נוהל הניתוח ואמצעי זהירות של טיפול בדיקור שיבוץ חוטים באלצהיימר

Summary

מחקר זה מציג פרוטוקול לטיפול בדיקור סיני באמצעות הטבעת חוטים בחולדות דמויות מחלת אלצהיימר.

Abstract

טיפול בהטבעה בחוטים (TEAT) הוא טיפול המונע ומנהל מחלות על ידי החדרת תפר מתכלה לתוך נקודת דיקור, ומספק גירוי ארוך טווח. TEAT היא גישה פשוטה המונעת את אי הנוחות של דיקור סיני רגיל ומספקת השפעות טיפוליות מתמשכות. מאמר זה דן בהשפעה הפוטנציאלית של TEAT על יכולות הלמידה והזיכרון של חולדות עם תסמינים דמויי מחלת אלצהיימר. מכיוון שניוון עצבי כימי וליקויים קוגניטיביים בחולדות אינם משקפים לחלוטין את השינויים הפתולוגיים האמיתיים שנצפו במחלת אלצהיימר. כתוצאה מכך, קבוצת המחקר שלנו הגדירה ביטויים אלה כתסמינים דמויי מחלת אלצהיימר. נקבע פרוטוקול המתווה את בחירת נקודות הדיקור, תהליך הניתוח ואמצעי הזהירות הדרושים לראש ולגב התחתון. הניסוי נערך על שלוש קבוצות: קבוצת ביקורת, קבוצת מודל וקבוצת TEAT, שכל אחת מהן הכילה 6 חולדות. כדי לגרום לתסמינים דמויי מחלת אלצהיימר, חולדות הוזרקו תוך צפקית עם D-גלקטוז במשך 7 שבועות (49 ימים). החולדות בקבוצת TEAT קיבלו טיפול בהטמעת חתול אקופוינט. לאחר תקופת ההתערבות, נערך מבוך מים מוריס (MWM) כדי להעריך את הלמידה והזיכרון של החולדות. לאחר מכן הוקרבו החולדות ונבדקה רקמת המוח שלהן. בדיקה היסטולוגית בוצעה כדי להבין את ההשפעות של TEAT על הפתולוגיה של חולדות המציגות סימפטומים של מחלת אלצהיימר. מחקר זה מציע כי TEAT עשוי לשפר את הלמידה והזיכרון בחולדות עם תסמינים דמויי מחלת אלצהיימר, מה שמצביע על גישה טיפולית חדשה ומבטיחה עבור מצב נוירודגנרטיבי זה.

Introduction

דיקור הטבעת חוטים (TEA) כרוך בהטבעה של תפרים חתוליים או נספגים בנקודות דיקור באמצעות מחט מיוחדת. טכניקה זו יש השפעה ממושכת עד התפרים נספגים ומתפרקים. הוא מספק גירוי מתמשך ומתמשך לנקודות הדיקור במשך שבוע או יותר¹, ומשיג תוצאה דומה ללא צורך בהליכים חוזרים יומיים². זה מקטין את מספר החולים המבקשים טיפול רפואי, ובכך חוסך משאבים רפואיים במידה מסוימת. בשנים האחרונות, TEAT נמצא בשימוש הולך וגובר בתחומים רפואיים שונים בסין, כולל רפואה פנימית, רפואה חיצונית, דרמטולוגיה, תווי פנים, גינקולוגיה ורפואת ילדים³. מחקרים הראו כי הוא יעיל ביצירת השפעות ארוכות טווח ואמינות עבור מחלות כרוניות ומורכבות מסוימות, כגון אפילפסיה⁴ ושיתוק עצב הפנים⁵. יש לו את היתרונות של טראומה מינימלית וניתוח פשוט⁶. בנוסף, עלויות הטיפול של TEAT דווחו נמוכות יותר מאלה של אלקטרואקופונקטורה (EA)⁷. לכן, TEAT מוערך יותר ויותר במחקר קליני ומדעי.

