Laboratório do Dr. de CAESTECKER é suportado pelo NIH 1RO1 HL093057-01 e 1RC4DK090770-01. Laboratório Dr. Harris é suportado por DK38226, DK51265, DK62794 e financiamento da Administração de Veteranos. Suporte para rato renais cirurgias de lesões, creatinina sérica e ensaios de fibrose também fornecidos pela Vanderbilt O&#39;Brien Kidney Injury Centro concessão 1P30 DK079341.

<ol><li> Autoclave todos os instrumentos cirúrgicos antes da cirurgia. Note-se que se está realizando várias cirurgias em diferentes camundongos, lavar instrumentos após o uso e, em seguida, esterilizar utilizando um esterilizador talão quente. Não é suficiente para absorver, em etanol a 70%. </li><li> Dar origem a 0,5 ml de S / C de soro fisiológico estéril pré-operatório e pós-operatório imediato para compensar a perda de fluido do corpo durante a cirurgia. </li><li> Pesar os ratinhos. </li><li> Anestesiar mouse usando Xilazina IP / mistura de ketamina. Ele normalmente leva 3-5 minutos para os ratos para chegar a anestesia plano cirúrgico. </li><li> Raspar o local da cirurgia com a área de margem suficiente para manter o cabelo de contaminar o local da incisão. Isto precisa de ser realizado numa área de preparação, onde a cirurgia não é realizada. </li><li> Aplicar pomada lubrificante oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento durante o procedimento. </li><li> Posicione o mouse propensos à superfície aquecida coberta com absorvente banco pad. Fita pernas para a superfície cirúrgico. </li><li> Se estiver usandoo sistema de banho de água, calor fixada em 38 ° C, 1 h antes da cirurgia. </li><li> Preparação asséptica utilizando Betadine solução escovilhão: esfregar a partir do centro do local para a periferia 3x, de cada vez, seguido por lavagem com Nolvasan para remover o Betadine. Todos Betadine deve ser removido do campo operatório antes da incisão por lavagem com Nolvasan. Antes de iniciar luvas de procedimento de assepsia deve ser alterado para ser estéril. </li><li> Cubra campo cirúrgico com uma cortina cirúrgica estéril. Isto irá evitar que o cabelo disperso de entrar no campo cirúrgico e proporcionar uma área em que para colocar os instrumentos estéreis durante a cirurgia. </li><li> Palpar localização rim através da pele. </li><li> Cortar a pele dorsal ao longo da linha média do rato (aproximadamente 1,5 cm) com uma tesoura e uma pinça. </li><li> Pele separada e subcutâneo sobre os lados dorsal direita e esquerda Através desta incisão por dissecção romba com uma tesoura e uma pinça. </li><li> Faça uma pequena incisão através da fl direitaank muscular e da fáscia acima do rim e exteriorizar o rim direito. </li><li> Dissecar cuidadosamente os pólos superior e inferior do rim livres de tecido circundante. Note-se que o tecido gordo em torno do pólo superior contém a glândula adrenal suportando o seu próprio fornecimento de sangue que pode ser empurrado para fora do rim, mas, obviamente, não devem ser removidos a partir do rato (Figura 1). Depois de rim libertadora do tecido circundante, amarre o fio de seda 4-0 ao redor do hilo do rim direito com um nó cirúrgico duplo. Deixe uma extremidade da sutura ~ 2 em tempo para manter-se o rim como você está cortando distal para o nó para que possa visualizar o local a ser cortado. Lavar o coto com solução salina estéril. </li><li> Feche a camada muscular, utilizando fio absorvível. </li><li> Adicione uma pequena incisão através do músculo flanco esquerdo e fáscia acima do rim e exteriorizar o rim esquerdo (Figura 2A). </li><li> Segure cuidadosamente renal usando uma pinça sem corte ao liberar renalpedículo de tecido adiposo ao redor usando uma pinça (Figuras 2B-2F). Demasiada pressão sobre os rins usando a pinça sem corte pode causar lesão renal assim é preciso lembrar disso quando projetar os controles de &quot;farsa&quot; para os estudos. Se você achar que seus controles sham estão desenvolvendo lesão renal (como evidenciado por um aumento na creatinina sérica), um método alternativo que você pode considerar para liberar o tecido adiposo em torno do pedículo renal é rolar suavemente os tecidos com solução salina estéril embebida de algodão cotonetes derrubado. Em nossa experiência, a gordura é muito bem ligado ao pedículo renal e não pode ser facilmente removida com cotonetes, e isso não pode ser a primeira aproximação que você gostaria de usar. No entanto, assim como outros aspectos deste modelo, isso é algo que você terá que estabelecer para si mesmo com a prática e experiência. </li><li> Grampo deixou pedículo renal com grampo vascular não traumático usando segurando uma pinça (para facilitar a colocação do grampo), use timer para diferentes clamp vezes, dependendo da estirpe do mouse e gravidade da lesão necessária (ver Tabela 1). </li><li> Cobrir o rim esquerdo com a pele (Figura 2H). </li><li> Cubra incisão na pele com gaze embebida salina. </li><li> Exteriorizar rim, confirmar aparência escura uniforme e soltar a braçadeira após os tempos indicados, e confirmar que a aparência escura inverte uniformemente em todo o rim (Figura 2I / G). Se o rim não é rápida e uniformemente re-perfundir (up-de-rosa), o mouse deve ser excluído da análise posterior. Com cuidado, empurre rim de volta para o espaço retroperitoneal. </li><li> Feche a camada muscular com fio absorvível. </li><li> Feche a camada de pele usando monofilamento de nylon sutura não absorvível. </li><li> Administrar buprenorfina analgesia. </li><li> Transferir ratos longe do campo cirúrgico para uma almofada de aquecimento até que eles acordam. </li><li> Devolver os ratos para quarto animal. </li><li> Acompanhar de perto os ratos e dar doses adicionaisde buprenorfina, como indicado acima de cada 8-12 horas, para a dor ou desconforto. Os sinais clínicos, resultando em administração de analgésicos incluem depressão ou outras alterações de comportamento, aparência anormal, ou postura como pilo-ereção, postura arqueada, a falta de higiene e alimentação, ou imobilidade. </li></ol>

