המחברים מודים אנדריאה Axtell, סטושי Itoh, MD, ג&#39;ף Velotta, MD, גרנט הויט, רוברט ג רובינס, MD, יו ג&#39;ין, MD, טים דויל, PhD, והדמיה הקטן סטנפורד בעלי חיים Core לקבלת סיוע טכני. המחברים גם להודות AM ביקפורדס, Inc התמיכה של ציוד וטרינרי. מחקר זה נתמך על ידי מענקי מחקר מן המכון הלאומי לבריאות (HL-75774 R01, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), טבק קשורות קליפורניה מחלות תוכנית המחקר של אוניברסיטת קליפורניה (15IT-0257 ו-1514RT 0169) , ומכון קליפורניה עבור הרגנרציה לרפואה (RS1-00183). NH נתמך על ידי מענק של איגוד הלב האמריקני.

1. אינדוקציה של איסכמיה Hindlimb חד צדדית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כלי הניתוח הדרוש לפעולה זו כוללים: מלקחיים הצביע בסדר, הצביע מלקחיים, מספריים באביב, מספריים כירורגיות, מחזיק מחט, והוא מפשק. אנחנו עושים מפשק שלנו באמצעות מהדק כי הוא קטן יותר מאשר retractors זמינים מסחרית. לעקר בכלים אלה לפני הניתוח על ידי החיטוי או מעקר חם חרוז. כלי כויה וסטרילי ספוגיות כותנה דק הצביע יהיה גם צורך בניתוח זה. מומלץ כי את הכלים להיות מעוקרים מחדש בקצות כנדרש במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הכלים מוכנים, במקום את העכבר לתוך תא הרדמה אינדוקציה המכיל 1-3% isoflurane ב 100% חמצן בקצב זרימה של 1L/min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו את העכבר בתא אינדוקציה עד שהוא לא מגיב לגירויים חיצוניים. ואז להסיר את החיה מבית הבליעה אינדוקציה. מומלץ לשטוף את ההרדמה מתיבת לפני פתיחת המכסה, כדי להקטין את החשיפה למפעיל isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אז במקום חיה במצב פרקדן על השולחן מראש ההפעלה ולחבר אותו זרם מתמשך של isoflurane. באמצעות מכונת גילוח חשמלית, להסיר את השיער מן hindlimb. החל קרם להסרת שיער ביסודיות להסיר שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בעמדת פרקדן על משטח לוהט עטוף על שולחן הניתוחים, ולחבר אותו זרם מתמשך של isoflurane. הרחב ולהבטיח את hindlimb עם חתיכת סרט. לאחר hindlimb הוא מאובטח, לנגב את העור עם שלושה עלובי לסירוגין בבטאדין ואלכוהול. במשך שארית ההליך הכירורגי, במיקרוסקופ לנתיחה בבית 10X או 20X הגדלה לקבל תצוגה מוגדלת של האזור hindlimb. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים בסדר ומספריים כירורגית, לעשות חתך של העור, כ 1 ס&quot;מ, מהברך כלפי הירך המדיאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש שנאגרו מלוחים פוספט (PBS), לחלח בסדר צמר גפן הצביע, בעדינות לסלק רקמות שומן תת עורי המקיפים את שריר הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבא, להחיל את כויה רוחבי כדי לחרות ו לנתח באמצעות רקמת שומן תת עורי כדי לחשוף את עורק הירך הבסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מפשק לפתוח את הפצע כדי לקבל תצוגה טובה יותר של כלי הדם בגפיים התחתונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים בסדר ספוגית כותנה דק ומחודד, בעדינות לחדור דרך מעטה הירך קרומי לחשוף את צרור neurovascular. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, באמצעות מערכת נקייה של מלקחיים בסדר צמר גפן, לבתר להפריד את עורק הירך מהעורק עצב הירך ואת במיקום פרוקסימלי ליד המפשעה. לאחר דיסקציה, לעבור קווצת תפר 7-0 משי מתחת סוף הפרוקסימלי של עורק הירך. לחסום את עורק הירך הפרוקסימלית באמצעות קשרים כפולים. מניחים את העניבה על הספינה כמו הפרוקסימלי של הפצע ככל האפשר כדי להשאיר אורך לקשור את השני קטע להתערב כי יהיה transected. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את עורק הירך מעורק הירך במיקום דיסטלי קרוב לברך. Pass קווצת תפר 7-0 מתחת בסוף הדיסטלי של העורק הפמורלי בקרבה העורק popliteal. לחסום את כלי השיט באמצעות קשרים כפולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום את עורק הירך הדיסטלי עם קבוצה שנייה של קשרים כפולים הפרוקסימלי רק כדי להגדיר את הראשון של קשרים. סט שני של התפרים ישמש מרתק העורק במהלך ההליך העסקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן דומה, למטרות מרתק, לחסום את עורק הירך הפרוקסימלי עם קבוצה שנייה של קשרים כפולים דיסטלי רק כדי להגדיר את הראשון של קשרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect קטע של עורק הירך בין קשרים דיסטלי וסמוך ספוגית כותנה דק מחודד מספריים האביב. היזהר לא לנקב את קיר עורק הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מפשק