מעבדתו של ד&quot;ר דה Caestecker נתמכת על ידי NIH 1RO1 HL093057-01 ו1RC4DK090770-01. המעבדה של ד&quot;ר האריס נתמכת על ידי DK38226, DK51265, DK62794 ומימון ממנהל הוותיקים. תמיכה עבור ניתוחי עכבר כליות פציעה, קריאטינין בסרום, מבחני סיסטיק גם הניתנים על ידי או &#39;בריין ונדרבילט הכליה פגיעה מרכז מענק 1P30 DK079341.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיטוי כל מכשירי הניתוח לפני הניתוח. שים לב שאם אחת הוא ביצוע ניתוחים רבים על עכברים שונים, לשטוף כלים לאחר שימוש ולאחר מכן לעקר באמצעות מעקר חרוז חם. זה לא מספיק כדי להשרות ב70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן מלח 0.5 מיליליטר S / C סטרילי נורמלי לפני ניתוח ומייד לאחר הניתוח, כדי לפצות על אובדן הנוזלים בגוף במהלך ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את העכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר באמצעות Xylazine IP / תערובת קטמין. זה בדרך כלל לוקח 3-5 דקות לעכברים להגיע למטוס הרדמה כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את האתר כירורגית עם אזור גבול מספיק כדי לשמור על שיער מהזיהום באתר החתך. זו צריכה להתבצע באזור הכנה, לא שבו הניתוח מתבצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה סיכה העיניים לעיניים כדי למנוע ההתייבשות במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על פני השטח נוטה מחוממים מכוסים במשטח ספסל סופג. רגלי קלטת למשטח כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם באמצעותמערכת אמבט מים, חום נקבע על 38 ° C שעה 1 לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה מזוהם באמצעות בטאדין פתרון ספוגית מקל: לקרצף מהמרכז לכיוון הפריפריה אתר 3x, בכל פעם ואחרי קרצוף עם Nolvasan להסיר פולידין. כל בטאדין יש להוציא מהתחום כירורגית לפני החתך על ידי שטיפה עם Nolvasan. לפני שמתחיל הליך כפפות אספטיים צריכים להיות שונה כדי להיות סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כיסוי תחום כירורגית עם וילון כירורגי סטרילי. זה ימנע שיער תועה מלהיכנס לשדה הניתוח ולספק אזור שעליו שכב מכשירים סטריליים במהלך ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשש מיקום כליה דרך העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את עור הגב לאורך קו האמצע של עכבר (כ -1.5 ס&quot;מ) באמצעות מספריים ומלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור נפרד ושכבות תת עורי מעל גב הצדדים ימני והשמאליים דרך חתך זה על ידי נתיחה בוטה באמצעות מספריים ומלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן דרך fl הנכוןank שריר וfascia מעל הכליות וexteriorize הכליה הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח קטבים העליונים ותחתונים של הכליות חינם מרקמה הסובבת. שימו לב כי רקמת שומן מסביב הקוטב העליון מכילה את בלוטת יותרת הכליה ביצוע אספקת הדם משלו שיכול להיות דחפה את הכליות אבל ברור שלא צריך להיות מוסר מהעכבר (איור 1). לאחר כליות משחררים מהרקמה שמסביב, לקשור