בהכרת תודה אנו מודים לחברי מעבדת מרדר. אנו מודים יועץ שלנו, ד&quot;ר איב מרדר, על התמיכה והעידוד שלה. מחקר זה מומן על ידי המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מענקים NS-17813 ו - NS-058110.

1. גרוס Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום סרטן על קרח במשך 30 דקות למערכות משעמם החושי והמוטורי של החיה. להקיף אותו מכל צדדיו עם קרח. יש ללבוש כפפות בעת טיפול הסרטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היכונו לנתיחה ברוטו ידי הנחת את המחבת לנתיחה וכלי תשתמש. Rongeurs, עצם חיתוך מספריים, מספריים קטנים, שיניים מלקחיים, מרית עם קצה קוני, צלחת שחורה Sylgard מצופה, וסיכות חרקים יש צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את סרטן מדלי הקרח ברגל האחוריות כדי למנוע צובט ומניחים אותו במחבת לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הטפרים לראשונה על ידי פיתול כל אחד פנימה. ואז להסיר את כל הרגל, תוך שימוש בתנועות פיתול זהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש rongeurs, להסיר את maxilla מכסה את הפה. גם להסיר את maxillule רך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש rongeurs שוב, להתחיל מהסוף אחורי רוחבי של שריון ולקבל אחיזה טובה על קצה זה. הצמד מטה עם rongeurs ולשבור את חתיכת שריון משם. הקפד להסיר מספיק שריון כדי לאפשר המרית להיכנס הפתיחה. המשך להסיר את הקצה של שריון עד העיניים לחזור בצד השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם הצד החד של המרית, לגרד בעדינות את הרקמה הפנימית הרכה מן הגג של שריון הגב. שמור את המרית במגע עם שריון כדי למנוע נזק STNS. השתמש rongeurs להתנתק חלקי שריון אשר הופרדו הרקמה. כמו כן חלק נפרד הרקמות הרכות של שריון הגחון לוודא להפריד כל השרירים adductor הצמדת רקמות שריון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתנתק שריון הגב כמו האחורי ככל הלב שבו יש שתי ossicles קטנה מבצבצת שריון. גזור ככל האפשר הקדמי. לייצב את Cephalon (&quot;פנים&quot;) באצבע אחת תוך שבירת משם את החלקים הקדמי ביותר של שריון הגב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצד הגחוני של שריון, לשלוף את הלסתות אחד בכל פעם, על ידי עיגון rongeurs על הלסת התחתונה, מסובב אותם החוצה כדי לסלק את הלסת התחתונה מן epistome המצורפת, ומשך אותה משם. שני ossicles ארוך עם שרירים יש לצרף הלסת התחתונה המחולץ אם נעשה כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נפרדת ממנו את הרקמה מן הצדדים של Cephalon ליד העיניים בעזרת מרית. עם מספריים קטנים לנתיחה, חוצים הרקמה כמו ליד הרכס של ossicle כשכבת אפשרי אחר שכבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את סרטן בקיר המחבת לנתיחה ולהשעין אותו לאבטחת אותו במקום (מציפורני ניתן להשתמש לשם כך). חותכים את labrum (&quot;השפה העליונה&quot;) הרחק epistome לוודא שלא להשאיר רקמה כלשהי המצורפת. שימוש עצם חיתוך מספריים בשני חתכים אלכסוניים לתוך שריון הגחון כדי להסיר את Cephalon. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את labrum עם מלקחיים שיניים וחתך את labium (&quot;השפה התחתונה&quot;) הרחק ossicle בצד הגחון. ואז בעדינות להרים את השפתיים הרחק שריון הגחון הנותרים. השתמש במספריים קטנים להפריד את החלק הגחוני של הקיבה מרקמת רירית שריון. כאשר ampullae השוער גלויים, לחתוך את הבטן מן הרקמה צידיו של אותו עד הבטן מופק הסרטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עדיין מחזיק את הבטן על ידי השפה עם מלקחיים, שאר הקיבה בכף היד ושופכים מלוחים לתוך הפה. זה מרחיב את הקיבה ואת עושה את זה קל יותר לחתוך פתוח. גזור מפתיחת בפתחו מטה בין הזכות השוער דרך ossicle בין ampullae. ואז לחתוך באלכסון למטה דרך שני סניפים cardial. חותכים את קצות שלוש שיניים בתוך הקיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבטן על צלחת גדולה, שחורה Sylgard מצופה, עם החלק הפנימי של הבטן כלפי מטה. הצמד מטה חמש פינות להכנת סיכות חרקים למלא את המנה עם מלח קרים, לטבול ההכנה כולה (ראה איור 1). </li></ol> 2. פיין Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> , Micro-לנתיחה כלים נדרשים לנתיחה את הקנס. בפרט, מלקחיים ומספריים באביב יש צורך, כמו גם בעל סיכה עם מחט טונגסטן. ברור, Sylgard מצופה, צלחת פטרי וכמה סיכות חוט דק צריך גם להיות מוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ההגדלה הנמוכה ביותר, התחל מצמיד את דשי ליד השפה שפעם פתיחת הפה. סידור מחדש של שאר הסיכות כדי הכנת מתוח סיכה כלשהו בתחומים אחרים הדרושים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם בזהירות את ובהיפודרמיס הבחין מכסה את החלק התחתון של הכנת וקוצצים אותו על פני להשאיר פיסת ובהיפודרמיס עם שתי נקודות לבנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקלפים את רקמת צהוב, דליל קרומי בתחתית ההכנה. Mvns מחוברים חלושות אל החלק התחתון של רקמה זו. בזהירות להפריד את mvns מרקמות הצהוב כפי שהיא עצרה. בצע את רקמת צהוב ולעקור לצד המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את התהליכים עבה היציאה המוח להאריך laterallי &#39; אלה הם העצבים commisural. לאחר סוף עצב commissural הוא הגיע, להסיר את מסה של רקמה ספוגית מחוץ לבן, כי כבר לחתוך מהצד של המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איפה יוני ובניו לפגוש את גלגלי השיניים, לחתוך את השריר ורקמות לחשוף את אורכו של יוני ובניו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור אל התיקון ובהיפודרמיס הבחין ולנתק אותה. זה צריך להשאיר פתח בעורק המקיף את STG. חותכים דרך הפתח כדי להפריד בין שני שרירים כי האגף STG. הרם את הקצוות של שרירים אלה לחתוך ימינה מתחתם כדי להפריד בינם לבין העורק ולחשוף את alns ו agns. הפרד את השרירים איגוף עד למעלה כמו הסחוס שוכב על STN. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הרקמה המקיפה את עורקי STG עד היכן mvns, dgn, ו dvn להיפגש. עבודה לאורך dvn את lvns לחתוך דרך רקמות, לבנבן עדין המכסה את lvns. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את PSN על ossicle באזור החלק התחתון של התכשיר. PSN ניתן להשתמש כדי לאתר את lvn וצומת dlvn. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבא אחרי dlvn מטה כדי לאתר את pyn ו PDN. Pyn לעתים קרובות כורך על ampulla השוער לפתיחה. PDN מזלגות מעל dlvn והוא בין ampulla השוער ואת השוער שרירים אירוביים שסתום. השאירו כמה שרירים המחוברים אחד העצבים האלה כי הם יכולים לבלבל בקלות כאשר ההכנה מועבר המנה Sylgard ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל העצבים נחשפו, לנתק את כל הקשרים שנותרו בין STNS לבין רקמות לא רצויות העצבים של הקיבה. בזהירות להזיז את STNS רחוק משאר הקיבה, חיתוך כל הקשרים החמיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצב את המנה Sylgard ברור עם המוני הנותרים של רקמת הקיבה על ידי שפשוף אותו על פני השטח של Sylgard עד Sylgard כבר לא מרגיש דביק מדי או