JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מתאר את בדיקת ההזנה המחייבת להעריך את ההשפעה הרעילה, פוטנציאלית, של פיטוכימיקל על זחלי החרקים הלפידופטרניים. זוהי בדיקה ביולוגית של חרקים בעלת יכולת הרחבה גבוהה, שקל לייעל את המינון התת-קטלני והקטלני, את פעילות ההרתעה ואת ההשפעה הפיזיולוגית. זה יכול לשמש להקרנת קוטלי חרקים ידידותיים לסביבה.

Abstract

Helicoverpa armigera, חרק lepidopteran, הוא מזיק polyphagous עם תפוצה עולמית. חרק אוכל עשב זה מהווה איום על הצמחים ועל התפוקה החקלאית. בתגובה, צמחים מייצרים מספר פיטוכימיקלים המשפיעים לרעה על גדילתו והישרדותו של החרק. פרוטוקול זה מדגים שיטת בדיקת הזנה מחייבת להערכת ההשפעה של פיטוכימיקל (קוורצטין) על גדילה, התפתחות והישרדות של חרקים. בתנאים מבוקרים, היילודים נשמרו עד הכוכב השני בתזונה מלאכותית מוגדרת מראש. זחלי הכוכב השני הורשו להיזון מתזונה מלאכותית המכילה קוורצטין במשך 10 ימים. משקל גופם של החרקים, שלב התפתחותם, משקלם ותמותתם תועדו בימים חלופיים. השינוי במשקל הגוף, ההבדל בדפוס ההזנה ופנוטיפים התפתחותיים הוערכו לאורך זמן הבדיקה. בדיקת האכלת החובה המתוארת מדמה מצב טבעי של בליעה וניתן להגדיל אותה למספר רב של חרקים. הוא מאפשר לנתח את השפעת הפיטוכימיקלים על דינמיקת הגדילה, המעבר ההתפתחותי והכושר הכללי של H. armigera. יתר על כן, מערך זה יכול לשמש גם להערכת שינויים בפרמטרים תזונתיים ובתהליכים פיזיולוגיים של מערכת העיכול. מאמר זה מספק מתודולוגיה מפורטת למערכות בדיקת הזנה, שעשויות להיות לה יישומים במחקרים טוקסיקולוגיים, סינון מולקולות קוטלי חרקים והבנת השפעות כימיות באינטראקציות בין צמחים לחרקים.

Introduction

הגורמים הביוטיים המשפיעים על פריון היבול הם בעיקר גורמים פתוגניים ומזיקים. מספר חרקים מזיקים גורמים ל-15% עד 35% מאובדן היבול החקלאי ומשפיעים על שיטות קיימות כלכלית1. חרקים השייכים למסדרים Coleoptera, Hemiptera, ו- Lepidoptera הם המסדר העיקרי של מזיקים הרסניים. הטבע המסתגל מאוד של הסביבה הועיל לפידופטרנים בפיתוח מספר מנגנוני הישרדות. בקרב חרקים לפידופטרניים, תולעת צמר גפן (Helicoverpa armigera) יכולה להיזון מכ-180 גידולים שונים ולגרום נזק משמעותי לרקמות הרבייה שלהם2. ברחבי העולם, התפשטות H. armigera גרמה להפסד של כ -5 מיליארד דולר3. כותנה, חומוס, אפונת יונים, עגבניות, חמניות וגידולים אחרים הם המארחים של H. armigera. הוא משלים את מחזור החיים שלו בחלקים שונים של צמחים פונדקאים. ביצים המוטלות על ידי נקבות עש בוקעות על העלים, ולאחר מכן הן ניזונות מרקמות צמחיות בשלבי הזחל. שלב הזחל הוא ההרסני ביותר בשל אופיו הרעב והסתגלני מאוד 4,5. H. armigera מראה תפוצה גלובלית ופלישה לטריטוריות חדשות בשל תכונותיו המדהימות, כגון פוליפגיה, יכולות נדידה מצוינות, פריון גבוה יותר, דיאפאוזה חזקה, והופעת עמידות לאסטרטגיות קיימות להדברת חרקים6.