את תפר משי 4-0 סביב hilum של הכליה הימנית באמצעות קשר כירורגית כפול. להשאיר קצה אחד של התפר ~ 2 בזמן להחזיק את הכליות כמו שאתה חותך את הקשר הדיסטלי לכך שאתה יכול לדמיין את האתר כדי להיחתך. להשקות את הגדם עם תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת השריר באמצעות תפר נספג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן דרך שריר האגף השמאלי וfascia מעל הכליות וexteriorize הכליה השמאלית (איור 2 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיק בזהירות כליות באמצעות מלקחיים בוטים תוך שחרור הכליותגבעול מרקמות שומן באמצעות מלקחיים (איורים 2 ב-2F). יותר מדי לחץ על הכליות באמצעות מלקחיים הבוטים עלולים לגרום לפגיעה בכליה ולכן אחד צריך לזכור את זה בעת תכנון בקרות &quot;אחיזת עיניים&quot; ללימודים. אם אתה מוצא כי בקרות הדמה שלך מתפתחות פגיעה בכליה (כפי שמעיד עלייה בקריאטינין בסרום), שיטה חלופית אתה יכול לשקול כדי לשחרר את רקמות שומן מסביב מגבעול הכליות היא לגלגל את הרקמות בעדינות עם סטרילי ספוג מלוחה כותנה מטליות שקצהו. מניסיוננו השומן די מחובר באופן הדוק לגבעול כליות ולא יכול בקלות להסיר עם צמר גפן, ולכן זה לא יכול להיות הגישה הראשונה שהיית רוצה להשתמש בו. עם זאת, כמו בהיבטים אחרים של מודל זה, זה משהו שיצטרך לקבוע לעצמך עם תרגול וניסיון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצמד עזב כליות pedicle באמצעות מהדק כלי דם טראומטי שאינו מחזיקים באמצעות מלקחיים (כדי להקל על מיקום מהדק), השתמש בטיימר לCLA שונההפעמים mp בהתאם לזן העכבר וחומרת פגיעה הנדרשת (ראה טבלה 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את הכליה השמאלית ועור (איור 2H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את החתך בעור עם גזה ספוגה בתמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Exteriorize כליות, לאשר מראה אחיד כהה ולשחרר את המהדק לאחר המועדים המצוינים, ולוודא כי מראה אפלולי הופך אחיד בכליות (איור 2I / G). אם הכליות לא במהירות ובאופן אחיד מחדש perfuse (עד ורוד) העכבר צריך להיות מחוץ לניתוח נוסף. דחפו בעדינות בחזרה לתוך כליות חלל retroperitoneal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת השריר באמצעות תפר נספג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת העור באמצעות תפר שאינו נספג ניילון חוט חד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל עצירות שיכוך כאבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכברים משדה הניתוח על גבי כרית חימום עד שהם מתעוררים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את העכברים לחדר של בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקוב מקרוב אחר העכברים ולתת מנות נוספותשל עצירות כפי שצוין לעיל בכל 8-12 שעות לכאב או אי נוחות. סימנים קליניים וכתוצאה מכך המתן של משככי כאבים דיכאון כוללים שינויים התנהגותיים או אחרים, מראה נורמלי, או תנוחה כגון Pilo-זקפה, יציבה כפופה, חוסר טיפוח ואכילה, או חוסר תנועה. </li></ol>