יבש. Sylgard הוא הידרופובי STNS תדבק בחריפות את זה אם את המנה Sylgard מצופה אינו מותנה בדרך זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים קצת מלח קרים המנה. תפוס את הקצוות העליונים של העצבים commissural עם מלקחיים ולהביא את STNS כדי בצלחת Sylgard ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פין STNS מטה אל Sylgard. סבר המוח מן העצבים commissural ולהשתמש סיכות minuten כדי לאבטח את ארבעת הקצוות של גלגלי השיניים למטה הראשון. ודא כי הכנה נכונה כלפי מעלה על ידי סימון כי IVN היא מצביעה למעלה מן Sylgard. Dgn צריך לצאת מעט מתחת STG כאשר STG הוא בצד ימין למעלה. הצמד את שאר העצב מסתיים למטה עם סיכות חוט דק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה משם כל שנותר שריר או רקמה STNS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Desheath STG באמצעות בעל פינים ו מכור מעט, מחט בסדר, טונגסטן. עושים חור קטן בפינה של נדן STG הרחק גופי התא ולהשתמש חור כדי לקבל בין שכבות נדן. בזהירות לחתוך כנף של נדן מופרדות לחשוף את neuropil STG וגופים התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פין כל דשי של נדן למטה כדי להגדיל את הנגישות הגופים התא כדי לייצב את STG עבור הקלטות תאיים. Re פינים שאר STNS להבטיח כי כל עצב מתוח היטב במרווחים הקלטה תאיים (ראה איור 3). </li></ol> 3. תוצאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן אידיאלי, כל העצבים צריך להיות חופשי של ניקס ואת הנזק, במיוחד אלה שיירשמו מ. אף אחד העצבים צריכה להיות סבוך או מעוות. STG צריך להיות שלם עם כל התאים מסודרים במבנה זקן סביב neuropil. STNS שלם סימטרית בילטרלי והן נראה כמו הננס עם lvns כמו הרגליים, mvns כמו הזרועות ואת הקצה הקדמי כראש. </li></ol> קיצורים: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> STNS </td><td> מערכת העצבים Stomatogastric </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastric גנגליון </td></tr><tr><td> בורג </td><td> Commissural גנגליון </td></tr><tr><td> OG </td><td> הוושט גנגליון </td></tr><tr><td> mvn </td><td> חדרית חציון עצב </td></tr><tr><td> יון </td><td> עצב הוושט Inferior </td></tr><tr><td> בן </td><td> עצב הוושט מעולה </td></tr><tr><td> AGN </td><td> עצב קיבה Anterior </td></tr><tr><td> AlN </td><td> עצב לרוחב Anterior </td></tr><tr><td> dgn </td><td> עצב קיבה הגבי </td></tr><tr><td> dvn </td><td> חדרית הגב עצב </td></tr><tr><td> lvn </td><td> חדרית Lateral עצב </td></tr><tr><td> PSN </td><td> הבטן Posterior עצב </td></tr><tr><td> pyn </td><td> השוער עצב </td></tr><tr><td> PDN </td><td> המרחיב השוער עצב </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> סניף הגבי של העצב חדרית לרוחב </td></tr><tr><td> IVN </td><td> חדרית נחותים עצב </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;איור 1&quot; /&gt; איור 1: תרשים הממחיש את המיקום המשוער של STNS בבטן לפני לנתיחה. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="איור 2" /> איור 2: תרשים של שרירים שונים בחלק התחתון של הקיבה כיסוי של STNS של אור ירוק. כל סוג תא STG הוא מופיע עם השרירים הם ידועים innervate. מפה זו שימושית בעת תכנון לנתח עצב שנושא אותות מתא נתון (באדיבות מעבדה נדים). <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3: תרשים סכמטי של STNS עם אלקטרודות תאיים ובארות תאיים (מ &#39;מרדר ו בוכר, 2007).

