מעבדתו של ד&quot;ר דה Caestecker נתמכת על ידי NIH 1RO1 HL093057-01 ו1RC4DK090770-01. המעבדה של ד&quot;ר האריס נתמכת על ידי DK38226, DK51265, DK62794 ומימון ממנהל הוותיקים. תמיכה עבור ניתוחי עכבר כליות פציעה, קריאטינין בסרום, מבחני סיסטיק גם הניתנים על ידי או &#39;בריין ונדרבילט הכליה פגיעה מרכז מענק 1P30 DK079341.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיטוי כל מכשירי הניתוח לפני הניתוח. שים לב שאם אחת הוא ביצוע ניתוחים רבים על עכברים שונים, לשטוף כלים לאחר שימוש ולאחר מכן לעקר באמצעות מעקר חרוז חם. זה לא מספיק כדי להשרות ב70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן מלח 0.5 מיליליטר S / C סטרילי נורמלי לפני ניתוח ומייד לאחר הניתוח, כדי לפצות על אובדן הנוזלים בגוף במהלך ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את העכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר באמצעות Xylazine IP / תערובת קטמין. זה בדרך כלל לוקח 3-5 דקות לעכברים להגיע למטוס הרדמה כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את האתר כירורגית עם אזור גבול מספיק כדי לשמור על שיער מהזיהום באתר החתך. זו צריכה להתבצע באזור הכנה, לא שבו הניתוח מתבצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה סיכה העיניים לעיניים כדי למנוע ההתייבשות במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על פני השטח נוטה מחוממים מכוסים במשטח ספסל סופג. רגלי קלטת למשטח כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם באמצעותמערכת אמבט מים, חום נקבע על 38 ° C שעה 1 לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה מזוהם באמצעות בטאדין פתרון ספוגית מקל: לקרצף מהמרכז לכיוון הפריפריה אתר 3x, בכל פעם ואחרי קרצוף עם Nolvasan להסיר פולידין. כל בטאדין יש להוציא מהתחום כירורגית לפני החתך על ידי שטיפה עם Nolvasan. לפני שמתחיל הליך כפפות אספטיים צריכים להיות שונה כדי להיות סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כיסוי תחום כירורגית עם וילון כירורגי סטרילי. זה ימנע שיער תועה מלהיכנס לשדה הניתוח ולספק אזור שעליו שכב מכשירים סטריליים במהלך ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשש מיקום כליה דרך העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את עור הגב לאורך קו האמצע של עכבר (כ -1.5 ס&quot;מ) באמצעות מספריים ומלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור נפרד ושכבות תת עורי מעל גב הצדדים ימני והשמאליים דרך חתך זה על ידי נתיחה בוטה באמצעות מספריים ומלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן דרך fl הנכוןank שריר וfascia מעל הכליות וexteriorize הכליה הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח קטבים העליונים ותחתונים של הכליות חינם מרקמה הסובבת. שימו לב כי רקמת שומן מסביב הקוטב העליון מכילה את בלוטת יותרת הכליה ביצוע אספקת הדם משלו שיכול להיות דחפה את הכליות אבל ברור שלא צריך להיות מוסר מהעכבר (איור 1). לאחר כליות משחררים מהרקמה שמסביב, לקשור את תפר משי 4-0 סביב hilum של הכליה הימנית באמצעות קשר כירורגית כפול. להשאיר קצה אחד של התפר ~ 2 בזמן להחזיק את הכליות כמו שאתה חותך את הקשר הדיסטלי לכך שאתה יכול לדמיין את האתר כדי להיחתך. להשקות את הגדם עם תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת השריר באמצעות תפר נספג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן דרך שריר האגף השמאלי וfascia מעל הכליות וexteriorize הכליה השמאלית (איור 2 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיק בזהירות כליות באמצעות מלקחיים בוטים תוך שחרור הכליותגבעול מרקמות שומן באמצעות מלקחיים (איורים 2 ב-2F). יותר מדי לחץ על הכליות באמצעות מלקחיים הבוטים עלולים לגרום לפגיעה בכליה ולכן אחד צריך לזכור את זה בעת תכנון בקרות &quot;אחיזת עיניים&quot; ללימודים. אם אתה מוצא כי בקרות הדמה שלך מתפתחות פגיעה בכליה (כפי שמעיד עלייה בקריאטינין בסרום), שיטה חלופית אתה יכול לשקול כדי לשחרר את רקמות שומן מסביב מגבעול הכליות היא לגלגל את הרקמות בעדינות עם סטרילי ספוג מלוחה כותנה מטליות שקצהו. מניסיוננו השומן די מחובר באופן הדוק לגבעול כליות ולא יכול בקלות להסיר עם צמר גפן, ולכן זה לא יכול להיות הגישה הראשונה שהיית רוצה להשתמש בו. עם זאת, כמו בהיבטים אחרים של מודל זה, זה משהו שיצטרך לקבוע לעצמך עם תרגול וניסיון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצמד עזב כליות pedicle באמצעות מהדק כלי דם טראומטי שאינו מחזיקים באמצעות מלקחיים (כדי להקל על מיקום מהדק), השתמש בטיימר לCLA שונההפעמים mp בהתאם לזן העכבר וחומרת פגיעה הנדרשת (ראה טבלה 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את הכליה השמאלית ועור (איור 2H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את החתך בעור עם גזה ספוגה בתמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Exteriorize כליות, לאשר מראה אחיד כהה ולשחרר את המהדק לאחר המועדים המצוינים, ולוודא כי מראה אפלולי הופך אחיד בכליות (איור 2I / G). אם הכליות לא במהירות ובאופן אחיד מחדש perfuse (עד ורוד) העכבר צריך להיות מחוץ לניתוח נוסף. דחפו בעדינות בחזרה לתוך כליות חלל retroperitoneal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת השריר באמצעות תפר נספג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת העור באמצעות תפר שאינו נספג ניילון חוט חד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל עצירות שיכוך כאבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכברים משדה הניתוח על גבי כרית חימום עד שהם מתעוררים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את העכברים לחדר של בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקוב מקרוב אחר העכברים ולתת מנות נוספותשל עצירות כפי שצוין לעיל בכל 8-12 שעות לכאב או אי נוחות. סימנים קליניים וכתוצאה מכך המתן של משככי כאבים דיכאון כוללים שינויים התנהגותיים או אחרים, מראה נורמלי, או תנוחה כגון Pilo-זקפה, יציבה כפופה, חוסר טיפוח ואכילה, או חוסר תנועה. </li></ol>

