אפקט משכך כאבים של Tuina על מודלים חולדה עם דחיסה של כאב גנגליון שורש הגב

Summary

מאמר זה מציג מניפולציה לטיפול בדחיסה כרונית של גנגליון השורש הגבי בחולדות באמצעות טיפול טווינא, יחד עם שיטה להערכת יעילותו בהתבסס על התנהגות כאב ותוצאות היסטופתולוגיות.

Abstract

כאב נוירופתי הוא מצב שכיח המשפיע על 6.9%-10% מהאוכלוסייה ונובע מפגיעה עצבית עקב אטיולוגיות שונות, כגון פריצת דיסק מותני, היצרות תעלת עמוד השדרה והיצרות הפתח הבין חולייתי. למרות שטווינה, טיפול ידני סיני מסורתי, הראה השפעות משככות כאבים בפרקטיקה הקלינית לטיפול בכאב נוירופתי, המנגנונים הנוירוביולוגיים הבסיסיים שלו עדיין אינם ברורים. מודלים של בעלי חיים חיוניים להבהרת העקרונות הבסיסיים של טווינה. במחקר זה, אנו מציעים פרוטוקול Tuina סטנדרטי עבור חולדות עם דחיסה של גנגליון שורש גבי (DRG), הכולל גרימת דחיסת DRG על ידי החדרת מוט נירוסטה לתוך הפתח הבין חולייתי, ביצוע מניפולציה Tuina עם פרמטרים ספציפיים של מיקום, עוצמה, ותדירות בסביבה מבוקרת, והערכת התוצאות ההתנהגותיות וההיסטופתולוגיות של טיפול Tuina. מאמר זה דן גם בהשלכות ובמגבלות הקליניות האפשריות של המחקר ומציע כיוונים למחקר עתידי על טווינה.

Introduction

במסגרות קליניות, מקובל לצפות בכאב פתולוגי נוירולוגי הנגרם על ידי דחיסת שורש עצב מסיבות שונות. הצורה האופיינית ביותר של כאב נוירופתי זה היא פריצת דיסק מותני (LDH), שהיא לעתים קרובות מתמשכת, חוזרת וקשה לריפוי. כ-9% מאוכלוסיית העולם מושפעת מ-LDH, מה שמוביל לנטל חברתי וכלכלי משמעותי¹. שכיחות סוג זה של כאב נוירופתי עולה מדי שנה, עם מגמה כלפי חולים צעירים יותר, עקב שינויים בייצור האנושי ובאורח החיים². למרות השימוש במשככי כאבים שאינם סטרואידים, לא ניתן להקל לחלוטין על הסימפטומים של החולים. כתוצאה מכך, טיפולים אלטרנטיביים, כגון Tuina, לטיפול בכאב הנגרם על ידי LDH זכו לתשומת לב גוברת.

טיפול טווינא, סוג של טיפול שמרני ב- LDH, מומלץ באופן נרחב בהנחיות קליניות שונות ברחבי העולם למניעה וטיפול בכאבי גב תחתון ^3,4. מחקרים הראו כי Tuina יכול להפחית באופן משמעותי גורמים דלקתיים כגון IL-6 בסרום וגורם נמק הגידול אלפא (TNF-α) בחולי LDH תוך שיפור הכאב של החולים ופגיעה בתפקוד המותני⁵. עם זאת, המנגנון הספציפי מאחורי ההשפעות משככות הכאב של טיפול Tuina עדיין לא ברור.

מודלים של בעלי חיים הם כלי רב ערך לחקר כאב נוירופתי הנגרם על ידי LDH⁶. הם מאפשרים מדידות התנהגותיות כדי להעריך את היעילות של טיפול Tuina ולספק דגימות של הפיזיולוגיה הפתולוגית של LDH. לדוגמה, דגימות מגרעיני השורש הגבי בירך ניתן לקחת כדי לאמת שינויים בתאי גנגליון שורש גבי. הדחיסה הכרונית של מודל גנגליון שורש הגב (CCD) משמשת בדרך כלל להערכת הפיזיולוגיה הפתולוגית של LDH, שכן היא גורמת נזק למורפולוגיה של תאי גנגליון שורש גבי התואמים את השינויים הפתולוגיים הנראים במקרים קליניים של דחיסת עצבים הנגרמת על ידי פריצת דיסק⁷.

