우리는 기꺼이 Marder 연구실의 구성원을 인정합니다. 우리는 그녀의 지원과 격려를위한 고문, 박사 이브 Marder을 감사합니다. 이 연구는 국립 신경 장애 뇌졸중 연구소 보조금 NS - 17813 및 NS - 058110에 의해 지원되었다.

1. 총 해부 <ol><li> 동물의 무딘 감각과 모터 시스템에 30 분간 얼음에 게 놓으십시오. 얼음 사방에 포위하라. 게를 다룰 때 장갑을 착용하여야한다. </li><li> 해부의 팬 및 사용 도구를 밖으로 누워하여 총 해부 준비. Rongeurs는 뼈가 절단 가위, 작은 가위, 톱니 포셉, 테이퍼 에지있는 주걱, 검은 Sylgard - 코팅 요리, 그리고 곤충 핀이 필요합니다. </li><li> 곤란 않도록하고 해부 냄비에 배치하기 위해 뒷다리 다리로 얼음 양동이에서 게를 제거합니다. </li><li> 안으로 각 하나를 복잡하게 먼저 발톱을 제거합니다. 그런 다음 동일한 비틀 모션을 사용하여 각 다리를 제거합니다. </li><li> rongeurs 사용하여 입을 덮고있는 maxilla를 제거합니다. 또한 부드러운 maxillule를 제거합니다. </li><li> rongeurs를 사용하면 다시 등딱지의 측면 후부 월말부터 시작하고 그것의 가장자리에 좋은 입씨름을. rongeurs로 다운 클램프와 등딱지의 일부를 끊다. 주걱가 시작을 입력할 수 있도록 충분히 등딱지의를 제거했는지 확인하십시오. 눈 등딱지 가장자리를 제거 계속 반대쪽에 반복합니다. </li><li> 주걱의 테이퍼 측면으로 부드럽게 등의 등딱지의 지붕에서 떨어져 부드러운 내부 조직을 다쳤어요. STNS 손상을 방지하기 위해 등딱지 접촉에 주걱 보관하십시오. 조직에서 분리되었습니다 등딱지의 일부를 떨어져 부수 rongeurs을 사용합니다. 또한 등딱지에 조직을 연결하는 내전근 근육을 분리해야하는 복부 등딱지에서 부드러운 조직의 일부를 별도의. </li><li> 등딱지에서 튀어나온 두 개의 작은방이 ossicles가 심장까지 후부로 등의 등딱지 멀리 떨어져. 멀리 앞쪽에 가능한 컷. 등의 등딱지의 가장 앞쪽에 부품을 떠나 어길 때 한 손가락으로 cephalon을 (이하 &quot;얼굴&quot;) 안정화. </li><li> 등딱지의 복부 측면에서 그들에게 부착 epistome에서 mandible을 이동시키다하는 바깥쪽을 왜곡하고,​​ 그것을 돌아서, mandible에 rongeurs를 고정하여 한 번에 mandibles 하나를 빼낸다. 정상적으로 완료하면 근육을 가진 두 개의 긴 ossicles가 추출 mandible에 첨부해야합니다. </li><li> 주걱을 사용하여 눈을 근처 cephalon의 측면에서 조직을 멀리 분리합니다. 계층에 의해 가능한 레이어로 소골편의 능선에 가까운 조직을 가로질러 작은 절개 가위와. </li><li> 해부의 냄비의 벽에 게를 휴식과 (발톱이에 사용할 수 있습니다) 장소에 고정 그것을 소품. 멀리 어느 조직이 첨부된 떠나지 않도록하는 epistome에서 labrum (이하 &quot;윗입술&quot;) 잘라. 뼈가 절단 가위를 사용하면 cephalon를 제거하는 복부 등딱지 두개의 대각선 인하합니다. </li><li> 톱니 포셉로 labrum를 타고 거리에 복부 측면에있는 소골편에서 labium (이하 &quot;아랫입술&quot;) 했네요. 그런 다음 부드럽게 남아있는 복부 등딱지 떨어져 입술을 리프트. 등딱지를 안감 조직에서 복부의 복부 부분을 분리하는 작은 가위를 사용합니다. 위는 게에서 추출한 때까지 pyloric ampullae 볼 때, 멀리 그것의 양쪽에있는 조직에서 배를 잘라. </li><li> 아직 손바닥에 대한 배를 휴식과 입안에 부어 호수, 포셉있는 입술로 배를 들고. 이것은 위장을 확대하고 쉽게 갈라 수 있습니다. 아래 ampullae 사이의 소골편 통해 pylorus 오른쪽 사이의 입을에서 열 컷. 