<ol>
	<li>Singh, A. P., Junemann, A., Muthuraman, A., Jaggi, A. S., Singh, N., Grover, K., Dhawan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+renal+failure.">Animal models of acute renal failure.</a> Pharmacological reports: PR. 64, 31-44 (2012).</li><li>Heyman, S. N., Rosenberger, C., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+ischemia-reperfusion:+Biases+and+myths-the+proximal+vs.+Distal+hypoxic+tubular+injury+debate+revisited.">Experimental ischemia-reperfusion: Biases and myths-the proximal vs. Distal hypoxic tubular injury debate revisited.</a> Kidney Int. 77, 9-16 (2010).</li><li>Lieberthal, W., Nigam, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure.+II.+Experimental+models+of+acute+renal+failure:+Imperfect+but+indispensable.">Acute renal failure. II. Experimental models of acute renal failure: Imperfect but indispensable.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F1-F12 (2000).</li><li>Dunn, S. R., Qi, Z., Bottinger, E. P., Breyer, M. D., Sharma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+endogenous+creatinine+clearance+as+a+measure+of+renal+function+in+mice.">Utility of endogenous creatinine clearance as a measure of renal function in mice.</a> Kidney Int. 65, 1959-1967 (2004).</li><li>Yuen, P. S., Dunn, S. R., Miyaji, T., Yasuda, H., Sharma, K., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+HPLC+determination+of+creatinine+in+mouse+serum.">A simplified method for HPLC determination of creatinine in mouse serum.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 286, F1116-F1119 (2004).</li><li>Hetu, P. O., Gingras, M. E., Vinet, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+rapid+liquid+chromatography+isotope+dilution+tandem+mass+spectrometry+(LC-IDMS/MS)+method+for+serum+creatinine.">Development and validation of a rapid liquid chromatography isotope dilution tandem mass spectrometry (LC-IDMS/MS) method for serum creatinine.</a> Clin. Biochem. 43, 1158-1162 (2010).</li><li>Keppler, A., Gretz, N., Schmidt, R., Kloetzer, H. M., Groene, H. J., Lelongt, B., Meyer, M., Sadick, M., Pill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats:+An+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay.">Plasma creatinine determination in mice and rats: An enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li><li>Yang, L., Besschetnova, T. Y., Brooks, C. R., Shah, J. V., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+cycle+arrest+in+G2/M+mediates+kidney+fibrosis+after+injury.">Epithelial cell cycle arrest in G2/M mediates kidney fibrosis after injury.</a> Nat. Med. 16, 535-543 (2010).</li><li>Shanley, P. F., Rosen, M. D., Brezis, M., Silva, P., Epstein, F. H., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topography+of+focal+proximal+tubular+necrosis+after+ischemia+with+reflow+in+the+rat+kidney.">Topography of focal proximal tubular necrosis after ischemia with reflow in the rat kidney.</a> Am. J. Pathol. 122, 462-468 (1986).</li><li>Chawla, L. S., Amdur, R. L., Amodeo, S., Kimmel, P. L., Palant, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+severity+of+acute+kidney+injury+predicts+progression+to+chronic+kidney+disease.">The severity of acute kidney injury predicts progression to chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 79, 1361-1369 (2012).</li><li>Lo, L. J., Go, A. S., Chertow, G. M., McCulloch, C. E., Fan, D., Ordonez, J. D., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dialysis-requiring+acute+renal+failure+increases+the+risk+of+progressive+chronic+kidney+disease.">Dialysis-requiring acute renal failure increases the risk of progressive chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 76, 893-899 (2009).</li><li>Burne, M. J., Haq, M., Matsuse, H., Mohapatra, S., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+to+renal+ischemia+reperfusion+injury+revealed+in+a+murine+model.">Genetic susceptibility to renal ischemia reperfusion injury revealed in a murine model.</a> Transplantation. 69, 1023-1025 (2000).</li><li>Muller, V., Losonczy, G., Heemann, U., Vannay, A., Fekete, A., Reusz, G., Tulassay, T., Szabo, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+renal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats:+Possible+role+of+endothelin.">Sexual dimorphism in renal ischemia-reperfusion injury in rats: Possible role of endothelin.</a> Kidney Int. 62, 1364-1371 (2002).</li><li>Schmitt, R., Marlier, A., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zag+expression+during+aging+suppresses+proliferation+after+kidney+injury.">Zag expression during aging suppresses proliferation after kidney injury.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 19, 2375-2383 (2008).</li><li>Oxburgh, L., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+of+the+mouse+kidney.">Ischemia-reperfusion injury of the mouse kidney.</a> Methods Mol. Biol. 886, 363-379 (2012).</li></ol>