<ol>
	<li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , (1992).</li><li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs.">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li><li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus,+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+(Decapoda+crustacean).">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li><li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Stomatogastric+Nervous+System:+Structure+and+function+of+a+small+neural+network.">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li></ol>

דיסקציה STNS היא הצעד הראשון בביצוע הניסוי electrophysiology או אימונוהיסטוכימיה, או לקבלת תאים תרבית תאים. ללא קשר הניסוי נועד, דיסקציה הגולמי יישאר ללא שינוי. עם זאת, דיסקציה הקנס עשוי להשתנות. חשוב לתכנן מראש של זמן שבו תאים אשר עצבים תוכלו להקליט. רוב הנוירונים STG יש תהליכים ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Black Sylgard 170</td>
<td>Other</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>170</td>
<td>Gross Dissection</td>
</tr>
<tr>
<td>Fine Scissors</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>14090-09</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insect Pins size 6</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>26000-65</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mayo Scissors</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>14110-17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro-Spatula</td>
<td>Surgery</td>
<td>Ward Sci.</td>
<td>15 V 4313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rongeurs</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>16000-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Forceps</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>11021-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter)</td>
<td>Surgery</td>
<td>California Fine Wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Dissection</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps #5</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>91150-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minuten Pins</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>26002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Moria Spring Scissors (7mm blades)</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>15370-52</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dish (100x15mm)</td>
<td>Other</td>
<td>Fischer	</td>
<td>08-757-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pin Holder</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>26018-17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Super fine forceps #5SF</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>11252-00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 182</td>
<td>Other</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>182</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten Needles</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>10130-05</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Wild</td>
<td>MC3</td>
<td>Misc.</td>
</tr>
<tr>
<td>Jonah Crab (C. borealis)</td>
<td>Animal</td>
<td>Commercial Lobster</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
						
		</div>

cancer borealis stomatogastric nervous system dissection

הגנגליון stomatogastric (STG) הוא מודל מצוין לחקר אינטראקציות הסלולר ורשת מכיוון שהוא מכיל מספר קטן יחסית של תאים (כ 25 ב C. borealis) אשר מאופיינים היטב. התאים STG בתערוכה מגוון רחב של יציאות ואחראים על פעולות מוטוריות של הקיבה. הבטן מכיל את טחנת קיבה אשר מתפרק מזון עם שלוש שיניים פנימיים, השוער אשר מסננים את האוכל לפני שהוא מגיע midgut. STG מייצר שתי יציאות קצבית לשלוט טחנת קיבה השוער המכונה גנרטורים דפוס מרכזי (CPGs). כל תא STG יכולים להשתתף אחד או שני מקצבים אלה. CPGs אלה מאפשרים לחקר neuromodulation, הומאוסטזיס, השתנות הסלולר רשת, פיתוח רשת, והתאוששות הרשת. דיסקציה של מערכת העצבים stomatogastric (STNS) מ הסרטן יונה (סרטן borealis) נעשית בשני חלקים: דיסקציה הגולמי בסדר. ב דיסקציה ברוטו הקיבה כולו גזור מן הסרטן. במהלך דיסקציה הקנס STNS מופק הקיבה באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה מיקרו לנתיחה הכלים (ראה תרשים 1). STNS כולל את STG, הגנגליון הוושט (OG), ואת הגרעינים commissural (בורג), כמו גם את העצבים כי innervate את שרירי הבטן. כאן, אנו מראים כיצד לבצע דיסקציה מלאה של STNS לקראת ניסוי electrophysiology שבו התאים STG תהיה רשמה intracellularly ואת העצבים ההיקפיים ישמשו הקלטות תאיים. הטכניקה הנכונה למציאת העצבים הרצוי מוצג, כמו גם הטכניקה שלנו desheathing הגנגליון לחשוף את somata ו neuropil.

Watch this Scientific Journal Video about Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection at JoVE.com

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

מערכת העצבים stomatogastric (STNS) של הסרטן יונה (<em&gt; ג borealis</em&gt;) יכול לשמש electrophysiology, אימונוהיסטוכימיה, תרבות מחקרים התא. מיצוי STNS נעשית שני חלקים: דיסקציה הגולמי בסדר.

סרטן Borealis מערכת העצבים Stomatogastric Dissection

The stomatogastric ganglion (STG) is an excellent model for studying cellular and network interactions because it contains a relatively small number of ...

cancer-borealis-stomatogastric-nervous-system-dissection

Research

JoVE Journal

Biology

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

12.5K Views.  Brandeis. מערכת העצבים stomatogastric (STNS) של הסרטן יונה ( ג borealis) יכול לשמש electrophysiology, אימונוהיסטוכימיה, תרבות מחקרים התא. מיצוי STNS נעשית שני חלקים: דיסקציה הגולמי בסדר.

Video: Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

Dissection of Drosophila Ovaries

Dissection של תסיסנית השחלות

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell interaction and signaling mechanisms that guide embryonic patterning. However, dissection of the mouse embryo from the decidua shortly after implantation can be a challenging procedure, and detailed step-by-step documentation of this process is lacking.