그런 다음 두 가지를 통해 cardial 대각선 아래로 했네요. 안쪽 위 세 치아의 끝을 잘라. </li><li> 아래 복부의 내부와 대형, 검정, Sylgard - 코팅 접시에 배를를 놓습니다. 곤충 핀으로 준비 다섯 모서리를 핀과 (그림 1 참조) 전체 준비를 immersing, 차가운 식염수에 접시를 입력합니다. </li></ol> 2. 파인 해부 <ol><li> , 미세 해부 도구는 미세 절개를 위해 필요합니다. 특히, 포셉 및 봄 가위는 텅스텐 바늘로 핀 홀더뿐만 아니라 필요합니다. 분명 Sylgard - 코팅, 배양 접시 및 일부 미세 와이어 핀도 준비되어 있어야합니다. </li><li> 가장 낮은 배율에서 시작, 입 열어야하는 데 사용되는 입술 근처에 펄럭를 달아하여 시작합니다. 준비가 긴장하고 필요한 다른 영역에 핀으로 핀의 나머지 부분을 재배열. </li><li> 조심스럽게 준비의 하단 부분을 덮고있는 발견 hypodermis를 들고 두 흰색 점들과 hypodermis의 패치를 떠나 전체를 잘라. </li><li> 준비의 하단에있는 노란색, 작게 묶은, 막의 조직까지 필. mvns은 약하게이 조직의 아래쪽에 첨부됩니다. 그것이 뽑아므로 조심스럽게 노란색 조직에서 mvns를 구분한다. 노란색 조직을 따라 뇌 함께 했네요. </li><li> 머리를 종료 두꺼운 프로세스를 따라 그 연장 laterallY. 이들은 commisural 신경입니다. commissural 신경의 끝에 도달하면, 거리에 두뇌의 측면에서 절단되어 해면, 오프 화이트 조직의 덩어리를 제거합니다. </li><li> 이온와 아들이 톱니바퀴를 충족 어디, 이온와 아들의 길이를 나타내기 위해 근육과 조직을 버려야. </li><li> 스파 티드 hypodermis 패치로 돌아가기 그것을 잘라. 이것은 STG 주변 동맥의 개통을두고해야합니다. 두 근육되는 측면 STG을 분리하기 위해 개방을 통해 잘라요. 이러한 근육의 끝부분을 들어 그들 동맥에서 분리하고 alns 및 agns을 폭로하기 위해 아래의 오른쪽 컷. 역 흩어져 연골처럼 멀리까지 측면 근육을 분리합니다. </li><li> 어디 mvns, dgn에 STG를 둘러싼 동맥 조직을 떼어 버리기, 그리고 DVN 만나. lvns에 DVN을 작업하고 lvns를 덮고 약간 흰, 섬세한 조직을 통해 했네요. </li><li> 준비 하단 소골편 통해 PSN을 찾습니다. PSN은 lvn 및 dlvn 접합을 찾습니다하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> 다음 pyn 및 pdn를 찾습니다 dlvn을 따르십시오. pyn는 종종 오프닝 pyloric ampulla 이상 래핑합니다. pdn은 dlvn의 포크에서와 pyloric ampulla과 심장 pyloric 밸브 근육 사이에 있습니다. 준비가 맑은 Sylgard 요리로 전송되었을 때 그들이 쉽게 혼동 수 있기 때문에 이러한 신경 중 하나에 연결된 근육 둡니다. </li><li> 일단 신경의 모든 STNS과 위장의 조직과 불필요한 신경 사이에 남아있는 연결이 끊어 밝혀왔다. 조심스럽게 모든 놓친 연결을 절단, 거리 위의 나머지 부분에서 STNS 이동합니다. </li><li> Sylgard 더 이상 너무 끈적 거리거나 건조한 느낌이 없을 때까지 Sylgard의 표면 위에 바르고하여 위 조직의 나머지 질량과 맑은 Sylgard 요리 상태. Sylgard은 소수성이고 Sylgard - 코팅 요리이 방식으로 에어컨하지 않은 경우 STNS 그것을 적극 준수합니다. </li><li> 접시 일부 차가운 호수를 추가합니다. 포셉와 commissural 신경의 위쪽 끝을 잡고 맑은 Sylgard 요리에 STNS 가져. </li><li> Sylgard에 STNS을 핀. commissural 신경에서 두뇌 세버 아래 먼저 톱니바퀴의 네 끝을 보호를 위해 minuten 핀을 사용합니다. 