מחלת אלצהיימר (AD) היא מחלה נוירודגנרטיבית המתקדמת עם הזמן. התהליך הפתופיזיולוגי שלה מתחיל לצבור כ -20 שנה לפני הופעת הסימפטומים הקליניים, אך המנגנון שלה עדיין לא מובן במלואו⁸. בהתחשב בזמינות המוגבלת של תרופות יעילות לאלצהיימר, המחקר מתמקד יותר ויותר בשלבים הפרודרומליים והפרה-קליניים של המחלה⁹. מניעה היא אסטרטגיה חיונית לטיפול בהתפתחות ובהתקדמות של ^9,10 לספירה. בשנים האחרונות, הרפואה הסינית המסורתית (TCM) התקדמה באופן משמעותי, והיא צפויה להציע אפשרויות חדשות למניעה וטיפול באלצהיימר^11,12. כתת-סוג של דיקור סיני, TEAT מועדף על פני טיפולים אחרים בשל טווח הטיפול הרחב שלו, טראומה מינימלית, ניתוח פשוט, תדירות טיפול נמוכה ויעילות ארוכת טווח⁶. ספרות חדשה מציעה כי TEAT עשוי להועיל לאנשים עם השמנת יתר^13,14, סוכרת¹⁵, נדודי שינה¹⁶, אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר¹⁷ ודיכאון¹⁸, כולם גורמי סיכון לאלצהיימר. הוא גם משפר את ההזדקנות בחולדות מזדקנות על ידי ויסות מיטופגיה², משפר למידה מרחבית ופגיעה בזיכרון, מקל על נזק פתולוגי של ההיפוקמפוס, ומעכב תגובה דלקתית בחולדות דמנציה וסקולרית (VD)¹⁹. זה נראה אטרקטיבי להבין אם TEAT יכול גם לפעול על תהליכים פתולוגיים במהלך אלצהיימר.

המחקר הנוכחי חסר אחידות וסטנדרטיזציה במספר אלמנטים קריטיים של פעולת TEAT, כולל שיטת ההטבעה, כלי ההטבעה, החוט ותקופת מרווח ההטבעה. חוסר סטנדרטיזציה זה משפיע על הערכת השפעת הטיפול וחקירת מנגנונים קשורים ומגביל קידום ותקשורת חיצוניים. מחקרים קודמים ^20,21 הוכיחו כי מתן תוך-צפקי של D-גלקטוז (D-gal) יכול לגרום לשינויים פתולוגיים דמויי מחלת אלצהיימר בחולדות, כולל ניוון עצבי וליקויים קוגניטיביים. יתר על כן, אלקטרואקופונקטורה ב Baihui (GV20) ו Shenshu (BL23) הוכח ביעילות לשפר ירידה קוגניטיבית, להפחית דלקת עצבית, ולהפחית נזק עצבי. מחקר זה לוקח חולדות מודל דמויות מחלת אלצהיימר כדוגמה כדי להציג את הבחירה של נקודות דיקור ואת תהליך הפעולה ואמצעי הזהירות של TEAT תחת מודל זה. הוא דן באלמנטים התפעוליים הקריטיים של TEAT במחקר ניסיוני כדי לספק התייחסות למחקרים עתידיים.

Protocol

כל הניסויים בוצעו בהתאם למדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושרו על ידי המרכז המחוזי של חוביי לבקרת מחלות ומניעתן, ועדת ניהול ושימוש בחיות מעבדה. לבדיקה השתמשו בסך הכל ב-18 נקבות של חולדות ספראג-דוולי (SD) בנות 3 חודשים במשקל 220-250 גרם. כל החולדות הוחזקו במחזור אור/חושך של 12 שעות בטמפרטורה של 23 ± 1 מעלות צלזיוס ולחות של 40%-50%, עם גישה חופשית למזון ומים. לאחר תקופת התאקלמות של שבוע, שבמהלכה הורשו החולדות להתרגל לתנאי המעבדה, החלו הניסויים.

1. פיתוח מודל

1. תכנון הניסוי מוצג באיור 1. חלקו באופן אקראי 18 נקבות Sprague-Dawley בנות 3 חודשים השוקלות 220-250 גרם לקבוצות ביקורת, מודל ו-TEAT. כל קבוצה מורכבת מ-6 חולדות.
2. הזריקו לקבוצת המודל ולקבוצת TEAT מדי יום D-גלקטוז (D-gal; 120 מ"ג/ק"ג/יום), בעוד קבוצת הביקורת מקבלת זריקות מי מלח (120 מ"ג/ק"ג/יום), למשך 7 שבועות (49 ימים) באזור הגחון התחתון²². הזריקה צריכה להינתן מדי יום בין השעות 8:00-9:00 בבוקר.
3. שוקלים את החולדות ביום השביעי בכל שבוע בין השעות 9:00-10:00. הניסוי נמשך 49 ימים. קברו את החוטים כל 14 יום בימים^ה-14,^{ה-28 וה-42}. קבע את השעה עבור כל שיבוץ חוט בין השעות 9:00-12:00 בבוקר.
4. המשך מתן intraperitoneal של D-גלקטוז במשך 7 שבועות כדי לגרום לתופעות פתולוגיות הקשורות למחלת אלצהיימר בחולדות²².

