עבודה זו נתמכה על ידי קרן ביל ומלינדה גייטס (פרויקט PneuCarriage, גרנט 52099) ותכנית התמיכה בתשתית התפעולית של הממשלה ויקטוריאני. תודה לאיילין דאן, ג&#39;נט Strachan, וקים הייר לקריאה ביקורתית של כתב היד.

1. הכנת תרחיף תא להקלדה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש μl 1 לולאה חד פעמית סטרילית, לקחת תנופה קטנה של תרבות הטהורה הלילה הטרי של pneumococci גדל על אגר דם סוס לא סלקטיבי מוצק ולחסן 100 μl לב עירוי מרק (HI). ההשעיה צריכה להיראות רק בעליל עכור. בעדינות להתסיס את הצינור לemulsify. הערה: מדיה אחר כגון מרק מוח לב עירוי יכולה להיות גם מתאימה. תוספת של סרום (למשל ריכוז סופי של 10% (v / v) בסרום של סוס) ודגירה על 37 מעלות צלזיוס למשך כ 1 שעות לפני השימוש יכולה לשמש כדי לשפר את התגובה. </li></ol> 2. בבדיקה צפיפות של השעיה תא גם ההשעיה התא מוכנה בשלב 1.1 תשמש כביקורת השלילית, וצריכה להיבדק לצפיפות תאים לפני הוספה סרה ההקלדה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות לולאת μl 1, להעביר טיפת הבידוד מוכן בשלב 1.1 על גלאסשקופיות מיקרוסקופ ים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת זוג המלקחיים, במקום coverslip מעגלי קטן על ההשעיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בהגדרת שלב לעומת זאת, להתבונן בהכנה מיקרוסקופית בהגדלה 400X, כדי לבדוק את הצפיפות של ההשעיה (איור 1 א). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הבידוד הוא כבד מדי (איור 2 א), להוסיף עוד מרק להשעית התא נעשתה בשלב 1.1 לדלל אותו. בעדינות מערבב שוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הבידוד הוא קל מדי, לדוגמא, יש &lt;50 תאים גלויים בתחום המיקרוסקופי (איור 2), להוסיף עוד חיידקים להכנת ההשעיה התא נעשתה בשלב 1.1 ולערבב בעדינות. הערה: עם ניסיון, הצפיפות של ההשעיה התא יכולה להישפט על ידי רועד ומחזיק עד האור, שבו הוא אמור להופיע להיות פשוט בעליל עכור. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.1-2.3 עד מספר מתאים של תאים נראים בשדה המיקרוסקופי. הערה: שקופיות זכוכית וcoverslשב&quot;ס מהווה סכנה חדה. לאחר שימוש, שקופיות וcoverslips מזוהמים עם חומר זיהומיות וחייבים להיות מסולקת למכל חד Biohazard. </li></ol> 3. הקלדה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר ~ μl 1 של הבידוד מוכן (למשל באמצעות μl לולאה 1) על גבי שקופית מיקרוסקופ הזכוכית. מחק את הלולאה לתוך המכל החד Biohazard. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נפח שווה (loopful μl 1) של נסיוב בטמפרטורת חדר לשקופית ומערבבים שני טיפות היטב עם הלולאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת זוג המלקחיים, במקום coverslip מעגלי קטן על ההשעיה, נזהר שלא לגעת בטיפה. מקום coverslip על ההשעיה מייד לאחר התוספת של נסיובי כדי למנוע את הנוזל בשקופית מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרוסקופ, לבחון את ההשעיה תחת שלב בניגוד עם הגדלה 400X. תגובת Quellung שלילית נצפתה כאשר ניתן לראות מעט או ללא &quot;נפיחות&quot; של תאי דלקת ריאות ב40הגדלת 0x, בדומה למה שרואה בהשעית תא pneumococcal ללא נסיובי הוסיפה (בקרה שלילית). תגובת Quellung חיובית נצפתה כאשר התאים נראים מוגדלים או &#39;נפוח&#39; וגלויים יותר בהשוואה לתאים בביקורת השלילית. הערה: תגובות חד משמעיות צריכים להיחקר יותר, למשל על ידי בדיקת התגובה לאחר דגירה דקות 5-10 בטמפרטורת חדר, או על ידי חזרה על התגובה עם יותר נסיוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל serotyping pneumococcal עם בדיקות רצופות של בריכות נסיובי בודדות עד תגובה חיובית הוא ציין. לחלופין, ניתן ליישם בברכות &#39;סיבובים&#39; בהתאם לשכיחות המקומית של קפסיד. הערה: בדיקה ב&#39;סיבובים &#39;מבטיחה כי הבריכות המכילות נוגדנים לזנים אל הנפוצים ביותר נבדקות ראשונה, מזעור מאמץ ועלות. בדיקה מקבילה של כמה בריכות מספקת גם בקרות שליליות נוספות, שיכול להיות שימושי בinterpretation. אם כל הבריכות ב&#39;סיבוב &#39;מסוים הן שליליות, לבדוק את הבודד בסיבובים הבאים של בריכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הבודד באמצעות הסוג המתאים או נסיוב קבוצה בתוך הבריכה תגובתי. במידת צורך, להשתמש בנסיובי גורם להבדיל סרוטיפ נוסף. הערה: מפתחות לנסיובי pneumococcal סופקו על ידי היצרן המשמשים בבחירת בריכה המתאימה, סוג, קבוצה או נסיובי גורם והפרשנות של תוצאות (כולל כל תגובות צולבות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם תוצאות שליליות שהושגו עם כל הבריכות, לבדוק את הבודד עם מגיב Omniserum (מכיל נוגדנים נגד 91 קפסיד 21). אם תגובת Quellung חיובית עדיין לא נצפתה כאשר בדיקת ריאות בודד עם מגיב Omniserum, זה יכול להיות בגלל הבודד מביע כמוסה קטנה או לא, או שנוגדנים נגד סרוטיפ אינם מיוצגים בOmniserum. הקטגוריה האחרונה עשויה לכלול קפסיד חדשים. </li> &lt;/ Ol&gt;

