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Résumé

Cette étude présente un protocole de thérapie d’acupuncture par encastrement de fils chez des rats semblables à la maladie d’Alzheimer.

Résumé

La thérapie par enrobage de fil (TEAT) est un traitement qui prévient et gère les maladies en insérant une suture biodégradable dans un point d’acupuncture, fournissant une stimulation durable. Le TEAT est une approche simple qui évite l’inconfort de l’acupuncture régulière et procure des effets thérapeutiques durables. Cet article traite de l’impact potentiel du TEAT sur les capacités d’apprentissage et de mémoire des rats présentant des symptômes semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer. Étant donné que la dégénérescence neuronale et les troubles cognitifs induits chimiquement chez les rats ne reflètent pas entièrement les véritables changements pathologiques observés dans la maladie d’Alzheimer. Par conséquent, notre groupe de recherche a désigné ces manifestations comme des symptômes similaires à ceux de la maladie d’Alzheimer. Un protocole a été établi pour décrire la sélection des points d’acupuncture, le processus d’opération et les précautions nécessaires pour la tête et le bas du dos. L’expérience a été menée sur trois groupes : un groupe témoin, un groupe modèle et un groupe TEF, chacun contenant 6 rats. Pour induire des symptômes semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer, des rats ont reçu une injection intrapéritonéale de D-galactose pendant 7 semaines (49 jours). Les rats du groupe TEAT ont reçu un traitement d’enrobage d’acupoint catgut. Après la période d’intervention, un labyrinthe d’eau Morris (MWM) a été réalisé pour évaluer l’apprentissage et la mémoire des rats. Par la suite, les rats ont été sacrifiés et leur tissu cérébral a été examiné. Un examen histologique a été réalisé pour comprendre les effets du TEAT sur la pathologie des rats présentant des symptômes de la maladie d’Alzheimer. Cette étude suggère que le TEAT peut améliorer l’apprentissage et la mémoire chez les rats présentant des symptômes semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer, indiquant une nouvelle approche de traitement potentiellement prometteuse pour cette maladie neurodégénérative.

Introduction

L’acupuncture à enrobage de fil (TEA) consiste à intégrer du catgut ou des sutures résorbables dans des points d’acupuncture à l’aide d’une aiguille spéciale. Cette technique a un effet prolongé jusqu’à ce que les sutures soient absorbées et dégradées. Il fournit une stimulation continue et soutenue des points d’acupuncture pendant une semaine ou plus1, obtenant un résultat comparable sans avoir besoin de procédures répétitives quotidiennes2. Cela réduit le nombre de patients cherchant un traitement médical, économisant ainsi dans une certaine mesure les ressources médicales. Ces dernières années, le TEAT a été de plus en plus utilisé dans divers domaines médicaux en Chine, notamment la médecine interne, la médecine externe, la dermatologie, les traits du visage, la gynécologie et la pédiatrie3. Des études ont montré qu’il est efficace pour produire des effets fiables à long terme pour certaines maladies chroniques et complexes, telles que l’épilepsie4 et la paralysie du nerf facial5. Il présente les avantages d’un traumatisme minimal et d’une utilisation simple6. De plus, les coûts de traitement des TILS sont inférieurs à ceux de l’électroacupuncture (EA)7. Par conséquent, le TEAT est de plus en plus valorisé dans la recherche clinique et scientifique.