<ol>
	<li>Singh, A. P., Junemann, A., Muthuraman, A., Jaggi, A. S., Singh, N., Grover, K., Dhawan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+renal+failure.">Animal models of acute renal failure.</a> Pharmacological reports: PR. 64, 31-44 (2012).</li><li>Heyman, S. N., Rosenberger, C., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+ischemia-reperfusion:+Biases+and+myths-the+proximal+vs.+Distal+hypoxic+tubular+injury+debate+revisited.">Experimental ischemia-reperfusion: Biases and myths-the proximal vs. Distal hypoxic tubular injury debate revisited.</a> Kidney Int. 77, 9-16 (2010).</li><li>Lieberthal, W., Nigam, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure.+II.+Experimental+models+of+acute+renal+failure:+Imperfect+but+indispensable.">Acute renal failure. II. Experimental models of acute renal failure: Imperfect but indispensable.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F1-F12 (2000).</li><li>Dunn, S. R., Qi, Z., Bottinger, E. P., Breyer, M. D., Sharma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+endogenous+creatinine+clearance+as+a+measure+of+renal+function+in+mice.">Utility of endogenous creatinine clearance as a measure of renal function in mice.</a> Kidney Int. 65, 1959-1967 (2004).</li><li>Yuen, P. S., Dunn, S. R., Miyaji, T., Yasuda, H., Sharma, K., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+HPLC+determination+of+creatinine+in+mouse+serum.">A simplified method for HPLC determination of creatinine in mouse serum.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 286, F1116-F1119 (2004).</li><li>Hetu, P. O., Gingras, M. E., Vinet, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+rapid+liquid+chromatography+isotope+dilution+tandem+mass+spectrometry+(LC-IDMS/MS)+method+for+serum+creatinine.">Development and validation of a rapid liquid chromatography isotope dilution tandem mass spectrometry (LC-IDMS/MS) method for serum creatinine.</a> Clin. Biochem. 43, 1158-1162 (2010).</li><li>Keppler, A., Gretz, N., Schmidt, R., Kloetzer, H. M., Groene, H. J., Lelongt, B., Meyer, M., Sadick, M., Pill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats:+An+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay.">Plasma creatinine determination in mice and rats: An enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li><li>Yang, L., Besschetnova, T. Y., Brooks, C. R., Shah, J. V., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+cycle+arrest+in+G2/M+mediates+kidney+fibrosis+after+injury.">Epithelial cell cycle arrest in G2/M mediates kidney fibrosis after injury.</a> Nat. Med. 16, 535-543 (2010).</li><li>Shanley, P. F., Rosen, M. D., Brezis, M., Silva, P., Epstein, F. H., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topography+of+focal+proximal+tubular+necrosis+after+ischemia+with+reflow+in+the+rat+kidney.">Topography of focal proximal tubular necrosis after ischemia with reflow in the rat kidney.</a> Am. J. Pathol. 122, 462-468 (1986).</li><li>Chawla, L. S., Amdur, R. L., Amodeo, S., Kimmel, P. L., Palant, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+severity+of+acute+kidney+injury+predicts+progression+to+chronic+kidney+disease.">The severity of acute kidney injury predicts progression to chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 79, 1361-1369 (2012).</li><li>Lo, L. J., Go, A. S., Chertow, G. M., McCulloch, C. E., Fan, D., Ordonez, J. D., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dialysis-requiring+acute+renal+failure+increases+the+risk+of+progressive+chronic+kidney+disease.">Dialysis-requiring acute renal failure increases the risk of progressive chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 76, 893-899 (2009).</li><li>Burne, M. J., Haq, M., Matsuse, H., Mohapatra, S., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+to+renal+ischemia+reperfusion+injury+revealed+in+a+murine+model.">Genetic susceptibility to renal ischemia reperfusion injury revealed in a murine model.</a> Transplantation. 69, 1023-1025 (2000).</li><li>Muller, V., Losonczy, G., Heemann, U., Vannay, A., Fekete, A., Reusz, G., Tulassay, T., Szabo, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+renal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats:+Possible+role+of+endothelin.">Sexual dimorphism in renal ischemia-reperfusion injury in rats: Possible role of endothelin.</a> Kidney Int. 62, 1364-1371 (2002).</li><li>Schmitt, R., Marlier, A., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zag+expression+during+aging+suppresses+proliferation+after+kidney+injury.">Zag expression during aging suppresses proliferation after kidney injury.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 19, 2375-2383 (2008).</li><li>Oxburgh, L., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+of+the+mouse+kidney.">Ischemia-reperfusion injury of the mouse kidney.</a> Methods Mol. Biol. 886, 363-379 (2012).</li></ol>