<ol>
	<li>O'Brien, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+disease+caused+by+Streptococcus+pneumoniae+in+children+younger+than+5+years:+global+estimates.">Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates.</a> Lancet. 374, 893-902 (2009).</li><li>Bogaert, D., De Groot, R., Hermans, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptococcus+pneumoniae+colonisation:+the+key+to+pneumococcal+disease.">Streptococcus pneumoniae colonisation: the key to pneumococcal disease.</a> Lancet Infect. Dis. 4, 144-154 (2004).</li><li>Henrichsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+newly+recognized+types+of+Streptococcus+pneumoniae.">Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 33, 2759-2762 (1995).</li><li>Calix, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical,+genetic,+and+serological+characterization+of+two+capsule+subtypes+among+Streptococcus+pneumoniae+Serotype+20+strains:+discovery+of+a+new+pneumococcal+serotype.">Biochemical, genetic, and serological characterization of two capsule subtypes among Streptococcus pneumoniae Serotype 20 strains: discovery of a new pneumococcal serotype.</a> J. Biol. Chem. 287, 27885-27894 (2012).</li><li>Hausdorff, W. P., Bryant, J., Paradiso, P. R., Siber, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Which+pneumococcal+serogroups+cause+the+most+invasive+disease:+implications+for+conjugate+vaccine+formulation+and+use,+part+I.">Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use, part I.</a> Clin. Infect. Dis. 30, 100-121 (2000).</li><li>Johnson, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evaluation+of+serotypes+causing+invasive+pneumococcal+disease+among+children+under+five:+the+pneumococcal+global+serotype+project.">Systematic evaluation of serotypes causing invasive pneumococcal disease among children under five: the pneumococcal global serotype project.</a> PLoS Med. 8, (2010).</li><li>Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+in+disease+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 378, 1962-1973 (2011).</li><li>Obaro, S. K., Adegbola, R. A., Banya, W. A., Greenwood, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carriage+of+pneumococci+after+pneumococcal+vaccination.">Carriage of pneumococci after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 348, 271-272 (1996).</li><li>Mulholland, K., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 379, 1388-1389 (2012).</li><li>Austrian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quellung+reaction,+a+neglected+microbiologic+technique.">The quellung reaction, a neglected microbiologic technique.</a> Mt. Sinai. J. Med. 43, 699-709 (1976).</li><li>Konradsen, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+in+Europe.">Validation of serotyping of Streptococcus pneumoniae in Europe.</a> Vaccine. 23, 1368-1373 (2005).</li><li>Lovgren, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+an+international+external+quality+assurance+model+to+support+laboratory+investigation+of+Streptococcus+pneumoniae,+developed+for+the+SIREVA+project+in+Latin+America,+from.">Evolution of an international external quality assurance model to support laboratory investigation of Streptococcus pneumoniae, developed for the SIREVA project in Latin America, from.</a> J. Clin. Microbiol. 45, 3184-3190 (2007).</li><li>Reasonover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+International+Circumpolar+Surveillance+interlaboratory+quality+control+program+for+Streptococcus+pneumoniae.">The International Circumpolar Surveillance interlaboratory quality control program for Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 138-143 (2011).</li><li>Hare, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=#34;Dodgy+6As&amp;#34;:+differentiating+pneumococcal+serotype+6C+from+6A+by+use+of+the+Quellung+reaction.">#34;Dodgy 6As&amp;#34;: differentiating pneumococcal serotype 6C from 6A by use of the Quellung reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 47, 1981-1982 (2009).</li><li>Kong, F., Gilbert, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+cpsA-cpsB+sequence+polymorphisms+and+serotype-/group-specific+PCR+to+predict+51+Streptococcus+pneumoniae+capsular+serotypes.">Using cpsA-cpsB sequence polymorphisms and serotype-/group-specific PCR to predict 51 Streptococcus pneumoniae capsular serotypes.</a> J. Med. Microbiol. 52, 1047-1058 (2003).</li><li>Castillo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+Streptococcus+pneumoniae.">Identification and characterization of Streptococcus pneumoniae.</a> Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. 2nd ed. , 73-86 (2011).</li><li>Kaijalainen, T., Rintamaki, S., Herva, E., Leinonen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+gene-technological+and+conventional+methods+in+the+identification+of+Streptococcus+pneumoniae.">Evaluation of gene-technological and conventional methods in the identification of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Microbiol. Methods. 51, 111-118 (2002).</li><li>Sorensen, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Typing+of+pneumococci+by+using+12+pooled+antisera.">Typing of pneumococci by using 12 pooled antisera.</a> J. Clin. Microbiol. 31, 2097-2100 (1993).</li><li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+to+pneumococcal+factor+antisera.">Key to pneumococcal factor antisera.</a> , (2013).</li><li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+antisera+for+in+vitro+diagnostic+use.">Pneumococcal antisera for in vitro diagnostic use.</a> , (2011).</li><li>Lund, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+Pneumococcus+infections.">Laboratory diagnosis of Pneumococcus infections.</a> Bull. World Health Organ. 23, 5-13 (1960).</li><li>Satzke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+method+for+detecting+upper+respiratory+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae:+Updated+recommendations+from+the+World+Health+Organization+Pneumococcal+Carriage+Working+Group.">Standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae: Updated recommendations from the World Health Organization Pneumococcal Carriage Working Group.</a> Vaccine. 32, 165-179 (2013).</li><li>Vernet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory-based+diagnosis+of+pneumococcal+pneumonia:+state+of+the+art+and+unmet+needs.">Laboratory-based diagnosis of pneumococcal pneumonia: state of the art and unmet needs.</a> Clin. Microbiol. Infect. 17, 1-13 (2011).</li><li>Casewell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experiences+in+the+use+of+commercial+antisera+for+the+capsular+typing+of+klebsiella+species.">Experiences in the use of commercial antisera for the capsular typing of klebsiella species.</a> J. Clin. Pathol. 25, 734-737 (1972).</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

