المؤلفون ممتنون للمساعدة التجريبية في تطوير طريقة التحصين داخل الوعاء اللمفي في الفئران من إيريس اردمان، باربرا فون بوست، وجوليا ماريا مارتينيز، غوميز. وذلك أيضا بفضل ماجي أراس ونيكولا Cesarovic على السماح لنا استخدام المسرح بهم الجراحية لهذا إنتاج الفيديو.

1. تخدير الفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد التخدير عن طريق خلط الكيتامين (مخدر فصامي) وزيلازين (مهدئ ومسكن) في مخزنة المالحة. تركيزات الكيتامين وزيلازين في الحل النهائي هي 12.5 و 2 ملغ / مل، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن التخدير إلى الفئران بالإعطاء البريتون باستخدام حقنة مع G إبرة 25-30. استخدام 0.1 ml/10 غرام من وزن الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم للعين للعيون الفئران من أجل منع جفاف التدريجي من القرنيات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أؤكد أن الفأر هو تخدير بما فيه الكفاية من قبل معسر قدم لها أو أخمص القدمين مع ملقط. إذا لا يتفاعل مع الماوس ردود الفعل لقرصة، والمضي قدما لعملية جراحية. إذا يتفاعل الماوس إلى قرصة مع ردود الفعل أو تقلصات العضلات، والانتظار 1-2 دقائق ثم كرر الاختبار قرصة. إذا كان الماوس لا يزال يتفاعل، استبدال الماوس مع حيوان جديد وتكرار الإجراءات من الخطوة 1.2 وما بعده. </li></ol> 2. أنا الجراحيةncision في المنطقة الأربي للماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على ظهرها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبلل المنطقة الأربية واحد مع تطهير الايثانول (70٪). لتوفير أفضل التطهير، قد يكون حلق المنطقة الأربية لإزالة الفراء تطهير مسبق مع الايثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ الساق الخلفية وثني مفصل الورك لإنتاج ما يقرب من زاوية 90 درجة من مفصل الورك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط microdissecting المنحني، واتخاذ الجلد الماوس في منطقة الأربية حيث مفصل الورك عازمة وسحب الجلد مبلل ارتفاعا طفيفا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين الضغط على الجلد مع ملقط، وقطع شق صغير (&lt;5 مم) من خلال الجلد باستخدام مقص جراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع غيض من مقص مغلقة في شق وفتح مزيد من شق طريق فتح مقص أثناء الضغط عليه داخل شق. وسوف يسبب هذا الجلد المسيل للدموع، وينبغي أن إنتاج قطر من أقل من 10 ملم. ملاحظة: مصدر ضوء بارد مع ضوء مرونة أدلة يمكن استخدامها لتحسين الرؤية. في كبار السنالفئران، وخاصة الذكور، وتحديد العقدة الليمفاوية قد يكون من الصعب بسبب الكثير الأنسجة الدهنية في المنطقة الاربية. </li></ol> 3. حقن داخل الوعاء اللمفي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير حقنة (0.5 مل أو أقل) مع 28-30 إبرة تحت الجلد G؛ قد يكون شطبة قصيرة أفضل من شطبة طويلة. نضح 10 ميكرولتر من اللقاح ليتم حقنه، وأؤكد أن حقنة خالية من الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توطين العقدة الليمفاوية الأربية مع مساعدة من ملقط المنحني وغيض من مقص مغلقة. فإن العقدة الليمفاوية تظهر رمادي داخل الأنسجة الدهنية أكثر بيضاء ويمكن التعرف على المزيد من خلال ارد وصادر الشعيرات الدموية الداخلة والخارجة من العقدة الليمفاوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شل العقدة الليمفاوية بوضعها بين فروع ملقط المنحني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ حقنة وادخال الإبرة في العقدة الليمفاوية مع شطبة مواجهة؛ التأكد من شطبة كله يدخل العقدة الليمفاوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن لقاح (10 ميكرولتر). إذا كانت إيماءة الليمفاويةه وتورم (تفجير)، وحقن يمكن افتراض ناجحة. إذا لم يتم وضع الإبرة عميقة بما فيه الكفاية في العقدة الليمفاوية، وبعض أو لقاح كامل قد يتسرب ولا تدخل العقدة الليمفاوية. إذا تم إدخال الإبرة عميقة جدا، وسوف يتم الافراج عن لقاح حقن تحت الجلد تحت العقدة الليمفاوية. في الحالة الأخيرة، كرر الحقن أو استبدال الماوس مع ماوس غير المعالجة الجديدة. </li></ol> 4. إغلاق شق من قبل التخييط <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح علبة خياطة جراحية معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ اجراء من إبرة خياطة مع حامل إبرة في الجزء الأعلى من الجسم إبرة. تشديد حامل إبرة عن طريق الضغط عليه حتى المصيد اسئلة الأول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ اجراء من الجلد في جانب واحد من شق باستخدام ملقط (اعتمادا على تفضيل الجراح، مسننة أو غير مسننة ملقط أو السنانير الجلد ويمكن استخدام). إدراج إبرة كاليفورنيا. 2-3 مم من حافة الجرح، والدخول من الخارج من الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوسأون عقد من الجلد مع ملقط وفهم الجانب الآخر من شق مع ملقط. إدراج إبرة كاليفورنيا. 2-3 ملم من حافة الجرح، والدخول من الداخل من الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخفيف حامل الإبرة وفهم نهاية الإبرة مع ملقط. سحب الإبرة مع فقي من خلال الجلد، وترك طول مناسب للفقي خارج أول نقطة إبرة الإدراج (إن عدة الفئران هي أن تعامل، وترك نهاية أقصر؛ 5-10 الفئران يمكن تشغيلها على إبرة خياطة مع واحد / فقي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل عقدة يفضل وفقا لبروتوكولات جراح القياسية. واحد غرزة غير كافية إذا شق ليست أكبر من 10 ملم. لشقوق أكبر، وجعل غرزة الثانية. </li></ol> 5. علاج ما بعد العمليات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في قفص، وتغطي مع الأنسجة للحفاظ على الدفء. عند معالجة الفئران متعددة، ووضعها قريبة من بعضها البعض للتدفئة. بدلا من ذلك، وضع الفئران على وسادة دافئة حتى قد أفاقيصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الفئران حتى يستيقظون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الفئران يوميا فيما يتعلق التئام الجروح فضلا عن غيرها من الأعراض السريرية مثل التهابات الجروح. وعادة ما يتم إغلاق الجرح بشكل كاف خلال يومين وتلتئم في غضون سبعة أيام من العملية. </li></ol>