준비가 ivn 떠나 Sylgard부터 가리키는 것을 선택하여 오른쪽까지 있는지 확인하십시오. STG는 오른쪽까지 때 dgn는 STG 아래 약간 종료해야합니다. 신경의 나머지 부분을 핀 미세 철사 핀과 함께 아래로 끝납니다. </li><li> STNS에서 남아있는 근육이나 조직을 멀리 청소하십시오. </li><li> Desheath 핀 홀더와 약간 중독, 괜찮아요, 텅스텐 바늘을 사용하여 STG합니다. 멀리 세포 기관에서 STG 칼집의 모서리에 작은 구멍을 만들어 칼집의 레이어 사이에 접근하기 위해 구멍을 사용합니다. 조심스럽게 STG neuropil와 세포 기관을 폭로 분리된 껍질을 떼어 잘라. </li><li> 세포 기관에 접근을 증가하고 세포 레코딩을위한 STG 안정화를 아래로 껍질의 펄럭 핀. 각 신경 긴장 늦추지하고 잘 세포외 기록 (그림 3 참조) 간격 있도록 STNS의 나머지 부분을 다시 핀. </li></ol> 3. 검색 결과 <ol><li> 이상적으로, 신경의, 특히 깨진 손상에서 기록되는 것들 무료로해야합니다. 신경의 어느 것도 리게하거나 트위스트해야합니다. STG는 neuropil 주위에 수염 형성에 배열 세포의 모두 손상됩니다. 그대로 STNS는 양자 대칭이고 다리, 팔, 머리로 앞쪽에 엔드로 mvns로 lvns와 homunculus 같다. </li></ol> 약어 : <table border="1"><tbody><tr><td> STNS </td><td> Stomatogastric 신경계 </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastric 신경절 </td></tr><tr><td> 코그 </td><td> Commissural 신경절 </td></tr><tr><td> OG </td><td> Oesophageal 신경절 </td></tr><tr><td> mvn </td><td> 미디언 심실 신경 </td></tr><tr><td> 이온 </td><td> 열등 oesophageal 신경 </td></tr><tr><td> 아들 </td><td> 우수한 oesophageal 신경 </td></tr><tr><td> agn </td><td> 앞쪽에 위의 신경 </td></tr><tr><td> ALN </td><td> 앞쪽에 측면 신경 </td></tr><tr><td> dgn </td><td> 도설 위의 신경 </td></tr><tr><td> DVN </td><td> 도설 심실 신경 </td></tr><tr><td> lvn </td><td> 측면 심실 신경 </td></tr><tr><td> PSN </td><td> 후부 위 신경 </td></tr><tr><td> pyn </td><td> Pyloric 신경 </td></tr><tr><td> pdn </td><td> Pyloric 확장시키는 신경 </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> 측면 심실 신경의 도설 지점 </td></tr><tr><td> ivn </td><td> 열등 심실 신경 </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;그림 1&quot;/&gt; 그림 1 : 해부하기 전에 복부에 STNS의 대략적인 위치를 설명하는 다이어그램. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : 밝은 녹색의 위장과 STNS의 오버레이의 하단 부분에 다양한 근육의 다이어그램. STG의 각 세포 유형은 그들이 신경을 분포시키다하는 것으로 알려져있는 근육과 함께 나열됩니다. 주어진 셀 (Nadim 연구실의 호의)에서 신호를 전달 신경을 해부하다 계획 때이지도는 유용합니다. <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : 세포내 전극과 세포외 우물 (Marder과 부처, 2007)로 STNS의 도식 다이어그램.