מולקולות כימיות מגוונות מטרפנים, פלבנואידים, אלקלואידים, פוליפנולים, גלוקוזידים ציאנוגניים ורבים אחרים נמצאים בשימוש נרחב להדברת התפשטות H. armigera 7. עם זאת, יישום תכוף של מולקולות כימיות מקנה השפעות שליליות על הסביבה ובריאות האדם עקב רכישת שאריות שלהם. כמו כן, הם מראים השפעה מזיקה על טורפים מזיקים שונים, וכתוצאה מכך חוסר איזון אקולוגי 8,9. לכן, יש צורך לחקור אפשרויות בטוחות וידידותיות לסביבה עבור מולקולות כימיות של הדברה.

מולקולות קוטלי חרקים טבעיים המיוצרים על ידי צמחים (פיטוכימיקלים) יכולות לשמש כחלופה מבטיחה לחומרי הדברה כימיים. פיטוכימיקלים אלה כוללים מטבוליטים שניוניים שונים השייכים למחלקות אלקלואידים, טרפנואידים ופנולים 7,10. קוורצטין הוא אחד הפלבנואידים (תרכובת פנולית) הנפוצים ביותר בדגנים, ירקות, פירות ועלים שונים. הוא מראה הרתעת האכלה ופעילות קוטלת חרקים נגד חרקים; כמו כן, הוא אינו מזיק לאויבים טבעיים של מזיקים11,12. לפיכך, פרוטוקול זה מדגים את בדיקת ההזנה באמצעות קוורצטין כדי להעריך את השפעתו הרעילה על H. armigera.

שיטות ביו-אסאי שונות פותחו כדי להעריך את ההשפעה של מולקולות טבעיות וסינתטיות על דפוסי ההזנה, הגדילה, ההתפתחות וההתנהגות של חרקים13. שיטות נפוצות כוללות את בדיקת דיסק העלים, מבחן האכלת בחירה, בדיקת הזנה טיפתית, בדיקת מגע, בדיקת כיסוי דיאטה ובדיקת האכלה חובה13,14. שיטות אלה מסווגות בהתבסס על האופן שבו חומרי הדברה מיושמים על חרקים. בדיקת האכלה מחייבת היא אחת השיטות הנפוצות, הרגישות, הפשוטות והסתגלות ביותר לבדיקת קוטלי חרקים סבירים והמינון הקטלני שלהם14. בבדיקת הזנה מחייבת, המולקולה המעניינת מעורבבת עם תזונה מלאכותית. זה מספק עקביות ושליטה על הרכב הדיאטה, יצירת תוצאות חזקות לשחזור. משתנים חשובים המשפיעים על בדיקות האכלה הם השלב ההתפתחותי של החרק, בחירת קוטל החרקים, גורמים סביבתיים וגודל המדגם. משך הבדיקה, מרווח בין שתי הקלטות נתונים, תדירות וכמות התזונה המואכלת, בריאות החרקים ומיומנות הטיפול של המפעילים יכולים גם הם להשפיע על תוצאות בדיקות האכלה14,15.

מחקר זה נועד להדגים את בדיקת ההזנה המחייבת כדי להעריך את ההשפעה של קוורצטין על הישרדות וכושר של H. armigera . הערכה של פרמטרים שונים, כגון משקל גוף חרקים, שיעור תמותה ופגמים התפתחותיים, תספק תובנות לגבי ההשפעות קוטלי החרקים של קוורצטין. בינתיים, מדידת פרמטרים תזונתיים, כולל יעילות ההמרה של מזון שנבלע (ECI), יעילות ההמרה של מזון מעוכל (ECD) ויכולת עיכול משוערת (AD), תדגיש את התכונות נוגדות ההזנה של קוורצטין.

Protocol

זחלי H. armigera נרכשו מ- ICAR-National Bureau of Agricultural Insect Resources (NBAIR), בנגלור, הודו. בסך הכל נעשה שימוש ב-21 זחלי אינסטאר שניים במחקר הנוכחי.

1. הכנת תזונה מלאכותית מבוססת חומוס

הערה: רשימת המרכיבים הדרושים להכנת תזונה מלאכותית מוזכרת בטבלה 1.