<ol>
	<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intralymphatic+injection+of+peptide+vaccines+enhances+immunogenicity.">Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity.</a> Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).</li><li>Maloy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunization+enhances+DNA+vaccination.">Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 3299-3303 (2001).</li><li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+DNA+vaccination+by+sequential+injection+of+lymph+nodes+with+plasmid+vectors+and+peptides.">Enhancing DNA vaccination by sequential injection of lymph nodes with plasmid vectors and peptides.</a> Vaccine. 27, 2603-2615 (2009).</li><li>Kreiter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranodal+vaccination+with+naked+antigen-encoding+RNA+elicits+potent+prophylactic+and+therapeutic+antitumoral+immunity.">Intranodal vaccination with naked antigen-encoding RNA elicits potent prophylactic and therapeutic antitumoral immunity.</a> Cancer Res. 70, 9031-9040 (2010).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+kinetics+determines+immune+reactivity.">Antigen kinetics determines immune reactivity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5189-5194 (2008).</li><li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node-targeted+immunotherapy+mediates+potent+immunity+resulting+in+regression+of+isolated+or+metastatic+human+papillomavirus-transformed+tumors.">Lymph node-targeted immunotherapy mediates potent immunity resulting in regression of isolated or metastatic human papillomavirus-transformed tumors.</a> Clin. Cancer Res. 15, 6167-6176 (2009).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+ligands+as+adjuvants+in+allergen-specific+immunotherapy.">Toll-like receptor ligands as adjuvants in allergen-specific immunotherapy.</a> Clin. Exp. Allergy. 35, 1591-1598 (2005).</li><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+denaturation,+a+simple+method+to+improve+the+immunotherapeutic+potential+of+allergens.">Heat denaturation, a simple method to improve the immunotherapeutic potential of allergens.</a> Eur. J. Immunol. 35, 3591-3598 (2005).</li><li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+injections+as+a+new+administration+route+for+allergen-specific+immunotherapy.">Intralymphatic injections as a new administration route for allergen-specific immunotherapy.</a> Int. Arch. Allergy Immunol. 150, 59-65 (2009).</li><li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+MHC+class+II+pathway+of+antigen+presentation+enhances+immunogenicity+and+safety+of+allergen+immunotherapy.">Targeting the MHC class II pathway of antigen presentation enhances immunogenicity and safety of allergen immunotherapy.</a> Allergy. 64, 172-178 (2009).</li><li>Mohanan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+routes+affect+the+quality+of+immune+responses:+A+cross-sectional+evaluation+of+particulate+antigen-delivery+systems.">Administration routes affect the quality of immune responses: A cross-sectional evaluation of particulate antigen-delivery systems.</a> J. Control Release. 147, 342-349 (2010).</li><li>Waeckerle-Men, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+targeting+of+BCG+vaccines+amplifies+CD4+and+CD8+T-cell+responses+and+protection+against+Mycobacterium+tuberculosis.">Lymph node targeting of BCG vaccines amplifies CD4 and CD8 T-cell responses and protection against Mycobacterium tuberculosis.</a> Vaccine. 31, 1057-1064 (2013).</li><li>von Beust, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+therapeutic+index+of+CpG+oligodeoxynucleotides+by+intralymphatic+administration.">Improving the therapeutic index of CpG oligodeoxynucleotides by intralymphatic administration.</a> Eur. J. Immunol. 35, 1869-1876 (2005).</li><li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunotherapy+for+cat+allergy+induces+tolerance+after+only+3+injections.">Intralymphatic immunotherapy for cat allergy induces tolerance after only 3 injections.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 129, 1290-1296 (2012).</li><li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+allergen+administration+renders+specific+immunotherapy+faster+and+safer:+a+randomized+controlled+trial.">Intralymphatic allergen administration renders specific immunotherapy faster and safer: a randomized controlled trial.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 17908-17912 (2008).</li><li>Lesterhuis, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Route+of+administration+modulates+the+induction+of+dendritic+cell+vaccine-induced+antigen-specific+T+cells+in+advanced+melanoma+patients.">Route of administration modulates the induction of dendritic cell vaccine-induced antigen-specific T cells in advanced melanoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 17, 5725-5735 (2011).</li><li>Fadul, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response+in+patients+with+newly+diagnosed+glioblastoma+multiforme+treated+with+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccination+after+radiation+chemotherapy.">Immune response in patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccination after radiation chemotherapy.