<ol>
	<li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , (1992).</li><li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs.">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li><li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus,+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+(Decapoda+crustacean).">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li><li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Stomatogastric+Nervous+System:+Structure+and+function+of+a+small+neural+network.">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li></ol>

STNS의 해부는 전기 생리학 또는 immunohistochemistry 실험, 또는 세포 배양을위한 세포를 얻기위한 수행의 첫 단계입니다. 상관없이 의도 실험, 총 해부는 변경되지 않습니다. 그러나, 미세 절개가 다를 수 있습니다. 앞으로도에서 기록 세포와 신경 어느 시간 계획하는 것이 중요합니다. STG 대부분의 뉴런은 복부에있는 하나 이상의 근육 신경을 분포시키다 (그림 2 참조)하고 innervated 대상에 따라 분류되...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Black Sylgard 170</td>
<td>Other</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>170</td>
<td>Gross Dissection</td>
</tr>
<tr>
<td>Fine Scissors</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>14090-09</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insect Pins size 6</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>26000-65</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mayo Scissors</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>14110-17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro-Spatula</td>
<td>Surgery</td>
<td>Ward Sci.</td>
<td>15 V 4313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rongeurs</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>16000-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Forceps</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>11021-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter)</td>
<td>Surgery</td>
<td>California Fine Wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Dissection</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps #5</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>91150-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minuten Pins</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>26002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Moria Spring Scissors (7mm blades)</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>15370-52</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri Dish (100x15mm)</td>
<td>Other</td>
<td>Fischer	</td>
<td>08-757-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pin Holder</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>26018-17</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Super fine forceps #5SF</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>11252-00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 182</td>
<td>Other</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>182</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten Needles</td>
<td>Surgery</td>
<td>FST</td>
<td>10130-05</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Wild</td>
<td>MC3</td>
<td>Misc.</td>
</tr>
<tr>
<td>Jonah Crab (C. borealis)</td>
<td>Animal</td>
<td>Commercial Lobster</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
						
		</div>

cancer borealis stomatogastric nervous system dissection

그것이 잘 특징 세포의 비교적 적은 수의 (약 25 C. 보레알리스)를 포함하고 있기 때문에 stomatogastric 신경절 (STG)는 휴대 전화 및 네트워크 상호 작용을 공부를위한 훌륭한 모델입니다. STG의 세포는 출력의 광범위한 전시와 복부의 모터 동작에 대한 책임이 있습니다. 위 세 가지 내부 치아와 음식, 그리고 midgut에 도달하기 전에 음식을 필터 pylorus를 나누기 위의 밀 포함되어 있습니다. STG는 위장 공장 및 중앙 패턴 발생기 (CPGs)로 알려진 pylorus를 제어하는​​ 두 리듬 출력을 생산하고 있습니다. STG의 각 세포는 이러한 리듬 중 하나 또는 둘 모두에 참여할 수 있습니다. 이러한 CPGs는 neuromodulation의 연구, 항상성, 휴대 전화 및 네트워크 다양성, 네트워크 개발 및 네트워크 복구를 위해 수 있습니다. 요나 크랩 (암 보레알리스)에서 stomatogastric 신경계 (STNS)의 절개는 두 부분으로 이루어집니다, 총 훌륭한 절개를. 총 해부에서 전체 복부는 게에서 해부하는 것입니다. 미세 절개 동안 STNS은 해부 현미경과 미세 해부 도구를 (그림 1 참조)를 사용하여 위장에서 추출됩니다. STNS는 STG, oesophageal 신경절 (OG), 그리고 commissural 신경 (COG)뿐만 아니라 복부 근육을 신경을 분포시키다 신경을 포함합니다. 여기, 우리는 세포 레코딩에 사용 될 STG의 세포가 intracellularly와 주변 신경에서 녹화한 것입 전기 생리학 실험 준비 STNS의 전체 절개를 수행하는 방법을 보여줍니다. 원하는 신경을 찾기위한 적절한 기술은 somata와 neuropil을 나타내기 위해 신경을 desheathing 우리의 기술뿐만 아니라 표시됩니다.

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Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

요나 크랩의 stomatogastric 신경계 (STNS) (<em&gt; C. 보레알리스</em&gt;) 전기 생리학, immunohistochemistry, 그리고 세포 배양 연구에 사용될 수 있습니다. STNS 추출은 두 부분으로 이루어집니다 : 총 훌륭한 절개를.

암 보레알리스 Stomatogastric 신경계의 해부

The stomatogastric ganglion (STG) is an excellent model for studying cellular and network interactions because it contains a relatively small number of ...

cancer-borealis-stomatogastric-nervous-system-dissection

Research

JoVE Journal

Biology

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

12.5K 조회수.  Brandeis. 요나 크랩의 stomatogastric 신경계 (STNS) ( C. 보레알리스) 전기 생리학, immunohistochemistry, 그리고 세포 배양 연구에 사용될 수 있습니다. STNS 추출은 두 부분으로 이루어집니다 : 총 훌륭한 절개를.

비디오: Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

Dissection of Drosophila Ovaries

Drosophila 난소의 해부

연구

생물학

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell interaction and signaling mechanisms that guide embryonic patterning. However, dissection of the mouse embryo from the decidua shortly after implantation can be a challenging procedure, and detailed step-by-step documentation of this process is lacking.

Here we demonstrate how post-implantation (6.5 dpc) embryos are isolated by first dissecting the uterus of a pregnant mouse (detection of the vaginal plug was designated day 0.5 poist coitum) and subsequently dissecting the embryo from maternal decidua. The dissection of Reichert's membrane is described as well as the removal of the ectoplacental cone.

Isolation of postimplantation-stage embryos allows one to study gene patterning and analyze cell-lineage decision making processes during embryonic development, but proper dissection of the early embryo can be challenging. This protocol describes a method for isolating early primitive-streak-stage embryos (~6.5 days post coitum [dpc]).

6.5 DPC 마우스 태아의 해부

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the immune response to an infection of the CNS, such as poliomyelitis, Lyme neuroborreliosis, or neurosyphilis, it is often necessary to isolate the CNS-infiltrating immune cells.
In this video-protocol we demonstrate how to isolate mononuclear cells (MNCs) from the CNS of a rat with EAE. The first step of this procedure requires a cardiac perfusion of the rodent with a saline solution to ensure that no blood remains in the blood vessels irrigating the CNS. Any blood contamination will artificially increase the number of apparent CNS-infiltrating MNCs and may alter the apparent composition of the immune infiltrate. We then demonstrate how to remove the brain and spinal cord of the rat for subsequent dilaceration to prepare a single-cell suspension. This suspension is separated on a two-layer Percoll gradient to isolate the MNCs. After washing, these cells are then ready to undergo any required procedure. 
Mononuclear cells isolated using this procedure are viable and can be used for electrophysiology, flow cytometry (FACS), or biochemistry. If the technique is performed under sterile conditions (using sterile instruments in a tissue culture hood) the cells can also be grown in tissue culture medium. A given cell population can be further purified using either magnetic separation procedures or a FACS.

In this video we demonstrate how to isolate mononuclear cells from the central nervous system of rats with experimental autoimmune encephalomyelitis.

EAE와 쥐의 중추 신경계에서 Mononuclear 세포의 분리

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use of the Drosophila motor system is due to its high accessibility. It can be analyzed with single-cell resolution. There are 30 muscles per hemisegment whose arrangement within the peripheral body wall are known. A total of 35 motor neurons attach to these muscles in a pattern that has high fidelity. Using molecular biology and genetics, one can create transgenic animals or mutants. Then, one can study the developmental consequences on the morphology and function of the NMJ. In order to access the NMJ for study, it is necessary to carefully dissect each larva. In this article we demonstrate how to properly dissect Drosophila larvae for study of the NMJ by removing all internal organs while leaving the body wall intact. This technique is suitable to prepare larvae for imaging, immunohistochemistry, or electrophysiology.

This protocol demonstrates how to dissect Drosophila larvae in preparation for immunohistochemistry and/or imaging of the neuromuscular junction.

Drosophila 애벌레 NMJ의 해부

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae exists in either a haploid or diploid state. The ability to combine alleles from two haploids and the ability to introduce modifications to the genome requires the production and dissection of asci. Asci production from haploid cells begins with the mating of two yeast haploid strains with compatible mating types to produce a diploid strain. This can be accomplished in a number of ways either on solid medium or in liquid. It is advantageous to select for the diploids in medium that selectively promotes their growth compared to either of the haploid strains. The diploids are then allowed to sporulate on nutrient-poor medium to form asci, a bundle of four haploid daughter cells resulting from meiotic reproduction of the diploid. A mixture of vegetative cells and asci is then treated with the enzyme zymolyase to digest away the membrane sac surrounding the ascospores of the asci. Using micromanipulation with a microneedle under a dissection microscope one can pick up individual asci and separate and relocate the four ascopores. Dissected asci are grown for several days and tested for the markers or alleles of interest by replica plating onto appropriate selective media.

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Micromanipulation of yeast cells is needed for meiotic genetic analysis or to select diploid zygotes. These micromanipulations are carried out using the microneedle of a dissection microscope. The microneedle is used to relocate cells and is controlled by a micromanipulator which are available with various degrees of automation.

