשב את הניקוד המקיף של המדדים23.
    figure-protocol-12147 (7)
    למספר 3, figure-protocol-12272
    figure-protocol-12365
    הערה: Si הוא הניקוד המקיף של כל מדגם. אנחנו צריכים לקבל את הציון הגבוה ביותר כנקודה המרכזית בעיצוב Box-Behnken. S 1, S 2, S 3, S 4 ו- S5 מוצגים בטבלה משלימה S3.

6. עיצוב Box-Behnken

  1. באמצעות מבחן הגורם היחיד, השתמש בתנאי עם הניקוד המקיף הגבוה ביותר (ראה טבלה 4, טבלה 5, טבלה 6 ואיור 2) כנקודת המרכז של משטח התגובה. השתמש בכמות יין שעורה הררי (A), זמן השריה (B) ועובי פרוסה של TBC (C) כגורמים המשפיעים והניקוד המקיף כערך התגובה24.
    הערה: בהתבסס על נתוני הגורם הבודד בטבלה 4, טבלה 5 וטבלה 6, הניקוד המקיף הגבוה ביותר מחושב באמצעות משוואות (2), (3), (4), (5), (6) ו-(7) בסעיף 5, ומתקבלת הנקודה הטובה ביותר. כמות יין השעורה הייתה גדולה פי חמישה מזו של TBC, זמן ההשריה היה 36 שעות, ועובי החיתוך היה 1.0 ס"מ.

7. שלבי תפעול תוכנת העיצוב Box-Behnken

  1. פתח את התוכנה (ראה טבלת חומרים) ובחר עיצוב חדש | Box-Behnken Design (ראה שלב 5.1; קובץ משלים 1).
    1. הזן את מספר הגורמים המשפיעים והזן את מידע הרמה (שלושה גורמים ברמה שלושה; ראה טבלה 7). התכנון של Box-Behnken מורכב מ-17 ניסויים במחקר זה. לבסוף, לחץ על המשך (ראה שלב 5.2; קובץ משלים 1).
    2. הגדר את הניקוד הכולל (Y) לפי משוואות (2), (3), (4), (5), (6) ו- (7) בסעיף 5 כתגובה. הזן את מספר ערכי התגובה (התמונה מציגה ערך תגובה אחד בלבד) ולחץ על סיום (ראה שלב 5.3; קובץ משלים 1).
    3. מעבדים את ה-TBC עם יין שעורה הררי בהתאם לתוצאות התכנון ומשלימים את הניסוי על בסיס 17 התרחישים המיועדים למשטח התגובה.
    4. הכן את הפתרונות לדוגמה על ידי ביצוע שלב 1.3 וחשב את התוכן הכולל של מד"א ו- DDAs על ידי מערכת HPLC.
    5. חשב את הניקוד המקיף עבור כל קבוצה לפי משוואות (2), (3), (4), (5), (6) ו-(7) בשלב 5, והזן את תוצאות הניקוד (ראה שלב 5.4; קובץ משלים 1).
  2. לחץ על נתח כדי לנתח את פרטי התאריך והדגם (ראה שלב 5.4.1; קובץ משלים 1).
    1. ביצוע תיקוף סטטיסטי של משוואות פולינומיות וניתוח משטחי תגובה המשורטטים בחלקות מודל תלת-ממדיות המתקבלות על ידי התוכנה.
    2. לחץ על ANOVA בתפריט העליון והתבונן בטבלת התוצאות.
  3. לחץ על מיטוב כדי להציג את תנאי התהליך האופטימליים החזויים (ראה שלב 5.4.2; קובץ משלים 1).

8. בדיקת תיקוף

  1. על פי התוצאות החזויות מתכנון משטח התגובה Box-Behnken, בשלב 7.3, לזהות את מצב העיבוד האופטימלי של TBC. הנה, זה כדלקמן: TBC מושרה במשך 24 שעות פי חמישה מכמות יין שעורה הררי, ועובי TBC הוא 1.5 ס"מ. קח את הרמה האופטימלית של גורמים משפיעים כתנאי עיבוד והגדר שלוש קבוצות מקבילות של ניסויים כדי לאמת את יציבות טכנולוגיית העיבוד.