ולסגור את החתך באמצעות תפרים Vicryl 5-0. תפרים אלה אינם צריכים להסיר במועד מאוחר יותר, כפי שהם נמסים מעצמם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חתך סגור, במקום חיה על גבי משטח לוהט עטוף בכלוב התאוששות לפקח ברציפות עד ערה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חיה התאוששה במשך שעה 1, להמשיך את הצעד דופלר לייזר זלוף דם כדי לאשר את הגיוס איסכמיה. </li></ol> 2. לייזר דופלר זלוף דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל את הצעד דופלר לייזר זלוף, במקום את העכבר לתוך תא הרדמה אינדוקציה המכיל 1-3% isoflurane ב 100% חמצן בקצב זרימה של 1L/min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו את העכבר בתא אינדוקציה עד שהוא לא מגיב לגירויים חיצוניים. ואז להסיר את החיה מבית הבליעה אינדוקציה. מומלץ לשטוף את ההרדמה מתיבת לפני פתיחת המכסה, כדי להקטין את החשיפה למפעיל isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את חיה על השולחן מראש ההפעלה מחובר זרימה רציפה של isoflurane. ואז להסיר את השיער מן hindlimb באמצעות מכונת גילוח חשמלית ואחריו קרם להסרת שיער לפי הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת השיער,במקום חיה על משטח מחומם 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות תחת זרימה רציפה של isoflurane. צג הטמפרטורה הליבה כדי להבטיח euthermia, כמו שינויי טמפרטורה יהיה להשפיע במידה ניכרת זלוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 5 דקות, במקום חיה במצב פרקדן על משטח אור קליטת שאינם משקפים כגון בד בצבע ירוק, קשור זרימה רציפה של isoflurane. הרחבת hindlimbs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, להפעיל את הלייזר דופלר imager ואת תוכנת הרכישה לאתחל את התוכנה. ציין את גודל שדה הראייה ואת הפתרון. עדיף לשמור את שדה הראיה וצפיפות פיקסל עקבי בין בעלי חיים על מנת להפוך בעתיד ניתוח קל יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתיחת קובץ חדש. לחצו על התחל כדי להתחיל לרכוש את נתוני התמונה. באופן כללי, imager מזהה אוטומטית את המרחק של העכבר, אבל אם תתבקש לעשות זאת, ציין את המרחק של החיה כדי imager. הלייזר יראה את הגבולות של שדה הראייה ולאחר מכן להתחיל לרכוש נתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הרכישה תושלם, התמונה תתחיל להופיע מגוון של צבעים המעידים על רמת זלוף דם לרגליים. צבעים ניתן להגדיר מגוון זלוף ספציפיים יותר להשוות נתונים בין בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר תושלם רכישת נתונים, שמור את הקובץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז להחזיר את החיה לכלוב התאוששות ולנטר את חיה ברציפות עד ערה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח את הנתונים, השתמש התאמה לסף בתוכנה ניתוח לחסר כל רעשי רקע. סף של 0.2 בדרך כלל ערך סביר. בחר 2 אזורים של עניין, או ROIs, כי כיסוי כל שטח hindlimb. מגוון של ציוני דרך ניתן להשתמש כדי לתקנן את ההחזר על ההשקעה בין איברים חיים. ואז לקבוע את השתנות אומר זלוף וב ההחזר על ההשקעה. ההבדל זלוף זלוף יחס בין האיבר איסכמית איבר לשלוט אז יכול להיות נחוש בקלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך זה ניתן לחזור לעקוב אחרי השינויים זלוף hindlimb לאורך זמן. בשלב הזמן הרצוי, בעל החיים יכול להיות מורדמים לצורך הערכה של תפקוד רקמות לעומת נתוני התמונה זלוף. </li></ol> 3. נציג תוצאות: האנטומיה של vasculature hindlimb מוצג באיור 1 2. תרשים נציג hindlimb לאחר explantation עורק הירך מוצג באיור 2. כדי לאשר את הגיוס של איסכמיה של hindlimb, ניתוח לייזר דופלר תמונה זלוף מדגים הפחתה דרמטית את זרימת הדם אל איבר איסכמי, בהשוואה איבר הבקרה, כפי שמוצג באיור 3. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="איור 1" width="600" height="406" /> באיור 1. אנטומיה של vasculature hindlimb. כוכביות לציין את מיקומם של קשירת לזירוז של איסכמיה hindlimb. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="תמונה 2" width="600" height="450" /> איור 2. דיאגרמה נציג מראה את האנטומיה של hindlimb לאחר קשירת של העורק הפמורלי באתרי הפרוקסימלית ומ דיסטלי לאחר ההסרה של עורק הירך. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="איור 3" width="600" height="256" /> 3. איור לייזר דופלר תמונות מראה זרימת הדם לפני ואחרי הגיוס של איסכמיה כדי hindlimb שמאל (מסומן בחץ).