</a> J. Immunother. 34, 382-389 (2011).</li><li>Eizenberg, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceptance+of+Intanza(R)+9+mug+intradermal+influenza+vaccine+in+routine+clinical+practice+in+Australia+and+Argentina.">Acceptance of Intanza(R) 9 mug intradermal influenza vaccine in routine clinical practice in Australia and Argentina.</a> Adv. Ther. 28, 640-649 (2011).</li><li>Durando, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvants+and+alternative+routes+of+administration+towards+the+development+of+the+ideal+influenza+vaccine.">Adjuvants and alternative routes of administration towards the development of the ideal influenza vaccine.</a> Hum. Vaccin. 7, 29-40 (2011).</li><li>Barth, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+trial+of+ex+vivo+CD40L+activation+of+a+dendritic+cell+vaccine+in+colorectal+cancer+patients:+tumor-specific+immune+responses+are+associated+with+improved+survival.">A randomized trial of ex vivo CD40L activation of a dendritic cell vaccine in colorectal cancer patients: tumor-specific immune responses are associated with improved survival.</a> Clin. Cancer Res. 16, 5548-5556 (2010).</li><li>Schwaab, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+immunologic+effects+of+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccine+with+Aldesleukin+(Interleukin+2)+and+IFN-{alpha}2a+therapy+in+metastatic+renal+cell+carcinoma+patients.">Clinical and immunologic effects of intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccine with Aldesleukin (Interleukin 2) and IFN-{alpha}2a therapy in metastatic renal cell carcinoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4986-4992 (2009).</li><li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunotherapy.">Intralymphatic immunotherapy.</a> Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 9, 537-543 (2009).</li><li>Catron, D. M., Itano, A. A., Pape, K. A., Mueller, D. L., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+the+first+50+hr+of+the+primary+immune+response+to+a+soluble+antigen.">Visualizing the first 50 hr of the primary immune response to a soluble antigen.</a> Immunity. 21, 341-347 (2004).</li><li>Itano, A. A., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+presentation+to+naive+CD4+T+cells+in+the+lymph+node.">Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node.</a> Nat. Immunol. 4, 733-739 (2003).</li><li>Johansen, P., Mohanan, D., Martinez-Gomez, J. M., Kundig, T. M., Gander, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lympho-geographical+concepts+in+vaccine+delivery.">Lympho-geographical concepts in vaccine delivery.</a> J. Control Release. 148, 56-62 (2010).</li><li>Johansen, P., von Moos, S., Mohanan, D., Kundig, T. M., Senti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+routes+for+allergen+immunotherapy.">New routes for allergen immunotherapy.</a> Hum. Vacc. Immunother. 8, 1525-1533 (2012).</li><li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intralymphatic+immunotherapy:+from+the+rationale+to+human+applications.">Intralymphatic immunotherapy: from the rationale to human applications.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 352, 71-84 (2011).</li><li>Duthie, M. S., Windish, H. P., Fox, C. B., Reed, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+defined+TLR+ligands+as+adjuvants+within+human+vaccines.">Use of defined TLR ligands as adjuvants within human vaccines.</a> Immunol. Rev. 239, 178-196 (2011).</li><li>Ribas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-lymph+node+prime-boost+vaccination+against+Melan+A+and+tyrosinase+for+the+treatment+of+metastatic+melanoma:+results+of+a+phase+1+clinical+trial.">Intra-lymph node prime-boost vaccination against Melan A and tyrosinase for the treatment of metastatic melanoma: results of a phase 1 clinical trial.</a> Clin. Cancer Res. 17, 2987-2996 (2011).</li><li>Bedrosian, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranodal+administration+of+peptide-pulsed+mature+dendritic+cell+vaccines+results+in+superior+CD8++T-cell+function+in+melanoma+patients.">Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients.</a> J. Clin. Oncol. 21, 3826-3835 (2003).</li><li>Lesimple, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injection+by+various+routes+of+melanoma+antigen-associated+macrophages:+biodistribution+and+clinical+effects.">Injection by various routes of melanoma antigen-associated macrophages: biodistribution and clinical effects.</a> Cancer Immunol. Immunother. 52, 438-444 (2003).</li><li>Brown, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-transduced+dendritic+cells+injected+into+skin+or+lymph+node+prime+potent+simian+immunodeficiency+virus-specific+T+cell+immunity+in+monkeys.">Adenovirus-transduced dendritic cells injected into skin or lymph node prime potent simian immunodeficiency virus-specific T cell immunity in monkeys.</a> J. Immunol. 171, 6875-6882 (2003).</li><li>Fong, L., Brockstedt, D., Benike, C., Wu, L., Engleman, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+injected+via+different+routes+induce+immunity+in+cancer+patients.">Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients.</a> J. Immunol. 166, 4254-4259 (2001).</li></ol>