יש סופרים אין ניגודי האינטרסים לחשוף.

אנו מתארים שני מודלים של IR-AKI כדי לחקור את ההשפעות של פגיעת כלייתית בינונית וקשה. מודלים אלה מאפשרים לנו לגרום לפציעה עקבית וצפויה עם תמותה נמוכה. הפרוטוקול שלנו מתאר רבים מהקשיים והחסרונות הקשורים באופן מסורתי עם המודל הזה. יתר על כן, יש לנו הראינו כי בהתאם לאורכו של ?...

מגוון רחב של דגמים ניסיוניים של ניזק כלייתי חריף (AKI) פותחו כדי להתאים את המגוון ומורכבות של המצב האנושי (ראה התייחסות לביקורת האחרונה, מקיפה 1). כל אחד מהמודלים הללו יש יתרונות וחסרונות משלה, ובעוד כל אחד מחקה את התנאים האנושיים המתאימים עם יעילות מגוונת, אף אחד בדיוק מודל הפתופיזיולוגיה של עמיתיהם האדם שלהם. reperfusion איסכמיה (IR) הנגרמים AKI פותחה כמודל של פגיעת כלייתית הנגרמת איסכמיה חריפה במכרסמים. בעוד חומרת פגיעת כלייתית צינורי לראות במודל זה היא ציין רק לעתים נדירות בחולים עם פציעות hypoperfusion כליות 2, על אף מגבלותיו ובעיקר בגלל האופי לשעתק יחסית של מודל זה, השימוש הנרחב שלה סיפקה, והוא צפוי, ימשיך כדי לספק תובנות חשובות לרבים מהמנגנונים המשותפים הבסיסיים של אקי, התיקון, וטיפול 3. IR ניתוח דורש familiarity עם האנטומיה כליות העכבר, מה שיש לנו שמודגמות בצורה פשוטה יותר באיור 1. (IR) ניתוח פציעת איסכמיה reperfusion כליות יכול להתבצע באמצעות הגחון (laparotomy) או הגבי (retroperitoneal) גישות. אנו משתמשים בגישה הגבי שכן הוא פחות טראומטי, ומאפשר החלמה מהירה יותר פעמים והישרדות משופרת (במיוחד כאשר לומדים את ההליך ראשון). פציעת IR כליות יכולה להתבצע באופן חד צדדי או דו צדדי. עם זאת, הבדלים בין לחצים יעילים מהדק (העשויים לנבוע מחציצה של שומן perihilar בין לסתות מהדק) ו / או הבדלים בתגובות בין הכליה לאיסכמיה צדדים מובילים לתוצאות משתנות יותר. אמנם זה לא בעיה בלתי עבירה, זה יכול להגדיל את השונות בין ניסויים, אשר היא בעיה רצינית עבור דגם זה. IR חד צדדי ניתן לבצע עם כריתת כלית קונטרה, לרוחב. זו השיטה שלנו לבחירה שכן הוא מפחית את השונות בהידוק בין pedicles, ובו בזמןllows אחד כדי להעריך את תפקוד כליות, שאינו מושפע עם IR חד צדדי בלבד. יש כבר דיון על מה היא השיטה המעשית לעומת אופטימלית ביותר להערכת תפקוד כליות בעכברים. חנקן אוריאה דם (BUN) מספק מדד לתפקוד כליות ומהווה סמן שימושי &quot;מבט ראשון&quot; בכמה דגמים של אקי, כולל פגיעת IR. עם זאת, יכולות להיות מושפעות ברמות BUN ידי מעמד נפח של העכברים אשר עשוי להיות מושפעים, במיוחד לאחר פציעת IR גישת הגחון, כאשר התאוששות מתעכבת מפחיתה את הצריכה אוראלית של נוזלים במשך מספר הימים לאחר ניתוח. קריאטינין בסרום מושפע פחות ממצב הידרציה אבל בבירור מושפע מסת שריר. אחד הקשיים עם מדידות קריאטינין בסרום היה בעיות עם זיהוי של chromogens הלא קריאטינין בסרום עכבר תוך שימוש בטכניקות המבוססות על חומצת picric. כחלופה, מספר המרכזים פיתחו שיטה מבוססת HPLC לכמת קריאטינין העכבר שאינו מושפע מ4 החפץ הזה. עם זאת, UNLאייק לחמנייה ומבחני קריאטינין חומצת picric, שרק דורשים μl 5-10 של סרום, HPLC-מבחני דורשים ~ סרום 25 μl לassay, שאם מתבצע בכפולות ידרשו ~ 100 μl של דם מלא לassay. זו יכולה להיות מגבילה עבור מחקרי עכבר. מרכזים מסוימים פיתחו שיטות HPLC והמוניות המבוסס על ספקטרומטריית רגישות יותר, המאפשרות ניתוח של כמויות קטנות יותר לדוגמה 5, 6. עם זאת, טכנולוגיות אלה אינן זמינות באופן נרחב. , Assay מפל האנזימטית חלופי (אשר דורש μl 5-10 רק של סרום) הוערך בעכבר ובדגימות סרום חולדות והראה במקביל מקרוב מדידות HPLC של קריאטינין בסרום בעוד שמבחני picric החומצה תמיד ערכי קריאטינין מעל אומדן 7. בעוד assay זה אינו בשימוש נרחב בספרות אקי, assay הוא זמין באופן מסחרי, פשוט לשימוש, ואנחנו מוצאים את נותן תוצאות אמינות עם המודל הזה של IR-Induced AKI בעכברים.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drug or solution</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (anesthetic)</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-881-9413 (100 mg/ml)</td>
			<td>Final concentration 30 mg/ml Ketamine with 3 mg/ml Xylazine administered at 3-4 ml/kg (100 mg/kg Ketamine and 10 mg/kg Xylazine)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (analgesic)</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-808-1939 (100 mg/ml)</td>
			<td>As above</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antisedan (anti-Xylazine)</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-867-7097 (5 mg/ml)</td>
			<td>Optional: to reverse effects of Xylazine in order to increase the rate of recovery after surgery Use 0.5-0.7 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (analgesic)</td>