의 해부 Saccharomyces Cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

With the goal of understanding how nervous systems produce activity and respond to the environment, neuroscientists turn to model systems that exhibit the activity of interest and are accessible and amenable to experimental methods. The stomatogastric nervous system (STNS) of the American lobster (Homarus americanus; also know was the Atlantic or Maine lobster) has been established as a model system for studying rhythm generating networks and neuromodulation of networks. The STNS consists of 3 anterior ganglia (2 commissural ganglia and an oesophageal ganglion), containing modulatory neurons that project centrally to the stomatogastric ganglion (STG). The STG contains approximately 30 neurons that comprise two central pattern generating networks, the pyloric and gastric networks that underlie feeding behaviors in crustaceans1,2. While it is possible to study this system in vivo3, the STNS continues to produce its rhythmic activity when isolated in vitro. Physical isolation of the STNS in a dish allows for easy access to the somata in the ganglia for intracellular electrophysiological recordings and to the nerves of the STNS for extracellular recordings. Isolating the STNS is a two-part process. The first part, dissecting the stomach from the animal, is described in an accompanying video article4. In this video article, fine dissection techniques are used to isolate the STNS from the stomach. This procedure results in a nervous system preparation that is available for electrophysiological recordings.

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

We describe the fine dissection of the stomatogastric nervous system from the stomach of the American lobster (Homarus americanus).

Homarus Americanus Stomatogastric 신경계의 해부

With the goal of understanding how nervous systems produce activity and respond to the environment, neuroscientists turn to model systems that exhibit the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental analysis of the embryo and larva is extensive and the morphology has been well documented, descriptions of adult zebrafish anatomy and studies of development of the adult structures and organs, together with techniques for working with adults are lacking. The organs of the larva undergo significant changes in their overall structure, morphology, and anatomical location during the larval to adult transition.  Externally, the transparent larva develops its characteristic adult striped pigment pattern and paired pelvic fins, while internally, the organs undergo massive growth and remodeling.  In addition, the bipotential gonad primordium develops into either testis or ovary.  This protocol identifies many of the organs of the adult and demonstrates methods for dissection of the brain, gonads, gastrointestinal system, heart, and kidney of the adult zebrafish. The dissected organs can be used for in situ hybridization, immunohistochemistry, histology, RNA extraction, protein analysis, and other molecular techniques.  This protocol will assist in the broadening of studies in the zebrafish to include the remodeling of larval organs, the morphogenesis of organs specific to the adult and other investigations of the adult organ systems.

This protocol describes a procedure for identifying and dissecting organs from the adult zebrafish.

성인 Zebrafish에서 기관의 해부

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer

In carcinogenesis, the "field defect" is recognized clinically because of the high propensity of survivors of certain cancers to develop other malignancies of the same tissue type, often in a nearby location. Such field defects have been indicated in colon cancer. The molecular abnormalities that are responsible for a field defect in the colon should be detectable at high frequency in the histologically normal tissue surrounding a colonic adenocarcinoma or surrounding an adenoma with advanced neoplasia (well on the way to a colon cancer), but at low frequency in the colonic mucosa from patients without colonic neoplasia.
Using immunohistochemistry, entire crypts within 10 cm on each side of colonic adenocarcinomas or advanced colonic neoplasias were found to be frequently reduced or absent in expression for two DNA repair proteins, Pms2 and/or ERCC1. Pms2 is a dual role protein, active in DNA mismatch repair as well as needed in apoptosis of cells with excess DNA damage. ERCC1 is active in DNA nucleotide excision repair. The reduced or absent expression of both ERCC1 and Pms2 would create cells with both increased ability to survive (apoptosis resistance) and increased level of mutability. The reduced or absent expression of both ERCC1 and Pms2 is likely an early step in progression to colon cancer.
DNA repair gene Ku86 (active in DNA non-homologous end joining) and Cytochrome c Oxidase Subunit I (involved in apoptosis) had each been reported to be decreased in expression in mucosal areas close to colon cancers. However, immunohistochemical evaluation of their levels of expression showed only low to modest frequencies of crypts to be deficient in their expression in a field defect surrounding colon cancer or surrounding advanced colonic neoplasia.
We show, here, our method of evaluation of crypts for expression of ERCC1, Pms2, Ku86 and CcOI. We show that frequency of entire crypts deficient for Pms2 and ERCC1 is often as great as 70% to 95% in 20 cm long areas surrounding a colonic neoplasia, while frequency of crypts deficient in Ku86 has a median value of 2% and frequency of crypts deficient in CcOI has a median value of 16% in these areas. The entire colon is 150 cm long (about 5 feet) and has about 10 million crypts in its mucosal layer. The defect in Pms2 and ERCC1 surrounding a colon cancer thus may include 1 million crypts. It is from a defective crypt that colon cancer arises.