Here we demonstrate how post-implantation (6.5 dpc) embryos are isolated by first dissecting the uterus of a pregnant mouse (detection of the vaginal plug was designated day 0.5 poist coitum) and subsequently dissecting the embryo from maternal decidua. The dissection of Reichert's membrane is described as well as the removal of the ectoplacental cone.

Isolation of postimplantation-stage embryos allows one to study gene patterning and analyze cell-lineage decision making processes during embryonic development, but proper dissection of the early embryo can be challenging. This protocol describes a method for isolating early primitive-streak-stage embryos (~6.5 days post coitum [dpc]).

Dissection של 6.5 עוברים DPC עכבר

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the immune response to an infection of the CNS, such as poliomyelitis, Lyme neuroborreliosis, or neurosyphilis, it is often necessary to isolate the CNS-infiltrating immune cells.
In this video-protocol we demonstrate how to isolate mononuclear cells (MNCs) from the CNS of a rat with EAE. The first step of this procedure requires a cardiac perfusion of the rodent with a saline solution to ensure that no blood remains in the blood vessels irrigating the CNS. Any blood contamination will artificially increase the number of apparent CNS-infiltrating MNCs and may alter the apparent composition of the immune infiltrate. We then demonstrate how to remove the brain and spinal cord of the rat for subsequent dilaceration to prepare a single-cell suspension. This suspension is separated on a two-layer Percoll gradient to isolate the MNCs. After washing, these cells are then ready to undergo any required procedure. 
Mononuclear cells isolated using this procedure are viable and can be used for electrophysiology, flow cytometry (FACS), or biochemistry. If the technique is performed under sterile conditions (using sterile instruments in a tissue culture hood) the cells can also be grown in tissue culture medium. A given cell population can be further purified using either magnetic separation procedures or a FACS.

In this video we demonstrate how to isolate mononuclear cells from the central nervous system of rats with experimental autoimmune encephalomyelitis.

בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use of the Drosophila motor system is due to its high accessibility. It can be analyzed with single-cell resolution. There are 30 muscles per hemisegment whose arrangement within the peripheral body wall are known. A total of 35 motor neurons attach to these muscles in a pattern that has high fidelity. Using molecular biology and genetics, one can create transgenic animals or mutants. Then, one can study the developmental consequences on the morphology and function of the NMJ. In order to access the NMJ for study, it is necessary to carefully dissect each larva. In this article we demonstrate how to properly dissect Drosophila larvae for study of the NMJ by removing all internal organs while leaving the body wall intact. This technique is suitable to prepare larvae for imaging, immunohistochemistry, or electrophysiology.

This protocol demonstrates how to dissect Drosophila larvae in preparation for immunohistochemistry and/or imaging of the neuromuscular junction.

תסיסנית הזחל Dissection NMJ

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae exists in either a haploid or diploid state. The ability to combine alleles from two haploids and the ability to introduce modifications to the genome requires the production and dissection of asci. Asci production from haploid cells begins with the mating of two yeast haploid strains with compatible mating types to produce a diploid strain. This can be accomplished in a number of ways either on solid medium or in liquid. It is advantageous to select for the diploids in medium that selectively promotes their growth compared to either of the haploid strains. The diploids are then allowed to sporulate on nutrient-poor medium to form asci, a bundle of four haploid daughter cells resulting from meiotic reproduction of the diploid. A mixture of vegetative cells and asci is then treated with the enzyme zymolyase to digest away the membrane sac surrounding the ascospores of the asci. Using micromanipulation with a microneedle under a dissection microscope one can pick up individual asci and separate and relocate the four ascopores. Dissected asci are grown for several days and tested for the markers or alleles of interest by replica plating onto appropriate selective media.

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Micromanipulation of yeast cells is needed for meiotic genetic analysis or to select diploid zygotes. These micromanipulations are carried out using the microneedle of a dissection microscope. The microneedle is used to relocate cells and is controlled by a micromanipulator which are available with various degrees of automation.