חוקרים רבים ערכו מספר ניסויים בבעלי חיים על שיכוך כאבים אקופרסורה ^8,9,10. עם זאת, כאשר מיישמים פעולות אקופרסורה על מודלים של בעלי חיים, הם לעתים קרובות מחקים אקופרסורה אנושית. ההשפעה הטיפולית של אקופרסורה מושפעת מגורמים כגון גודל, תדירות וכיוון הכוח המופעל^11,12,13. אם הניסוי חסר תקן אקופרסורה אחיד, כגון הכוח, התדירות ומשך הפעולה, הדבר עלול לגרום לסטייה מסוימת בתוצאות הניסוי. מאמר זה מציג סדרה של תוכניות טיפול באקופרסורה המבוססות על המאפיינים של חולדות CCD, ומקדם את הפיתוח של פעולות אקופרסורה סטנדרטיות במודלים של בעלי חיים.

Protocol

עבודה זו בוצעה במעבדת הכאב של המכון לנוירוביולוגיה באוניברסיטת פודאן. הניסויים אושרו ונשמרו בקפדנות על ההנחיות להגנה על חיות מעבדה שנקבעו על ידי האגודה הבינלאומית לחקר הכאב (LASP) לכל ההליכים הכירורגיים והטיפול בבעלי חיים. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בחולדות Sprague-Dawley (SD), שכללו 32 זכרים בגילאי 40-50 יום, במשקל ממוצע של 220 ±-1.38 גרם. חולדות אלה התקבלו ממרכז החיות הניסיוני של האקדמיה למדעי החיים בשנחאי, האקדמיה הסינית למדעים. בעלי החיים טופלו כראוי ושוכנו בחדר ייעודי עם אוורור עצמאי, טמפרטורה מווסתת (22 ± 1 מעלות צלזיוס) ולחות (40%-50%). לחולדות הייתה גישה למזון ומים נאותים בכלובים שלהן. חדר חיות המעבדה פעל במחזור אור-חושך של 12 שעות כדי לשמור על סדירות השעון הביולוגי של החולדות, ואנשי צוות ייעודיים החליפו באופן קבוע את הריפוד. צילום הרנטגן בוצע במחלקת הרדיולוגיה של בית החולים Yueyang לרפואה סינית מסורתית ומערבית משולבת, המסונף לאוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית.

1. משתתפי המחקר והקבצתו

1. הקצו 32 חולדות לארבע קבוצות: נאיבית (בקרה), דמה (פעולת דמה), CCD (דחיסת גנגליון שורש גבי כרונית) ו-CCD + Tuina (8 חולדות לקבוצה). לחולדות הייתה גישה חופשית למזון ומים במתקנים לבעלי חיים.
   הערה: לחולדות נאיביות לא הייתה התערבות, בעוד שקבוצת הדמה עברה את אותו הליך כירורגי כמו חולדות קבוצת CCD, אך מבלי להשאיר מוט נירוסטה בצורת "L" בפתח הבין חולייתי L4 ו- L5. חולדות בקבוצת CCD עברו ניתוח מלא של מודל דחיסת גנגליון שורש גבי כרוני. חולדות בקבוצת CCD + Tuina קיבלו טיפול בטווינא החל מהיום הרביעי לאחר ניתוח CCD.