יש סופרים אין ניגודי האינטרסים לחשוף.

אנו מתארים שני מודלים של IR-AKI כדי לחקור את ההשפעות של פגיעת כלייתית בינונית וקשה. מודלים אלה מאפשרים לנו לגרום לפציעה עקבית וצפויה עם תמותה נמוכה. הפרוטוקול שלנו מתאר רבים מהקשיים והחסרונות הקשורים באופן מסורתי עם המודל הזה. יתר על כן, יש לנו הראינו כי בהתאם לאורכו של ?...

מגוון רחב של דגמים ניסיוניים של ניזק כלייתי חריף (AKI) פותחו כדי להתאים את המגוון ומורכבות של המצב האנושי (ראה התייחסות לביקורת האחרונה, מקיפה 1). כל אחד מהמודלים הללו יש יתרונות וחסרונות משלה, ובעוד כל אחד מחקה את התנאים האנושיים המתאימים עם יעילות מגוונת, אף אחד בדיוק מודל הפתופיזיולוגיה של עמיתיהם האדם שלהם. reperfusion איסכמיה (IR) הנגרמים AKI פותחה כמודל של פגיעת כלייתית הנגרמת איסכמיה חריפה במכרסמים. בעוד חומרת פגיעת כלייתית צינורי לראות במודל זה היא ציין רק לעתים נדירות בחולים עם פציעות hypoperfusion כליות 2, על אף מגבלותיו ובעיקר בגלל האופי לשעתק יחסית של מודל זה, השימוש הנרחב שלה סיפקה, והוא צפוי, ימשיך כדי לספק תובנות חשובות לרבים מהמנגנונים המשותפים הבסיסיים של אקי, התיקון, וטיפול 3. IR ניתוח דורש familiarity עם האנטומיה כליות העכבר, מה שיש לנו שמודגמות בצורה פשוטה יותר באיור 1. (IR) ניתוח פציעת איסכמיה reperfusion כליות יכול להתבצע באמצעות הגחון (laparotomy) או הגבי (retroperitoneal) גישות. אנו משתמשים בגישה הגבי שכן הוא פחות טראומטי, ומאפשר החלמה מהירה יותר פעמים והישרדות משופרת (במיוחד כאשר לומדים את ההליך ראשון). פציעת IR כליות יכולה להתבצע באופן חד צדדי או דו צדדי. עם זאת, הבדלים בין לחצים יעילים מהדק (העשויים לנבוע מחציצה של שומן perihilar בין לסתות מהדק) ו / או הבדלים בתגובות בין הכליה לאיסכמיה צדדים מובילים לתוצאות משתנות יותר. אמנם זה לא בעיה בלתי עבירה, זה יכול להגדיל את השונות בין ניסויים, אשר היא בעיה רצינית עבור דגם זה. IR חד צדדי ניתן לבצע עם כריתת כלית קונטרה, לרוחב. זו השיטה שלנו לבחירה שכן הוא מפחית את השונות בהידוק בין pedicles, ובו בזמןllows אחד כדי להעריך את תפקוד כליות, שאינו מושפע עם IR חד צדדי בלבד. יש כבר דיון על מה היא השיטה המעשית לעומת אופטימלית ביותר להערכת תפקוד כליות בעכברים. חנקן אוריאה דם (BUN) מספק מדד לתפקוד כליות ומהווה סמן שימושי &quot;מבט ראשון&quot; בכמה דגמים של אקי, כולל פגיעת IR. עם זאת, יכולות להיות מושפעות ברמות BUN ידי מעמד נפח של העכברים אשר עשוי להיות מושפעים, במיוחד לאחר פציעת IR גישת הגחון, כאשר התאוששות מתעכבת מפחיתה את הצריכה אוראלית של נוזלים במשך מספר הימים לאחר ניתוח. קריאטינין בסרום מושפע פחות ממצב הידרציה אבל בבירור מושפע מסת שריר. אחד הקשיים עם מדידות קריאטינין בסרום היה בעיות עם זיהוי של chromogens הלא קריאטינין בסרום עכבר תוך שימוש בטכניקות המבוססות על חומצת picric. כחלופה, מספר המרכזים פיתחו שיטה מבוססת HPLC לכמת קריאטינין העכבר שאינו מושפע מ4 החפץ הזה. עם זאת, UNLאייק לחמנייה ומבחני קריאטינין חומצת picric, שרק דורשים μl 5-10 של סרום, HPLC-מבחני דורשים ~ סרום 25 μl לassay, שאם מתבצע בכפולות ידרשו ~ 100 μl של דם מלא לassay. זו יכולה להיות מגבילה עבור מחקרי עכבר. מרכזים מסוימים פיתחו שיטות HPLC והמוניות המבוסס על ספקטרומטריית רגישות יותר, המאפשרות ניתוח של כמויות קטנות יותר לדוגמה 5, 6. עם זאת, טכנולוגיות אלה אינן זמינות באופן נרחב. , Assay מפל האנזימטית חלופי (אשר דורש μl 5-10 רק של סרום) הוערך בעכבר ובדגימות סרום חולדות והראה במקביל מקרוב מדידות HPLC של קריאטינין בסרום בעוד שמבחני picric החומצה תמיד ערכי קריאטינין מעל אומדן 7. בעוד assay זה אינו בשימוש נרחב בספרות אקי, assay הוא זמין באופן מסחרי, פשוט לשימוש, ואנחנו מוצאים את נותן תוצאות אמינות עם המודל הזה של IR-Induced AKI בעכברים.