يدعى TMK كما المخترع من براءات الاختراع التي تتعامل مع العلاج المناعي في الإنسان داخل الوعاء اللمفي. وقد TMK المستشار العلمي وتلقت نفقات السفر من ImVisioN محدودة، Cytos التكنولوجيا الحيوية، وشركة MannKind، وXBiotech الولايات المتحدة الأمريكية شركة PJ ليس لديها مصلحة الصراع في الكشف عنها.

وقد ثبت أن التحصين داخل الوعاء اللمفي والعلاج المناعي ليكون مناسبا لتحفيز كل من استجابات الأجسام المضادة والاستجابات تي خلية. كما هو موضح في هذه المقالة الفيديو، الإجراء داخل الوعاء اللمفي التطعيم هو وسيلة سريعة وسهلة لتحفيز استجابات مناعية قوية لدى الفئران. جراح ا...

وعادة ما يتم حقن تحت الجلد أو في العضل لقاحات لتحفيز الاستجابات المناعية. نجاح هذا الإجراء يتطلب الصرف كفاءة اللقاح إلى الغدد الليمفاوية حيث الخلايا مستضد تقديم يمكن أن تتفاعل مع الخلايا الليمفاوية لتوليد T-B-والاستجابات الخلية. بالإضافة إلى ذلك، قوة ونوع الاستجابات المناعية التي يسببها تعتمد أيضا على كثافة أو تواتر هذه التفاعلات وكذلك المكروية نفسها، خصوصا محتوى السيتوكينات. كما سوى جزء صغير من لقاح يحقن الأنسجة الطرفية تصل إلى العقدة الليمفاوية، واللقاحات من الفئران والبشر عن طريق الحقن المباشر للقاح في الغدد الليمفاوية، ويتم إنشاؤها الاستجابات المناعية للموقع، وقد أجريت. في الإنسان، ويسترشد الإجراء بواسطة الموجات فوق الصوتية، وهو إجراء يستخدم أيضا لإدارة وكلاء التصوير لتصور وتشخيص في النظام اللمفاوي. في الفئران، وهذا الإجراء هو الغازية. هنا، وهو صغير (5-10 ملم) incisioن يتم في المنطقة الأربية الحيوانات تخدير 1، المترجمة العقدة الليمفاوية ويجمد مع ملقط، ويتم حقن حجم 10-20 ميكرولتر من اللقاح تحت المراقبة البصرية، ويستخدم 10 ميكرولتر لحقن الفئران في الأول والشباب مع الغدد الليمفاوية صغيرة، في حين أن 20 ميكرولتر يمكن حقنها في الغدد الليمفاوية من الفئران الأكبر سنا أو تستعد بالفعل، والتي لديها الغدد الليمفاوية أكبر. شق يمكن أن تكون مغلقة مع غرزة واحدة باستخدام خيوط الجراحة. بواسطة هذه الطريقة، وتحصين الفئران مع البلازميد الحمض النووي 2،3، رسول الحمض النووي الريبي 4، 1،3،5،6 الببتيد، البروتين 7-10، الجسيمات 11، 12 البكتيريا وكذلك المواد المساعدة 7،13، وتحسن قوي من المناعة وقد لوحظت استجابات ضد كل نوع من اللقاحات. طريقة التطعيم داخل الوعاء اللمفي غير مناسبة وخاصة في الحالات التي تنتج التطعيم التقليدية الحصانة غير كافية أو حيث كمية اللقاح المتاحة محدودة أو النسخةذ مكلفة. في الإنسان، وقد تم تطبيق الأسلوب داخل الوعاء اللمفي التحصين للمرضى الحساسية 14،15 أو المرضى الذين يعانون من سرطان 16-21. على الرغم من أن الفكرة الحالية هو أن الأسلوب داخل الوعاء اللمفي هو أكثر الغازية من الطرق الأخرى عن طريق الحقن مثل حقن العضلي وتحت الجلد، تصور الألم ليست أعلى من بعد ثقب الوريدي 15. ومن المتوقع أن التطعيم داخل الوعاء اللمفي سوف تصبح بديلا أو مكملا لأساليب أخرى من اللقاحات الوقائية والعلاجية على وجه الخصوص. توضح هذه المقالة في التفاصيل كيف يتم تنفيذ الإجراء التطعيم داخل الوعاء اللمفي في الفئران. ، تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي وصفها الوكالة البيطرية كانتون زيورخ وتنفيذ المبادئ التوجيهية والتوجيهات وفقا لحماية الحيوانات المستخدمة لأغراض علمية الاتحادية السويسرية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="653">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Ketamine (Ketasol-100)</td>
			<td style="width:135px;">Graeub AG, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Anesthetics</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:233px;">Xylazine (Rompun)</td>
			<td style="width:135px;">Bayer, Germany</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Anesthetics</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Viscotears Eye-Gel</td>
			<td style="width:135px;">Novartis, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>To keep eyes from drying out during anesthesia.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">BD Micro-Fine 0.5 ml</td>
			<td style="width:135px;">BD Medical, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>29 G Insulin syringes with permanently attached needles</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">6-0 Dermalon Monofilament nylon</td>
			<td style="width:135px;">Covidien, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Curved forceps, 4.5 inch</td>
			<td style="width:135px;">Polymed, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For incision and holding of lymph node</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Straight surgical scissors, 4.5 inch</td>
			<td style="width:135px;">Polymed, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For incision</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:233px;">Needle holder, 5.5 inch</td>
			<td style="width:135px;">Polymed, Switzerland</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>To close incision with suture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:233px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intralymphatic immunotherapy and vaccination in mice