Reduced/absent expression of Pms2 and/or ERCC1 in entire crypts is a frequent event within 10 cm on each side of colonic adenocarcinomas, likely the basis of a field defect with high mutability and progression to cancer. Deficiency in Ku86 or CcOI is much less frequent in these field defects.

결함 Pms2, ERCC1, Ku86, 결장암을 진행하는 동안 필드 결함에 CcOI

In carcinogenesis, the "field defect" is recognized clinically because of the high propensity of survivors of certain cancers to develop other ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells form, and how they interact with their environment is therefore crucial for understanding development, homeostasis and disease. The ovary of the fruit fly Drosophila melanogaster has served as an influential model for the interaction of germ line stem cells (GSCs) with their somatic support cells (niche) 1, 2. The known location of the niche and the GSCs, coupled to the ability to genetically manipulate them, has allowed researchers to elucidate a variety of interactions between stem cells and their niches 3-12.
Despite the wealth of information about mechanisms controlling GSC maintenance and differentiation, relatively little is known about how GSCs and their somatic niches form during development. About 18 somatic niches, whose cellular components include terminal filament and cap cells (Figure 1), form during the third larval instar 13-17. GSCs originate from primordial germ cells (PGCs). PGCs proliferate at early larval stages, but following the formation of the niche a subgroup of PGCs becomes GSCs 7, 16, 18, 19. Together, the somatic niche cells and the GSCs make a functional unit that produces eggs throughout the lifetime of the organism.
Many questions regarding the formation of the GSC unit remain unanswered. Processes such as coordination between precursor cells for niches and stem cell precursors, or the generation of asymmetry within PGCs as they become GSCs, can best be studied in the larva. However, a methodical study of larval ovary development is physically challenging. First, larval ovaries are small. Even at late larval stages they are only 100&mu;m across. In addition, the ovaries are transparent and are embedded in a white fat body. Here we describe a step-by-step protocol for isolating ovaries from late third instar (LL3) Drosophila larvae, followed by staining with fluorescent antibodies. We offer some technical solutions to problems such as locating the ovaries, staining and washing tissues that do not sink, and making sure that antibodies penetrate into the tissue. This protocol can be applied to earlier larval stages and to larval testes as well.

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

How niches and stem cells form during development is an important question with practical implications. In the Drosophila ovary, germ line stem cells and their somatic niches form during larval development. This video demonstrates how to dissect, stain and mount female gonads from late third instar (LL3) Drosophila larvae.

해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

A BW Reporter System for Studying Receptor-Ligand Interactions

Interactions between receptors and ligands constitute a fundamental biological process. However, direct experiments with cells that express the native receptor and the ligand are challenging since the ligand of a specific receptor may be unknown and experimental procedures with the native ligand can be technically complicated. To address these obstacles, we describe a reporter system to detect the binding and activation of a specific receptor by a ligand of interest. In this reporter system, the extracellular domain of a specific receptor is conjugated to mouse CD3&#950; and this chimeric protein is then expressed in mouse BW cells. These transfected BW cells can then be incubated with different targets (e.g., cells or antibodies). Activation of a transfected receptor leads to the secretion of mouse interleukin-2 (mIL-2) which can be detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). This reporter system has the advantages of being sensitive and specific to a single receptor. In addition, the activation level of a specific receptor can easily be quantified and can be used even in cases where the ligand of the receptor is unknown. This system has been implemented successfully in many of our studies to characterize receptor-ligand interactions. We have recently employed this system to study the activation of human Fc&#947; receptors (Fc&#947;Rs) by different monoclonal anti-CD20 antibodies in clinical use.

This protocol describes how to establish a reporter system that can be used to identify and quantify receptor-ligand interactions.

수용 체 Ligand 상호 작용을 공부 하기 위한 BW 기자 시스템

Interactions between receptors and ligands constitute a fundamental biological process. However, direct experiments with cells that express the native ...