שלב קריטי בטכניקה זו הוא להבטיח תרבות טהורה משמשת להכנת ההשעיה יחד עם הוספת מספר מתאים של תאים חיידקיים למרק. יש לציין כי צמיחת מושבה ומורפולוגיה על צלחות אגר משתנים בין מבודד pneumococcal שונה. כמה לייצר מושבות יבשות ומחוספסות, שיכול להיות קשה לבחור את עם לולאה ולא emulsify גם במרק. מסיבה זו, ייתכן שתהיה צורך בתנופה גדולה יותר של חיידקים בעת הכנת ההשעיה התא. בכל מקרה, זוהי חובתו של תאים בודדים, ולא אגרגטים, ברורים בביקורת השלילית כל כך הגודל היחסי שלהם יכול להיות בהשוואה לתאים עם נסיובי הוסיפו. בנוסף, יותר מדי תאי חיידקים עלולים לגרום לתגובה שלילית כוזבת, שבו עודף של אנטיגן קופסית עשוי לעכב את תגובת Quellung 10. מסיבה זו, חשוב ליצור השעיה חיידקים עם צפיפות תאים מתאימה (איור 1). Susפנסיה יכולה להישמר במשך מספר חודשים על ידי התוספת של כמה טיפות של פורמלין המרוכז. זה מאפשר בדיקות אצווה קלים יותר וגם מעקר את מרק הפחתת הסיכון לזיהומים נרכש במעבדה, אם כי זה חייב להישקל מול סיכוני הבטיחות של פורמלין טיפול, שהוא רעיל ומאכל, מסרטנים, רגישות, ודליק. בנוסף, יש לנו ציינו כי חלק מבודד להראות תגובות חלשות יותר בנוכחות של פורמלין (מידע לא מוצג). תגובות Quellung נבחנות באמצעות מיקרוסקופ. השימוש בניגוד שלב משפר את הנראות של הקפסולה. בחלק מהמעבדות, התגובה היא שנצפו באמצעות נפט טבילה ב1,000 הגדלה X 14, 16. בנוסף, חלק ממעבדות משתמשות כתם דלפק (מתילן כחול) כדי לשפר את הנראות של תגובה חיובית 10, 16, 22 נוסף. השיטה המוצגת כאן מוצגת ללא שמן-immersion ותחת הגדלה 400X 15, 17. שיטה זו היא מהירה, פשוט וקלה יחסית לקרוא 23. זה חשוב לשמור על נהלי בקרת איכות פנימית טובים כדי להבטיח את נהלי נסיובי ובדיקות הם בסדר. השתתפות בתכנית אבטחת איכות חיצונית היא לעתים קרובות מועילה. מגבלה העיקרית של תגובת Quellung לserotyping של pneumococci היא העלות הגבוהה של נסיובי הנדרש. עם זאת, זה ממוזער בפרוטוקול לעיל בשל הכמות הקטנה של נסיוב המשמשת לכל תגובה. בכמה שיטות אחרות כבר תיארו לserotyping pneumococci 23, 24. עם זאת, Quellung נשאר תקן הזהב ופיתוח השיטות חדשות דורש סטנדרטיזציה נגד תגובת Quellung 23. שימוש נסיובי המתאים, תגובת Quellung יכולה גם להיות מנוצל כדי לזהות ולהקליד כובעים אחריםULE ייצור חיידקים 25. תגובת Quellung היא סייע באפיון של זנים אל ריאות הנוכחיות ועתידית, כמו גם מתן מידע על יעילות חיסון ואת ההשפעה ארוך הטווח של חיסון בכרכרה ומחלות.