وعادة ما يتم حقن تحت الجلد أو في العضل لقاحات لتحفيز الاستجابات المناعية. نجاح هذا يتطلب كفاءة الصرف لقاح إلى الغدد الليمفاوية حيث الخلايا مستضد تقديم يمكن أن تتفاعل مع الخلايا الليمفاوية لتوليد الاستجابات المناعية أراد. قوة ونوع الاستجابات المناعية التي يسببها تعتمد أيضا على كثافة أو تردد من التفاعلات وكذلك المكروية، وخاصة محتوى السيتوكينات. كما سوى دقيقة واحدة جزء من اللقاحات حقن محيطيا تصل إلى الغدد الليمفاوية، وأجريت التطعيمات من الفئران والبشر عن طريق الحقن المباشر للقاح في الغدد الليمفاوية الأربية، أي حقن داخل الوعاء اللمفي. في الإنسان، ويسترشد الإجراء بواسطة الموجات فوق الصوتية. في الفئران، يتم إجراء الصغيرة (5-10 مم) شق في المنطقة الأربية تخدير الحيوانات، المترجمة العقدة الليمفاوية ويجمد مع ملقط، ويتم حقن حجم 10-20 ميكرولتر من اللقاح تحت المراقبة البصرية.يتم إغلاق شق مع غرزة واحدة باستخدام خيوط الجراحة. تم تلقيح الفئران مع الحمض النووي البلازميد، RNA، الببتيد، والبروتين، والجسيمات، والبكتيريا وكذلك المواد المساعدة، ولوحظ تحسن قوي من الاستجابات المناعية ضد كل نوع من اللقاحات. طريقة التطعيم داخل الوعاء اللمفي غير مناسبة وخاصة في الحالات التي تنتج التطعيم التقليدية كافية أو الحصانة حيث كمية اللقاح المتاحة محدودة.

إجراء الحقن داخل الوعاء اللمفي في الفئران، على الرغم من الطبيعة الجراحية، هي على التوالي إلى الأمام وسريع نسبيا. ويمكن لشخص مدرب تنفيذ الإجراء في 3-4 دقيقة. شق أن يتم إغلاق مع غرزة واحدة يشفى عادة في غضون يومين (الشكل 1) وقد...

Watch this Scientific Journal Video about Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice at JoVE.com

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

غالبا ما يفشل التطعيم الوقائية والعلاجية لتحفيز الاستجابات المناعية القوية بسبب الصرف الأسبوع من اللقاح إلى الغدد الليمفاوية وبالتالي إشراك الفقراء من الخلايا المناعية. عن طريق الحقن المباشر للقاح إلى الغدد الليمفاوية، ما يسمى الحقن داخل الوعاء اللمفي، نجاعة اللقاح يمكن تحسين بقوة ويمكن تقليل جرعات اللقاح.