  1. שקלו את כל השברים בנפרד בכד, כמפורט בטבלה 1, והכינו תערובת הומוגנית באמצעות מרית/מערבב מגנטי.
  2. מרתיחים את מקטע C בטמפרטורה של כ-100°C במיקרוגל למשך 5 דקות, מוסיפים למקטע A ומערבבים היטב.
  3. לאחר ערבוב יסודי, הניחו למקטע המעורב להתקרר מעט לפני הוספת חלק B (חלק B מכיל רכיבי חום-שבר).
  4. יוצקים לתוך צלחת פטרי שקופה, פוליסטירן, 150 מ"מ x 150 מ"מ.

2. הכנת תזונה מלאכותית המכילה קוורצטין

  1. שקלו את הכמות המתאימה (1,000 ppm) של קוורצטין הידרט (ראו טבלת חומרים) והמיסו כראוי בנפח המינימלי של ממיסים אורגניים, כגון אתנול (2 מ"ג/מ"ל), דימתיל סולפוקסיד (DMSO; 30 מ"ג/מ"ל) או דימתיל פורממיד (DMF). כאן, DMSO משמש להמסת קוורצטין.
  2. הוסיפו קוורצטין מומס למקטע B, ולאחר מכן הוסיפו אותו לתערובת של שברים A ו-C (נפח המים שהופחת מחלק B שווה לנפח ה-DMSO שנוסף).
  3. הוסיפו כמות שווה של ממס אורגני המשמש להמסת קוורצטין לדיאטת הבקרה.
    הערה: איור 1 מראה את הייצוג הסכמטי של הכנת דיאטות מלאכותיות המכילות קוורצטין.

3. גידול ותחזוקה של תרבות H. armigera

הערה: יש להשתמש בחומרים מנוקים ומעוקרים כראוי לגידול חרקים ותחזוקתם. טפל בחרקים בזהירות על ידי ביצוע כל נוהלי ההפעלה הסטנדרטיים הקשורים לסטריליות ובטיחות 16,17,18.

  1. שמור ביצים H . armigera בתא הרבייה (צנצנת פלסטיק מכוסה בד מוסלין) עם תנאים נשמרים, כמתואר בשלב 3.3. לאחר מכן, העבירו בעדינות יילודים חדשים באמצעות מברשת צבע עדינה על תזונה מלאכותית טרייה המבוססת על חומוס.
  2. השתמשו בתזונה מלאכותית לגידול הזחלים, וב-20% (w/v) תמיסת סוכרוז עם מולטי-ויטמין 1% (w/v) (ראו טבלת חומרים) לעשים בוגרים19,20.
    הערה: מכיוון שזחלי אינסטאר שלישי ומעלה של H. armigera מראים נטייה קניבליסטית, יש צורך לגדל כל זחל בבקבוקון נפרד.
  3. שמור על הטמפרטורה ב 25 ± 1 °C (75 °F) ולחות יחסית ב 70% בחדר גידול חרקים, עם 16 שעות אור: 8 שעות כהה photoperiod21.
  4. לגדל דור אחד של חרקים במעבדה עבור הומוגניות ולאחר מכן להשתמש בו עבור בדיקת האכלה.
  5. לחלופין, להגדיל את הטמפרטורה של חדר תרבית חרקים ל 28 °C כדי להאיץ את הצמיחה של זחלים וגלמים22.

4. הגדרה לבדיקת האכלה

  1. אספו זחלי אינסטאר של 21 שניות לכל סט (בקרה וטיפול) והרחיקו אותם מהתזונה, למשך כ-1-3 שעות.
  2. חתכו את התזונה המכילה קוורצטין לחתיכות קטנות, רשמו את משקל התזונה שניתנה ואת גוף החרק, והעבירו בזהירות את החרקים לבקבוקוני תרבית. אפשרו לחרקים להיזון מהתזונה המתאימה.
    הערה: יש להתייחס אליו כיום 0 של בדיקת ההזנה.
  3. רשום את משקל גוף החרק, תזונה נתונה, תזונה שלא נאכלה ופראס בימים חלופיים (ימים 2, 4, 6, 8 ו-10) עד היום העשירי לבדיקה.
  4. לאחר היום ה-10, דאגו שהם ניזונים מהתזונה שלהם כדי לצפות בשינויים התפתחותיים ומורפולוגיים נוספים.
    הערה: השינויים ההתפתחותיים באמצעות: (1) מתווכי זחל-גולם, כגון חצי הגוף האחורי של הגלמים עם כתמי ציפורן הזחל, קפסולת ראש ורגלי בית החזה; (2) גלמים בעלי גוף מושחר לחלוטין; (3) גלמים קטנים עם התכווצות הגוף; (4) גולם-עש ביניים עם עור הגולם הישן. שינויים מורפולוגיים כוללים בוגרים של עש פגום עם גוף חריג, כנפיים מעוותות ורגליים משותפות. שינויים אלה מושווים לאחר מכן לחרקים הניזונים מתזונת הביקורת.
  5. יש להקפיא את החרקים ביום ה-10 אם אין צורך בחקר פגמים התפתחותיים ומורפולוגיים.
    הערה: לפני הקפאת הזחלים, הם צריכים להיות משוללים של הדיאטה לפחות 3 שעות כדי להסיר דיאטה שיורית ממערכת העיכול.