La maladie d’Alzheimer (MA) est une maladie neurodégénérative qui progresse avec le temps. Son processus physiopathologique commence à s’accumuler environ 20 ans avant l’apparition des symptômes cliniques, mais son mécanisme n’est pas encore entièrement compris8. Compte tenu de la disponibilité limitée de médicaments efficaces contre la maladie d’Alzheimer, la recherche se concentre de plus en plus sur les stades prodromiques et précliniques de la maladie9. La prévention est une stratégie cruciale pour lutter contre le développement et la progression de la maladie d’Alzheimer 9,10. Ces dernières années, la médecine traditionnelle chinoise (MTC) a fait des progrès significatifs et devrait offrir de nouvelles possibilités pour prévenir et traiter la MA 11,12. En tant que sous-type d’acupuncture, le TEAT est préféré aux autres thérapies en raison de sa large gamme de traitements, de son traumatisme minimal, de son fonctionnement simple, de sa faible fréquence de traitement et de son efficacité durable6. De nouvelles publications suggèrent que les TEAT pourraient être bénéfiques pour les personnes atteintes d’obésité13,14, de diabète15, d’insomnie16, d’ostéoporose postménopausique17 et de dépression18, qui sont tous des facteurs de risque de la MA. Il améliore également la sénescence chez les rats vieillissants en régulant la mitophagie2, améliore l’apprentissage spatial et les troubles de la mémoire, atténue les dommages pathologiques de l’hippocampe et inhibe la réponse inflammatoire chez les rats atteints de démence vasculaire (VD)19. Il m’a semblé intéressant de déterminer si le TEAT pouvait également agir sur les processus pathologiques au cours de la MA.

La recherche actuelle manque d’uniformité et de normalisation dans plusieurs éléments critiques du fonctionnement du TEAT, notamment la méthode d’intégration, l’outil d’intégration, le fil et la période d’intervalle d’intégration. Ce manque de standardisation affecte l’évaluation de l’effet de la thérapie et l’exploration des mécanismes connexes et limite la promotion et la communication externes. Des recherches antérieuresont démontré que l’administration intrapéritonéale de D-galactose (D-gal) peut induire des changements pathologiques semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer chez les rats, y compris la dégénérescence neuronale et les troubles cognitifs. De plus, il a été démontré que l’électroacupuncture à Baihui (GV20) et Shenshu (BL23) améliore efficacement le déclin cognitif, atténue la neuroinflammation et réduit les dommages neuronaux. Cette étude prend l’exemple de rats modèles semblables à la maladie d’Alzheimer pour présenter la sélection des points d’acupuncture et le processus de fonctionnement et les précautions du TEAT dans ce modèle. Il traite des éléments opérationnels critiques du TEAT dans la recherche expérimentale afin de fournir une référence pour les études futures.

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Protocole

Toutes les expériences ont été menées conformément au Guide des National Institutes of Health pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvées par le Comité de gestion et d’utilisation des animaux de laboratoire du Centre provincial de contrôle et de prévention des maladies du Hubei. Au total, 18 rats femelles Sprague-Dawley (SD) âgés de 3 mois pesant de 220 à 250 g ont été utilisés pour le test. Tous les rats ont été maintenus sur un cycle lumière/obscurité de 12 heures à 23 ± 1 °C et 40 à 50 % d’humidité, avec un accès libre à la nourriture et à l’eau. Après une période d’acclimatation d’une semaine, au cours de laquelle les rats ont été autorisés à s’habituer aux conditions du laboratoire, les expériences ont été lancées.

1. Développement du modèle

  1. Le plan d’expérience est illustré à la figure 1. Répartissez au hasard 18 rats femelles Sprague-Dawley de 3 mois pesant de 220 à 250 g en groupes témoins, modèles et trayons. Chaque groupe est composé de 6 rats.
  2. Injecter quotidiennement du D-galactose (D-gal ; 120 mg/kg/jour), tandis que le groupe témoin reçoit des injections salines (120 mg/kg/jour), pendant 7 semaines (49 jours) dans la région ventrale inférieure22. L’injection doit être administrée quotidiennement entre 8h00 et 9h00.
  3. Pesez les rats le 7ème jour de chaque semaine entre 9h00 et 10h00. L’expérience a duré 49 jours. Enterrez les fils tous les 14jours les 14, 28et 42e jours. Fixez l’heure de chaque intégration de fil entre 9h00 et 12h00.
  4. Poursuivre l’administration intrapéritonéale de D-galactose pendant 7 semaines pour induire des manifestations pathologiques liées à la maladie d’Alzheimer chez le rat22.