الخلايا الجذعية داخل الوعاء اللمفي والتطعيم في الفئران

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

intralymphatic-immunotherapy-and-vaccination-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

22.9K Views.  University Hospital Zurich.  غالبا ما يفشل التطعيم الوقائية والعلاجية لتحفيز الاستجابات المناعية القوية بسبب الصرف الأسبوع من اللقاح إلى الغدد الليمفاوية وبالتالي إشراك الفقراء من الخلايا المناعية. عن طريق الحقن المباشر للقاح إلى الغدد الليمفاوية، ما يسمى الحقن دا?...

Video: Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

الإنبثاث التجريبية وCTL المناعي نقل بالتبني النموذجي ماوس

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Protocol for Recombinant RBD-based SARS Vaccines: Protein Preparation, Animal Vaccination and Neutralization Detection

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide variety of pathogens 1-3. Since the mammalian cell system is capable of post-translational modification, thus forming properly folded and glycosylated proteins, recombinant proteins expressed in mammalian cells have shown the greatest potential to maintain high antigenicity and immunogenicity 4-6.
Although no new cases of SARS have been reported since 2004, future outbreaks are a constant threat; therefore, the development of vaccines against SARS-CoV is a prudent preventive step and should be carried out. The RBD of SARS-CoV S protein plays important roles in receptor binding and induction of specific neutralizing antibodies against virus infection 7-9. Therefore, in this protocol, we describe novel methods for developing a RBD-based subunit vaccine against SARS. Briefly, the recombinant RBD protein (rRBD) was expressed in culture supernatant of mammalian 293T cells to obtain a correctly folded protein with proper conformation and high immunogenicity 6. The transfection of the recombinant plasmid encoding RBD to the cells was then performed using a calcium phosphate transfection method 6,10 with some modifications. Compared with the lipid transfection method 11,12, this modified calcium phosphate transfection method is cheaper, easier to handle, and has the potential to reach high efficacy once a transfection complex with suitable size and shape is formed 13,14. Finally, a SARS pseudovirus neutralization assay was introduced in the protocol and used to detect the neutralizing activity of sera of mice vaccinated with rRBD protein. This assay is relatively safe, does not involve an infectious SARS-CoV, and can be performed without the requirement of a biosafety-3 laboratory 15.
The protocol described here can also be used to design and study recombinant subunit vaccines against other viruses with class I fusion proteins, for example, HIV, respiratory syncytial virus (RSV), Ebola virus, influenza virus, as well as Nipah and Handra viruses. In addition, the methods for generating a pseudovirus and subsequently establishing a pseudovirus neutralization assay can be applied to all these viruses.

This protocol describes a general procedure for studying recombinant receptor-binding domain (RBD)-based subunit vaccines against SARS. It includes methods for transfection and expression of RBD protein in 293T cells, immunization of mice with RBD and detection of neutralization activity of mouse sera using an established SARS pseudovirus neutralization assay.

بروتوكول لقاحات مرض السارس المؤتلف RBD المستندة : إعداد البروتين ، والكشف عن تطعيم الحيوانات تحييد

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be established. The method described below, prepared in accordance with Good Manufacturing Process (GMP) guidelines, is an optimization of the most common ex vivo preparation method for generating large numbers of DCs for clinical studies 2.
Our method utilizes the synthetic TLR 3 agonist Polyinosinic-Polycytidylic Acid-poly-L-lysine Carboxymethylcellulose (Poly-ICLC) to stimulate the DCs. Our previous study established that Poly-ICLC is the most potent individual maturation stimulus for human DCs as assessed by an upregulation of CD83 and CD86, induction of interleukin-12 (IL-12), tumor necrosis factor (TNF), interferon gamma-induced protein 10 (IP-10), interleukmin 1 (IL-1), and type I interferons (IFN), and minimal interleukin 10 (IL-10) production.
DCs are differentiated from frozen peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) obtained by leukapheresis. PBMCs are isolated by Ficoll gradient centrifugation and frozen in aliquots. On Day 1, PBMCs are thawed and plated onto tissue culture flasks to select for monocytes which adhere to the plastic surface after 1-2 hr incubation at 37 &deg;C in the tissue culture incubator. After incubation, the lymphocytes are washed off and the adherent monocytes are cultured for 5 days in the presence of interleukin-4 (IL-4) and granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) to differentiate to immature DCs. On Day 6, immature DCs are pulsed with the keyhole limpet hemocyanin (KLH) protein which serves as a control for the quality of the vaccine and may boost the immunogenicity of the vaccine 3. The DCs are stimulated to mature, loaded with peptide antigens, and incubated overnight. On Day 7, the cells are washed, and frozen in 1 ml aliquots containing 4 - 20 x 106 cells using a controlled-rate freezer. Lot release testing for the batches of DCs is performed and must meet minimum specifications before they are injected into patients.

The most commonly used method for generating large numbers of autologous dendritic cells (DCs) for use in tumor immunotherapy is described. The method uses IL-4 and GM-CSF to differentiate DCs from monocytes. The immature DCs are stimulated to mature and then loaded with antigens before they are injected back into the patient.

إعداد ورم مستضد محملة الخلايا الجذعية الناضجة لعلاج مناعي

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat because of increased worldwide exchanges and human populations penetrating more and more natural ecosystems. A good example of such an emerging situation is chikungunya virus epidemics of 2005-2006 in the Indian Ocean. Recent progresses in our understanding of cellular pathways controlling viral replication suggest that compounds targeting host cell functions, rather than the virus itself, could inhibit a large panel of RNA viruses. Some broad-spectrum antiviral compounds have been identified with host target-oriented assays. However, measuring the inhibition of viral replication in cell cultures using reduction of cytopathic effects as a readout still represents a paramount screening strategy. Such functional screens have been greatly improved by the development of recombinant viruses expressing reporter enzymes capable of bioluminescence such as luciferase. In the present report, we detail a high-throughput screening pipeline, which combines recombinant measles and chikungunya viruses with cellular viability assays, to identify compounds with a broad-spectrum antiviral profile.

In vitro assays to measure virus replication have been greatly improved by the development of recombinant RNA viruses expressing luciferase or other enzymes capable of bioluminescence. Here we detail a high-throughput screening pipeline that combines such recombinant strains of measles and chikungunya viruses to isolate broad-spectrum antivirals from chemical libraries.

الإنتاجية العالية للفحص واسع الطيف الكيميائية مثبطات الحمض النووي الريبي الفيروسات

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo to express chimeric antigen receptors specific for glioma antigens (CAR T cells). The expansion and function of adoptively transferred CAR T cells can be potentiated by the lymphodepletive and tumoricidal effects of standard of care chemotherapy and radiotherapy. We describe a method for generating CAR T cells targeting EGFRvIII, a glioma-specific antigen, and evaluating their efficacy when combined with a murine model of glioblastoma standard of care. T cells are engineered by transduction with a retroviral vector containing the anti-EGFRvIII CAR gene. Tumor-bearing animals are subjected to host conditioning by a course of temozolomide and whole brain irradiation at dose regimens designed to model clinical standard of care. CAR T cells are then delivered intravenously to primed hosts. This method can be used to evaluate the antitumor efficacy of CAR T cells in the context of standard of care.

The lymphodepletive and immunomodulatory effects of chemotherapy and radiation standard of care can be leveraged to enhance the antitumor efficacy of T cell immunotherapy. We outline a method for generating EGFRvIII-specific chimeric antigen receptor (CAR) T cells and administering them in the context of glioblastoma standard of care.

جيل من الخلايا T CAR للعلاج بالتبني في سياق ورم أرومي دبقي مستوى الرعاية

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol specifically intended to measure antigen-specific killing without an infection. This protocol is designed and describes methods to overcome these limitations by allowing for the detection of antigen-specific killing of a target cell by CD8+ T cells in vivo. This is accomplished by merging a vaccination model with a traditional CFSE-labeled target killing assay. This combination allows the researcher to assess the antigen-specific CTL potential directly and quickly as the assay is not dependent upon tumor growth or infection. In addition, the readout is based on flow cytometry and so should be readily accessible to most researchers. The major limitation of the study is identifying the timeline in vivo that is appropriate to the hypothesis being tested. Variations in antigen strength and mutations in the T cells that may result in differential cytolytic function need to be carefully assessed to determine the optimal time for cell harvest and assessment. The appropriate concentration of peptide for vaccination has been optimized for hgp10025-33 and OVA257-264, but further validation would be needed for other peptides that may be more appropriate to a given study. Overall, this protocol allows a quick assessment of killing function in vivo and can be adapted to any given antigen.

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

The goal of this protocol is to allow for detection of in vivo antigen-specific killing of a target cell in a murine model.

في فيفو الفحص للكشف عن وظيفة محددة مستضد تي خلية عن استخدام نموذج التطعيم

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the antibody needs to distinguish between highly related structures (e.g., a normal protein and a mutated version thereof). The current way of generating such discriminative mAbs involves extensive screening of multiple Ab-producing B cells, which is both costly and time consuming. We propose here a rapid and cost-effective method for the generation of discriminative, fully human mAbs starting from human blood circulating B lymphocytes. The originality of this strategy is due to the selection of specific antigen binding B cells combined with the counter-selection of all other cells, using readily available Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC). Once specific B cells are isolated, cDNA (complementary deoxyribonucleic acid) sequences coding for the corresponding mAb are obtained using single cell Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) technology and subsequently expressed in human cells. Within as little as 1 month, it is possible to produce milligrams of highly discriminative human mAbs directed against virtually any desired antigen naturally detected by the B cell repertoire.

We describe a method for the production of human antibodies specific for an antigen of interest, starting from rare B cells circulating in human blood. Generation of these natural antibodies is efficient and rapid, and the antibodies obtained can discriminate between highly related antigens.

جيل من التمييزية مونوكلونل البشرية من خلايا نادرة محددة مستضد ب المتداولة في الدم

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce efficient therapies have been proposed over the last decade. Among the promising candidates for designing novel therapeutic strategies, cellular immunotherapies have been targeted to eliminate highly invasive and chemo-radioresistant tumor cells, likely involved in a rapid and fatal relapse of this cancer. Thus, administration(s) of allogeneic GBM-reactive immune cell effectors, such as human V&#978;9V&#948;2 T lymphocytes, in the vicinity of the tumor would represents a unique opportunity to deliver efficient and highly concentrated therapeutic agents directly into the site of brain malignancies. Here, we present a protocol for the preparation and the stereotaxic administration of allogeneic human lymphocytes in immunodeficient mice carrying orthotopic human primary brain tumors. This study provides a preclinical proof-of-concept for both the feasibility and the antitumor efficacy of these cellular immunotherapies that rely on stereotactic injections of allogeneic human lymphocytes within intrabrain tumor beds.

Here, we present a protocol for the preparation and the stereotaxic administration of allogeneic human lymphocytes in immunodeficient mice carrying orthotopic human primary brain tumors. This study provides a proof-of-concept for both the feasibility and the antitumor efficacy of intrabrain-delivered cellular immunotherapies.

نقل الخلايا المناعية السامة للخلايا في نماذج مورين لتكثيفها عديدة الأشكال جليوبلاستوما أورثوتوبيك الإنسان التبني المناظير باستخدام الأشعة

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...

Optimized Interferon-gamma ELISpot Assay to Measure T Cell Responses in the Guinea Pig Model after Vaccination

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, influenza, diphtheria, and viral hemorrhagic fevers. We have demonstrated that plasmid-DNA (pDNA) vaccine delivery into the skin elicits robust humoral responses in the guinea pig. However, the use of this animal to model immune responses was somewhat limited in the past due to the lack of available reagents and protocols to study T cell responses. T cells play a pivotal role in both immunoprophylactic and immunotherapeutic mechanisms. Understanding T cell responses is crucial for the development of infectious disease and oncology vaccines and accommodating delivery devices. Here we describe an interferon-gamma (IFN-&#947;) enzyme-linked immunospot (ELISpot) assay for guinea pig peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The assay enables researchers to characterize vaccine-specific T-cell responses in this important rodent model. The ability to assay cells isolated from the peripheral blood provides the opportunity to track immunogenicity in individual animals.

The development of the interferon-gamma ELISpot assay for guinea pig PBMCs allows the characterization of T-cell responses in this highly relevant model for studying infectious diseases. We have applied the assay to measure T cell responses associated with intradermal delivery of DNA vaccines.

محسن انترفيرون-غاما السبت المقايسة لاستجابات الخلية تي التدبير في نموذج خنزير غينيا بعد التطعيم

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, ...

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases reported annually. The control of RABV circulation in wildlife reservoirs is typically accomplished by a strategy of oral rabies vaccination (ORV). Currently no wildlife ORV program exists in Puerto Rico. Research into oral rabies vaccines and various bait types for mongooses has been conducted with promising results. Monitoring the success of ORV relies on estimating bait uptake by target species, which typically involves evaluating a change in RABV neutralizing antibodies (RVNA) post vaccination. This strategy may be difficult to interpret in areas with an active wildlife ORV program or in areas where RABV is enzootic and background levels of RVNA are present in reservoir species. In such situations, a biomarker incorporated with the vaccine or the bait matrix may be useful. We offered 16 captive mongooses placebo ORV baits containing ethyl-iophenoxic acid (et-IPA) in concentrations of 0.4% and 1% inside the bait and 0.14% in the external bait matrix. We also offered 12 captive mongooses ORV baits containing methyl-iophenoxic acid (me-IPA) in concentrations of 0.035%, 0.07% and 0.14% in the external bait matrix. We collected a serum sample prior to bait offering and then weekly for up to eight weeks post offering. We extracted Iophenoxic acids from sera into acetonitrile and quantified using liquid chromatography/mass spectrometry. We analyzed sera for et-IPA or me-IPA by liquid chromatography-mass spectrometry. We found adequate marking ability for at least eight and four weeks for et- and me-IPA, respectively. Both IPA derivatives could be suitable for field evaluation of ORV bait uptake in mongooses. Due to the longevity of the marker in mongoose sera, care must be taken to not confound results by using the same IPA derivative during consecutive evaluations.

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

We offered captive mongooses placebo oral rabies vaccine baits with ethyl or methyl iophenoxic acid as a biomarker and verified bait uptake using a novel liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method.

تحليل نظائرها حمض الأيوفينوكسيك في النمس الهندي الصغير (الهربساتوبوتوس)سيرا لاستخدامها كعلامة بيولوجية التطعيم داء الكلب عن طريق الفم

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...