5. הקלטה וניתוח נתונים

  1. בתוכנת GraphPad Prism (ראה טבלת חומרים), בחר טבלת נתונים XY מתיבת הדו-שיח "ברוכים הבאים או טבלה חדשה", ובטבלה זו הזן את מספר החרקים משכפל ערכים זה לצד זה בעמודות המשנה. לאחר מכן, תן את שם הכותרת לציר X כמספר הימים, ובקבוצות A ו- B, תן את שם הכותרת כטיפול בקרה וקוורצטין, בהתאמה. שים את משקל הגוף של כל חרק תחת שליטה וטיפול כדי ליצור את גרף משקל הגוף.
    הערה: הניתוח ב- GraphPad עשוי להשתנות בהתאם לגודל המדגם ומספר הטיפולים.
  2. השווה את משקל גוף החרק בין קבוצת הביקורת וקבוצת הטיפול באמצעות מבחן t של תלמיד (α = 0.05).
  3. ספרו את הזחלים והגלמים החיים והמתים ביום ה-10 כדי לשרטט עקומת קפלן-מאייר לאחוזי הישרדות באמצעות תוכנת הגרפים.
  4. ספרו את מספר הגלמים וחשבו את אחוז הגלמים באמצעות הנוסחה הנתונה:
  5. אחוז הגור (%) = (מספר הגלמים שנוצרו/המספר הכולל של הזחלים) x 100
  6. השווה את התפתחות הזחלים במונחים של מדדים תזונתיים23 באמצעות הנוסחאות הבאות, ECI (%) = (עלייה במשקל הזחלים/משקל המזון הנאכל) x 100
    ECD (%) = (עלייה במשקל הזחלים/[משקל המזון הנאכל - משקל הפראס]) x 100
    AD (%) = ([משקל המזון הנאכל - משקל המזון]/משקל המזון הנאכל) x 100

תוצאות

זחלי חרקים שניזונו מתזונה שהכילה 1,000 ppm קוורצטין הראו ירידה משמעותית במשקל הגוף של ~57% בהשוואה לקבוצת הביקורת (איור 2A). הירידה במשקל הגוף הביאה לירידה בגודל הגוף של זחלים שטופלו בקוורצטין (איור 2B). נצפתה ירידה ניכרת בקצב ההזנה של זחלים שניזונו מקוורצטין בהשוו...

Discussion

בדיקות ביולוגיות במעבדה שימושיות לחיזוי תוצאות ולהפקת נתוני רעילות השוואתיים על מספר תרכובות בתקופה קצרה ובעלות סבירה. הבדיקה הביולוגית של ההזנה מסייעת לפרש את יחסי הגומלין בין קוטל חרקים לבין קוטלי חרקים-צמחים. זוהי שיטה יעילה למדידת רעילותם של מגוון חומרים המפשטת באופן משמעותי את תהל?...

Disclosures

המחברים לא הצהירו על ניגוד עניינים.