Dissection של Saccharomyces cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

With the goal of understanding how nervous systems produce activity and respond to the environment, neuroscientists turn to model systems that exhibit the activity of interest and are accessible and amenable to experimental methods. The stomatogastric nervous system (STNS) of the American lobster (Homarus americanus; also know was the Atlantic or Maine lobster) has been established as a model system for studying rhythm generating networks and neuromodulation of networks. The STNS consists of 3 anterior ganglia (2 commissural ganglia and an oesophageal ganglion), containing modulatory neurons that project centrally to the stomatogastric ganglion (STG). The STG contains approximately 30 neurons that comprise two central pattern generating networks, the pyloric and gastric networks that underlie feeding behaviors in crustaceans1,2. While it is possible to study this system in vivo3, the STNS continues to produce its rhythmic activity when isolated in vitro. Physical isolation of the STNS in a dish allows for easy access to the somata in the ganglia for intracellular electrophysiological recordings and to the nerves of the STNS for extracellular recordings. Isolating the STNS is a two-part process. The first part, dissecting the stomach from the animal, is described in an accompanying video article4. In this video article, fine dissection techniques are used to isolate the STNS from the stomach. This procedure results in a nervous system preparation that is available for electrophysiological recordings.

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

We describe the fine dissection of the stomatogastric nervous system from the stomach of the American lobster (Homarus americanus).

Homarus Americanus Stomatogastric Dissection מערכת העצבים

With the goal of understanding how nervous systems produce activity and respond to the environment, neuroscientists turn to model systems that exhibit the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental analysis of the embryo and larva is extensive and the morphology has been well documented, descriptions of adult zebrafish anatomy and studies of development of the adult structures and organs, together with techniques for working with adults are lacking. The organs of the larva undergo significant changes in their overall structure, morphology, and anatomical location during the larval to adult transition.  Externally, the transparent larva develops its characteristic adult striped pigment pattern and paired pelvic fins, while internally, the organs undergo massive growth and remodeling.  In addition, the bipotential gonad primordium develops into either testis or ovary.  This protocol identifies many of the organs of the adult and demonstrates methods for dissection of the brain, gonads, gastrointestinal system, heart, and kidney of the adult zebrafish. The dissected organs can be used for in situ hybridization, immunohistochemistry, histology, RNA extraction, protein analysis, and other molecular techniques.  This protocol will assist in the broadening of studies in the zebrafish to include the remodeling of larval organs, the morphogenesis of organs specific to the adult and other investigations of the adult organ systems.

This protocol describes a procedure for identifying and dissecting organs from the adult zebrafish.

Dissection של איברים מן דג הזברה למבוגרים

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer

In carcinogenesis, the "field defect" is recognized clinically because of the high propensity of survivors of certain cancers to develop other malignancies of the same tissue type, often in a nearby location. Such field defects have been indicated in colon cancer. The molecular abnormalities that are responsible for a field defect in the colon should be detectable at high frequency in the histologically normal tissue surrounding a colonic adenocarcinoma or surrounding an adenoma with advanced neoplasia (well on the way to a colon cancer), but at low frequency in the colonic mucosa from patients without colonic neoplasia.
Using immunohistochemistry, entire crypts within 10 cm on each side of colonic adenocarcinomas or advanced colonic neoplasias were found to be frequently reduced or absent in expression for two DNA repair proteins, Pms2 and/or ERCC1. Pms2 is a dual role protein, active in DNA mismatch repair as well as needed in apoptosis of cells with excess DNA damage. ERCC1 is active in DNA nucleotide excision repair. The reduced or absent expression of both ERCC1 and Pms2 would create cells with both increased ability to survive (apoptosis resistance) and increased level of mutability. The reduced or absent expression of both ERCC1 and Pms2 is likely an early step in progression to colon cancer.
DNA repair gene Ku86 (active in DNA non-homologous end joining) and Cytochrome c Oxidase Subunit I (involved in apoptosis) had each been reported to be decreased in expression in mucosal areas close to colon cancers. However, immunohistochemical evaluation of their levels of expression showed only low to modest frequencies of crypts to be deficient in their expression in a field defect surrounding colon cancer or surrounding advanced colonic neoplasia.
We show, here, our method of evaluation of crypts for expression of ERCC1, Pms2, Ku86 and CcOI. We show that frequency of entire crypts deficient for Pms2 and ERCC1 is often as great as 70% to 95% in 20 cm long areas surrounding a colonic neoplasia, while frequency of crypts deficient in Ku86 has a median value of 2% and frequency of crypts deficient in CcOI has a median value of 16% in these areas. The entire colon is 150 cm long (about 5 feet) and has about 10 million crypts in its mucosal layer. The defect in Pms2 and ERCC1 surrounding a colon cancer thus may include 1 million crypts. It is from a defective crypt that colon cancer arises.