2. הכנה ל- TEAT

1. לעקר כלי ניתוח כגון מספריים עיניים, מגשים ופינצטה ולחטא. יש לנקות היטב את המשטחים בסביבת חדר הניתוח ולחטא.
2. הכינו את המשטח הכירורגי על ידי הנחת כרית חימום קטנה לבעלי חיים שטוחה על פני השטח, ולאחר מכן נשפך במגבת סטרילית. לאחר מכן, הניחו את לוח ההפעלה הנקי והחיטוי בצורה חלקה למעלה, כאשר הצד המחוספס פונה כלפי מעלה. לאחר מכן, הפעל את כרית החימום והגדר את הטמפרטורה ל -32 מעלות צלזיוס.
3. עבור ההליך, בחר מחט חד פעמית מס '6 הטבעה חוט בקוטר של 0.6 מ"מ ותפר כירורגי נספג 5-0 (תפר קולגן) באורך של 2 ס"מ. חתכו את התפר הניתוחי הנספג בקוטר 2 ס"מ 5-0 לחתיכות של 0.5 ס"מ ו-0.2 ס"מ באמצעות מספריים אופתלמיים. משרים את החוט החתוך במי מלח 0.9% ומניחים בצד.
4. לשטוף ידיים עם מים וסבון במשך 20 שניות, ולאחר מכן לייבש אותם. לאחר מכן, לבשו כפפות סטריליות.
5. מרדימים את החולדות בהזרקת IP של כלורל הידרט (300 מ"ג/ק"ג) באזור הגחון התחתון, מוודאים שהרדמה מאושרת כאשר בעלי חיים אינם מגיבים במישור הניתוחי, בהתבסס על חוסר תגובה מבדיקת צביטת בוהן, ושמירה על מצב פיזיולוגי יציב. בנוסף, כדי למנוע יובש בקרנית ונזק פוטנציאלי בזמן שהחולדות נמצאות תחת הרדמה, יש למרוח כמות נדיבה של משחה וטרינרית על העיניים, ולהבטיח שהן יישארו משומנים לאורך כל ההליך.
   הערה: מומלץ להרדים את החולדה, מכיוון שכואב לה לחוות את הפירסינג.

3. פעולת שיבוץ חוטים עבור Baihui (GV 20)

1. אתרו את נקודת הדיקור Baihui (GV 20) בחולדות בנקודת האמצע הימנית של עצם הקודקוד (איור 2A). מקמו את החולדות כך שיחשפו את הראש במלואו, כשהאוזניים משוכות קדימה כדי לדמות בקירוב את השיטה המשמשת בבני אדם לחיבור קווי קודקוד האוזן. זהה את נקודת Baihui (GV 20) על ידי מישוש הרכס האורכי המרכזי של הגולגולת ואיתור המיקום בערך בנקודת האמצע שלה. אשר את נקודת הדיקור הזו עוד יותר ברמה שבה האוזניים היו יוצרות מגע עם הראש אם היו מונחות שטוחות, מיישרות קו עם ההצטלבות של התפר הסגיטלי והעצם הקודקודית. השתמש בטוש כדי לסמן את Baihui (GV 20).
2. גילחו את אזור הראש סביב נקודת הדיקור של החולדה באמצעות גוזם (בדרך כלל גוזם זקן חשמלי לגברים).
3. לפני הניתוח, יש לחטא את נקודות הדיקור ואת העור שמסביב על ידי מריחת תמיסת יוד 0.5% בתנועות סיבוביות, החל מהמרכז וכלפי חוץ. לאחר מכן, לבצע תהליך חיטוי משולש: להשתמש יודופור 3x, כל ואחריו יישום של אלכוהול כדי להבטיח טיהור נאות ולהכין את האתר לטכניקה אספטית.
4. השתמש במלקחיים כדי להדק החוצה את התפר הכירורגי נספג 0.2 ס"מ ספוג ספוג במי מלח והניחו אותו בקצה הקדמי של צינור המחט. לאחר מכן, חבר אותו לליבת המחט.
5. צבטו את האזור סביב Baihui (GV 20) עם האגודל והאצבע המורה ביד אחת, תוך החזקת המחט ביד השנייה.
6. הכנס את המחט אופקית ומהירה בזווית של 15° לפני העור, 0.1 ס"מ מתחת לנקודת Baihui (GV 20), תוך צביטת העור (איור 3A).
7. לאחר שקצה המחט מגיע לגובה של 0.1 ס"מ מעל נקודת הבאי-הווי (GV 20), דחפו את ליבת המחט תוך משיכת צינור המחט כדי להשתיל באופן מלא את התפר הניתוחי הנספג בקוטר 0.2 ס"מ ברקמה התת עורית של נקודת הדיקור (איור 3B).
8. הוציאו לאט את המחט, וודאו שאין תפר חשוף. לחץ על חור המחט עם כותנה יבשה סטרילית במשך 10 שניות כדי למנוע דימום. אם החוט נמצא מחוץ לגוף לאחר הטמעת הקו בנקודות דיקור, חלצו אותו והפעילו אותו מחדש.