2. ביסוס מודל בעלי חיים

1. מתן איזופלואורן להרדמת חולדות. ברגע שהחולדות מאבדות את הכרתן (ללא רפלקס תנועת זנב או רפלקס כיפוף רגליים), יש לגלח את השיער באזור הניתוח באמצעות סכין גילוח.
   הערה: תרופות משככי כאבים יושמו 15 דקות לפני הניתוח וחולדות הוזרקו תת עורית עם טרמדול 20 מ"ג / ק"ג.
2. אבטחו את החולדה על לוח קצף (ראו טבלת חומרים) והשתמשו בגומיות כדי לאבטח את הגפיים והחותכות שלה. נגבו את האזור המוכן עם הכנה סטרילית של אלכוהול ויוד לסירוגין במשך 3 מחזורים לפחות.
3. הכנס את הבדיקה בצורת "L" (ראה טבלת חומרים).
   1. השתמשו במספריים כדי לבצע חתך של 2-3 ס"מ דרך העור, הפאשיה השטחית והפאשיה העמוקה שכבה אחר שכבה. ראשית, אתר את עמוד השדרה האיליאק העליון הקדמי, המתאים לעמוד השדרה המותני החמישי. לאחר מכן, אתר ברצף את התהליכים השדרתיים השלישי והרביעי.
   2. הדקו את התהליך הספינוסי עם מלקחיים עם שיניים והרימו אותו כדי לאפשר למספריים להיות קרובים לצד הימני של התהליך הספינוסי ולחתוך את השריר המחובר לצד הימני של תהליך עמוד השדרה.
   3. לאחר מכן, לנתח בבוטות את השריר המחובר למשטח החיצוני של לוחית החוליות עד שיש התנגדות לצד ימין. הבליטה היא המפרק הזיגאפופיסיאלי. באופן דומה, לנתח בבוטות את השריר ואת fascia על המפרק zygapophysial.
      הערה: התהליך הרוחבי המצביע על כיוון ראשה של החולדה ייגע תחילה בחזית החיצונית התחתונה של מפרק הזיגאפופיסיאל. מתחת לתהליך הרוחבי נמצא הפתח הבין חולייתי, המלא בשורשי עצבים וברקמות רכות שמסביב ובדרך כלל לא קל למצוא אותו.
   4. ראשית, השתמש בבדיקה בצורת "L" כדי לקבוע את מיקום הפתח הבין חולייתי, ולאחר מכן השתמש במוט נירוסטה בצורת "L" (שצריך להיות מיוצר בקוטר של 0.4 מ"מ ובאורך של 4 מ"מ) כדי להחדיר אותו לפתח הבין חולייתי.
   5. אם גנגליון השורש הגבי נדחס בהצלחה, החולדה תציג תנועת זנב ורפלקס כיפוף רגליים. הכנס את מוט הנירוסטה לפתח הבין חולייתי המותני הרביעי והחמישי. לאחר מכן, תפרו (3-0, ראו טבלת חומרים) את השריר, הפאשיה והעור שכבה אחר שכבה.
4. הניחו את החולדה בקופסה תרמוסטטית עד שתתעורר. לאחר התעוררות, שימו לב אם תפקוד הגפה האחורית הימנית של החולדה תקין. אם יש גרירה, זה אומר שהניתוח פגע בעצבים המוטוריים, ויש להשליך את החולדה. אם תפקוד הגפה האחורית הימנית תקין, ניתן להשתמש בחולדה ולהכניס אותה לכלוב להאכלה.