Acknowledgements

SM, YP ו- VN מכירים במלגה שהוענקה על ידי ועדת המענקים של האוניברסיטה, ממשלת הודו, ניו דלהי. RJ מודה למועצה למחקר מדעי ותעשייתי (CSIR), הודו, ולמעבדה הכימית הלאומית CSIR, פונה, הודו, לתמיכה כספית תחת קודי הפרויקט MLP036626, MLP101526 ו- YSA000826.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Agar AgarHimediaRM666Solidifying agent
Ascorbic acidHimediaCMS1014Vitamin C source
Bengal GramNANAProtein and carbohydrate source
CaseinSigmaC-5890Protein source
CholesterolSisco Research Laboratories34811Fatty acid source
Choline ChlorideHimediaGRM6824Ammonium salt
DMSOSigma67-68-5Solvent
GraphPad Prism v8.0https://www.graphpad.com/guides/prism/latest/user-guide/using_choosing_an_analysis.htm
Methyl ParabenHimediaGRM1291Antifungal agent
Multivitamin capsuleGalaxoSmithKlineNAVitamin source
QuercetinSigmaQ4951-10GPhytochemical
Sorbic AcidHimediaM1880Antimicrobail agent
StreptomycinHimediaCMS220Antibiotic
Vitamin E capsuleNukind HealthcareNAVitamin E source
Yeast ExtractHimediaRM027Amino acid source