<table><tbody><tr><td>Ketamine (anesthetic)</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-881-9413 (100 mg/ml)</td><td>Final concentration 30 mg/ml Ketamine with 3 mg/ml Xylazine administered at 3-4 ml/kg (100 mg/kg Ketamine and 10 mg/kg Xylazine)</td></tr><tr><td>Xylazine (analgesic)</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-808-1939 (100 mg/ml)</td><td>As above</td></tr><tr><td>Antisedan (anti-Xylazine)</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-867-7097 (5 mg/ml)</td><td>Optional: to reverse effects of Xylazine in order to increase the rate of recovery after surgery Use 0.5-0.7 mg/kg</td></tr><tr><td>Buprenorphine (analgesic)</td><td>Bedford Laboratories</td><td>NDC 55390-100-10 (0.3 mg/ml)</td><td>Dose 0.05-0.1 &amp;mu;g/g every 8-12 hr. Make up a 1:5 dilution in sterile normal saline preoperatively and give 2.5-5 &amp;mu;l/g of the diluted solution.</td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-211-38</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Betadine swab sticks</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-153-01</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Nolvasan Surgical Scrub</td><td>Pfizer Animal Care</td><td>300253</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Table 2. Drugs and solutions for I/R surgery.&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Iris Scissors</td><td>Integra Miltex</td><td>VWR 21909-404</td><td>For skin and muscle dissection</td></tr><tr><td>Curved iris forceps</td><td>FST</td><td>11065-07</td><td>To hold skin and muscle, to remove peri-nephric fat</td></tr><tr><td>Blunt forceps</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5228</td><td>To manipulate kidneys</td></tr><tr><td>Vascular clamp (795 g pressure)</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5459</td><td>Good for C57BL/6 and BALB/c mice strains</td></tr><tr><td>Schwartz clip applying forceps</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5450</td><td>For RS-5459 clamps</td></tr><tr><td>Vascular clamp (75-85 g pressure)</td><td>FST</td><td>18055-02</td><td>Optimal for CD1 mice strain, but also can be used for C57BL/6 and BALB/c</td></tr><tr><td>Micro-Serrefine Clamp Applicator-14 cm with Lock</td><td>FST</td><td>18056-14</td><td>For FST 18055-02 clamps</td></tr><tr><td>Gayman T/Pump (water-bath heated platform)</td><td>Braintree Scientific</td><td>TP-650</td><td>The water heater is set at 38 &amp;deg;C 1 hr prior surgery</td></tr><tr><td>15&quot; W x 24&quot; Heated platform</td><td>Braintree Scientific</td><td>HHP-2</td><td>Connect to Gayman heated water pump</td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>Model 39DP</td><td>Uses microwave for heating. This is useful for warming during recovery</td></tr><tr><td>Absorbable suture (Vicryl 5-0)</td><td>ETHICON</td><td>VCP834G</td><td>For fascia and muscle</td></tr><tr><td>Non-absorbable suture: monofilament nylon MONOMID 6/0 660B)</td><td>CP Medical</td><td>CP-B660B-03</td><td>For skin</td></tr><tr><td>Halsey needle holder: Tungsten Carbide/13 cm</td><td>FST</td><td>12501-13</td><td>To hold suture needles</td></tr><tr><td>Timer</td><td>FST</td><td>06-662-3</td><td>To quantify ischemia time</td></tr><tr><td>Hot bead sterilizer</td><td>FST</td><td>18000-45</td><td>To sterilize instruments between mice if you are performing multiple surgeries (it is not sufficient to soak instruments in ethanol)</td></tr><tr><td>Electric razor</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-22965</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Tape</td><td>Durapore</td><td>1538-0</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>1 ml Syringe</td><td>EXELint</td><td>26044</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Sterile cotton tipped applicators</td><td>Kendall</td><td>8884541300</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Absorbent BenchPad</td><td>VWR</td><td>56617-014</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Surgical drapes</td><td>VWR</td><td>21902-985</td><td>Need to be autoclaved</td></tr><tr><td>2&amp;rsquo;&amp;rsquo; x 2&amp;rsquo;&amp;rsquo; Gauze Pads</td><td>Medi-First</td><td>60673</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Sterile gloves</td><td>Cardinal Health</td><td>2D7251</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Table 3. Equipment and instruments for I/R surgery.&lt;/strong&gt;</td></tr></tbody></table>

ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice

פגיעה בכליות איסכמיה reperfusion מושרה חריפות (IR-AKI) היא בשימוש נרחבת כמודל של AKI בעכברים, אך תוצאות הן לעתים קרובות משתנים מאוד עם שיעורי תמותה גבוהים, בדרך כלל לא מדווחים שעשויה לבלבל ניתוחים. clamping pedicle כליות דו צדדית משמשת בדרך כלל כדי לגרום IR-AKI, אבל הבדלים בין לחצים יעילים מהדק ו / או תגובות הכליה לאיסכמיה בין הכליות לעתים קרובות להוביל לתוצאות משתנות יותר. בנוסף, ידועות פעמים מהדק קצרות יותר כדי לגרום לפגיעה בצינורי משתנה יותר, ואילו עכברים שעברו פגיעה דו צדדית עם זמנים ארוכים יותר לפתח פציעת מהדק צינורי עקבית יותר, לעתים קרובות הם מתים בתוך 3 הימים הראשונים לאחר פגיעה עקב אי ספיקת כליות חמורה. כדי לשפר את ההישרדות לאחר פציעה ולהשיג תוצאות יותר עקביות וצפויות, פיתחנו שני מודלים של פציעת איסכמיה reperfusion חד צדדית ואחרי כריתת כליה הנגדית. שני הניתוחים מבוצעים באמצעות גישת גב, הפחתת לחץ כירורגית כתוצאה Flaparotomy הגחון ROM, משמש בדרך כלל לניתוחי IR-AKI עכבר. לאינדוקציה של BALB / ג פציעה בינוני לעבור חד צדדי ההידוק של גבעול כליה עבור 26 דקות וגם לעבור כריתת כליה הנגדית בו זמנית. שימוש בגישה זו, 50-60% מעכברים לפתח HR המתון AKI 24 לאחר פציעה אבל 90-100% מעכברים לשרוד. כדי לגרום לאקי חמור יותר, BALB / ג לעבור pedicle כליות הידוק למשך 30 דקות ואחרי כריתת כליה הנגדית 8 ימים לאחר פציעה. זה מאפשר הערכה תפקודית של התאוששות כליה לאחר פגיעה עם 90-100% הישרדות. נזק מוקדם לאחר פציעת צינורי כמו גם סיסטיק פגיעה פוסט עקבי ביותר משתמש במודל זה.

IR המתון IR-Induced AKI. חד צדדי עם כריתת כליה הנגדית בו זמנית באופן משמעותי מפחית שונות בתוצאות, אבל עם זמנים קצרים יותר מהדק הדרושים לעכברים כדי לשרוד בהליך זה, אנחנו עדיין מצאנו כי רק 50-60% מעכברים פיתחה אי ספיקת כליות 24 שעות הצפויות לאחר פציעה (איור 3 א). במ?...

Watch this Scientific Journal Video about Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice at JoVE.com

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והישרדות תלויות ברקע, גיל וכירורגי ציוד עכבר.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

ischemia-reperfusion-model-acute-kidney-injury-post-injury-fibrosis

Research

JoVE Journal

Medicine

39.5K Views.  Vanderbilt University Medical Center. אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והי...

Video: Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

דום לב Normothermic ו החייאה: במודל עכבר של פגיעה איסכמיה reperfusion

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable during renal transplantation. Experimental models that accurately and reproducibly recapitulate renal IRI are crucial in dissecting the pathophysiology of AKI and the development of novel therapeutic agents. Presented here is a mouse model of renal IRI that results in reproducible AKI. This is achieved by a midline laparotomy approach for the surgery with one incision allowing both a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia of the left kidney. By careful monitoring of the clamp position and body temperature during the period of ischaemia this model achieves reproducible functional and structural injury. Mice sacrificed 24 hr&#160;following surgery demonstrate loss of renal function with elevation of the serum or plasma creatinine level as well as structural kidney damage with acute tubular necrosis evident. Renal function improves and the acute tissue injury resolves during the course of 7 days following renal IRI such that this model may be used to study renal regeneration. This model of renal IRI has been utilized to study the molecular and cellular pathophysiology of AKI as well as analysis of the subsequent renal regeneration.

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

אינדוקציה והערכה של איסכמיה reperfusion פגיעה בלבבות עכברוש Langendorff-perfused

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

הערכה של שמורת זרם כלילית לאחר איסכמיה אוטם שריר הלב Reperfusion בחולדות

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

מודל עכבר יעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

טכניקת כלית עכבר המבודדת perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Biology

Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of spontaneous circulation (ROSC) after successful cardiopulmonary resuscitation. Conversely, recovery of kidney function from AKI is a predictor of favorable neurological outcomes and hospital discharge. However, an effective intervention to prevent kidney damage caused by cardiac arrest after ROSC is lacking, suggesting that additional therapeutic strategies are required. Renal hypoperfusion and reperfusion are two pathophysiological mechanisms that cause AKI after cardiac arrest. Animal models of ischemia-reperfusion-induced AKI (IR-AKI) of both kidneys are comparable with patients with AKI following ROSC in a clinical setting. However, IR-AKI of both kidneys is technically challenging to analyze because the model is associated with high mortality and wide variation in kidney damage, which may affect the analysis. Lightweight mice were chosen, placed under general anesthesia with isoflurane, subjected to surgery with a dorsolateral approach, and their body temperature maintained during operation, thereby reducing tissue damage and establishing a reproducible acute renal IR-AKI research protocol.

This study established a protocol focusing on the technical refinement of a mouse model of bilateral renal ischemia-reperfusion for acute kidney injury research.

שכלול טכני של מודל עכבר איסכמיה כלייתית דו-צדדית למחקר פגיעה חריפה בכליות

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of ...

Developing Murine Acute Kidney Injury Model Using Bilateral Ischemia-Reperfusion

Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Model for Acute Kidney Injury in Mice

Acute kidney injury (AKI) is defined as a rapid decline in renal function, in which persistent kidney dysfunction gradually progresses to chronic kidney disease (CKD) due to the irreversible loss of nephrons and their maladaptive repair. In recent years, the incidence of AKI has been increasing concerning diverse etiologies, including volume depletion, sepsis, nephrotoxicity, muscle injury, and major trauma, in which ischemia-reperfusion injury (IRI)&#160;accounts for most episodes. Development of the IRI model in mice is induced by surgical clamping of the renal pedicles, which provides powerful and controllable tools for preclinical models of AKI. Importantly, the IRI model is deployed at different stages of the AKI development, especially in the processes of AKI to CKD. Despite the IRI model being widely practiced in many laboratories, a series of variables still influence the results of this model. Here, we describe the procedure of IRI model development to provide a repeatable and reliable method for researchers to explore the underlying pathogenesis in the development of AKI and the progression of AKI to CKD.

The ischemia-reperfusion injury (IRI) model can be used at different stages of acute kidney injury (AKI) development, especially during AKI to chronic kidney disease (CKD) progression. Here, we describe the procedure for IRI model development in mice via a trans-abdominal approach, clamping renal pedicles via a vascular clip to induce ischemic injury.

Acute kidney injury (AKI) is defined as a rapid decline in renal function, in which persistent kidney dysfunction gradually progresses to chronic kidney ...

Unilateral Ureteral Obstruction Model for Investigating Kidney Interstitial Fibrosis

Kidney fibrosis is the final pathological outcome of progressive chronic kidney disease (CKD). The unilateral ureteral obstruction (UUO) model is widely used to elucidate the molecular and cellular mechanisms underlying kidney interstitial fibrosis and to identify potential therapeutic targets. This model is established in mice through surgical ligation of a unilateral ureter, a procedure that is relatively straightforward and easy to perform. However, the UUO mouse model is known to exhibit significant variability and inconsistency, influenced by factors such as mouse strain, age, sex, anesthesia type, duration of surgery, body temperature during the procedure, the operator's surgical skills, feeding conditions, and the overall health status of the mice. Variations in surgical techniques, suture placement, and the duration of obstruction contribute to the variability in outcomes. Additionally, inconsistent sampling of obstructed kidneys further increases variability in the assessment of kidney fibrosis. This study outlines the process of developing the UUO mouse model and evaluating interstitial fibrosis, discusses the technical challenges contributing to the model's unpredictability, and proposes potential solutions. These insights aim to establish a more standardized and universally applicable approach for investigating kidney fibrosis.

This protocol describes a method for inducing unilateral ureteral obstruction (UUO) in mice to study the progression of tissue fibrosis in obstructive nephropathy. It includes surgical procedures, post-operative care, and methods for fibrosis assessment.

Kidney fibrosis is the final pathological outcome of progressive chronic kidney disease (CKD). The unilateral ureteral obstruction (UUO) model is widely ...