<ol>
	<li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia.">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).</li><li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization.">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li><li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li></ol>

ישנם כמה מקורות של השתנות לשקול בעת תכנון וביצוע מודלים איסכמיה hindlimb. ראשית, ברמה של איסכמיה עשויים להשתנות בהתאם למיקום של קשירת ביחס לזה של ענפים בצד. לכן, עבור עקביות של המודל, החיות צריכים לעבור את אותה רמה של קשירת העורקים. מקור נוסף של השתנות התאוששות איסכמי קשורה לגיל של החיות, עם בעלי חיים צעירים (6-8 שבועות) לאחר שיעורי החלמה מהירה ומלאה יותר מאשר בעלי חיים מבוגרים יותר (80-10 חודשים), כפי שנבחנו על ידי hemodynamic (כלומר זלוף לייזר דופלר) או פונקציונלי (כלומר בדיקה הליכון) מודד. עבור מחקרים בהם אחד הוא הערכת סוכן angiogenic, זה עשוי להיות עדיף להשתמש בבעלי חיים מבוגרים, כי הבדל גדול בין הקבוצות אפשר לראות עם התערבות טיפולית. לעומת זאת, עבור מחקרים בהם אחד להערכת גורם אנטי angiogenic, זה עשוי להיות עדיף להשתמש בבעלי חיים צעירים על מנת למקסם את גודל ההשפעה 3. אם מבוצע כהלכה, לא צריך להיות מינימלי לסיבוכים כגון דימום, זיהום, או תמותה. אם הדימום מתרחש על ידי הפרעה מקרית של עורק הירך או כלי אחר, לחץ מתון עם צמר גפן סטרילי היטה המוליך או גזה יש להחיל לאתר של דימום עד שהדימום ייפסק. בעלי חיים מראה סימנים של זיהום יש לטפל עם אנטי זיהומיות סוכנים. בעלי חיים מציג נמק משמעותי ייתכן שיהיה צורך beeuthanized. סיבוך זה שכיח יותר אצל בעלי חיים מבוגרים, כמה זנים, כגון עכברים BALB ג 4. בנוסף, מודל איסכמיה hindlimb עלול לגרום לכאב קל עד מתון. לכן, משככי כאבים כגון עצירות או carprofen צריכה להינתן לפי הצורך לטיפול בכאב, על פי המלצות IACUC. לסיכום, אנו הדגימו שיטה פשוטה לשחזור ללימוד PAD במודל של איסכמיה Murine hindlimb. המודל איסכמיה hindlimb עם ניתוח לייזר דופלר הדמיה היא מערכת מצוינת ללמוד פתולוגיות כלי הדם להערכת מועמדים טיפולית.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical Tools</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Constix Cotton Swabs</td>
<td>Tool</td>
<td>Contec</td>
<td>SC-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine (Povidone-iodine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>PDI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70% alcohol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Kendall</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7-0 silk suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Genzyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 vicryl suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Ethicon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>Tool</td>
<td>GE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cautery</td>
<td>Tool</td>
<td>Baxter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System</td>
<td>Equipment</td>
<td>Perimed</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