2. Préparation pour le trayon

  1. Stérilisez les instruments chirurgicaux tels que les ciseaux ophtalmiques, les plateaux et les pinces à épiler et désinfectez-les. Nettoyez soigneusement les surfaces de l’environnement de la salle d’opération et désinfectez.
  2. Préparez la plate-forme chirurgicale en posant un petit coussin chauffant pour animaux à plat sur la surface, suivi d’un drapage avec une serviette stérile. Ensuite, placez la planche de commande nettoyée et désinfectée en douceur sur le dessus, avec le côté rugueux vers le haut. Ensuite, allumez le coussin chauffant et réglez la température à 32 °C.
  3. Pour l’intervention, choisissez une aiguille d’enrobage de fil jetable n° 6 d’un diamètre de 0,6 mm et une suture chirurgicale résorbable 5-0 (suture au collagène) d’une longueur de 2 cm. Coupez la suture chirurgicale résorbable 5-0 de 2 cm en morceaux de 0,5 cm et 0,2 cm à l’aide de ciseaux ophtalmiques. Trempez le fil coupé dans une solution saline à 0,9 % et réservez.
  4. Lavez-vous les mains à l’eau et au savon pendant 20 secondes, puis séchez-les. Ensuite, portez des gants stériles.
  5. Anesthésier les rats à l’aide d’une injection IP d’hydrate de chloral (300 mg/kg) dans la région ventrale inférieure, en veillant à ce que l’anesthésie soit confirmée lorsque les animaux ne répondent pas dans un plan chirurgical, en fonction de l’absence de réponse à un test de pincement des orteils, et en maintenant un état physiologique stable. De plus, pour prévenir la sécheresse de la cornée et les dommages potentiels pendant que les rats sont sous anesthésie, appliquez une quantité généreuse de pommade vétérinaire sur les yeux, en veillant à ce qu’ils restent lubrifiés tout au long de la procédure.
    REMARQUE : Il est recommandé d’anesthésier le rat, car il est douloureux pour lui de ressentir le piercing.

3. Opération d’encastrement de fils pour Baihui (GV 20)

  1. Localisez le point d’acupuncture Baihui (GV 20) chez le rat au milieu droit de l’os pariétal (Figure 2A). Positionnez les rats de manière à exposer complètement la tête, avec les oreilles tirées vers l’avant pour se rapprocher de la méthode utilisée chez les humains pour connecter les lignes de l’apex de l’oreille. Identifiez le point Baihui (GV 20) en palpant la crête longitudinale centrale du crâne et en localisant l’emplacement à peu près à son milieu. Confirmez davantage ce point d’acupuncture au niveau où les oreilles entreraient en contact avec la tête si elles étaient posées à plat, en s’alignant avec l’intersection de la suture sagittale et de l’os pariétal. Utilisez un marqueur pour marquer Baihui (GV 20).
  2. Rasez la zone de la tête autour du point d’acupuncture du rat à l’aide d’une tondeuse (généralement une tondeuse à barbe électrique pour hommes).
  3. Avant la chirurgie, désinfectez les points d’acupuncture et la peau environnante en appliquant une solution d’iode à 0,5 % en mouvements circulaires, en commençant par le centre et en se déplaçant vers l’extérieur. Par la suite, effectuez un triple processus de désinfection : utilisez l’iodophor 3x, chacun suivi d’une application d’alcool pour assurer une bonne décontamination et préparer le site pour la technique aseptique.
  4. À l’aide d’une pince, clampez la suture chirurgicale résorbable de 0,2 cm imbibée de solution saline et placez-la à l’extrémité avant du tube de l’aiguille. Ensuite, connectez-le à l’âme de l’aiguille.
  5. Pincez la zone autour de Baihui (GV 20) avec le pouce et l’index d’une main, tout en tenant l’aiguille de l’autre.
  6. Insérez l’aiguille horizontalement et rapidement à un angle de 15° par rapport à la surface de la peau, à 0,1 cm sous le point Baihui (GV 20), tout en pinçant la peau (Figure 3A).
  7. Une fois que la pointe de l’aiguille atteint 0,1 cm au-dessus du point Baihui (GV 20), poussez le noyau de l’aiguille tout en rétractant le tube de l’aiguille pour implanter complètement la suture chirurgicale résorbable de 0,2 cm dans le tissu sous-cutané du point d’acupuncture (Figure 3B).
  8. Retirez lentement l’aiguille, en vous assurant qu’aucune suture n’est exposée. Appuyez sur le trou de l’aiguille avec du coton sec stérile pendant 10 secondes pour éviter les saignements. Si le fil est à l’extérieur du corps après avoir intégré la ligne aux points d’acupuncture, extrayez-le et réopérez-le.