pneumoniae Streptococcus (pneumococcus) הוא אחראי למותם של 800,000 ילדים מוערכים מתחת לגיל חמש בשנה, עם הנטל של מחלה נופל בעיקר במדינות משאבים לעניים 1. מחלות דלקת ריאות טווח חומרה מזיהומים מקומיים כגון תקשורת אזנים חריפה לזיהומים מסכנים חיים קשים כגון אלח דם, דלקת קרום המוח ודלקת ריאות 2. מעל 90 קפסיד קופסית של pneumococci תוארו 3, 4. חיסוני pneumococcal הנוכחיים מספקים הגנה מפני הזנים אל כי הם אחראים למרבית מחלות 5 פולשנית, 6. עם זאת, שימוש נרחב בחיסונים נקשר עם החלפת קפסיד הכלולים בחיסון מזני nonvaccine, הן בכרכרה האף והלוע ומחלה פולשנית 7, 8. זה מדגיש את החשיבות של serotyping לאפידמיולוגייםמעקב והשפעת חיסון לטווח ארוך לומדים 9. שיטת תקן זהב עבור הקלדת pneumococcal היא מבחן התגובה קופסית, המכונה תגובת Quellung, שתואר לראשונה על ידי נויפלד ב1902 (ראה 10 אוסטריים). רמה גבוהה של התאמה נמצאה בין מעבדות, ובין תגובת Quellung ושיטות serotyping האחרות 11-13. יש כמה וריאציות של תגובת Quellung 10, 14-16. השיטה המתוארת כאן אינה דורשת שימוש בכתם דלפק או עדשת טבילת שמן, אלא ירידה של דגימה מוכנה היא מעורבת עם סרום ההקלדה ובדקה באופן מיידי בהגדלה 400X. תגובת Quellung מבוצעת בדרך כלל באמצעות נסיובי זמין מסחרי. השיטה המתוארת כאן משתמשת בפחות נסיובי לעומת שיטות אחרות 16, 17, מה שהופך את זה יותר חסכוני. ברגע שIsolאכלתי מזוהה pneumococcus, הוא נבדק ברצף עם בריכות נסיובי עד תגובה חיובית הוא ציין. כל נסיוב בריכה מכיל תערובות שונות של נסיובי הועלו נגד 91 קפסיד pneumococcal 18. ברגע שהברכה הוקמה, סוג הפרט ונסיובי קבוצה שנכללים בבריכת התגובה נבדקים בנפרד ברצף. נסיובי סוג בדרך כלל מגיב עם סרוטיפ אחת (לדוגמא סוג נסיוב 1 מגיב עם סרוטיפ 1), ואילו נסיובי הקבוצה להגיב בכל קפסיד בקבוצה מסוימת (לדוגמא: קבוצת 22 נסיוב מגיב עם קפסיד 22F ו22A). הזנים אל חלק בתוך קבוצות נבדלים נוסף באמצעות נסיובי גורם (למשל סרוטיפ 22F מגיב עם 22b גורם, אבל לא 22c). במקרה זה בדיקה היא המשיכה עם כל נסיובי הגורם הרלוונטי עד סרוטיפ נקבע 19, 20. תגובת Quellung היא פשוטה ומהירה 14 וניתן לבצעו בכל ליטרaboratory כי הוא מצויד במיקרוסקופ באיכות טוב וסט מתאים של נסיובי.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1305">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pneumococcus (Neufeld) antisera</td>
			<td>SSI Diagnostica</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a> 
			Bring all antisera to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pneumococcus (Omni) antiserum</td>
			<td>SSI Diagnostica</td>
			<td>2438</td>
			<td>Bring all antisera to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Optical Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica DML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Calibrated Disposable Inoculating Loops 1 &#181;l</td>
			<td>Copan</td>
			<td>CD175S01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Horse Blood Agar (HBA) plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PP2001</td>
			<td><a href="http://www.thermofisher.com.au/">http://www.thermofisher.com.au/</a> 
			Bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heart Infusion (HI) broth</td>
			<td>Media Preparation Unit (MPU), The University of Melbourne</td>
			<td>40HIN</td>
			<td>Bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass microscope slides 76 mm x 26 mm</td>
			<td>Lomb Scientific</td>
			<td>7101</td>
			<td>Sharps hazard: Dispose in a biohazard sharps container</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Circular glass coverslips</td>
			<td>NeuVitro&#160;</td>
			<td>GG-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;">*Excluding the antisera, all other materials can be purchased from alternative suppliers</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;">*Plates prepared from defibranated sheep blood are suitable but blood plates prepared from citrated blood or human blood are not</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