			<td>Bedford Laboratories</td>
			<td>NDC 55390-100-10 (0.3 mg/ml)</td>
			<td>Dose 0.05-0.1 &mu;g/g every 8-12 hr. Make up a 1:5 dilution in sterile normal saline preoperatively and give 2.5-5 &mu;l/g of the diluted solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine swab sticks</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>NDC 67618-153-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nolvasan Surgical Scrub</td>
			<td>Pfizer Animal Care</td>
			<td>300253</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 2. Drugs and solutions for I/R surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>VWR 21909-404</td>
			<td>For skin and muscle dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved iris forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11065-07</td>
			<td>To hold skin and muscle, to remove peri-nephric fat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5228</td>
			<td>To manipulate kidneys</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clamp (795 g pressure)</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5459</td>
			<td>Good for C57BL/6 and BALB/c mice strains</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz clip applying forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5450</td>
			<td>For RS-5459 clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clamp (75-85 g pressure)</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-02</td>
			<td>Optimal for CD1 mice strain, but also can be used for C57BL/6 and BALB/c</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Serrefine Clamp Applicator-14 cm with Lock</td>
			<td>FST</td>
			<td>18056-14</td>
			<td>For FST 18055-02 clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gayman T/Pump (water-bath heated platform)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>TP-650</td>
			<td>The water heater is set at 38 &deg;C 1 hr prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15" W x 24" Heated platform</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>HHP-2</td>
			<td>Connect to Gayman heated water pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>Model 39DP</td>
			<td>Uses microwave for heating. This is useful for warming during recovery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable suture (Vicryl 5-0)</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>VCP834G</td>
			<td>For fascia and muscle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-absorbable suture: monofilament nylon MONOMID 6/0 660B)</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>CP-B660B-03</td>
			<td>For skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey needle holder: Tungsten Carbide/13 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>12501-13</td>
			<td>To hold suture needles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>FST</td>
			<td>06-662-3</td>
			<td>To quantify ischemia time</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead sterilizer</td>
			<td>FST</td>
			<td>18000-45</td>
			<td>To sterilize instruments between mice if you are performing multiple surgeries (it is not sufficient to soak instruments in ethanol)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric razor</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>CLP-22965</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Durapore</td>
			<td>1538-0</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>EXELint</td>
			<td>26044</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cotton tipped applicators</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>8884541300</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent BenchPad</td>
			<td>VWR</td>
			<td>56617-014</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21902-985</td>
			<td>Need to be autoclaved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2'' x 2'' Gauze Pads</td>
			<td>Medi-First</td>
			<td>60673</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>2D7251</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3. Equipment and instruments for I/R surgery.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice

פגיעה בכליות איסכמיה reperfusion מושרה חריפות (IR-AKI) היא בשימוש נרחבת כמודל של AKI בעכברים, אך תוצאות הן לעתים קרובות משתנים מאוד עם שיעורי תמותה גבוהים, בדרך כלל לא מדווחים שעשויה לבלבל ניתוחים. clamping pedicle כליות דו צדדית משמשת בדרך כלל כדי לגרום IR-AKI, אבל הבדלים בין לחצים יעילים מהדק ו / או תגובות הכליה לאיסכמיה בין הכליות לעתים קרובות להוביל לתוצאות משתנות יותר. בנוסף, ידועות פעמים מהדק קצרות יותר כדי לגרום לפגיעה בצינורי משתנה יותר, ואילו עכברים שעברו פגיעה דו צדדית עם זמנים ארוכים יותר לפתח פציעת מהדק צינורי עקבית יותר, לעתים קרובות הם מתים בתוך 3 הימים הראשונים לאחר פגיעה עקב אי ספיקת כליות חמורה. כדי לשפר את ההישרדות לאחר פציעה ולהשיג תוצאות יותר עקביות וצפויות, פיתחנו שני מודלים של פציעת איסכמיה reperfusion חד צדדית ואחרי כריתת כליה הנגדית. שני הניתוחים מבוצעים באמצעות גישת גב, הפחתת לחץ כירורגית כתוצאה Flaparotomy הגחון ROM, משמש בדרך כלל לניתוחי IR-AKI עכבר. לאינדוקציה של BALB / ג פציעה בינוני לעבור חד צדדי ההידוק של גבעול כליה עבור 26 דקות וגם לעבור כריתת כליה הנגדית בו זמנית. שימוש בגישה זו, 50-60% מעכברים לפתח HR המתון AKI 24 לאחר פציעה אבל 90-100% מעכברים לשרוד. כדי לגרום לאקי חמור יותר, BALB / ג לעבור pedicle כליות הידוק למשך 30 דקות ואחרי כריתת כליה הנגדית 8 ימים לאחר פציעה. זה מאפשר הערכה תפקודית של התאוששות כליה לאחר פגיעה עם 90-100% הישרדות. נזק מוקדם לאחר פציעת צינורי כמו גם סיסטיק פגיעה פוסט עקבי ביותר משתמש במודל זה.