Reduced/absent expression of Pms2 and/or ERCC1 in entire crypts is a frequent event within 10 cm on each side of colonic adenocarcinomas, likely the basis of a field defect with high mutability and progression to cancer. Deficiency in Ku86 or CcOI is much less frequent in these field defects.

Pms2 לקוי, ERCC1, Ku86, CcOI ב פגמים שדה במהלך התקדמות סרטן המעי הגס

In carcinogenesis, the "field defect" is recognized clinically because of the high propensity of survivors of certain cancers to develop other ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells form, and how they interact with their environment is therefore crucial for understanding development, homeostasis and disease. The ovary of the fruit fly Drosophila melanogaster has served as an influential model for the interaction of germ line stem cells (GSCs) with their somatic support cells (niche) 1, 2. The known location of the niche and the GSCs, coupled to the ability to genetically manipulate them, has allowed researchers to elucidate a variety of interactions between stem cells and their niches 3-12.
Despite the wealth of information about mechanisms controlling GSC maintenance and differentiation, relatively little is known about how GSCs and their somatic niches form during development. About 18 somatic niches, whose cellular components include terminal filament and cap cells (Figure 1), form during the third larval instar 13-17. GSCs originate from primordial germ cells (PGCs). PGCs proliferate at early larval stages, but following the formation of the niche a subgroup of PGCs becomes GSCs 7, 16, 18, 19. Together, the somatic niche cells and the GSCs make a functional unit that produces eggs throughout the lifetime of the organism.
Many questions regarding the formation of the GSC unit remain unanswered. Processes such as coordination between precursor cells for niches and stem cell precursors, or the generation of asymmetry within PGCs as they become GSCs, can best be studied in the larva. However, a methodical study of larval ovary development is physically challenging. First, larval ovaries are small. Even at late larval stages they are only 100&mu;m across. In addition, the ovaries are transparent and are embedded in a white fat body. Here we describe a step-by-step protocol for isolating ovaries from late third instar (LL3) Drosophila larvae, followed by staining with fluorescent antibodies. We offer some technical solutions to problems such as locating the ovaries, staining and washing tissues that do not sink, and making sure that antibodies penetrate into the tissue. This protocol can be applied to earlier larval stages and to larval testes as well.

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

How niches and stem cells form during development is an important question with practical implications. In the Drosophila ovary, germ line stem cells and their somatic niches form during larval development. This video demonstrates how to dissect, stain and mount female gonads from late third instar (LL3) Drosophila larvae.

Dissection ו מכתים של תסיסנית הזחל השחלות

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

A BW Reporter System for Studying Receptor-Ligand Interactions

Interactions between receptors and ligands constitute a fundamental biological process. However, direct experiments with cells that express the native receptor and the ligand are challenging since the ligand of a specific receptor may be unknown and experimental procedures with the native ligand can be technically complicated. To address these obstacles, we describe a reporter system to detect the binding and activation of a specific receptor by a ligand of interest. In this reporter system, the extracellular domain of a specific receptor is conjugated to mouse CD3&#950; and this chimeric protein is then expressed in mouse BW cells. These transfected BW cells can then be incubated with different targets (e.g., cells or antibodies). Activation of a transfected receptor leads to the secretion of mouse interleukin-2 (mIL-2) which can be detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). This reporter system has the advantages of being sensitive and specific to a single receptor. In addition, the activation level of a specific receptor can easily be quantified and can be used even in cases where the ligand of the receptor is unknown. This system has been implemented successfully in many of our studies to characterize receptor-ligand interactions. We have recently employed this system to study the activation of human Fc&#947; receptors (Fc&#947;Rs) by different monoclonal anti-CD20 antibodies in clinical use.

This protocol describes how to establish a reporter system that can be used to identify and quantify receptor-ligand interactions.

מערכת BW כתב ללמוד אינטראקציות קולטן-ליגנד

Interactions between receptors and ligands constitute a fundamental biological process. However, direct experiments with cells that express the native ...