3. טיפול Tuina

1. צרו סביבה נוחה: לפני התחלת טיפול בטווינה, הקדישו את החולדה לרסן למשך 30 דקות כדי לאפשר לה להסתגל (איור 1). מכשיר זה יכול לחשוף באופן מלא את הירך של החולדה ולשתק אותה, מה שמקל על תמרוני טווינה (ראו טבלת חומרים).
   הערה: הטמפרטורה בחדר הטיפולים צריכה להישמר בין 22-26 מעלות צלזיוס, והלחות צריכה להיות בין 40%-50%.
2. סטנדרטיזציה של Tuina: ודא שהמטפלים לובשים שרוולי אצבע אלחוטיים שיכולים לנטר את הלחץ והתדירות של Tuina ולספק נתוני משוב בזמן אמת. ראשית, לתרגל Tuina עם נתוני משוב של שרוולי האצבע, התאמת הכוח ל 5 N ואת התדר ל 2 הרץ. לאחר מכן, בצעו את אותם תמרונים על החולדות, ושמרו על כוח ותדירות עקביים לאורך כל התהליך (איור 2).
   הערה: בהתבסס על עבודתנו הקודמת, כוח הלחיצה האופטימלי המחושב הוא 5 N (ראה סעיף דיון לפרטים).
3. זהה את נקודת הדיקור: בחר את שריר הגסטרוקנמיוס של הגפה האחורית הימנית כאזור טווינה של החולדה, בצומת של שני ראשי שריר הגסטרוקנמיוס, בערך במיקום של BL57¹⁴.
4. בצעו את הטווינה: ודאו שהמטפל פונה לאספקט האחורי של ירך החולדה ומחזיק את הגפה האחורית הימנית של החולדה עם הגפה העליונה הימנית. מקם את האגודל אנכית על נקודת הדיקור BL57, וודא שהאמה והאצבעות מפעילות כוח כדי לבצע תנועה סיבובית קצבית לטווח קטן תוך הפעלת לחץ של 5 N (איור 3).
5. במהלך הטיפול, ודא שהכוח והתדירות של משוב המניפולציה תואמים את הערכים שנקבעו מראש. התחל את ההתערבות מהיום הרביעי לאחר הניתוח, עם Tuina מבוצע פעם ביום במשך 15 דקות, ברציפות במשך 18 ימים.

4. בדיקה התנהגותית לכאב

הערה: מבחנים התנהגותיים נערכו לפני מידול, לאחר מידול, ביום התערבות 1, יום התערבות 3, יום התערבות 7, יום התערבות 14, יום התערבות 17, ויום התערבות 21.

1. בצע סף תגובה לגירוי מכני (Paw Withdrawal Threshold, PWT) לפי השלבים הבאים (איור 4).
   1. השתמשו בשיטת פון פריי כדי לבדוק את סף התגובה של גירוי מכני בכפות רגליהן של החולדות. הניחו את החולדות בתא זכוכית מחוסמת שקוף בגודל 20 ס"מ × 10 ס"מ × 20 ס"מ, שהונח על מעמד רשת תיל מתכת עם פתחים של 10 מ"מ × 10 מ"מ בגובה של 40 ס"מ. שמור על טמפרטורת החדר ב 23 ± 2 °C (75 °F), והסביבה שקטה.
   2. מדדו את סף המשיכה המכנית בעזרת סיבי פון פריי אלקטרוניים (ראו טבלת חומרים). לגרות את מרכז כף הרגל של החולדה עד שהיא נעה באופן ניכר, כגון הרמת הרגל או הימנעות ממנה. ההתקן רושם את ערך הלחץ המרבי (N) באופן אוטומטי.
   3. המתינו 15 שניות או יותר לפני שתעוררו שוב את אותה חולדה. שמור על כל גירוי מתחת ל -5 שניות כדי למנוע רגישות מישושית בכפות החולדה. חזור על הבדיקה חמש פעמים עד ששלוש המדידות העוקבות שונות בפחות מ- 10 N.
2. בצעו חביון למשיכת כפות (PWL) בתגובה לגירוי תרמי (איור 5).
   1. הערך את PWL באמצעות שיטת Hargreaves^15,16. הניחו את החולדות בתא קטן עשוי זכוכית מחוסמת שקופה, בגודל 20 ס"מ x 10 ס"מ x 20 ס"מ, עם מכסה זכוכית שקוף עם חור אוורור. מחממים את האזור המרכזי של מכסה הזכוכית ל-45°C באמצעות פלטת חימום עד שהוא מגיע לטמפרטורה יציבה.
   2. במהלך שלב הבדיקה ההתנהגותית, יש להרגיל את החולדות למעבדה ההתנהגותית למשך שעתיים לפחות בכל יום כדי למזער את ההשפעה של גורמים סביבתיים על תוצאות הבדיקה.
   3. לפני הבדיקה הרשמית, הניחו את החולדות במעבדה ההתנהגותית למשך 30 דקות כדי לאפשר להן להסתגל לסביבה ולהפחית הפרעות.
   4. חממו את פלטת החימום ל-45°C, והניחו את הגפיים האחוריות של החולדה על צלחת החימום.
   5. חביון נסיגת הכפות (PWL) הוגדר כזמן מתחילת החימום ועד להופעת רפלקס נסיגת הכפות בתגובה לגירוי תרמי. בכל בדיקה, בדוק את אותה גפה אחורית שלוש פעמים ברציפות, ואת הערך הממוצע כדי לקבל את חביון התגובה של אותה גפה אחורית. לאחר הבדיקה, החזירו את החולדות לכלובים שלהן להאכלה.