4. Opération d’encastrement de fils pour Shenshu (BL 23)

  1. Le point d’acupuncture Shenshu (BL 23) chez le rat est situé à 5 mm latéralement de la 2e vertèbre lombaire (Figure 2B). Tout d’abord, localisez la 6e vertèbrelombaire en fonction du tubercule de la hanche du rat. Localisez ensuite la 2e vertèbrelombaire en comptant vers le haut quatre corps vertébraux. Shenshu (BL 23) sera de 5 mm latéral à23.
    REMARQUE : La combinaison des points d’acupuncture Baihui (GV 20) et Shenshu (BL 23) est un ensemble fréquemment utilisé dans la théorie de la médecine traditionnelle chinoise (MTC) pour la prévention et le traitement des troubles cérébraux. Comme l’ont confirmé des recherches antérieures20,21, cette association de points d’acupuncture a été établie pour son efficacité.
  2. Utilisez un marqueur pour marquer Shenshu (BL 23). Rasez le dos et la taille autour du point d’acupuncture du rat à l’aide d’une tondeuse (généralement une tondeuse à barbe électrique).
  3. Avant la chirurgie, désinfectez les points d’acupuncture et la peau environnante en appliquant une solution d’iode à 0,5 % dans un mouvement circulaire, en commençant par le centre et en se déplaçant vers l’extérieur. Par la suite, effectuez un triple processus de désinfection : utilisez l’iodophore trois fois, chacune suivie d’une application d’alcool pour assurer une bonne décontamination et une préparation du site pour la technique aseptique.
  4. À l’aide d’une pince, clampez la suture chirurgicale résorbable de 0,5 cm imbibée de solution saline et placez-la à l’extrémité avant du tube de l’aiguille. Ensuite, connectez-le à l’âme de l’aiguille.
  5. Étirez la peau avec l’index et le majeur de la main pressante ou le pouce et l’index. Tenez l’aiguille avec la main perforatrice.
  6. Insérez rapidement l’aiguille perpendiculairement dans le point situé à 0,25 cm sous le Shenshu (BL 23). Voir la figure 4A.
  7. Une fois que la pointe de l’aiguille atteint 0,5 cm sous la peau, ajustez la pointe de l’aiguille en rendant la direction d’insertion centripète, formant un angle de 45° avec la surface de la peau et insérez obliquement 0,5 cm (Figure 4B).
    REMARQUE : Il est important de faire preuve de prudence lors de l’aiguille du Shenshu (BL 23), qui est situé près du rein. Une insertion profonde ou un soulèvement et une poussée répétés de l’aiguille peuvent causer des dommages. Par conséquent, nous recommandons une profondeur d’insertion d’environ 0,3 à 0,6 cm.
  8. Poussez l’âme de l’aiguille tout en rétractant le tube et implantez complètement la suture chirurgicale résorbable de 0,5 cm dans le tissu musculaire du point d’acupuncture (Figure 4C).
  9. Retirez lentement l’aiguille en vous assurant qu’aucune suture n’est exposée. Ensuite, appuyez sur le trou de l’aiguille avec du coton sec stérile pendant 10 secondes pour éviter les saignements. Si le fil est à l’extérieur du corps après avoir intégré la ligne aux points d’acupuncture, extrayez-le et réopérez-le.

5. Soins postopératoires

  1. En postopératoire, placez le rat sur un petit coussin chauffant pour animaux réglé à une température de 32°C pour faciliter la récupération de l’anesthésie. Assurez-vous que l’animal est pleinement conscient et que son état est satisfaisant avant de le remettre dans son enclos.
  2. Après la chirurgie, observez des signes de réponses inflammatoires stériles dans la zone touchée dans la semaine. Ces signes peuvent inclure une rougeur, un gonflement ou un écoulement semblable à du pus. En règle générale, ces symptômes ne nécessitent aucun traitement. Cependant, s’il y a une quantité excessive d’exsudat, drainez et désinfectez la zone touchée. Dans de tels cas, appliquez une pommade à l’érythromycine jusqu’à ce que la plaie se rétablisse complètement.