capsular serotyping of streptococcus pneumoniae using the quellung reaction

ישנם מעל 90 קפסיד שונים קופסית של Streptococcus pneumoniae (pneumococcus). כמו גם להיות כלי להבנת האפידמיולוגיה pneumococcal, serotyping קופסית יכול לספק מידע שימושי למחקרי יעילות חיסון והשפעה. תגובת Quellung היא שיטת תקן זהב עבור serotyping קופסית ריאות. השיטה כרוכה בבדיקת השעיה תא pneumococcal עם נסיובי נקווה וספציפי המכוונים נגד פוליסכריד קופסית. תגובות נוגדן אנטיגן הם נצפו במיקרוסקופ. יש הפרוטוקול שלושה שלבים עיקריים: 1) הכנה של השעיה תא חיידק, 2) ערבוב של תאים ונסיובי בשקופית זכוכית, ו 3) קריאת תגובת Quellung באמצעות מיקרוסקופ. תגובת Quellung היא פשוטה למדי לביצוע ויכולה להיות מיושמת בכל מקום במיקרוסקופ ונסיובי מתאים זמינים.

<html> תגובת Quellung חיובית מתרחשת כאשר נוגדן ספציפי לסוג נקשר לכמוסה של pneumococcus, מה שמוביל לשינוי במקדם השבירה שלה 10. כאשר מתחת למיקרוסקופ, החיידקים מופיעים &#39;נפוחים&#39; וגלוי יותר 14. איור 1A מראה תאי דלקת ריאות במרק HI. כאשר אנטי סרום ספציפי לסוג נוסף להשעית החיידקים, pneumococci מופיע &#39;נפוח&#39;, שבירה ומעוגלת יותר (איור 1). תאי חיידקיים רבים מדי הוסיפו למרק עלולים לגרום להצטברות של תאים או תגובה שלילית כוזבת. איור 2 מראה inocula של תאי דלקת ריאות במרק HI כי הם &#39;כבדים מדי&#39; (איור 2 א) או &#39;קל מדי&#39; (איור 2). &quot;Src =&quot; 08fig1highres.jpg / files/ftp_upload/51208/51208fig1.jpg &quot;/&gt; איור 1. תגובת Quellung שלילית וחיובית. תכשירים pneumococcal 9V סרוטיפ לבודד ללא נסיוב (1A) ועם קבוצת 9 נסיוב (1B), נתפסו בהגדלה 400X. זה האחרון מציג את &quot;נפיחות&quot; ועיגול של תאים חיידקיים לראות בדרך כלל בתגובת Quellung חיובית. <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2.jpg" /> איור 2. כבד מדי וקל מדי inocula. הכנות של מתלי pneumococcal סלולריים, כי הם כבדים מדי (2A) או בהיר מדי (2B), כאשר הוא מוצג תחת הגדלה 400X.

Watch this Scientific Journal Video about Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction at JoVE.com

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

תגובת Quellung היא טכניקת תקן זהב עבור serotyping Streptococcus pneumoniae. טכניקה זו מנצלת מיקרוסקופ ונסיובי pneumococcal הספציפי ומשמשת בדרך כלל התייחסות ומעבדות מחקר ברחבי העולם.

קופסית Serotyping של<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; שימוש תגובת Quellung

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

capsular-serotyping-streptococcus-pneumoniae-using-quellung

Google

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

45.2K Views.  Murdoch Childrens Research Institute.  תגובת Quellung היא טכניקת תקן זהב עבור serotyping Streptococcus pneumoniae. טכניקה זו מנצלת מיקרוסקופ ונסיובי pneumococcal הספציפי ומשמשת בדרך כלל התייחסות ומעבדות מחקר ברחבי העולם. 

Video: Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of infection with influenza virus alone. Instead, most individuals are thought to have succumbed to a secondary bacterial infection, predominately caused by the bacterium Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). The synergistic relationship between infections caused by influenza virus and the pneumococcus has subsequently been observed during the 1957 Asian influenza virus pandemic, as well as during seasonal outbreaks of the virus (reviewed in 1, 2). Here, we describe a protocol used to investigate the mechanism(s) that may be involved in increased morbidity as a result of concurrent influenza A virus and S. pneumoniae infection. We have developed an infant murine model to reliably and reproducibly demonstrate the effects of influenza virus infection of mice colonised with S. pneumoniae. Using this protocol, we have provided the first insight into the kinetics of pneumococcal transmission between co-housed, neonatal mice using in vivo imaging 3.

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

A concurrent infection with influenza A virus is one of the factors implicated in the induction of invasive pneumococcal disease during asymptomatic Streptococcus pneumoniae carriage. Here we describe a mixed infection method using infant mice to investigate the synergism between these two respiratory pathogens.

באמצעות הדמיה Bioluminescent לחקור סינרגיזם בין Streptococcus pneumoniae ו שפעת וירוס עכברים תינוקות

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not representative of the behavior, status or phenotype of single cells. Due to this new insight the number of single cell studies rises continuously (for recent reviews see 1,2,3). However, many of the single cell techniques applied do not allow monitoring the development and behavior of one specific single cell in time (e.g. flow cytometry or standard microscopy).
Here, we provide a detailed description of a microscopy method used in several recent studies 4, 5, 6, 7, which allows following and recording (fluorescence of) individual bacterial cells of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae through growth and division for many generations. The resulting movies can be used to construct phylogenetic lineage trees by tracing back the history of a single cell within a population that originated from one common ancestor. This time-lapse fluorescence microscopy method cannot only be used to investigate growth, division and differentiation of individual cells, but also to analyze the effect of cell history and ancestry on specific cellular behavior. Furthermore, time-lapse microscopy is ideally suited to examine gene expression dynamics and protein localization during the bacterial cell cycle. The method explains how to prepare the bacterial cells and construct the microscope slide to enable the outgrowth of single cells into a microcolony. In short, single cells are spotted on a semi-solid surface consisting of growth medium supplemented with agarose on which they grow and divide under a fluorescence microscope within a temperature controlled environmental chamber. Images are captured at specific intervals and are later analyzed using the open source software ImageJ.

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

This protocol provides a step-by-step procedure to monitor single cell behavior of different bacteria in time using automated fluorescence time-lapse microscopy. Furthermore, we provide guidelines how to analyze the microscopy images.

תא הדמיה חיה של Bacillus subtilis ו Streptococcus pneumoniae באמצעות מיקרוסקופית אוטומטי זמן לשגות

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing the mucosal surface of the nasopharynx, where it can reside, multiply and eventually overcome host defences to invade to other tissues of the host. Establishment of an infection in the normally lower respiratory tract results in pneumonia. Alternatively, the bacteria can disseminate into the bloodstream causing bacteraemia, which is associated with high mortality rates2, or else lead directly to the development of pneumococcal meningitis. Understanding the kinetics of, and immune responses to, nasopharyngeal colonization is an important aspect of S. pneumoniae infection models.
Our mouse model of intranasal colonization is adapted from human models3 and has been used by multiple research groups in the study of host-pathogen responses in the nasopharynx4-7. In the first part of the model, we use a clinical isolate of S. pneumoniae to establish a self-limiting bacterial colonization that is similar to carriage events in human adults. The procedure detailed herein involves preparation of a bacterial inoculum, followed by the establishment of a colonization event through delivery of the inoculum via an intranasal route of administration. Resident macrophages are the predominant cell type in the nasopharynx during the steady state. Typically, there are few lymphocytes present in uninfected mice8, however mucosal colonization will lead to low- to high-grade inflammation (depending on the virulence of the bacterial species and strain) that will result in an immune response and the subsequent recruitment of host immune cells. These cells can be isolated by a lavage of the tracheal contents through the nares, and correlated to the density of colonization bacteria to better understand the kinetics of the infection.

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Colonization of the murine nasopharynx with Streptococcus pneumoniae and the subsequent extraction of adherent or recruited cells is described. This technique involves flushing the nasopharynx and collection of the fluid through the nares and is adaptable for various readouts, including differential cell quantification and analysis of mRNA expression in situ.

אפיון של תגובות דלקתיות במהלך קולוניזציה תוך-אפית עם דלקת ריאות סטרפטוקוקוס

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact cellular functions, including energetics and signal transductions. While both fluorescent and electrophysiological methods, including electrode usage and patch-clamping, have been well developed for measuring these events in eukaryotic cells, methodology for measuring similar events in microorganisms have proven more challenging to develop given their small size in combination with the more complex outer surface of bacteria shielding the membrane. During our studies of death-initiation in Streptococcus pneumoniae (pneumococcus), we wanted to elucidate the role of membrane events, including changes in polarity, integrity, and intracellular ion concentrations. Searching the literature, we found that very few studies exist. Other investigators had monitored radioisotope uptake or equilibrium to measure ion fluxes and membrane potential and a limited number of studies, mostly in Gram-negative organisms, had seen some success using carbocyanine or oxonol fluorescent dyes to measure membrane potential, or loading bacteria with cell-permeant acetoxymethyl (AM) ester versions of ion-sensitive fluorescent indicator dyes. We therefore established and optimized protocols for measuring membrane potential, rupture, and ion-transport in the Gram-positive organism S. pneumoniae. We developed protocols using the bis-oxonol dye DiBAC4(3) and the cell-impermeant dye propidium iodide to measure membrane depolarization and rupture, respectively, as well as methods to optimally load the pneumococci with the AM esters of the ratiometric dyes Fura-2, PBFI, and BCECF to detect changes in intracellular concentrations of Ca2+, K+, and H+, respectively, using a fluorescence-detection plate reader. These protocols are the first of their kind for the pneumococcus and the majority of these dyes have not been used in any other bacterial species. Though our protocols have been optimized for S. pneumoniae, we believe these approaches should form an excellent starting-point for similar studies in other bacterial species.

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Unlike that seen for eukaryotes, there is a paucity of studies that detail membrane depolarization and ion concentration changes in bacteria, primarily as their small size makes conventional methods of measurement difficult. Here, we detail protocols for monitoring such events in the significant Gram-positive pathogen Streptococcus pneumoniae utilizing fluorescence techniques.

ניטור שינויים בממברנה קוטביות, ממברנה יושרה, וריכוזי יון תאיים ב<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; שימוש צבעי ניאון

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major cause of morbidity and mortality world-wide. Current vaccines target the pneumococcal capsule, and there are over 90 capsular serotypes. Serotyping pneumococcal isolates is therefore important for assessing the impact of vaccination programs and for epidemiological purposes. The World Health Organization has recommended latex agglutination as an alternative method to the &#8216;gold standard&#8217; Quellung test for serotyping pneumococci. Latex agglutination is a relatively simple, quick and inexpensive method; and is therefore suitable for resource-poor settings as well as laboratories with high-volume workloads. Latex agglutination reagents can be prepared in-house utilizing commercially-sourced antibodies that are passively attached to latex particles. This manuscript describes a method of production and quality control of latex agglutination reagents, and details a sequential testing approach which is time- and cost-effective. 
This method of production and quality control may also be suitable for other testing purposes.

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination testing is a simple, rapid and inexpensive method for serotyping Streptococcus pneumoniae, and has also been widely applied in diagnostic microbiology. This manuscript describes the in-house production of latex agglutination reagents, quality control procedures and the application of this technique to pneumococcal serotyping.

קופסית Serotyping של<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; על ידי לאטקס התלכדות

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of causing systemic disease in both fish and humans. A better understanding of S. iniae disease pathogenesis requires an appropriate model system. The genetic tractability and the optical transparency of the early developmental stages of zebrafish allow for the generation and non-invasive imaging of transgenic lines with fluorescently tagged immune cells. The adaptive immune system is not fully functional until several weeks post fertilization, but zebrafish larvae have a conserved vertebrate innate immune system with both neutrophils and macrophages. Thus, the generation of a larval infection model allows the study of the specific contribution of innate immunity in controlling S. iniae infection.
The site of microinjection will determine whether an infection is systemic or initially localized. Here, we present our protocols for otic vesicle injection of zebrafish aged 2-3 days post fertilization as well as our techniques for fluorescent confocal imaging of infection. A localized infection site allows observation of initial microbe invasion, recruitment of host cells and dissemination of infection. Our findings using the zebrafish larval model of S. iniae infection indicate that zebrafish can be used to examine the differing contributions of host neutrophils and macrophages in localized bacterial infections. In addition, we describe how photolabeling of immune cells can be used to track individual host cell fate during the course of infection.

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Here, we present a protocol for the generation and imaging of a localized bacterial infection in the zebrafish otic vesicle.

הדמיה לא פולשנית של התגובה החיסונית המולדת בדגם דג הזברה הזחל של<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; זיהום

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

מודל Murine של הקבוצה B<em&gt; סטרפטוקוקוס</em&gt; נרתיקי Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, preferably in models which mimic the intended clinical indication. A method for inducing robust lung infections in immunocompetent rats and mice is described which allows for the assessment of treatments in a model of serious pneumonia caused by S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae or A. baumannii. Animals are anesthetized, and an agar-based inoculum is deposited deep into the lung via nonsurgical intratracheal intubation. The resulting infection is consistent, reproducible, and stable for at least 48 h and up to 96 h for most isolates. Studies with marketed antibacterials have demonstrated good correlation between in vivo efficacy and in vitro susceptibility, and concordance between pharmacokinetic/pharmacodynamic targets determined in this model and clinically accepted targets has been observed. Although there is an initial time investment when learning the technique, it can be performed quickly and efficiently once proficiency is achieved. Benefits of the model include elimination of the neutropenic requirement, increased robustness and reproducibility, ability to study more pathogens and isolates, improved flexibility in study design and establishment of a challenging infection in an immunocompetent host.

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. אינפלואנזה</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; או<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major manifestation of S. suis infections. A suitable infection model is an essential tool to understand the mechanisms of diseases caused by pathogens. Several routes of infection in mice have been developed to study the pathogenesis of S. suis infection. However, the intraperitoneal, intranasal, and intravenous routes of infection are not suitable for studying the roles of S. suis surface components in meningitis directly in the brain, such as the extracellular matrix from biofilms. Although intracisternal inoculation has been used for S. suis infection, the precise injection site has not been described. Here, the intracranial subarachnoidal route of infection was described in a mouse model to investigate the roles of biofilms in S. suis meningitis. S. suis planktonic cells or biofilm state cells were directly injected into the subarachnoid space of mice through the injection site located 3.5 mm rostral from the bregma. Histopathological analysis and increased mRNA expression of TLR2 and cytokines of the brain tissue from mice injected with biofilm state cells clearly indicated that S. suis biofilm plays definitive roles in S. suis meningitis. This route of infection has obvious advantages over other routes of infection, allowing the study of the host-bacterium interaction. Furthermore, it permits the effect of bacterial components on host immune responses directly in the brain to be assessed, and mimics bacterial entrance into the central nervous system. This route of infection can be extended for investigating the mechanisms of meningitis caused by other bacteria. In addition, it can also be used to test the efficacy of drugs against bacterial meningitis.

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Here, we describe the intracranial subarachnoidal route of infection in mice to study roles of biofilms in Streptococcus suis meningitis. This infection model is also suitable for studying the pathogenesis of other bacterial meningitis and the efficacy of new drugs against bacterial meningitis.

Subarachnoidal תוך-גולגולתי, תוואי זיהום עבור חוקרים התפקידים של סטרפטוקוקוס suis Biofilms ב דלקת קרום המוח במודל זיהום של עכברים

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Measuring Dengue Virus RNA in the Culture Supernatant of Infected Cells by Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction

At present, real-time polymerase chain reaction (PCR) technology is an indispensable tool for the detection and quantification of viral genomes in research laboratories, as well as for molecular diagnosis, because of its sensitivity, specificity, and convenience. However, in most cases, the quantitative PCR (qPCR) assay generally used to detect virus infection has relied on the purification of viral nucleic acid prior to the PCR step. In this study, the fluorescence-based reverse transcription qPCR (RT-qPCR) assay is developed through the combination of a processing buffer and a one-step RT-PCR reagent so that the whole process, from the harvest of the culture supernatant of virus-infected cells until real-time detection, can be performed without viral RNA purification. The established protocol enables the quantification of a wide range of RNA concentrations of dengue virus (DENV) within 90 min. In addition, the adaptability of the direct RT-qPCR assay to the evaluation of an antiviral agent is demonstrated by an in vitro experiment using a previously reported DENV inhibitor, mycophenolic acid (MPA). Moreover, other RNA viruses, including yellow fever virus (YFV), Chikungunya virus (CHIKV), and measles virus (MeV), can be quantified by direct RT-qPCR with the same protocol. Therefore, the direct RT-qPCR assay described in this report is useful for monitoring RNA virus replication in a simple and rapid manner, which will be further developed into a promising platform for a high-throughput screening study and clinical diagnosis.

Real-time quantitative polymerase chain reaction analysis combined with reverse transcription (RT-qPCR) has been widely used to measure the level of RNA virus infections. Here we present a direct RT-qPCR assay, which does not require an RNA purification step, developed for the quantification of several RNA viruses, including dengue virus.