5. זילוח

1. אופן ההכנה: הכינו מראש תמיסת מלח 0.9% ותמיסת פרפורמלדהיד 4%. הכניסו את תמיסת המלח לתנור לטמפרטורה קבועה של 37°C, ואחסנו את תמיסת הפרפורמאלדהיד במקרר בטמפרטורה של 4°C לשימוש מאוחר יותר.
2. לבצע הרדמה וליצור גישה.
   1. התחילו בהזרקת 25% אורתאן (0.6 מ"ל/100 גרם, ראו טבלת חומרים) לחלל הבטן של החולדה כדי לגרום להרדמה עמוקה. המתן עד שלא נצפה שום רפלקס של בוהן, קרנית או סיבוב. תקנו את החולדה על לוח קצף.
   2. חותכים את עצם החזה במספריים ופותחים את העור ואת הפאשיה שכבה אחר שכבה. חותכים את הסרעפת וחותכים את הצלעות משני הצדדים כדי לחשוף את הלב במלואו. בזהירות להפריד את קרום הלב. להפריד את הריאות מהלב.
   3. השתמש במלקחיים כדי למשוך ולחשוף את אבי העורקים על ידי משיכת הלב לכיוון עצמך. יישרו את המחט, החדר השמאלי ואבי העורקים בקו ישר ובאותו מישור אופקי. לאחר מכן הכנס את המחט מהחדר השמאלי לתוך אבי העורקים עד שהמחט נראית בתוך אבי העורקים.
   4. השתמש במלקחיים כדי להדק את אבי העורקים ואת המחט בתוך אבי העורקים, ולאחר מכן לפתוח את אטריום שמאל עם מספריים. בשלב זה, כמות גדולה של דם תזלוג מהאטריום השמאלי. פתח את השסתום לתמיסת המלח וחבר את הזרקת המלח לניקוב תמיסת מלח 37 מעלות צלזיוס, בסך הכל כ 150-200 מ"ל.
3. לאחר השלמת זילוח המלח, עברו לתמיסת פרפורמלדהיד 4% ונקבו עם תמיסת פרפורמלדהיד 4% בסך הכל כ-400 מ"ל ב-4°C. כאשר מתחילים את הזלוף paraformaldehyde, להחזיק את השיניים הקדמיות של החולדה עם זוג אחד של מלקחיים ולמשוך אותם קדימה, תוך אחיזת הזנב ביד אחת ומשיכת אותו לאחור, וזה יתרון להארכה מלאה של עמוד השדרה והגדלת הפתח הבין חולייתי כדי להקל על דגימת DRG.
4. במהלך הזילוח, הכבד של החולדה, המזנטריה והאומנטום הגדול יותר הופכים בהדרגה מחווירים עד שהכבד נעשה נוקשה. לאחר מכן, האטו את קצב הזרימה והתאימו אותו לכ-2 טיפות לשנייה עד שכל הפרפורמלדהיד מחורר.