IR המתון IR-Induced AKI. חד צדדי עם כריתת כליה הנגדית בו זמנית באופן משמעותי מפחית שונות בתוצאות, אבל עם זמנים קצרים יותר מהדק הדרושים לעכברים כדי לשרוד בהליך זה, אנחנו עדיין מצאנו כי רק 50-60% מעכברים פיתחה אי ספיקת כליות 24 שעות הצפויות לאחר פציעה (איור 3 א). במ?...

Watch this Scientific Journal Video about Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice at JoVE.com

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והישרדות תלויות ברקע, גיל וכירורגי ציוד עכבר.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

ischemia-reperfusion-model-acute-kidney-injury-post-injury-fibrosis

Research

JoVE Journal

Medicine

39.3K Views.  Vanderbilt University Medical Center. אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והי...

Video: Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

דום לב Normothermic ו החייאה: במודל עכבר של פגיעה איסכמיה reperfusion

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

הערכה של שמורת זרם כלילית לאחר איסכמיה אוטם שריר הלב Reperfusion בחולדות

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

מודל מפרה קליני לחקר איסכמיה-reperfusion פציעה במיקרו-כירורגיה משחזרת

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

אספקה תוך-תוך-קרדיאלית מושהית של תאי גזע לאחר פציעת איסכמיה רפרציה במודל מורין

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Acute Kidney Injury Model Induced by Cisplatin in Adult Zebrafish

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney due to its low molecular weight. Such accumulation causes the death of tubular cells and can induce the development of Acute Kidney Injury (AKI), which is characterized by a quick decrease in kidney function, tissue damage, and immune cells infiltration. If administered in specific doses cisplatin can be a useful tool as an AKI inducer in animal models. The zebrafish has appeared as an interesting model to study renal function, kidney regeneration, and injury, as renal structures conserve functional similarities with mammals. Adult zebrafish injected with cisplatin shows decreased survival, kidney cell death, and increased inflammation markers after 24 h post-injection (hpi). In this model, immune cells infiltration and cell death can be assessed by flow cytometry and TUNEL assay. This protocol describes the procedures to induce AKI in adult zebrafish by intraperitoneal cisplatin injection and subsequently demonstrates how to collect the renal tissue for flow cytometry processing and cell death TUNEL assay. These techniques will be useful to understand the effects of cisplatin as a nephrotoxic agent and will contribute to the expansion of AKI models in adult zebrafish. This model can also be used to study kidney regeneration, in the search for compounds that treat or prevent kidney damage and to study inflammation in AKI. Moreover, the methods used in this protocol will improve the characterization of tissue damage and inflammation, which are therapeutic targets in kidney-associated comorbidities.

This protocol describes the procedures to induce Acute Kidney Injury (AKI) in adult zebrafish using cisplatin as a nephrotoxic agent. We detailed the steps to evaluate the reproducibility of the technique and two techniques to analyze inflammation and cell death in the renal tissue, flow cytometry and TUNEL, respectively.

מודל פגיעה בכליות חריפה המושרה על ידי ציספלטין בדג זברה למבוגרים

Cisplatin is commonly used as chemotherapy. Although it has positive effects in cancer-treated individuals, cisplatin can easily accumulate in the kidney ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, including ischemia-reperfusion injury (IRI) of extrahepatic organs. This model requires numerous experiments and devices. The duration of anhepatic phase is closely related to the time to develop IRI after transplantation. In this experiment, we used hemodynamic changes to induce extrahepatic organ damage in rats and determined the maximum tolerance time. The time until the most severe organ injury varied for different organs. This method can easily be replicated and can also be used to study IRI of the extrahepatic organs after liver transplantation.

This paper provides a detailed description of how to build an animal model of the anhepatic phase (liver ischemia) in rats to facilitate basic research into ischemia-reperfusion injury after liver transplantation.

פגיעה באיבר איסכמיה-רפרופוזיה על ידי הדמיית שינויים המודינמיים במודל השתלת כבד עכברוש

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

מודל השתלת ריאה של חולדה של איסכמיה חמה / פגיעה ברפרפוזיה: אופטימיזציות לשיפור התוצאות

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

מודל עכבר יעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...