References

  1. Popp, J., Pető, K., Nagy, J. Pesticide productivity and food security. A review. Agronomy for Sustainable Development. 33 (1), 243-255 (2013).
  2. da Silva, F. R., et al. Comparative toxicity of Helicoverpa armigera and Helicoverpa zea (Lepidoptera: Noctuidae) to selected insecticides. Insects. 11 (7), 431 (2020).
  3. Usman, A., Ali, M. I., Shah, M., e Amin, F., Sarwar, J. Comparative efficacy of indigenous plant extracts and a synthetic insecticide for the management of tomato fruit worm (Helicoverpa armigera Hub.) and their effect on natural enemies in tomato crop. Pure and Applied Biology. 7 (3), 1014-1020 (2018).
  4. Honnakerappa, S. B., Udikeri, S. S. Abundance of Helicoverpa armigera (Hubner) on different host crops. Journal of Farm Science. 31, 436-439 (2018).
  5. Edosa, T. T. Review on bio-intensive management of African bollworm, Helicoverpa armigera (Hub.): Botanicals and semiochemicals perspectives. African Journal of Agricultural Research. 14 (1), 1-9 (2019).
  6. Zhou, Y., et al. Migratory Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae) exhibits marked seasonal variation in morphology and fitness. Environmental Entomology. 48 (3), 755-763 (2019).
  7. Souto, A. L., et al. Plant-derived pesticides as an alternative to pest management and sustainable agricultural production: Prospects, applications and challenges. Molecules. 26 (16), 4835 (2021).
  8. Özkara, A., Akyıl, D., Konuk, M. Pesticides, environmental pollution, and health. Environmental Health Risk-Hazardous Factors to Living Species. , (2016).
  9. Alengebawy, A., Abdelkhalek, S. T., Qureshi, S. R., Wang, M. -. Q. Heavy metals and pesticides toxicity in agricultural soil and plants: Ecological risks and human health implications. Toxics. 9 (3), 42 (2021).
  10. Tlak Gajger, I., Dar, S. A. Plant allelochemicals as sources of insecticides. Insects. 12 (3), 189 (2021).
  11. Riddick, E. W. Potential of quercetin to reduce herbivory without disrupting natural enemies and pollinators. Agriculture. 11 (6), 476 (2021).
  12. Gao, Y. -. L., et al. The effect of quercetin on the growth, development, nutrition utilization, and detoxification enzymes in Hyphantria cunea Drury (Lepidoptera: Arctiidae). Forests. 13 (11), 1945 (2022).
  13. Durmuşoğlu, E., Hatipoğlu, A., Gürkan, M. O., Moores, G. Comparison of different bioassay methods for determining insecticide resistance in European Grapevine Moth, Lobesia botrana (Denis & Schiffermüller) (Lepidoptera: Tortricidae). Turkish Journal of Entomology. 39 (3), 271-276 (2015).
  14. Paramasivam, M., Selvi, C. Laboratory bioassay methods to assess the insecticide toxicity against insect pests-A review. Journal of Entomology and Zoology Studies. 5 (3), 1441-1445 (2017).
  15. Clark, E. L., Isitt, R., Plettner, E., Fields, P. G., Huber, D. P. W. An inexpensive feeding bioassay technique for stored-product insects. Journal of Economic Entomology. 107 (1), 455-461 (2014).
  16. Waldbauer, G. P., Cohen, R. W., Friedman, S. An improved procedure for laboratory rearing of the corn earworm, Heliothis zea (Lepidoptera: Noctuidae). The Great Lakes Entomologist. 17 (2), 10 (2017).
  17. Friesen, K., Berkebile, D. R., Zhu, J. J., Taylor, D. B. Laboratory rearing of stable flies and other muscoid Diptera. JoVE. (138), e57341 (2018).
  18. Zheng, M. -. L., Zhang, D. -. J., Damiens, D. D., Lees, R. S., Gilles, J. R. L. Standard operating procedures for standardized mass rearing of the dengue and chikungunya vectors Aedes aegypti and Aedes albopictus (Diptera: Culicidae)-II-Egg storage and hatching. Parasites & Vectors. 8, 1-7 (2015).
  19. Nagarkatti, S., Prakash, S. Rearing Heliothis armigera (Hubn.) on an artificial diet. Technical Bulletin Commonwealth Institute of Biological Control. , (1974).
  20. Adhav, A. S., Kokane, S. R., Joshi, R. S. Functional characterization of Helicoverpa armigera trehalase and investigation of physiological effects caused due to its inhibition by Validamycin A formulation. International Journal of Biological Macromolecules. 112, 638-647 (2018).
  21. Abbasi, B. H., et al. Rearing the cotton bollworm, Helicoverpa armigera, on a tapioca-based artificial diet. Journal of Insect Science. 7 (1), 35 (2007).
  22. Armes, N. J., Jadhav, D. R., Bond, G. S., King, A. B. S. Insecticide resistance in Helicoverpa armigera in South India. Pesticide Science. 34 (4), 355-364 (1992).
  23. Waldbauer, G. P. The consumption and utilization of food by insects. Advances in Insect Physiology. 5, 229-288 (1968).
  24. Carpinella, M. C., Defago, M. T., Valladares, G., Palacios, S. M. Antifeedant and insecticide properties of a limonoid from Melia azedarach (Meliaceae) with potential use for pest management. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 51 (2), 369-374 (2003).
  25. Diaz Napal, G. N., Palacios, S. M. Bioinsecticidal effect of the flavonoids pinocembrin and quercetin against Spodoptera frugiperda. Journal of Pest Science. 88, 629-635 (2015).
  26. ffrench-Constant, R. H., Roush, R. T. Resistance detection and documentation: the relative roles of pesticidal and biochemical assays. Pesticide Resistance in Arthropods. , 4-38 (1990).
  27. Gikonyo, N. K., Mwangi, R. W., Midiwo, J. O. Toxicity and growth-inhibitory activity of Polygonum senegalense (Meissn.) surface exudate against Aedes aegypti larvae. International Journal of Tropical Insect Science. 18 (3), 229-234 (1998).
  28. Sharma, R., Sohal, S. K. Bioefficacy of quercetin against melon fruit fly. Bulletin of Insectology. 66 (1), 79-83 (2013).
  29. Després, L., David, J. -. P., Gallet, C. The evolutionary ecology of insect resistance to plant chemicals. Trends in Ecology & Evolution. 22 (6), 298-307 (2007).
  30. Shi, G., Kang, Z., Ren, F., Zhou, Y., Guo, P. Effects of quercetin on the growth and expression of immune-pathway-related genes in silkworm (Lepidoptera: Bombycidae). Journal of Insect Science. 20 (6), 23 (2020).
  31. Selin-Rani, S., et al. Toxicity and physiological effect of quercetin on generalist herbivore, Spodoptera litura Fab. and a non-target earthworm Eisenia fetida Savigny. Chemosphere. 165, 257-267 (2016).
  32. Ateyyat, M., Abu-Romman, S., Abu-Darwish, M., Ghabeish, I. Impact of flavonoids against woolly apple aphid, Eriosoma lanigerum (Hausmann) and its sole parasitoid, Aphelinus mali (Hald). Journal of Agricultural Science. 4 (2), 227 (2012).
  33. Brito-Sierra, C. A., Kaur, J., Hill, C. A. Protocols for testing the toxicity of novel insecticidal chemistries to mosquitoes. JoVE. (144), e57768 (2019).
  34. Mitchell, C., Brennan, R. M., Graham, J., Karley, A. J. Plant defense against herbivorous pests: exploiting resistance and tolerance traits for sustainable crop protection. Frontiers in Plant Science. 7, 1132 (2016).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

195Helicoverpa armigera

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved