엔트로피 방법과 결합된 Box-Behnken 디자인을 기반으로 한 Highland Barley Wine을 사용한 Tiebangchui 가공 최적화

요약

본 프로토콜은 엔트로피 방법과 결합된 Box-Behnken 설계 응답 표면을 기반으로 고지대 보리 와인으로 처리된 Tiebangchui의 가공 기술을 최적화하기 위한 효율적인 방법을 설명합니다.

초록

독성 민족 의약품의 가공은 안전한 임상 적용을 위해 매우 중요합니다. 따라서 전통적인 가공의 한계를 해결하고 민족 의약품의 가공 방법을 현대 연구 방법을 사용하여 표준화해야합니다. 본 연구에서는 고지대 보리 와인으로 가공한 Aconitum pendulum Busch의 말린 뿌리인 일반적으로 사용되는 티베트 약재인 Tiebangchui(TBC)의 가공 기술을 최적화하였다. 디에스테르-디테르페노이드 알칼로이드(DDA)(아코니틴, 3-데옥시아코니틴, 3-아세틸아코니틴)와 모노에스테르-디테르페노이드 알칼로이드(MDA)(벤조일라코닌) 함량을 평가 지표로 사용하였으며, 각 평가 지수의 가중치 계수는 엔트로피법으로 결정하였다.

단일 요인 테스트와 Box-Behnken 설계는 고지대 보리 와인과 TBC 간의 비율, TBC의 슬라이스 두께 및 처리 시간의 영향을 조사하는 데 사용되었습니다. 엔트로피 방법에 의해 결정된 각 지수의 객관적인 가중치에 따라 종합 채점을 수행하였다. 고지대 보리 와인을 사용한 TBC의 최적 가공 조건은 다음과 같습니다 : 고지대 보리 와인의 양은 TBC의 5 배, 담금 시간은 24 시간, TBC 두께는 1.5cm입니다. 그 결과 검증 테스트와 예측 값 사이의 상대 표준 편차가 2.55 % 미만이었고 고지대 보리 와인으로 가공 된 TBC의 최적화 된 가공 기술은 간단하고 실현 가능하며 안정적이어서 산업 생산에 대한 참고 자료를 제공 할 수 있습니다.

서문

Aconitum pendulum Busch의 말린 뿌리인 Tiebangchui(TBC)는 잘 알려진 티베트 의학이며 처음에는 고전 티베트 의학 서적 "Four Medical Tantra"^1,2에 기록되었습니다. "중화 인민 공화국 보건부 의약품 기준 (티베트 의학)"에 따르면 TBC는 감기 퇴치, 통증 완화, 바람 완화 및 충격 진정에 효과적이며 일반적으로 클리닉에서 류마티스 관절염 치료에 사용됩니다 ^3,4,5.

TBC는 주로 독성이 강한 디에스테르-디테르페노이드 알칼로이드(DDA)와 중간 정도의 독성이 있는 모노에스테르-디테르페노이드 알칼로이드(MDA)를 포함한 알칼로이드를 함유하고 있습니다.^6,7,8. 이러한 화학 성분은 약효가 있는 활성 성분이지만 독성이 있습니다. 가장 유명한 활성 및 독성 성분 중 하나 인 아코 니틴은 1mg을 초과하면 중독을 일으킨다⁹. 따라서 TBC의 부적절하거나 과도한 사용은 중독 및 사망을 초래할 수 있으며, TBC의 독성 감쇠 및 효능 예약은 안전한 임상 적용을 위해 매우 중요하다^10,11.

처리는 TBC를 해독하는 효과적인 방법입니다. 고대 티베트 의학 서적에 따르면 고지대 보리 와인으로 가공하는 것은 독성을 약화시키고 TBC의 효능을 보존하는 효율적인 방법입니다. TBC를 고원 보리 와인에 담그고 하룻밤 동안 저장하고 건조시킨 다음 의약품에 첨가한다¹². 그러나 특정 처리 기술 및 잠재적 영향 요인은 거의 보고되지 않으며 전통적인 처리 프로세스는 종종 경험에 의존하고 표준화된 방법이 부족합니다. 따라서 가공 공정을 최적화하고 표준화하기 위한 현대의 과학 및 기술 방법이 필요합니다.

Box-Behnken 설계 방법은 2차 다항식 피팅을 통해 다양한 요인 간의 상호 작용과 종합 점수에 미치는 영향을 조사하는 데 사용됩니다. 이러한 설계는 최적 조건의 직관적인 관찰을 가능하게 하며, 약국(¹³)의 분야에서 널리 사용되어 왔다. 예를 들어, 엔트로피 방법을 기반으로 한 Box-Behnken 설계 방법은 Curcuma Longa Radix¹⁴의 식초로 볶는 가공 기술을 성공적으로 최적화했습니다. 본 연구에서는 엔트로피 방법과 결합된 Box-Behnken 반응 표면 실험 설계를 사용하여 고지대 보리 와인으로 가공된 TBC의 가공 기술을 최적화했습니다. 최적화된 가공 기술은 품질 관리와 안전한 임상 사용을 보장할 것으로 기대됩니다.

프로토콜

본 연구에서는 고지대 보리 와인으로 가공된 TBC의 가공 기술을 엔트로피 방법과 결합된 Box-Behnken 설계로 최적화하였다. DDA와 MDA 함량을 평가 지표로 사용하였으며, 각 평가 지수의 가중치 계수는 엔트로피 방식으로 결정하였다.

1. 실험 준비

1. 고원 보리 와인을 준비하십시오¹⁵.
   1. 검은 고원 보리 쌀 500.00g을 취해 물의 5 배를 더한다. 남은 물이 흡수될 때까지(~2시간) 밥을 짓습니다. 그것을 붓고 온도가 37 °C로 떨어질 때까지 기다렸다가 Jiuqu 4g ( 재료 표 참조)을 넣고 잘 섞은 다음 캔을 밀봉하고 용기를 면봉으로 싸서 7 일 동안 끓입니다.
   2. 7일째 되는 날에 물 300mL를 넣고 다시 밀봉한다. 8일째 되는 날부터 와인을 꺼내기 시작하고 그 후 물 300mL로 교체합니다. 밀봉하여 1 일 동안 발효시킨 후 와인을 마시고 다시 물 300mL를 넣으십시오. 이 과정을 세 번 반복하고 주류를 결합하십시오.
   3. 끓으면 불을 약불로 줄이고 남은 물이 흡수될 때까지 계속 끓인다.
2. 가공 제품을 준비하려면 용기에 TBC를 정확하게 계량하고 고지대 보리 와인을 넣고 1 일 동안 담가 두십시오. 그런 다음 항온 전기 건조 오븐에서 건조시킵니다.
   알림: 건조 온도는 알칼로이드 조성의 변화를 피하기 위해 40°C 미만이어야 합니다.
3. 테스트 샘플 용액을 준비합니다.
   1. 원뿔형 플라스크에서 TBC 가공 제품 분말(2g)의 무게를 정확하게 측정하고 40% 암모니아 용액을 첨가하고 이소프로판올-에틸 아세테이트(1:1) 혼합 용매(50mL)(전력: 200W, 주파수: 40kHz, 온도: 40°C)를 30분 동안 수행합니다.
      알림: 40% 암모니아 용액을 준비하려면 암모니아 40mL를 100mL 용량 플라스크에 옮긴 다음 순수한 물로 희석합니다.
   2. 이소프로판올-에틸 아세테이트 혼합물(1:1 v/v)을 추가하여 추출된 용액을 원래 무게로 조정합니다.
   3. 추출된 용액(25 mL)을 건조될 때까지 감압 하에서 용매의 회수를 위해 둥근 바닥 플라스크에 정확하게 옮긴다.
   4. 마지막으로, 단계 1.3.3으로부터의 잔류물을 용해시키기 위해 0.05% 염산-메탄올 용액을 5 mL 부피 플라스크에 옮기고, 0.05% 메탄올 염산염 용액으로 희석한다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 시스템에 주입하기 전에 0.22μm 미세 다공성 멤브레인 필터를 통해 용액을 여과합니다.
      참고: 0.05mL 부피 플라스크에 염산 0.05mL를 첨가하여 100% 메탄올 염산염을 준비한 다음 메탄올로 희석합니다.
4. 벤조일라코닌 5.18 mg, 아코니틴 13.13 mg, 3-데옥시아코니틴 10.05 mg, 3-아세틸아코니틴 10.09 mg을 정확하게 칭량하여 표준용액을 준비한 후, 5mL 용량플라스크에 개별적으로 고형물을 넣는다. 0.05 % 메탄올 염산염 용액으로 희석한다.

2. 크로마토그래피 조건

1. HPLC에 대해 표 1 과 같이 크로마토그래피 조건을 설정합니다. 사용된 기기에 대한 자세한 내용은 재료 표에 나와 있습니다.

3. 시스템 적응성 테스트

1. 선형성 범위
   참고: 먼저 HPLC를 사용하여 샘플에서 벤조일라코니틴, 아코니틴, 3-데옥시아코니틴 및 3-아세틸아코니틴의 피크 면적을 측정한 다음 알려진 표준 용액 농도의 피크 면적을 무작위로 결정했습니다. 다음으로, 두 피크 면적(시료 용액 및 표준액)의 차이를 비교하여 서로 다른 시료에서 벤조일아코니틴, 아코니틴, 3-데옥시아코니틴 및 3-아세틸아코니틴의 농도를 추정한 다음 표준 용액을 선형 범위로 조정하여 시료의 농도를 곡선에 포함시켰습니다. 표준 곡선 농도를 표 2에 나타내었다.
   1. 1.036 mg/mL, 0.518 mg/mL, 0.2072 mg/mL, 0.1036 mg/mL 및 0.0518 mg/mL를 함유하는 벤조일아코니틴 기준 용액을 준비합니다.
   2. 1.313 mg/mL, 0.5252 mg/mL, 0.2626 mg/mL, 0.1313 mg/mL 및 0.05252 mg/mL를 함유하는 아코니틴 참조 용액을 준비합니다.
   3. 1.005 mg/mL, 0.5025 mg/mL, 0.201 mg/mL, 0.1005 mg/mL 및 0.402 mg/mL를 함유하는 3-데옥시아코니틴 참조 용액을 준비합니다.
   4. 0.2018 mg/mL, 0.1009 mg/mL, 0.04036 mg/mL, 0.02018 mg/mL 및 0.01009 mg/mL를 함유하는 3-아세틸아코니틴 기준 용액을 준비합니다.
   5. 주입 농도에 대한 피크 면적을 표시하여 각 화합물의 선형성을 조사합니다.
2. 정밀 테스트를 수행하려면 각 기준 용액 10μL을 매일 6회 HPLC 시스템에 주입하고 2.1단계에서 설명한 것과 동일한 HPLC 조건을 사용하여 샘플을 실행하여 각 구성 요소의 피크 면적을 기록합니다.
3. 1.3단계를 통해 제조된 시료 용액 10μL를 주입하여 일중 안정성 테스트를 수행하고 0시간, 2시간, 4시간, 8시간, 14시간, 12시간 및 24시간¹⁶일 후의 피크 면적을 확인합니다.
4. 1.3단계에 따라 동일한 TBC 배치의 6개 샘플을 채취하여 재현성 테스트를 수행하여 테스트 샘플 솔루션을 준비합니다. 각 샘플 10μL을 HPLC 시스템에 주입하고 2.1단계에 설명된 대로 샘플을 실행합니다.
5. 복구 테스트를 수행하여 방법의 정확도를 평가합니다. 시험액에 각 지표성분(벤조일아코니틴, 아코니틴, 3-데옥시아코니틴, 3-아세틸아코니틴)의 표준용액을 100% 첨가하여 각각 회수율을 계산한다. 예를 들면, 벤조일아코니틴의 내용이 TBC 표본에 있는 0.1524 mg/mL이기 때문에, 정확하게 벤조일아코니틴 표준의 0.1524 mg의 무게를 측정하고 TBC 표본에 추가하고, 그 후에 단계 1.3에 따라 시험 표본 해결책을 준비하십시오. 2.1단계에서 설명한 것과 동일한 HPLC 조건으로 이러한 샘플을 실행합니다. 방정식 (1)을 사용하여 회수율을 계산합니다.
   (1개)
   여기서, A는 시료용액에서 측정하고자 하는 성분(벤조일아코니틴, 아코니틴, 3-데옥시아코니틴, 또는 3-아세틸아코니틴)의 양이고, B는 첨가된 표준물질(벤조일라코니틴, 아코니틴, 3-데옥시아코니틴, 또는 3-아세틸아코니틴)의 양이며, C는 표준용액 및 시료용액을 포함하는 용액의 측정값이다(표 3 참조)). 위의 단계를 수행하기 위한 크로마토그래피 조건에 대해서는 2.1단계를 참조하십시오. 회수율은 샘플 분석 중 표적 성분(벤조일아코니틴, 아코니틴, 3-데옥시아코니틴 또는 3-아세틸아코니틴)의 손실 정도를 반영합니다. 회수율이 높을수록 대상 성분의 손실이 낮아집니다.

4. 고지대 보리 와인으로 가공된 TBC의 단일 요인 테스트

참고: 고지대 보리 와인과 TBC의 비율, TBC의 슬라이스 두께 및 담금 시간은 고지대 보리 와인으로 가공된 TBC 동안 TBC에서 더 많은 독성 성분(아코니틴, 3-데옥시아코니틴 및 3-아세틸아코니틴)의 용해에 영향을 미칩니다¹⁷. 단일 요인 테스트 및 Box-Behnken 설계를 사용하여 고지대 보리 와인과 TBC의 비율, TBC의 슬라이스 두께 및 담금 시간의 영향을 조사했습니다.

1. 고지대 보리 와인 첨가 테스트(A)를 각각 30g의 TBC로 설정하여 5개의 테스트 그룹을 설정하여 수행하며, 여기서 고지대 보리 와인의 양은 레시피에서 TBC 양의 2배, 3배, 4배, 5배 및 6배입니다. 담그는 시간은 12 시간이고 슬라이스는 1.0cm 두께¹⁸입니다.
   참고: 동일한 조건 테스트의 각 그룹은 세 개의 병렬 그룹으로 처리되어야 합니다.
2. 각각 30g의 TBC가 포함된 5개의 테스트 그룹을 설정하여 담금 시간 테스트(B)를 수행합니다. 담그는 시간은 12시간, 24시간, 36시간, 48시간입니다. 고지대 보리 와인의 양은 TBC의 5 배이며 슬라이스는 두께^{1.0cm입니다 19}.
   참고: 동일한 조건 실험의 각 그룹은 세 개의 병렬 그룹으로 처리되어야 합니다.
3. 각각 30g의 TBC를 사용하여 5개의 테스트 그룹을 설정하여 슬라이싱 두께 테스트(C)를 수행합니다. 슬라이스는 두께가 0.5cm, 1.0cm, 1.5cm, 2.0cm, 담금질 시간은 24시간, 고원 보리 와인의 양은 TBC²⁰의 5배입니다.
   참고: 동일한 조건 실험의 각 그룹은 세 개의 병렬 그룹으로 처리되어야 합니다.
4. 각 테스트 그룹에 대해 가공 된 제품을 정확하게 측정하여 1.3 단계에 따라 테스트 샘플 용액을 준비합니다. HPLC로 각 샘플의 피크 면적을 측정하고 표준 곡선을 사용하여 MDA 및 DDA의 양을 추정합니다. 표준 곡선에서 y는 피크 면적이고 x는 함량입니다. MDAs의 함량은 벤조일 아코니틴이고, DDAs의 함량은 아코니틴, 3-데옥시아코니틴, 3-아세틸아코니틴의 합이다.
5. DDA의 전체 내용과 MDA의 내용을 평가 지표로 사용하고, 엔트로피 방법(섹션 5)을 통해 각 평가 지수의 가중치 계수와 종합 점수를 결정합니다.
   주의 : TBC는 독성이 있으므로 가공 중에 보호 조치를 취해야 합니다.

5. 종합 점수를 계산하는 엔트로피 방법

참고: 계산 과정을 자세히 설명하기 위해 단일 요인 테스트에서 슬라이싱 두께 테스트의 실험 데이터를 예로 사용합니다. 보충 표 S1의 각 샘플에 있는 성분의 피크 면적과 표 2의 표준 곡선을 사용하여 MDA 및 DDA의 함량을 계산합니다(보충 표 S2 참조). 선형 방정식에서 y는 피크 면적이고 x는 함량입니다. 본 연구에서는 양성 지표로 중등도 독성의 MDA(벤조일아코니틴)를 사용하였고, 독성이 높은 DDA(아코니틴, 3-데옥시아코니틴, 3-아세틸아코니틴)의 총 함량을 음성 지표로 사용하였다. MDAs의 함량은 벤조일 아코니틴이고, DDAs의 함량은 아코니틴, 3-데옥시아코니틴, 3-아세틸아코니틴의 합이다. 각 샘플에는 i = 1,2,...,n 및 j = 1,2의 두 가지 평가 지표가 있습니다,... m²¹.

1. 방정식 (2)를 사용하여 MDA²²의 내용을 표준화합니다.
   (2개)
   따라서
   참고: Xij는 i번째 샘플의 j번째 표시기 값입니다. Xij*는 Xij의 표준화된 값입니다. 예를 들어, i=3이고 j=1이고, _X31은 제3 샘플의 제1 지시약의 값을 나타내고, 제3 샘플의 제1 지시약의 표준화 값을 나타낸다. 보충표 S3에 나타내었다.
2. 방정식 (3)을 사용하여 DDA의 전체 내용을 표준화한다⁽²³).
   (3)
   
   참고: 여기서, i=3, j=2는 세 번째 샘플의 두 번째 지시자를 나타낸다. 는 세 번째 표본에서 두 번째 지표의 표준화된 값입니다. 보충표 S3에 나와 있습니다.
3. 식 (4) 및 (5)를 사용하여 각 인디케이터(²³)의 엔트로피 값(Hj)을 정의한다.
   1. 수학식 4를 이용하여 i번째 평가지표 _Pij 하에서 j번째 시행 확률을 계산한다.
      (4개)
      3번은
      
      
      참고: 세 번째 표본의 첫 번째 지표와 두 번째 지표의 확률 값은 각각 0.2374와 0.2812입니다. 보충표 S3에 나와 있습니다.
   2. 정보 엔트로피 _Hj를 계산합니다.
      (5개)
      
      
      참고: H ₁은 슬라이싱 두께 테스트에서 첫 번째 표시기(MDA)의 엔트로피이고 H₂는 두 번째 표시기(DDA)의 엔트로피입니다.
4. 방정식 (6)을 사용하여 지표 가중치(Wj)²³를 계산합니다.
   (6개)
   = 33.3%
   = 66.7%
   참고: _Wj는 각 지표의 가중치 계수입니다. 슬라이싱 두께 시험에서 포지티브 인디케이터(MDA)와 네거티브 인디케이터(DDA)의 중량 계수는 각각 33.3%와 66.7%입니다.
5. 수학식 7을 사용하여 지표²³의 종합 점수를 계산한다.
   (7)
   3번은
   
   참고: Si는 각 샘플의 종합 점수입니다. Box-Behnken 설계의 중심점으로 가장 높은 점수를 얻어야 합니다. S1, _S2, S3, _S4, 및 _S5는 보충표 S3에 나타내었다.

6. Box-Behnken 디자인

1. 단일 요인 검정을 통해 종합 점수가 가장 높은 조건(표 4, 표 5, 표 6 및 그림 2 참조)을 반응 표면의 중심점으로 사용합니다. 고지대 보리 와인의 양(A), 담금 시간(B), TBC의 슬라이스 두께(C)를 영향 요인으로 사용하고 종합 점수를 응답 값²⁴로 사용합니다.
   참고: 표 4, 표 5, 표 6의 단일 요인 데이터를 기반으로 섹션 5의 방정식 (2), (3), (4), (5), (6), (7)에 의해 가장 높은 종합 점수를 계산하고 가장 좋은 점수를 얻습니다. 고지대 보리 와인의 양은 TBC의 5 배, 담금 시간은 36 시간, 슬라이스 두께는 1.0cm였다.

7. Box-Behnken 설계 소프트웨어 작동 단계

1. 소프트웨어를 열고( 재료 표 참조) New Design | Box-Behnken Design (5.1단계; 보충 파일 1).
   1. 영향 요인의 개수를 입력하고 레벨 정보(3단계-3단계, 표 7 참조)를 입력합니다. Box-Behnken 설계는 이 연구에서 17개의 실험으로 구성됩니다. 마지막으로 계속 을 클릭합니다(5.2단계; 보충 파일 1).
   2. 섹션 5의 방정식 (2), (3), (4), (5), (6), (7)에 의한 종합 채점(Y)을 응답으로 설정합니다. 응답 값의 수를 입력하고(이미지에는 하나의 응답 값만 표시됨) 마침 을 클릭합니다(5.3단계 참조; 보충 파일 1).
   3. 설계 결과에 따라 고지대 보리 와인으로 TBC를 처리하고 반응 표면을 위해 설계된 17개의 시나리오를 기반으로 실험을 완료합니다.
   4. 1.3단계에 따라 샘플 용액을 준비하고 HPLC 시스템에 의해 MDA 및 DDA의 총 함량을 계산합니다.
   5. 5단계에서 수학식 (2), (3), (4), (5), (6), (7)에 의해 각 그룹의 종합 점수를 계산하고 점수 결과를 입력합니다(단계 5.4; 보충 파일 1).
2. 분석을 클릭하여 날짜 및 모델 정보를 분석합니다(단계 5.4.1; 보충 파일 1).
   1. 다항식 방정식의 통계적 검증과 소프트웨어에서 얻은 3D 모델 플롯에 표시된 응답 표면 분석을 수행합니다.
   2. 상단 메뉴에서 ANOVA 를 클릭하고 결과 테이블을 관찰합니다.
3. 최적화를 클릭하여 예측된 최적 공정 조건을 확인합니다(단계 5.4.2; 보충 파일 1).

8. 검증 테스트

1. Box-Behnken 반응 표면 설계로부터 예측된 결과에 따라, 7.3 단계에서 TBC의 최적 처리 조건을 확인한다. 여기서, 그것은 다음과 같습니다 : TBC는 고지대 보리 와인의 5 배의 양으로 24 시간 동안 담가 두며, TBC의 두께는 1.5cm입니다. 영향 요인의 최적 수준을 처리 조건으로 삼고 처리 기술의 안정성을 검증하기 위해 세 가지 병렬 실험 세트를 설정합니다.

결과

이 연구에서 TBC의 정밀도, 안정성, 반복성 및 샘플 회수율은 이 방법이 실현 가능하다는 것을 나타냅니다. TBC의 4가지 지수 성분은 특정 농도 범위 내에서 양호한 선형 관계를 가졌다. 일반적인 크로마토그램은 그림 1에 나와 있습니다. 정밀도 시험 결과(표 8)는 피크 면적의 상대 표준편차(RSD)가 벤조일라코닌, 아코니틴, 3-데옥시아코니틴에 대해 각각 2.56%, 1.49%, 2...

토론

일반적으로 사용되는 독성 효과가 있는 티베트 의약품으로서, 가공의 독성 감쇠 효과는 TBC의 임상 적용에 매우 중요하다²⁵. 본 연구에서는 고지대 보리 와인으로 가공된 TBC의 가공 기술을 최적화하였다. 주요활성성분을 검토하고 TBC의 약리학적 효과를 관련시킴으로써, TBC 알칼로이드가 항염 및 진통 효과가 있으며 류마티스 관절염 치료에 사용될 수 있음을 발견하였다. 이 연구?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aconitine	Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd	PS000905
3-Acetylaconitine	Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd	PS010552
3-Deoxyaconitine	Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd	PS011258
Benzoylaconine	Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd	PS010300
Circulating water vacuum pump	Gongyi City Yuhua Instrument Co., Ltd	SHZ-DIII
Design-Expert	State-East Corporation	8.0.6
Electric constant temperature drying oven	Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd	101-3-BS
Electronic analytical balance	Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd.	FA1004
High performance liquid chromatography	Shimadzu Enterprise Management (China) Co., Ltd	shimadzu 2030
Highland barley rice	Kangding City, Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture, Sichuan Province	20221015
Millipore filter	Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd	φ13 0.22 Nylon66
Rotary evaporator	Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory	RE-2000A
Starter of liquor-making	Angel Yeast CO., Ltd	BJ22-104
Ultra pure water systemic	Merck Millipore Ltd.	Milli-Q
Ultrasonic cleansing machine	Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd	SB-8200 DTS