<ol>
	<li>Singh, A. P., Junemann, A., Muthuraman, A., Jaggi, A. S., Singh, N., Grover, K., Dhawan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+renal+failure.">Animal models of acute renal failure.</a> Pharmacological reports: PR. 64, 31-44 (2012).</li><li>Heyman, S. N., Rosenberger, C., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+ischemia-reperfusion:+Biases+and+myths-the+proximal+vs.+Distal+hypoxic+tubular+injury+debate+revisited.">Experimental ischemia-reperfusion: Biases and myths-the proximal vs. Distal hypoxic tubular injury debate revisited.</a> Kidney Int. 77, 9-16 (2010).</li><li>Lieberthal, W., Nigam, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure.+II.+Experimental+models+of+acute+renal+failure:+Imperfect+but+indispensable.">Acute renal failure. II. Experimental models of acute renal failure: Imperfect but indispensable.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F1-F12 (2000).</li><li>Dunn, S. R., Qi, Z., Bottinger, E. P., Breyer, M. D., Sharma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+endogenous+creatinine+clearance+as+a+measure+of+renal+function+in+mice.">Utility of endogenous creatinine clearance as a measure of renal function in mice.</a> Kidney Int. 65, 1959-1967 (2004).</li><li>Yuen, P. S., Dunn, S. R., Miyaji, T., Yasuda, H., Sharma, K., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+HPLC+determination+of+creatinine+in+mouse+serum.">A simplified method for HPLC determination of creatinine in mouse serum.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 286, F1116-F1119 (2004).</li><li>Hetu, P. O., Gingras, M. E., Vinet, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+rapid+liquid+chromatography+isotope+dilution+tandem+mass+spectrometry+(LC-IDMS/MS)+method+for+serum+creatinine.">Development and validation of a rapid liquid chromatography isotope dilution tandem mass spectrometry (LC-IDMS/MS) method for serum creatinine.</a> Clin. Biochem. 43, 1158-1162 (2010).</li><li>Keppler, A., Gretz, N., Schmidt, R., Kloetzer, H. M., Groene, H. J., Lelongt, B., Meyer, M., Sadick, M., Pill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats:+An+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay.">Plasma creatinine determination in mice and rats: An enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li><li>Yang, L., Besschetnova, T. Y., Brooks, C. R., Shah, J. V., Bonventre, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+cycle+arrest+in+G2/M+mediates+kidney+fibrosis+after+injury.">Epithelial cell cycle arrest in G2/M mediates kidney fibrosis after injury.</a> Nat. Med. 16, 535-543 (2010).</li><li>Shanley, P. F., Rosen, M. D., Brezis, M., Silva, P., Epstein, F. H., Rosen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topography+of+focal+proximal+tubular+necrosis+after+ischemia+with+reflow+in+the+rat+kidney.">Topography of focal proximal tubular necrosis after ischemia with reflow in the rat kidney.</a> Am. J. Pathol. 122, 462-468 (1986).</li><li>Chawla, L. S., Amdur, R. L., Amodeo, S., Kimmel, P. L., Palant, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+severity+of+acute+kidney+injury+predicts+progression+to+chronic+kidney+disease.">The severity of acute kidney injury predicts progression to chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 79, 1361-1369 (2012).</li><li>Lo, L. J., Go, A. S., Chertow, G. M., McCulloch, C. E., Fan, D., Ordonez, J. D., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dialysis-requiring+acute+renal+failure+increases+the+risk+of+progressive+chronic+kidney+disease.">Dialysis-requiring acute renal failure increases the risk of progressive chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 76, 893-899 (2009).</li><li>Burne, M. J., Haq, M., Matsuse, H., Mohapatra, S., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+to+renal+ischemia+reperfusion+injury+revealed+in+a+murine+model.">Genetic susceptibility to renal ischemia reperfusion injury revealed in a murine model.</a> Transplantation. 69, 1023-1025 (2000).</li><li>Muller, V., Losonczy, G., Heemann, U., Vannay, A., Fekete, A., Reusz, G., Tulassay, T., Szabo, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+renal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats:+Possible+role+of+endothelin.">Sexual dimorphism in renal ischemia-reperfusion injury in rats: Possible role of endothelin.</a> Kidney Int. 62, 1364-1371 (2002).</li><li>Schmitt, R., Marlier, A., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zag+expression+during+aging+suppresses+proliferation+after+kidney+injury.">Zag expression during aging suppresses proliferation after kidney injury.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 19, 2375-2383 (2008).</li><li>Oxburgh, L., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+of+the+mouse+kidney.">Ischemia-reperfusion injury of the mouse kidney.</a> Methods Mol. Biol. 886, 363-379 (2012).</li></ol>

Autores não têm conflitos de interesse de divulgar.

Nós descrevemos dois modelos de IR-AKI para estudar os efeitos da lesão renal moderada e grave. Estes modelos permitem induzir lesão consistente e previsível, com baixa mortalidade. Nosso protocolo descreve muitas das dificuldades e armadilhas tradicionalmente associados com este modelo. Além disso, mostrámos que, dependendo do comprimento do pedículo clampeamento renal, o modelo induz uma ligeira e moderada LRA reversível em grande parte, ou LRA mais grave, com uma recuperação incompleta e fibrose renal persi...

A variedade de modelos experimentais de lesão renal aguda (LRA) foram desenvolvidos para atender a diversidade e complexidade da condição humana (ver referência para a recente revisão abrangente 1). Cada um desses modelos tem as suas próprias forças e fraquezas, e enquanto cada imita as condições humanas correspondentes com eficiências variadas, nenhum modelar com precisão a fisiopatologia de seus colegas humanos. Isquemia-reperfusão (IR) induzida LRA tem sido desenvolvido como um modelo de lesão renal induzida por isquemia aguda em roedores. Embora a gravidade da lesão tubular renal visto neste modelo é raramente observada em pacientes com lesões hipoperfusão renal 2, apesar de suas limitações e, em grande parte devido à natureza relativamente reprodutível deste modelo, sua ampla utilização tem proporcionado e, espera-se, continuará fornecer importantes insights sobre muitos dos mecanismos básicos comuns da AKI, reparo e terapia 3. Cirurgia IR requer familiarity com a anatomia do rim do rato, que tenham ilustrado de forma simplificada na figura 1. Lesão de isquemia-reperfusão (IR) cirurgia lesão renal pode ser realizada por meio de ventrais (laparotomia) ou dorsal abordagens (retroperitoneal). Nós usamos uma abordagem dorsal, pois é menos traumática, permitindo que o tempo de recuperação mais rápido e melhor sobrevivência (particularmente quando se aprende primeiro o procedimento). Lesão renal IR pode ser feita unilateralmente ou bilateralmente. No entanto, as diferenças entre as pressões eficazes braçadeira (que podem resultar da interposição de gordura perihilário entre as mandíbulas de aperto) e / ou diferenças nas respostas renais, a isquemia, entre os lados conduz a resultados mais variáveis. Enquanto isso não é um problema insuperável, ele pode aumentar a variabilidade entre os experimentos, que é um grande problema para este modelo. IR unilateral pode ser realizada com a nefrectomia contralateral. Este é o nosso método de escolha, uma vez que reduz a variabilidade no aperto entre pedículos e, ao mesmo tempo, umallows uma para avaliar a função renal, o que não é afectado com IR unilateral sozinho. Houve discussão sobre o que é o método mais prático vs ideal para avaliar a função renal em camundongos. Uréia (BUN) fornece uma medida da função renal e é um &quot;primeiro olhar&quot; marcador útil em alguns modelos de AKI, incluindo lesão IR. No entanto, os níveis de uréia pode ser afetada pelo estado do volume dos ratos que podem ser afetados, especialmente após abordagem ventral lesão IR, quando a recuperação tardia reduz a ingestão oral de fluidos para um número de dias pós-cirurgia. A creatinina sérica é menos influenciada pelo estado de hidratação, mas está claramente afetada pela massa muscular. Uma das dificuldades com medidas de creatinina sérica tem havido problemas com a detecção de cromógenos não de creatinina no soro de rato usando técnicas à base de ácido pícrico. Como uma alternativa, um número de centros de ter desenvolvido um método baseado em HPLC para quantificar a creatinina do rato, que não é afectado por este artefato 4. No entanto, unlike BUN e pícrico ensaios de creatinina de ácido, que requerem apenas 5-10 ul de soro, HPLC ensaios requerem ~ 25 soro uL por ensaio, a qual se for realizada em duplicado exigirá ~ 100 uL de sangue total por ensaio. Isto pode ser limitante para estudos do rato. Alguns centros têm desenvolvido métodos HPLC e Massa baseada em espectrometria mais sensíveis que permitem a análise de volumes de amostra menores, 5, 6. No entanto, estas tecnologias não são facilmente acessíveis. Um, o ensaio de cascata enzimática alternativa (que requer apenas 5-10 ul de soro) foi avaliada em ratos e amostras de soro de rato e mostrado para paralelo de perto as medições de HPLC de creatinina sérica, enquanto os testes de ácido pícrico sempre valores de creatinina sobrestimar 7. Embora este ensaio não é amplamente utilizada na literatura LRA, o ensaio é comercialmente disponível, simples de utilizar, e descobrimos dá resultados fiáveis ​​com este modelo de IR induzida LRA em ratinhos.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drug or solution</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (anesthetic)</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-881-9413 (100 mg/ml)</td>
			<td>Final concentration 30 mg/ml Ketamine with 3 mg/ml Xylazine administered at 3-4 ml/kg (100 mg/kg Ketamine and 10 mg/kg Xylazine)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (analgesic)</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-808-1939 (100 mg/ml)</td>
			<td>As above</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antisedan (anti-Xylazine)</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-867-7097 (5 mg/ml)</td>
			<td>Optional: to reverse effects of Xylazine in order to increase the rate of recovery after surgery Use 0.5-0.7 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (analgesic)</td>
			<td>Bedford Laboratories</td>
			<td>NDC 55390-100-10 (0.3 mg/ml)</td>
			<td>Dose 0.05-0.1 &mu;g/g every 8-12 hr. Make up a 1:5 dilution in sterile normal saline preoperatively and give 2.5-5 &mu;l/g of the diluted solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine swab sticks</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>NDC 67618-153-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nolvasan Surgical Scrub</td>
			<td>Pfizer Animal Care</td>
			<td>300253</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 2. Drugs and solutions for I/R surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>VWR 21909-404</td>
			<td>For skin and muscle dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved iris forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11065-07</td>
			<td>To hold skin and muscle, to remove peri-nephric fat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5228</td>
			<td>To manipulate kidneys</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clamp (795 g pressure)</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5459</td>
			<td>Good for C57BL/6 and BALB/c mice strains</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz clip applying forceps</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5450</td>
			<td>For RS-5459 clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clamp (75-85 g pressure)</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-02</td>
			<td>Optimal for CD1 mice strain, but also can be used for C57BL/6 and BALB/c</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Serrefine Clamp Applicator-14 cm with Lock</td>
			<td>FST</td>
			<td>18056-14</td>
			<td>For FST 18055-02 clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gayman T/Pump (water-bath heated platform)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>TP-650</td>
			<td>The water heater is set at 38 &deg;C 1 hr prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15" W x 24" Heated platform</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>HHP-2</td>
			<td>Connect to Gayman heated water pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>Model 39DP</td>
			<td>Uses microwave for heating. This is useful for warming during recovery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable suture (Vicryl 5-0)</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>VCP834G</td>
			<td>For fascia and muscle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-absorbable suture: monofilament nylon MONOMID 6/0 660B)</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>CP-B660B-03</td>
			<td>For skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsey needle holder: Tungsten Carbide/13 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>12501-13</td>
			<td>To hold suture needles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>FST</td>
			<td>06-662-3</td>
			<td>To quantify ischemia time</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead sterilizer</td>
			<td>FST</td>
			<td>18000-45</td>
			<td>To sterilize instruments between mice if you are performing multiple surgeries (it is not sufficient to soak instruments in ethanol)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric razor</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>CLP-22965</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>Durapore</td>
			<td>1538-0</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>EXELint</td>
			<td>26044</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cotton tipped applicators</td>
			<td>Kendall</td>
			<td>8884541300</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent BenchPad</td>
			<td>VWR</td>
			<td>56617-014</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21902-985</td>
			<td>Need to be autoclaved</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2'' x 2'' Gauze Pads</td>
			<td>Medi-First</td>
			<td>60673</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>2D7251</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3. Equipment and instruments for I/R surgery.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice

Isquemia-reperfusão induzida lesão renal aguda (IR-AKI) é amplamente utilizado como um modelo de LRA em camundongos, mas os resultados são muitas vezes bastante variável, com altas taxas de mortalidade muitas vezes não declarada que pode confundir análises. Bilateral pedículo clampeamento renal é comumente usado para induzir o IR-AKI, mas as diferenças entre as pressões de fixação eficazes e / ou respostas renais à isquemia entre os rins muitas vezes levam a resultados mais variáveis. Além disso, os tempos mais curtos da braçadeira são conhecidas por induzir a lesão tubular mais variável, e quando os ratos submetidos a lesão bilateral com tempos mais longos da braçadeira desenvolver lesão tubular mais consistente, eles morrem frequentemente durante os primeiros 3 dias após a lesão devido a insuficiência renal grave. Para melhorar a sobrevivência pós-lesão e obter resultados mais consistentes e previsíveis, desenvolvemos dois modelos de lesão unilateral de isquemia-reperfusão, seguido por nefrectomia contralateral. Ambas as cirurgias são realizadas através de uma abordagem dorsal, reduzindo o stress cirúrgico resultando from laparotomia ventral, comumente usado para rato IR-AKI cirurgias. Para a indução da lesão ratinhos BALB / c moderadas submeter unilateral de aperto do pedículo renal durante 26 min, e também submetidos a nefrectomia contralateral simultâneo. Utilizando esta abordagem, 50-60% dos ratinhos desenvolvem moderada LRA 24 h depois da lesão, mas 90-100% dos ratinhos sobreviver. Para induzir o LRA mais grave, ratinhos BALB / c sofrem pedículo renal aperto durante 30 min seguido por nefrectomia contralateral 8 dias após o ferimento. Isto permite a avaliação funcional da recuperação renal após lesão com 90-100% de sobrevivência. Cedo dano tubular pós-lesão, bem como a fibrose pós lesão são altamente consistente com esse modelo.

Moderado IR induzida AKI. IR Unilateral com nefrectomia contralateral simultânea reduz substancialmente a variabilidade nos resultados, mas com tempos mais curtos de fixação necessários para os ratos para sobreviver a este procedimento, ainda constatou que apenas 50-60% dos camundongos desenvolveu o esperado insuficiência renal 24 hr após a lesão (Figura 3A). Em termos práticos, isso cria dificuldades avaliação dos dados, a menos que os estudos envolvem esquemas de tratamento ...

Watch this Scientific Journal Video about Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice at JoVE.com

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Descrevemos modelos de lesão renal por isquemia e reperfusão induzida moderada e grave em que os ratos submetidos a clampeamento do pedículo renal unilateral seguido de nefrectomia contralateral simultânea ou tardia, respectivamente. Estes modelos consistentemente dar origem a uma disfunção renal e fibrose pós-lesão, mas a gravidade da lesão e sobrevivência dependem de fundo, idade e equipamento cirúrgico mouse.

Isquemia-reperfusão modelo de lesão renal aguda e Pós Lesão fibrose em camundongos

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

ischemia-reperfusion-model-acute-kidney-injury-post-injury-fibrosis

Research

JoVE Journal

Medicine

39.2K visualizações.  Vanderbilt University Medical Center. Descrevemos modelos de lesão renal por isquemia e reperfusão induzida moderada e grave em que os ratos submetidos a clampeamento do pedículo renal unilateral seguido de nefrectomia contralateral simultânea ou tardia, respectivamente. Estes modelos consistentemente dar origem a uma disfunção renal e fibrose pós-lesão, mas a gravidade da lesão e sobrevivência dependem de fundo, idade e equipamento cirúrgico mouse.