murine model of hindlimb ischemia 

בארצות הברית, מחלת עורקים היקפית (PAD) משפיעה על כ -10 מיליון אנשים, והיא נפוצה גם ברחבי העולם. טיפולים רפואיים להקלה סימפטומטית מוגבלים. התערבויות כירורגיות או endovascular שימושיים עבור אנשים מסוימים, אבל לטווח ארוך התוצאות הן לעתים קרובות מאכזב. כתוצאה מכך, יש צורך בפיתוח טיפולים חדשים לטיפול PAD. הכנת Murine איסכמיה hindlimb הוא מודל של PAD, והוא שימושי לבדיקה טיפולים חדשים. כאשר לעומת דגמים אחרים של איסכמיה רקמות כגון קשירת עורקים כליליים או מוחין, קשירת עורק הירך מספק מודל פשוט יותר של רקמה איסכמית. יתרונות אחרים של מודל זה הם וקלות הגישה עורק הירך לבין שיעור תמותה נמוך. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את המתודולוגיה של המודל Murine של איסכמיה hindimb חד צדדית. חומרים ותהליכים ספציפיים ליצירת מודל הערכת יתוארו, כולל הערכה של זלוף איבר על ידי לייזר דופלר הדמיה. פרוטוקול זה יכול גם להיות מנוצל להשתלה ולא פולשנית מעקב של תאים, אשר באה לידי ביטוי הואנג et al. 1.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Murine Model of Hindlimb Ischemia

ההליך הכירורגי לזירוז של איסכמיה hindlimb החד צדדית באה לידי ביטוי, עם אישור של איסכמיה על ידי הדמיה זלוף דופלר לייזר.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

57.1K Views.  Stanford University. ההליך הכירורגי לזירוז של איסכמיה hindlimb החד צדדית באה לידי ביטוי, עם אישור של איסכמיה על ידי הדמיה זלוף דופלר לייזר.

Video: Murine Model of Hindlimb Ischemia

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

מודל hypoxic אנצפלופתיה איסכמי של איסכמיה הלידה

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This pathology causes symptoms such as intermittent claudication (pain with walking), painful ischemic ulcerations, or even limb-threatening gangrene. It is generally believed that the vascular endothelium, a monolayer of endothelial cells that invests the luminal surface of all blood and lymphatic vessels, plays a dominant role in vascular homeostasis and vascular regeneration. As a result, stem cell-based regeneration of the endothelium may be a promising approach for treating PAD.In this video, we demonstrate the transplantation of embryonic stem cell (ESC)-derived endothelial cells for treatment of unilateral hindimb ischemia as a model of PAD, followed by non-invasive tracking of cell homing and survival by bioluminescence imaging. The specific materials and procedures for cell delivery and imaging will be described. This protocol follows another publication in describing the induction of hindlimb ischemia by Niiyama et al.1

The surgical procedure for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial cells to the ischemic hindlimb is demonstrated, with non-invasive tracking by bioluminescence imaging.

עובריים, נגזר גזע לתאי אנדותל לטיפול איסכמיה Hindlimb

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

LAD-קשירת: מודל Murine של אוטם שריר הלב

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying disuse-atrophy in rodents 4-6. Our study evaluated an alternant method to the gold-standard Morey-Holton HU tail-traction technique in mice. Fifty-four female mice (4-8 mo.) were HU for 14 days (n=34) or 28 days (n=20). Recovery from HU was assessed after 3 days of normal cage ambulation following HU (n=22). Aged matched mice (n=76) served as weight-bearing controls.
Prior to HU a tail ring was formed with a 2-0 sterile surgical steel wire that was passed through the 5th, 6th, or 7th inter-vertebral disc space and shaped into a ring from which the mice were suspended. Vertebral location for the tail-ring was selected to appropriately balance animal body weight without interfering with defecation.
We determined the success of this novel HU technique by assessing body weight before and after HU, degree of soleus atrophy, and adrenal mass following HU. Body weight of the mice prior to HU (24.3 &plusmn; 2.9g) did not significantly decline immediately after 14d of HU (22.7 &plusmn; 1.9g), 28d of HU (21.3 + 2.1g) or after 3 days recovery (24.0 &plusmn; 1.8g). Soleus muscle mass significantly declined (-39.1%, and -46.6%) following HU for 14 days and 28 days respectively (p&lt;0.001). Following 3 days of recovery soleus mass significantly increased to 74% of control values. Adrenal weights of HU mice were not different compared to control mice.
The success of our novel HU method is evidenced by the maintenance of animal body weight, comparable adrenal gland weights, and soleus atrophy following HU, corresponding to expected literature values 2, 7, 8. The primary advantages of this HU method include: 1) ease of tail examination during suspension; 2) decreased likelihood of cyanotic, inflamed, and/or necrotic tails frequently observed with tail-taping and HU; 3) no possibility of mice chewing the traction tape and coming out of the suspension apparatus; and 4) rapid recovery and normal cage activity immediately after HU.