4. פעולת שיבוץ חוטים עבור Shenshu (BL 23)

1. נקודת הדיקור שנשו (BL 23) בחולדות ממוקמת 5 מ"מ לרוחב החוליה המותנית^השנייה (איור 2B). ראשית, אתר את החוליה המותנית^{ה -} 6 בהתבסס על פקעת הירך של החולדה. לאחר מכן אתר את החוליה המותנית^השנייה על ידי ספירה כלפי מעלה של ארבעה גופי חוליות. שנשו (BL 23) יהיה 5 מ"מ רוחבי אליו²³.
   הערה: השילוב של נקודות הדיקור Baihui (GV 20) ו- Shenshu (BL 23) הוא קבוצה המשמשת לעתים קרובות בתיאוריית הרפואה הסינית המסורתית (TCM) למניעה וטיפול בהפרעות מוחיות. כפי שאושר על ידי מחקר קודם^20,21, זיווג אקופוינט זה נקבע על יעילותו.
2. השתמש בטוש כדי לסמן את Shenshu (BL 23). יש לגלח את אזור הגב והמותניים סביב נקודת הדיקור של החולדה באמצעות גוזם (בדרך כלל גוזם זקן חשמלי).
3. לפני הניתוח, יש לחטא את נקודות הדיקור ואת העור שמסביב על ידי מריחת תמיסת יוד 0.5% בתנועה מעגלית, החל מהמרכז וכלפי חוץ. לאחר מכן, בצע תהליך חיטוי משולש: השתמש ביודופור שלוש פעמים, כל אחת ואחריה יישום של אלכוהול כדי להבטיח טיהור נאות והכנת האתר לטכניקה אספטית.
4. השתמש במלקחיים כדי להדק החוצה את התפר הניתוחי נספג 0.5 ס"מ ספוג ספוג במי מלח ומקם אותו בקצה הקדמי של צינור המחט. לאחר מכן, חבר אותו לליבת המחט.
5. מתח את העור עם האצבע המורה והאמצעית של היד הלוחצת או האגודל והאצבעות המורה. החזק את המחט עם היד המנוקבת.
6. הכנס במהירות את המחט בניצב לנקודה 0.25 ס"מ מתחת לשנשו (BL 23). ראו איור 4A.
7. לאחר שקצה המחט מגיע ל-0.5 ס"מ מתחת לעור, התאימו את קצה המחט, והפכו את כיוון ההחדרה לצנטריפטלי, ויצרו זווית של 45° עם פני העור והכניסו באלכסון 0.5 ס"מ (איור 4B).
   הערה: חשוב לנקוט משנה זהירות בעת מחט Shenshu (BL 23), אשר ממוקם ליד הכליה. החדרה עמוקה או הרמה ודחיפה חוזרות ונשנות של המחט עלולות לגרום נזק. לכן, אנו ממליצים על עומק החדרה של סביב 0.3-0.6 ס"מ.
8. דחפו את ליבת המחט תוך כדי משיכת הצינור והשתילו באופן מלא את התפר הניתוחי הנספג בקוטר 0.5 ס"מ ברקמת השריר של נקודת הדיקור (איור 4C).
9. משכו באיטיות את המחט, וודאו שאין תפר חשוף. לאחר מכן, לחץ על חור המחט עם כותנה יבשה סטרילית במשך 10 שניות כדי למנוע דימום. אם החוט נמצא מחוץ לגוף לאחר הטמעת הקו בנקודות דיקור, חלצו אותו והפעילו אותו מחדש.