6. Tests comportementaux et examen histologique

  1. Après l’intervention, à la semaine 8, effectuez l’expérience Morris Water Maze (MWM) 2,24 pour évaluer leurs capacités d’apprentissage et de mémoire. Effectuez les épreuves d’apprentissage sur 5 jours, à raison de quatre épreuves par jour. Administrez ensuite un essai de sonde après 24 heures à compter du dernier jour d’acquisition.
  2. Effectuer des comparaisons statistiques à l’aide d’un logiciel d’analyse statistique. Analyser les données comportementales de la capacité d’apprentissage par analyse de variance à sens unique (ANOVA) et test de Tukey post-hoc. Évaluez la signification des données de latence d’échappement par analyse de variance à mesures répétées (ANOVA) bidirectionnelle suivie du test de Bonferroni post-hoc. Une valeur de p <0,05 est considérée comme significative dans tous les tests.
  3. Après l’évaluation comportementale, anesthésier les rats comme ci-dessus et euthanasier par injections intrapéritonéales de 150 mg/kg de poids corporel de pentobarbital sodique.
  4. Fixer le cerveau du rat par perfusion à l’aide de 4% de paraformaldéhyde perfusé par le système vasculaire25.
    1. Insertion et fixation de l’aiguille de gavage
      1. Préparez une aiguille 12G et assurez-vous qu’elle est droite et adaptée au passage dans le ventricule du rat. Localisez le ventricule du rat, qui est généralement le ventricule gauche, et insérez l’aiguille à travers celui-ci dans l’aorte ascendante. Cette étape nécessite de la précision et une bonne compréhension de l’anatomie du rat.
      2. Une fois l’aiguille en place, utilisez un hémostat pour serrer l’aiguille de gavage près du point où elle pénètre dans l’aorte. Cela aidera à sécuriser l’aiguille et à l’empêcher de bouger.
      3. Assurez-vous que la pince est suffisamment serrée pour maintenir l’aiguille en toute sécurité, mais pas au point d’endommager l’aorte ou d’entraver la circulation sanguine. L’aiguille du gavage doit rester dans l’aorte ascendante tout au long de la procédure pour maintenir une bonne perfusion.
    2. Perfusion avec une solution saline normale
      1. Préparez une seringue de 50cc sans aiguille pour la perfusion. Fixez l’autre extrémité de l’aiguille du gavage, qui se trouve à l’extérieur du corps du rat, à la seringue remplie de solution saline normale.
      2. Faites une petite incision pour couper l’appendice auriculaire droit afin de permettre au sang de s’écouler du cœur. Cette étape permet de s’assurer que le sang est déplacé par la solution saline pendant la perfusion.
      3. Commencez à injecter la solution saline normale dans l’aorte ascendante à un rythme régulier et constant. Cela permettra d’évacuer le sang et de préparer les tissus à la fixation.
      4. Surveillez le liquide qui sort de l’appendice auriculaire droit et soyez prêt à changer la seringue au besoin pour maintenir une perfusion continue de solution saline fraîche.
        placé, préparez-vous à perfuser avec le fixateur.
      5. Remplacez la seringue contenant du sérum physiologique par une seringue contenant 4 % de paraformaldéhyde, un fixateur couramment utilisé en histologie. Procéder à la perfusion à l’aide du paraformaldéhyde pour fixer les tissus en place pour le traitement et l’analyse ultérieurs.
        REMARQUE : Tout au long de cette procédure, il est crucial de maintenir des techniques d’asepsie pour prévenir l’infection et de manipuler le rat en douceur pour minimiser les blessures. De plus, tout le personnel impliqué doit être formé à la technique pour assurer l’uniformité et l’efficacité.
  5. Retirez la cervelle de rat et placez-la dans un flacon contenant 4% de paraformaldéhyde pendant 24-48 h à 4 °C25,26. Effectuer la déshydratation à l’éthanol et le traitement au xylène étape par étape, suivis de coupes coronales continues conventionnelles (4-5 μm) pour la mesure. Évaluer la morphologie et la perte de neurones de l’hippocampe dans chaque groupe à l’aide de la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E) (200x).
    REMARQUE : Aucune nécropsie n’a été effectuée chez les rongeurs pour déterminer la présence de lésions gastro-intestinales (GI), en raison de l’absence de signes cliniques indiquant des troubles gastro-intestinaux tout au long de la période expérimentale. Les animaux n’ont présenté aucun effet indésirable manifeste qui suggérerait la présence de telles pathologies.