We developed an alternant hindlimb unloading model in mice. The primary advantage of our hindlimb unloading tail-ring method over the conventional Morey-Holton tail-traction technique is a simple straightforward procedure that minimizes stress upon the animal.

שיטת Alternant את המודל המסורתי של נאס&quot;א פריקה Hindlimb ב עכברים

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed under anoxia for 20 hr&#160;(simulated ischemia), and subsequently moved to a normal atmosphere with food (simulated reperfusion). This experimental paradigm results in increased death and neuronal damage, and techniques are presented to assess organism viability, alterations to the morphology of touch neuron processes, as well as touch sensitivity, which represents the behavioral output of neuronal function. Finally, a method for constructing hypoxic incubators using common kitchen storage containers is described. The addition of a mass flow control unit allows for alterations to be made to the gas mixture in the custom incubators, and a circulating water bath allows for both temperature control and makes it easy to identify leaks. This method provides a low cost alternative to commercially available units.

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

A protocol is described that uses anoxia/starvation in C. elegans to model ischemia/reperfusion. Functional outcomes include increased mortality, visible abnormalities in GFP-labeled neuronal processes, and impaired behavioral responses that require neuronal function.

דגם אנוקסיה רעב לאיסכמיה / reperfusion ב<em&gt; ג elegans</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

מאתר כולין לקויה, בתוספת Ethionine (CDE) דיאטה מודל של פגיעה כרונית בכבד

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. Bariatric surgery is currently the most effective long-term treatment for obesity. In addition to weight loss, bariatric surgery produces additional health benefits such as remission of type 2 diabetes, remission of hypertension, and decreased risk of developing certain types of cancer. The mechanisms beyond weight loss for these benefits remain incompletely defined. Therefore, animal models of bariatric surgery are being developed and validated to identify the mechanisms leading to these benefits, with the goal of improving understanding of gastrointestinal physiology and identifying new therapeutic targets. VSG has become the most commonly performed bariatric procedure in the clinic in the United States because it is highly effective at producing weight loss and metabolic improvement, and is simpler to perform than other bariatric procedures. Therefore, we have developed and validated a murine model of VSG. This murine VSG model recapitulates many of the effects of VSG seen in humans, including improved glucose and blood pressure regulation. The method is based on isolation of the stomach, ligation of gastric vessels, and removal of 70% of the stomach by transecting along the greater curvature of the stomach. We have successfully applied this surgical protocol to various genetically modified mouse lines to define the mechanistic contributors to the benefits of VSG. Furthermore, this murine VSG model has been combined with other surgical techniques, to achieve deeper mechanistic insight. Therefore, this is a simple and versatile model for studying gastrointestinal physiology and the health benefits of bariatric surgery.

The following describes the performance of vertical sleeve gastrectomy in mice. This is a type of weight-loss surgery that involves removal of approximately 70% of the stomach.

מודל מאתר של ניתוח אנכי שרוול קיבה

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

ניתוח ספקטרומטר המסה כדי לזהות את אוביקווילציה של EYFP-מתויג CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most animal laboratories.&#160;Contrary to the conventional approach for double ligation of the femoral artery (DLFA), a smaller incision on the right inguinal region was made to expose the proximal femoral artery (FA) to perform DLFA. Then, using a 7-0 suture, the incision was dragged to the knee region to expose the distal FA. Magnetic resonance imaging (MRI) on bilateral hind limbs was used to detect FA occlusion after the surgery. At 0, 1, 3, 5, and 7 days after the surgery, functional recovery of the hind limbs was visually assessed and graded using the Tarlov scale. Histologic evaluation was performed after euthanizing the animals 7 days after DLFA. The procedures were successfully performed on the right leg in ten ApoE-/- mice, and no mice died during subsequent observation. The incision sizes in all 10 mice were less than 5 mm (4.2 &#177; 0.63 mm). MRI results showed that FA blood flow in the ischemic side was clearly blocked. The Tarlov scale results demonstrated that hind limb function significantly decreased after the procedure and slowly recovered over the following 7 days. Histologic evaluation showed a significant inflammatory response on the ischemic side and reduced microvascular density in the ischemic hind limb. In conclusion, this study introduces a modified technique using a miniature incision to perform hind limb ischemia (HLI) using DLFA.

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

This article demonstrates an efficient surgical approach to establish acute ischemia in mice with a small incision. This approach can be applied by most research groups without any laboratory upgrades.

מודל כירורגי מותאם של איסכמיה בגפיים אחוריות ב- ApoE-/- עכברים באמצעות חתך מיניאטורי

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...