5. טיפול לאחר הניתוח

1. לאחר הניתוח, הניחו את החולדה על כרית חימום קטנה של בעלי חיים בטמפרטורה של 32 מעלות צלזיוס כדי להקל על ההתאוששות מההרדמה. ודא שבעל החיים בהכרה מלאה ומצבו משביע רצון לפני החזרתו למתחם הדיור שלו.
2. לאחר הניתוח, לראות סימנים של תגובות דלקתיות סטריליות באזור הפגוע בתוך שבוע. סימנים אלה עשויים לכלול אדמומיות, נפיחות או הפרשה דמוית מוגלה. בדרך כלל, תסמינים אלה אינם דורשים כל טיפול. עם זאת, אם יש כמות מופרזת של exudate, לנקז ולחטא את האזור הפגוע. במקרים כאלה, להחיל משחה אריתרומיצין עד הפצע מתאושש לחלוטין.

6. בדיקה התנהגותית ובדיקה היסטולוגית

1. בעקבות ההתערבות, בשבוע 8, בצעו את ניסוי מוריס ווטר מבוך (MWM) ^2,24 כדי להעריך את יכולות הלמידה והזיכרון שלהם. בצע את ניסויי הלמידה במשך 5 ימים, עם ארבעה ניסויים ביום. לאחר מכן נהל ניסוי בדיקה לאחר 24 שעות מיום הרכישה האחרון.
2. ביצוע השוואות סטטיסטיות באמצעות תוכנת ניתוח סטטיסטי. לנתח את הנתונים ההתנהגותיים של יכולת הלמידה על ידי ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ומבחן טוקי פוסט-הוק. הערך את המשמעות של נתוני חביון בריחה על ידי ניתוח דו-כיווני חוזר של השונות (ANOVA) ואחריו מבחן בונפרוני שלאחר הוק. ערך של p <0.05 נחשב משמעותי בכל הבדיקות.
3. לאחר ההערכה ההתנהגותית, יש להרדים את החולדות כנ"ל ולהרדים אותן באמצעות זריקות תוך צפקיות של 150 מ"ג/ק"ג משקל גוף של נתרן פנטוברביטל.
4. לתקן את המוח של החולדה באמצעות זילוח באמצעות 4% paraformaldehyde מחורר דרך מערכת כלי הדם²⁵.
   1. החדרה וקיבוע של מחט gavage
      1. הכינו מחט 12G וודאו שהיא ישרה ומתאימה למעבר בחדר של החולדה. אתרו את החדר של החולדה, שהוא בדרך כלל החדר השמאלי, והכניסו את המחט דרכו לאבי העורקים העולה. שלב זה דורש דיוק והבנה טובה של האנטומיה של חולדות.
      2. ברגע שהמחט נמצאת במקומה, השתמש בהמוסטאט כדי להדק את מחט הגבאג' בסמוך לנקודה שבה היא נכנסת לאבי העורקים. זה יעזור לאבטח את המחט ולמנוע ממנה לזוז.
      3. ודא כי המהדק הוא הדוק מספיק כדי להחזיק את המחט היטב, אבל לא כל כך חזק כדי לפגוע באבי העורקים או לעכב את זרימת הדם. מחט gavage צריך להישאר אבי העורקים עולה לאורך כל ההליך כדי לשמור על זילוח תקין.
   2. זילוח עם מי מלח רגילים
      1. מכינים מזרק 50 סמ"ק ללא מחט לזילוח. חברו את הקצה השני של מחט הגבאג', שנמצא מחוץ לגוף החולדה, למזרק המלא במי מלח רגילים.
      2. בצע חתך קטן כדי לחתוך את תוספתן פרוזדורים ימין כדי לאפשר לדם לזרום החוצה מהלב. שלב זה מבטיח כי הדם נעקר על ידי מלוחים במהלך זילוח.
      3. מתחילים להזריק את המלח הרגיל לאבי העורקים העולה בקצב קבוע וקבוע. זה יהיה לשטוף את הדם ולהכין את הרקמות לקיבוע.
      4. יש לעקוב אחר הנוזל היוצא מתוספתן הפרוזדורים הימני ולהיות מוכנים להחליף את המזרק לפי הצורך כדי לשמור על זילוח רציף עם מי מלח טריים.
         מונחים, להתכונן לחורר עם הקיבוע.
      5. החליפו את המזרק המכיל מי מלח במזרק המכיל 4% פרפורמלדהיד, חומר קיבוע נפוץ בהיסטולוגיה. המשך עם זילוח באמצעות paraformaldehyde כדי לתקן את הרקמות במקום לעיבוד וניתוח הבאים.
         הערה: במהלך הליך זה, חיוני לשמור על טכניקות אספטיות למניעת זיהום ולטפל בחולדה בעדינות כדי למזער את הפגיעה. בנוסף, יש להכשיר את כל אנשי הצוות המעורבים בטכניקה כדי להבטיח עקביות ויעילות.
5. הסר את מוח החולדה והכנס אותו לבקבוק דגימה המכיל 4% paraformaldehyde למשך 24-48 שעות ב 4 ° C^25,26. בצע התייבשות אתנול וטיפול בקסילן צעד אחר צעד, ולאחר מכן קטעי קורונל רציפים קונבנציונליים (4-5 מיקרומטר) למדידה. להעריך את המורפולוגיה ואת האובדן של נוירונים בהיפוקמפוס בכל קבוצה באמצעות צביעה Hematoxylin ו Eosin (H&E) (200x).
   הערה: בדיקת נקרופסי להערכת נגעים במערכת העיכול (GI) לא נערכה על המכרסמים בהתבסס על היעדר סימנים קליניים המעידים על הפרעות במערכת העיכול לאורך כל תקופת הניסוי. בעלי החיים לא הציגו תגובות שליליות גלויות שיצביעו על נוכחות של פתולוגיות כאלה.