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Résultats

Cet article présente la méthode de fonctionnement spécifique du TEAT chez les rats de type Alzheimer. Il traite des éléments opérationnels critiques du TEAT dans la recherche expérimentale afin de fournir une référence pour les études futures.

La TEAT améliore l’apprentissage chez les rats semblables à la maladie d’Alzheimer
Comme l’illustre l’organigramme (figure 5), pendant la période d’entraînement adaptatif, on a obs...

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Discussion

Temps d’intervention
L’étiologie de la MA est complexe et sa pathogenèse reste incertaine. À l’heure actuelle, il n’existe aucun traitement efficace contre la maladie, et son évolution est irréversible. Par conséquent, la communauté universitaire est parvenue à un consensus sur l’importance de se concentrer sur la prévention et le traitement de la MA. Les stratégies de prévention et de traitement de la MA mettent l’accent sur l’intervention précoce, suivant le concept de la M...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par des fonds de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (NSFC) n° 82374564 (à YJD) et n° 82074566 (à YJD) et de la base d’héritage Sun Guojie pour l’acupuncture-moxibustion MTC de la Fédération mondiale des sociétés d’acupuncture-moxibustion à Wuhan, en Chine (Fédération mondiale des sociétés d’acupuncture-moxibustion [2019] n° 26) (à YJD) et le projet de construction du studio d’héritage national célèbre de la MTC de l’Administration nationale de la médecine traditionnelle chinoise, Chine (l’Administration nationale de la médecine traditionnelle chinoise [2022] n° 5) (à YJD).

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matériels

NameCompanyCatalog NumberComments
0.9% saline, 4% paraformaldehyde, Hematoxylin, Eosin Y (water-soluble), absolute ethanol, 0.01M PBS powder, xylene, hydrochloric acid, embedded paraffin, neutral gumsinopharm (www.sinopharm.com)
5-0 absorbable surgical suturebodamedical (www.bodamedical.com)
70% alcohol, iodophor, cotton ballUsed for disinfection.
chloral hydratesigmaC8383
coverslips, glass slidesGuangzhou Wuqiang Experimental Equipment Co., Ltd
DehydratorWuhan Junjie JT-12J Computerized Biological Tissue Dehydrator
DELUXE THERMOSTAT HEAT MATZhenhua InstrumentsFor maintaining the body temperature of rats.
D-galactosesigmaG0750
electric men's beard trimmerUsed for shaving rats.
Electronic scale for small animals (ZK-DST)Henan Zhike Information Technology Co., Ltd
erythromycin ointmentfrontpharm
glass dishUsed to place cut absorbable sutures.
High-Pressure Steam Sterilization Pot (YM100Z)Shanghai Sanshen medical equipment factoryFor sterilization of surgical instruments.
Ice Maker (CMB40)Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.
Microscope (BX-53)OLYMPUS
milk powderUsed for the MWM test.
Morris Water Maze Video Tracking System & Data Analysis Software (Version: Watermaze 2.0)Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd
No.6 thread-embedding needlebodamedical (www.bodamedical.com)
ophthalmic scissors, trays, tweezers
Pathology Microtome  (RM 2016)LEICA, Germany
pentobarbitalGermanyP11011
permanent markerUsed to mark the acupoint.
Slicing knives (R35)Feathers, Japanese
soapUsed to wash hands.
sterile gloves

Références

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