תוצאות

במחקר זה, הדיוק, היציבות, החזרתיות ושחזור הדגימה של TBC הצביעו על כך שהשיטה אפשרית. לארבעת רכיבי המדד ב-TBC היה קשר ליניארי טוב בטווח ריכוז מסוים. כרומטוגרמות אופייניות מוצגות באיור 1. תוצאות בדיקת הדיוק (טבלה 8) הראו כי סטיית התקן היחסית (RSD) של אזורי השיא הייתה 2.56%, 1.49% ו-...

Discussion

כתרופה טיבטית נפוצה עם השפעות רעילות, ההשפעה מחלישת הרעילות של העיבוד חשובה ביותר ליישום הקליני של TBC25. במחקר זה, טכנולוגיית העיבוד של TBC המעובדת עם יין שעורה הררי עברה אופטימיזציה. על ידי סקירת החומרים הפעילים העיקריים והתייחסות להשפעות הפרמקולוגיות של TBC, מצאנו כי לאלקלואיד?...

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה כספית על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '82130113), הקרן למדע פוסט-דוקטורט בסין (מס '2021MD703800), קרן המדע לנוער של מדע וטכנולוגיה, המחלקה במחוז סצ'ואן (מס '2022NSFSC1449), ותוכנית קידום המחקר "מלגות Xinglin" של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (לא. BSH2021009).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AconitineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS000905
3-AcetylaconitineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS010552
3-DeoxyaconitineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS011258
BenzoylaconineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS010300
Circulating water vacuum pumpGongyi City Yuhua Instrument Co., LtdSHZ-DIII
Design-Expert State-East Corporation8.0.6
Electric constant temperature drying ovenShanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd101-3-BS
Electronic analytical balanceShanghai Liangping Instruments Co., Ltd.FA1004
High performance liquid chromatographyShimadzu Enterprise Management (China) Co., Ltdshimadzu 2030
Highland barley riceKangding City, Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture, Sichuan Province20221015
Millipore filterTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltdφ13 0.22 Nylon66
Rotary evaporatorShanghai Yarong Biochemical Instrument FactoryRE-2000A
Starter of liquor-makingAngel Yeast CO., LtdBJ22-104
Ultra pure water systemicMerck Millipore Ltd.Milli-Q
Ultrasonic cleansing machineNingbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., LtdSB-8200 DTS