6. אוסף גנגליון שורש דורסלי

הערה: לאחר זילוח, חתכו במהירות את החלק המותני בעמוד השדרה של החולדה. אתר את הפתח הבין חולייתי L5 ו- L4 על ידי חיבור הנקודות הגבוהות ביותר של הפסגה האיליאק משני הצדדים לתהליך עמוד השדרה המותני L5 בשיטת מיקום זו, והסר את גנגליון השורש הגבי מהפתח הבין חולייתי. שיטת הגבייה הספציפית היא כדלקמן:

1. מפתח תעלת עמוד השדרה (תעלת עמוד השדרה החזי), הכנס את המספריים לתעלת עמוד השדרה וחתך את הלמינה משני הצדדים עד שניתן להסיר לחלוטין את כל הלמינה, תוך חשיפת תעלת עמוד השדרה כולה.
   הערה: היזהר שלא לפגוע בחוט השדרה ובשורשי העצבים מחוץ לתעלת עמוד השדרה בעת חיתוך הלמינה.
2. הסר בזהירות את חוט השדרה ואת הרצועה האורכית האחורית. מפרידים את הדורה מאטר המחוברת לחור הפנימי של הפתח הבין חולייתי.
3. השתמש במלקחיים אופתלמיים כדי להדק ולשלוף את גנגליון השורש הגבי, שצורתו כפנינה וצהבהב מעט.
   הערה: בשל השבריריות והקשיחות הירודה של רקמת העצבים, יש צורך לתפוס את הכוח ואת כיוון המשיכה בעת משיכת גנגליון שורש הגב ולא להשתמש בכוח הזרוע.
4. בעת שליפת גנגליון השורש הגבי, הקפד לנקות את הרקמות הרכות שמסביב, כולל דורה מאטר וארכנואיד, מראש כדי להקל על משיכה חלקה של גנגליון שורש הגב.
5. מניחים את גנגליון השורש הגבי על נייר סופג, חותכים את האקסון בעזרת להב ומנקים את כלי הדם על פני גנגליון השורש הגבי.
6. לאחר החיתוך, שוקלים את גנגליון השורש הגבי וטובלים אותו בתמיסת פרפורמלדהיד 4% עם ריכוז של 4% וטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך זמן מספיק, בדרך כלל כ 2-4 שעות, ולאחר מכן מעבירים את גנגליון השורש הגבי לתמיסת סוכרוז PB של 10%, 20% ו- 30% PB (4 מעלות צלזיוס) שהוכנה מראש להתייבשות הדרגתית.

7. Cryosectioning

1. התחל על ידי הצבת גנגליון שורש הגב בתמיסת PBS 0.01 M. נערו אותם במשך 10 דקות ולאחר מכן שטפו את תמיסת הסוכרוז. חותכים בזהירות את סיבי האקסון של שני המקטעים של גרעיני השורש הגבי. נקו את ראש ההקפאה של מכונת ההקפאה והוסיפו לו את תרכובת טמפרטורת החיתוך האופטימלית (OCT) (ראו טבלת חומרים).
2. מניחים את ראש ההקפאה על פני מעטפת מתכת המכילה חנקן נוזלי, ממתינים עד שהרקמה קפואה, מסירים אותה וחותכים אותה שטוחה. לאחר מכן, מניחים את ראש ההקפאה על בסיס כלי הפריסה. עובי פרוסות גרעיני השורש הגבי צריך להיות 15 מ"מ. סדרו את החלקים הדקים החתוכים בקופסת עץ לפי הסדר ואחסנו אותם במקרר בטמפרטורה של -20°C, הרחק מאור.

8. צביעת Hematoxylin ו Eosin

1. מניחים את המקטעים 2 דקות בקסילן, ומייבשים אותם בסדרה של אלכוהולים, כולל 100%, 95%, 80% ו-70%, למשך 2 דקות כל אחד. לאחר מכן מניחים את המקטעים 2 דקות במים מזוקקים, דקה אחת בהמטוקסילין, מבצעים 5 דקות של שטיפת מי ברז, ומבצעים התמיינות בתמיסת אלכוהול מלוחים 1% למשך 30 שניות, ואחריה 30 שניות בליתיום קרבונט רווי.
2. לאחר מכן, מניחים את הפרוסות 2 דקות כל אחת במים מזוקקים ומי ברז, 5 דקות בתמיסת אאוזין (0.5%), שטיפה מהירה של דקה אחת במים מזוקקים, שני סיבובים של 2 דקות כל אחד ב-95% ו-100% אלכוהול, 30 שניות ב-100% קסילן בתוספת סודיום ביקרבונט, שלושה סיבובים של 3 דקות כל אחד בקסילן, ולבסוף, חותמים עם בלסם ניטרלי (ראו טבלת חומרים).

תוצאות

טיפול בטווינה יכול לעזור להפחית את ספי הגירוי המכני והתרמי של חולדות הנגרמים על ידי מידול CCD
לאחר 17 ימים של טיפול בטווינה, נצפה הבדל משמעותי בספי PWT בין חולדות CCD שקיבלו טיפול בטווינה לבין קבוצת ה-CCD שלא טופלה (P = 0.021, <0.05) (איור 6 וטבלה 1).

?...

Discussion

קבוצת המחקר שלנו ערכה מחקרים רלוונטיים על הפרמטרים של מניפולציה Tuina בשלב מוקדם. ראשית, חשוב להגדיר את עוצמת הכוח למניפולציה של טווינה. בטווינה הקלינית, המטפלים מתאימים את עוצמת הכוח בהתאם לניסיונם ולתחושותיהם הסובייקטיביות של המטופלים, ומשיגים את אפקט טווינה הטוב ביותר באמצעות תקשורת. עם...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
"L" stainless steel rod (4 mm long and 0.4 mm in diameter)	hand-made	/	For CCD models making
ALMEMO admeasuring apparatus	ahlborn	2450-1	Mechanical Withdrawal Threshold test
Constant temperature slicer CM-1900	Leica	1491950C1US	For specimen production
Disinfectant (iodine) 100 mL/bottle	LIRCON/Shandong Lilkang	/	For disinfection
Disposable sterile syringe 5 mL	Shanghai Misha Wa Medical Industry	/	For injection
Electron microscope CX-31	Olympus, Japan	BJ002318	For specimen observation
Finger pressure recordings	Suzhou Changxian Optoelectronic Technology	CX1003w	For Tuina manipulation
Foam board (35 cm x 20 cm)	hand-made	/	It is our homemade apparatus for fixing rats
MERSILK W2512	Johnson & Johnson	/	For tissue suture
Neutral balsam	Sinopharm Chemical Reagent	10004160	For specimen production
paraformaldehyde	China National Chemical Reagent	/	For specimen production
Pentobarbital sodium	Sigma-Aldrich	P3761	For anesthesia of rat
Plantar Test Apparatus (Hargreaves Method) for Mice and Rats	IITC Life Science	/	Paw Withdrawal Latency
Precision electronic scale for experiment JY3002	Shanghai Precision Scientific Instrument	/	Weighing of rat
Rat hair clipper	Philips	HP6341/00	Shaving of rat fur
Restrainer for rats	Tongji University (self-made)	/	It is a homemade apparatus made by Tongji University, which can effectively immobilize the rats and fully expose their hind limbs.
Tissue-Tek O.C.T. Compound	SAKURA	4583	For specimen production
Uratan	China National Chemical Reagent	/	For anesthesia of rat
X-ray detector XR-600	Dongguan Kaso Electronic Technology	/	Examination of CCD models
xylene	Shanghai Sinopharm Group	100092	For specimen production