תוצאות

מאמר זה מציג את שיטת הפעולה הספציפית של TEAT בחולדות דמויות מחלת אלצהיימר. הוא דן באלמנטים התפעוליים הקריטיים של TEAT במחקר ניסיוני כדי לספק התייחסות למחקרים עתידיים.

TEAT משפר את הלמידה בחולדות דמויות מחלת אלצהיימר
כפי שמודגם בתרשים הזרימה (איור 5), במ?...

Discussion

זמן התערבות
האטיולוגיה של אלצהיימר מורכבת, והפתוגנזה שלה נותרה לא ודאית. נכון לעכשיו, אין טיפול יעיל למחלה, והקורס שלה הוא בלתי הפיך. לכן, הקהילה האקדמית הגיעה לקונצנזוס על החשיבות של התמקדות במניעה וטיפול באלצהיימר. אסטרטגיות המניעה והטיפול באלצהיימר שמות דגש על התערבות מוקדמ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% saline, 4% paraformaldehyde, Hematoxylin, Eosin Y (water-soluble), absolute ethanol, 0.01M PBS powder, xylene, hydrochloric acid, embedded paraffin, neutral gum	sinopharm (www.sinopharm.com)
5-0 absorbable surgical suture	bodamedical (www.bodamedical.com)
70% alcohol, iodophor, cotton ball			Used for disinfection.
chloral hydrate	sigma	C8383
coverslips, glass slides	Guangzhou Wuqiang Experimental Equipment Co., Ltd
Dehydrator	Wuhan Junjie JT-12J Computerized Biological Tissue Dehydrator
DELUXE THERMOSTAT HEAT MAT	Zhenhua Instruments		For maintaining the body temperature of rats.
D-galactose	sigma	G0750
electric men's beard trimmer			Used for shaving rats.
Electronic scale for small animals (ZK-DST)	Henan Zhike Information Technology Co., Ltd
erythromycin ointment	frontpharm
glass dish			Used to place cut absorbable sutures.
High-Pressure Steam Sterilization Pot (YM100Z)	Shanghai Sanshen medical equipment factory		For sterilization of surgical instruments.
Ice Maker (CMB40)	Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.
Microscope (BX-53)	OLYMPUS
milk powder			Used for the MWM test.
Morris Water Maze Video Tracking System & Data Analysis Software (Version: Watermaze 2.0)	Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd
No.6 thread-embedding needle	bodamedical (www.bodamedical.com)
ophthalmic scissors, trays, tweezers
Pathology Microtome  (RM 2016)	LEICA, Germany
pentobarbital	Germany	P11011
permanent marker			Used to mark the acupoint.
Slicing knives (R35)	Feathers, Japanese
soap			Used to wash hands.
sterile gloves