References

  1. Zhang, J., et al. Study of quality standards for Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 40 (9), 2100-2103 (2018).
  2. Liu, X. F., et al. Study on toxicity reduction and effect preservation of the compatibility of Tibetan medicine Aconitum pendulum Busch and Terminalia chebula Retz. Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica. 13 (3), 69-72 (2022).
  3. Luo, D. S. . Chinese Tibetan herbs. 63, (2007).
  4. Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum Busch and A. flavum Hand-Mazz: A narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. Journal of Ethnopharmacology. 292, 115216 (2022).
  5. Yu, L. Q., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Frontiers in Pharmacology. 13, 938915 (2022).
  6. Zhang, Y., Fu, X. Y. UPLC Simultaneous determination of six esteric alkaloids components in Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 16 (5), 62-65 (2020).
  7. Wang, Y. J., et al. Determination of alkaloid content in different medicinal parts of the folk medicine. Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 32 (8), 1390-1393 (2010).
  8. Shao, C. L., Fu, J. L., Fu, S. X., Ma, H. W., Sun, X. D. Toxicity research and processing methods of Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 10 (2), 32-34 (2014).
  9. Chan, T. Y. K. Aconite poisoning. Clinical Toxicology. 47 (4), 279-285 (2009).
  10. Li, S. L., et al. An insight into current advances on pharmacology, pharmacokinetics, toxicity and detoxification of aconitine. Biomedicine & Pharmacotherapy. 151, 113115 (2022).
  11. Zhao, M. Y. Study on identification and processing attenuation of Tibetan drug Bangna. Southwest Jiaotong University. , (2018).
  12. Tibet Autonomous Region Food and Drug Administration. . Tibetan herbal medicine concoction specification. , 135 (2008).
  13. Abd-El-Aziz, N. M., Hifnawy, M. S., El-Ashmawy, A. A., Lotfy, R. A., Younis, I. Y. Application of Box-Behnken design for optimization of phenolics extraction from Leontodon hispidulus in relation to its antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activities. Scientific Reports. 12 (1), 8829 (2022).
  14. Quan, L., et al. Optimization of processing technology of stir-frying with vinegar of Curcuma Longa Radix by orthogonal design and Box-Behnken design-response surface based on entropy method. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 49 (8), 1823-1828 (2018).
  15. Jia, F. C., et al. Research on the brewing technology of Tibetan traditional barley liquor based on response surface method. Food and Fermentation Industries. 45 (22), 171-178 (2019).
  16. Zhao, X. H., et al. Determination of osthol in different traditional Chinese medicines by HPLC. Chinese Journal of Pharmaceutics. 19 (5), 154-158 (2021).
  17. Feng, Z. G., et al. Processing methods and the underlying detoxification mechanisms for toxic medicinal materials used by ethnic minorities in China: A review. Journal of Ethnopharmacology. 305, 116126 (2023).
  18. Wang, D. M., Lu, Z. J., Wang, Y. H., Zhang, C. S. Applying grading methods of synthesizing multiple guidelines to optimizing alcohol-steam processing technology from Ploygonatum odordatum. Journal of Zhejiang A & F University. 30 (1), 100-106 (2013).
  19. He, N. L., Bao, M. L., Ba, G. N. Study on the best processing technology of Terminalia Decoction soaking iron. Journal of Medicine & Pharmacy of Chinese Minorities. 20 (9), 36-38 (2014).
  20. Liu, C., et al. Optimization of processing technology for Saposhnikoviae Radix by Box-Behnken design-response surface methodology. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 20 (5), 18-21 (2014).
  21. Ferreira, S. L. C., et al. Box-Behnken design: an alternative for the optimization of analytical methods. Analytica Chimica Acta. 597 (2), 179-186 (2007).
  22. Dong, R., Lu, Y., Wang, P. The process optimization of vinegar roasting of Bupleurum chinense by entropy weight method combined with Box-Behnken response surface method and its protective effect on mice liver injury. Science and Technology of Food Industry. 42 (23), 209-217 (2021).
  23. Li, W. J., et al. Analysis on the times of Polygonati Rhizoma steamed by multiple times based on entropy weight and gray relative analysis method. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 36 (11), 6764-6769 (2021).
  24. Huang, B. J., Liu, X. T., Mao, Y. M., Qi, B., Liu, L. Response surface methodology combined with analytic hierarchy process to optimize the processing technology of Custutae semen with wine. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 33 (8), 1890-1894 (2022).
  25. Wang, J., Meng, X. H., Chai, T., Yang, J. L., Shi, Y. P. Diterpenoid alkaloids and one lignan from the roots of Aconitum pendulum Busch. Natural Products and Bioprospecting. 9 (6), 419-423 (2019).
  26. Xie, H. H., et al. Metabolomics study of aconitine and benzoylaconine induced reproductive toxicity in Be Wo cell. Chinese Journal of Analytical Chemistry. 43 (12), 1808-1813 (2015).
  27. Han, Y. F., et al. Optimization of extraction process for Yangyin Runmu granules by Box-Behnken design based on entropy weight method-analytic hierarchy process method. Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy. 39 (7), 896-903 (2022).
  28. Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Clinamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (8), 1838-1842 (2022).
  29. Pan, Y. L. Optimization of stir-baking process of Coix lacryma-Jobi Var.Mayuen Kernel by Box-Behnken response surface methodology. Shandong Chemical Industry. 51 (14), 73-75 (2022).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

195

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved