עבודה זו נתמכה על ידי מענקים הפועלים לKJ ממדעי הטבע והנדסת מועצת מחקר של קנדה (NSERC) וקרוהן וקוליטיס הקרן של קנדה (CCFC). VM נתמך על ידי מלגת CFRI וGB מלגת לימודים לתואר שני מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). BAV הוא ילדים עם מעיים והפרעות בכבד יו&quot;ר הקרן (ילד) למחקר בילדים מחל מעי דלקתי וקנדה מחקר הקתדרה בילדים לגסטרואנטרולוגיה וKJ הוא המטפל מדען בכיר נתמך על ידי ילד והילד ומשפחה מכון מחקר תכנית (CFRI) המטפל מדענים בפרס , אוניברסיטה של ​​קולומביה הבריטית.

הליכים כרוכים בנושאי בעלי חיים לעקוב אחר הנחיות טיפול בבעלי החיים שהותוו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש (IACUC) באוניברסיטה של ​​קולומביה הבריטית. נהלים שהוזכרו בפרוטוקול זה יהיה מתואר עבור שני חולדות ועכברים, ואילו נציג התוצאות יוצגו מחולדות ספראג-Dawley. 1. הכנת DNBS וIntrarectal המינהל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחדרה רקטלית של DNBS בחולדות, טרי להכין 15-30 מ&quot;ג של DNBS/250 μl 50% אתנול. לעכברים, להכין 2-6 מ&quot;ג של DNBS/100 μl 50% אתנול. הערה: לייעל את ריכוז DNBS המדויק כדי להינתן בכל מתקן. חולדות זכרים ספראג-Dawley, ועכברי C57BL / 6 הם העדיפו לאינדוקציה של קוליטיס DNBS, ניתן להשתמש בזני עכבר וחולדה אחרים לעומת זאת. עכברים וחולדות שטופלו רק עם 50% אתנול יכולים לשמש כקבוצות ביקורת אך בהתחשב בהשפעות של אתנול הם קלים או נעדרים, אפשר אומיt ההכללה של קבוצה זו למחקר 12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף מזרק 1 מיליליטר למחט 19 G שיש לו קטטר פוליאתילן (PE-90 - חולדות או PE-50 - עכברים) מהודק עד סופו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קל להרדים את העכברוש או מנוחת עכבר על כרית חימום (למשל על ידי מתן isoflurane 1.5% באמצעות חרטומו, עדיין צריכה להיות חיות הרף ורפלקסים בליעה ולהציג את נשימה רגילה). החל ג&#39;ל המדמיע לעיניה, כדי למנוע את עיני התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להפעיל לחץ עם קצות אצבעות לקצה האחורי של החיה כדי להסיר כל צואה שעלולה להיות נוכח במעי גס דיסטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בעדינות את הקטטר intrarectally, עם קטטר והגיע לכ 8 הפרוקסימלי סנטימטר אל פי הטבעת לחולדות, או 3-4 סנטימטר לעכברים. להזריק כמות קטנה של הפתרון בזמן החדרת הצנתר לשמן, המאפשר החדרה קלה יותר. הערה: אם כל התנגדות מורגשת בזמן החדרת הצנתר, אל תמשיך להכניס מכיוון שהדבר עלול להוביל לניקוב שלבדופן המעי. הסר את הקטטר ותנסה להכניס מחדש בעדינות, שוב שימון המעי הגס שכימשיך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להזריק 250 (חולדות) או 100 μl (עכברים) של DNBS, או נפח שווה או 50% אתנול לפקדים. לאחר הזרקת DNBS, מקם את בעלי החיים את הראש למטה ל90 שניות כדי למנוע אובדן של DNBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מתן DNBS, להאכיל את החיות 8% מים סוכרוז בתמיסת מלח 0.2% על מנת למנוע התייבשות בשבוע הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתבונן היטב את בעלי החיים, עם מעקב יומי לירידה במשקל וסימנים של התייבשות או מצוקה לתקופת הניסוי. הערה: ירידה במשקל עשויה מתקרבת במהירות את המלצות CCAC של ירידה במשקל המרבית המותרת. מאז זה בעיקר נובע מהתייבשות, יש להשתמש בירידה במשקל כמדד לניהול הפתרון של רינגר לקטט להגביל התייבשות. אנא הקפד להתייעץ עם וטרינר המתקן בנושאי בריאות כמתאים. </li></ol> 2. שיתוףllecting רקמות והערכת נזק היסטולוגית בDNBS עכברים פיגור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנקודת הזמן הרצויה לאחר אתגר עם DNBS, להרדים בעלי חיים על ידי מינון יתר עם isoflurane בתא הרדמה בתוספת מספיק חמצן. שים לב לבעלי החיים עד שלא עולה או יורדים מהחזה נתפס ואין דופק מוחשי. לאשר את החיה כבר מורדמים כראוי על ידי העדר תגובה לקמצוץ הבוהן או נוגעים ללב של הקרנית, ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את חלל הבטן ולהוציא את המעי גס כולו. פתח את מעי אורכים; צריכים להיות שנצפו כיבים ברירית מקרוסקופית כ 5-6 הפרוקסימלי סנטימטר מהקצה הדיסטלי של המעי הגס בחולדות (2-3 סנטימטר בעכברים). הערה: לאחר הסרת המעי גס, להעריך את ציוני נזק מקרוסקופית אם תרצה בכך. לאסוף קטעים של מעי גס ממקבילים מיקום האנטומי מבעלי השליטה. הערה: האנשים הבקיע הרקמות לציוני נזק מקרוסקופית צריכיםלהיות עיוור לזהותו של קבוצות הטיפול. ציון סעיפי רקמות באמצעות הקריטריונים הבאים או דומים: חומרה והיקף של כיב (0-10), סיכמו עם ציונים על היעדרות או נוכחות של שלשול (0 או 1), הידבקויות (0, 1 או 2) ועובי דופן מעי הגס מקסימאלי במילימטרים 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף 0.5 סעיפי סנטימטר הפרוקסימלי לאתר של נזק מקרוסקופית מקסימאלי. הצמד להקפיא סעיף 0.5 סנטימטר אחד בחנקן נוזלי בהמשך כדי להעריך myeloperoxidase פעילות (MPO) (מדד של חדירת נויטרופילים), ולמקם את הסעיף האחר ב10% ניטראלי שנאגרו פורמלין לניתוח היסטולוגית. הערה: הצמד רקמות קפואות עבור assay myeloperoxidase ניתן לאחסן ב-80 מעלות צלזיוס למשך עד חודש 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לרקמות שנאספו לניתוח היסטולוגית בשלב 2.3 לתקן בפורמלין לילה, ולאחר מכן לשטוף עם 70% אתנול. להטביע רקמות בפרפין ולחתוך לעובי רצוי (3-5 מיקרומטר), כתם עם hemotoxylin ו eosin (HE) לניקוד היסטולוגית. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש שני משקיפים להבקיע לפחות שלושה חלקי רקמות מכל חיה תחת מיקרוסקופ אור כדי לקבוע את ציוני נזק היסטולוגית לכל קבוצה. הערה: האנשים הבקיע הרקמות לציוני נזק היסטולוגית צריכים להיות עיוורים לזהותו של קבוצות הטיפול. ציון סעיפי רקמות באמצעות הקריטריונים הבאים או דומים: היקף לחדור תא דלקתי (0 = נעדר, 3 = transmural), אובדן של אדריכלות רירית (0 = נעדר, 3 = חמורה), נוכחות או עדר של מורסות קריפטה (0-1) , ודלדול גביע תא (0-3). לקבוע ציון נזק היסטולוגית כסכום של ציונים אלה 11. </li></ol> 3. רקמת מעי פיגור הבמה Myeloperoxidase (MPO) Assay על DNBS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פעילות MPO assay ב0.5 פלחים הגס סנטימטר שהושגו בשלב 2.3. Homogenize רקמות במאגר המגון MPO (0.5% ברומיד hexadecyltrimethyl-אמוניום בחיץ פוספט אשלגן 50 מ&quot;מ (pH 6.0)) לתת segme מעי גס 50 מ&quot;גNT / מיליליטר של השעיה חיץ הומוגניזציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot הפתרון הומוגני לתוך 1 מיליליטר מנות ו צנטריפוגות ב 4 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות ב 10,000 X גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את כל aliquot 100 μl עם 2.9 מיליליטר של 50 מ&quot;מ חיץ פוספט (pH 6.0) המכיל 0.167 מ&quot;ג / מיליליטר של o-dianisidinedihydrochloride ו0.0005% מי חמצן בקובט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את קצב ספיגת באמצעות ספקטרופוטומטר ב460 ננומטר. הערה: פעילות MPO מוגדרת ככמות האנזים משפילה 1 μmol / דקות של H 2 O 2 לH 2 O בטמפרטורת חדר, והוא בא לידי ביטוי ביחידות למ&quot;ג של רקמה. </li></ol>

<ol>
	<li>Per&#353;e, M., Cerar, A., Biotechnol, J. .. . B. i. o. m. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. , (2012).</li><li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression.">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li><li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis.">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li><li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+CD4++lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis.">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. Med. 5 (10), 1178-1182 (1999).</li><li>Boyer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myenteric+plexus+injury+and+apoptosis+in+experimental+colitis.">Myenteric plexus injury and apoptosis in experimental colitis.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 117 (1), 41-53 (2005).</li><li>Saunders, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenergic+and+cholinergic+neural+pathways+mediate+stress-induced+reactivation+of+colitis+in+the+rat.">Noradrenergic and cholinergic neural pathways mediate stress-induced reactivation of colitis in the rat.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat.">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis.">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li><li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease.">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li><li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain.">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li><li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mundra+H.,Innis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet.">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li><li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis.">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li><li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis.">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li><li>Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-3+fatty+acid-rich+diet+prevents+early+response+of+interleukin-6+elevation+in+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+enteritis.">N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis.</a> Int. J. Mol. Med. 12, 721-725 (2003).</li><li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10,+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+(DSS)+colitis.">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li><li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice.">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li><li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats.">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

מודל DNBS המתואר בפרוטוקול זה הוא מודל קוליטיס יקר, זול, ושחזור שיכול להיות מנוצל ללימוד היבטים שונים של מחלת מעי דלקתי. כאשר מנוהל intrarectally לחולדות או עכברים, DNBS גורם מידה ניכרת של דלקת ופגיעה ברקמות במעי הגס, שמזכיר מחלת קרוהן האנושית במונחים של התכונות היסטולוגית השונ...

מחלות מעי דלקתיות (IBD) מאופיינת בדלקת כרונית התקפי בדרכי העיכול (GI), וכתוצאה מכך תסמינים של שלשולים, ירידה במשקל, וכאבי בטן. קוליטיס כיבית (UC) ומחלת קרוהן (CD) הם שתי הצורות העיקריות של מחלת מעי דלקתי, ויכול להיות מכובד על ידי המיקום של הדלקת בתוך מערכת העיכול. בחולי UC, הדלקת כרוכה בדרך כלל פי הטבעת והוא משתרע בסמיכות את המעי הגס הלמשפיעה על הרירית השטחית רק מידה משתנה. לעומת זאת, CD יכול להשפיע על כל חלק של מערכת העיכול, למרות שזה בעיקר משפיע על המעי וcecum. תקליטור לעתים קרובות בא לידי ביטוי כדלקת transmural קשור לעתים קרובות עם גרנולומות ומובילה לstricturing (fibrostenotic) ו / או חדירת מחלה (fistulizing). למרות אטיולוגיה של IBD נותרת חמקמקה, מקובל גם כי IBD תלוי בכמה גורמים, הכולל אינטראקציות בין המארחים מערכת חיסונית, רגישות גנטית וresponses לגורמים סביבתיים וחיידקים. עד כה, מודלים שונים של IBD הוצעו שמציגים תגובות קליניות, היסטולוגית וחיסוניות שונות אופייניות לUC ו-CD. הדגמים הנפוצים ביותר כוללים עכברים מהונדסים גנטי (IL-2, IL-10 SAMP / yit,) מודלים מושרה, זיהום (rodentium Citrobacter, typhimurium סלמונלה), מודלים העברת מאמצת (CD45 + RB גבוה, העברה לתא CD62L + לעכברים SCID) ו מודלים קוליטיס כימי שגרמו (Dextran נתרן סולפט (DSS), חומצת sulfonic Trinitrobenzene (TNBS), וחומצת sulfonic Dinitrobenzene (DNBS)). בשל העלות הנמוכה שלהם והתפרצות מהירה של מחלה, מודלים כימיים נחשבים לא יסולא בפז לחקר היבטים השונים של מחלת מעי דלקתי. לכל אחד מדגמי קוליטיס הכימיים המפורטים יתרונות כמו גם מגבלות בהיבטים מסוימים של הרלוונטיות הקלינית, חיסונית וhistopathological למחלת המעי דלקתית. DSS הוא אחת מהשיטות כימיות הנפוצות ביותר המועסקות כדי לגרום coliTIS במכרסמים 1. מנהל של 3-10 DSS% (MW: 42 KDA) ל7-10 ימים במי השתייה של עכברים יכול לגרום לסימפטומים וסימנים של דלקת המעי הגס, כולל ירידה במשקל, שלשולים עם דם, קיצור מעי הגס, כיבים ברירית וחדירת נויטרופילים. מודל זה שימושי במיוחד עבור מחקרי הקרנת סמים, כמו גם לבחון את מנגנוני התחדשות אפיתל, את ההשפעה של חסינות מולדת על הומאוסטזיס הרירי, ואת התפקיד של דלקת בקידום דיספלזיה במעי והתפתחות אדנוקרצינומה. יש עם זאת כמה חסרונות למודל DSS, כולל וריאציה בריכוז של DSS הדרוש כדי לגרום לקוליטיס במתקנים שונים של בעלי חיים, כמו גם ספיגת מים עולים בקנה אחד על ידי עכברים וחשיפה ובכך עולה בקנה אחד לDSS, וכתוצאה מכך הווריאציה בתואר, במידה ו הפצה של פגיעה ברירית וכיבים במעי הגס. כל התכונות הללו יובילו לההטרוגניות של תוצאות ולהגביל את היכולת להשוות את התוצאות על פני fr לימודיםקבוצות מחקר שונות אום. אלטרנטיבה למודל DSS היא DNBS-Induced hapten או המודלים TNBS של קוליטיס. מודל זה מעסיק החדרה רקטלית של רירית רגישות DNBS סוכנים או TNBS, בדילול מלא בריכוזים שונים של אתנול. הממשל של אתנול הוא תנאי הכרחי כדי לשבור את מחסום רירית המעי כדי לאפשר חדירה של DNBS או TNBS לpropria lamina. אז DNBS / TNBS יהיה haptenize חלבונים במעי הגס וחיידקי מעיים המקומיים להפוך immunogenic, ובכך מפעילה את המארח מולדים ואת התגובה חיסונית אדפטיבית. באופן כללי, מודל זה קשור לשלשולים חריפים ולעתים עקובים מדם, ירידה במשקל ועיבוי קיר מעיים עם זאת סימפטומים משתנים בהתאם לסוג של מכרסם בשימוש, כמו גם העיתוי, מינון ומידת חשיפה לDNBS או TNBS משמש ב מחקר. הבחנות חשובות בין חולדות ועכברים יש לציין, עם היתרונות של עלות נמוכה יותר לרכישה ולוח, כמו גם לואוr מסת גוף להפחתת עלויות לכל בעלי חיים של טיפול בגוף חי. זה צריך להיות מוגדר נגד כמובן יותר מהיר וחמור של קוליטיס בעכברים, שבו החיות יותר שבירות ותגובה עשויות להגיע לנקודת סיום הומנית במהירות. דלקת המעיים בתחילה כתוצאה מנזק הנגרם על אתנול לתאי האפיתל במעי, שמוביל לחדירות מוגברת אפיתל, חדירה של חיידקים לרירית, haptenization של חלבוני מארח, כל זה וכתוצאה מכך ההסתננות של נויטרופילים, מקרופאגים ולימפוציטים Th1 T לתוך הרירית הפגועה. בהשוואה לDNBS, TNBS נחשב כימי מסוכן בשל מאפייני חמצוני ביותר שלה, שיכול להוות סיכון לפיצוץ במגע עם בסיסים כגון נתרן ואשלגן הידרוקסידי. לכן DNBS נחשב כיום כבחירה מועדפת של חומר כימי על TNBS לגרום לדלקת מעי גס. במכרסמים, קוליטיס DNBS נחשב כאחת השיטות הנוחה ביותר ללמוד folloIBD הכנף קשור מכפילי של מחלה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דיכאון והפעלה מחדש של קוליטיס: הוכח כי לחץ, חרדה ודיכאון בחולי IBD לעתים קרובות קשורים עם הישנות מחלה. קוליטיס DNBS הוא מודל מתאים ללמוד את התפקיד של דיכאון והשלכותיו על הפעלה מחדש של קוליטיס בעכברים. השיטה כרוכה בדרך כלל אינדוקציה ראשונית של קוליטיס ידי DNBS, ואחריו ברזולוציה של קוליטיס על ידי השארת העכברים עבור 6-8 שבועות. אז העכברים מנוהלים עם סוכני דיכאון גורם כגון reserpine או על ידי bulbectomy חוש הריח כדי לגרום לדיכאון ואחרי בדיקה אותם להפעלה מחדש של קוליטיס דרך אתגר עם מינון subcolitic של DNBS 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתח והפעלה מחדש של קוליטיס: מתח הוא עוד גורם סביבתי נפוץ שנקשר לפתוגנזה של IBD. ישנו גוף הולך וגדל של ראיות המצביע על קשר חזק בין לחץ כרוני והופעת תסמינים של UC ו-CD במכרסמיםזה, כמו גם בבני אדם ופרימטים לא אנושיים 3. קוליטיס DNBS הוא מודל טוב ללמוד מחדש הקשורים ללחץ של קוליטיס בשני עכברים וחולדות. השיטה בדרך כלל מועסקת באופן דומה כאמור לטיפול בדיכאון אלא במקום של דיכאון, בעלי החיים שנחשפו ללחצים כגון קולי ומתח איפוק 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דלקת נוירוגנית: מספר המחקרים שתואר גם שינויים חולפים או קבועים במערכת העצבים enteric מבנה (ENS) ופונקציה, כפי שניתן לראות בדגימות רקמה ממודלים של בעלי חיים ושל חולים עם מחלת מעי דלקתי. DNBS הוא מודל טוב כדי לחקור את ההשפעות של דלקת בENS 5 וללמוד הן noradrenergic ומסלולים עצביים הכולינרגית 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנגנוני פציעה תיקון: בפתוגנזה של IBD, מתווכי פגיעה הנגזר מארח כגון מיני חמצן תגובתי (ROS), תחמוצת חנקן (NO), מולקולת הידבקות אינטר 3 (ICAM-3), ו-P-selectin כולם הוכחו pלהניח תפקיד בשיבוש אפיתל במעי. DNBS הוא מודל מצוין ללמוד פציעות שנגרמו על ידי עד הוויסות של מתווכים אלה, כמו גם מנגנוני תיקון שמוסדרים על ידי שימוש בסמים או מעכבי 7,8 סלקטיבית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דלקת transmural: בנוסף ליישומים שהוזכרו לעיל של DNBS, המודל יכול להיות מיושם גם כדי ללמוד דלקת transmural של המעיים, תכונה קלאסית שנמצאה בחולים עם תקליטור. DNBS וקוליטיס-Induced TNBS שניהם קשורים עם חדירה משמעותית של לימפוציטים, לרירית המעי הגס מה שהופך את הדגמים האלה שימושיים במיוחד ללמוד מנגנונים חיסוניים תלויים תא T. </li></ol> בהשוואה למודל DSS, היתרונות של DNBS וקוליטיס-Induced TNBS כוללים עלות נמוכה, התפתחות מהירה של דלקת המעי הגס (בדרך כלל דורש 1-3 ימים כדי להראות כיבים ודלקות לשחזור) ונזק מקומי עקבי למעי גס דיסטלי. עם זאת החסרונות הם דרישה לרמה גבוהה יותר של מומחיות טכנית, אופטימיזציה של מינון DNBS / TNBS, ואת הצורך בהרדמה לממשל בפי הטבעת. במאמר זה אנו מתודולוגיים חקרנו את ההשפעות של ריכוזים שונים של n-6 ו n-3 חומצות שומן רב בלתי רוויות על שינוי תגובת רירית המעי לקוליטיס-Induced DNBS בחולדות באמצעות שמן חריע שמנים צמחיים (SO) ושמן קנולה (CO) , ושמן דגים (FO). הוכח כי חומצות n-6 ו-n-3 שומן הם מתווכים חשובים של מחלה דלקתית של מעי דרך את תפקידם כmoieties acyl של phosopholipids קרום תא 9. בניגוד לפוטנציאל מעודדי דלקת של n-6 חומצות שומן, n-3 חומצות שומן במספיק גבוהה הצריכה הן פוטנציאל חומרים אנטי דלקתיים חזקים. הפעולות אנטי דלקתיות של n-3 חומצות שומן בתיווך ישירות דרך החלפה של חומצה הארכידונית כמצע eicosanoid, עיכוב חילוף חומרים חומצה הארכידונית ובעקיפין באמצעות שינוי של proinflביטוי ammatory גן ואיתות תא. N-3 חומצות השומן גם להצמיח resolvins, משפחה של מתווכים אנטי דלקתיים. צריכה גבוה של n-3 חומצות שומן קשור לירידה בייצור של eicosanoids מעודדי דלקת, ציטוקינים, כמוקינים, מיני חמצן תגובתי וביטוי של מולקולות הדבקות. במחקר זה, חולדות דיאטות כרצונך מודעה זהות בכל החומרים המזינים, למעט חומצות שומן נמאס, עם כאנרגית אחוזים מהשומן, 20% SO, CO 20%, או 18% שמן דגים בתוספת 2% שמן חריע (FO) 10-11 . כאחוז מהאנרגיה היומית, הדיאטה כן ובלבד 15% חומצה לינולאית (LA), עם &lt;חומצת 0.06% α-לינולנית (ALA) ולא חומצת eicosapentaenoic (EPA) או חומצת docosahexaenoic (DHA), דיאטת CO הייתה 4.2 % לוס אנג&#39;לס ו1.9% ALA ללא EPA או DHA, ודיאטת FO סיפקו 1.4% EPA, 4.9% DHA, 0.32% לוס אנג&#39;לס, ו0.12% ALA. שלושה שבועות לאחר תחילת דיאטת השומנים בדם, העכברים ניתנו DNBS intrarectal או 50% אתנול והקריבו 5 ימים לאחר מכן. Inflתגובת ammatory הוערכה על ידי הערכה של ירידה במשקל, ציוני נזק היסטולוגית ופעילות myeloperoxidase רקמות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<colgroup>
		<col />
		<col /> 
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19 gauge needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-50</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427517</td>
			<td>for intra-rectal administration in mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-90</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427519</td>
			<td>for intra-rectal administration in rat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNBS</td>
			<td>MP Bio</td>
			<td>150959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tear gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>63601662596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>5F93-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>TPZ-0510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A-962.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hexadecyltrimethyl-ammonium bromide</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate buffer solution</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>79628-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">O-dianisidine dihydrochloride</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">30% H2O2</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td>hydrogen peroxide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>Benchmarker Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Image.Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Data analysis software program </td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td style="width:119px;"> GraphPad Prism Software Version 4.00 </td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">San Diego California USA, www.graphpad.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat

מחלות מעי דלקתיות (IBD), כוללים מחלת קרוהן וקוליטיס כיבית, כבר מזמן מזוהות עם בסיס גנטי, ולאחרונה לארח את תגובה חיסונית לסוכני חיידקים וסביבתיים. קוליטיס Dinitrobenzene חומצת sulfonic (DNBS) מושרה מאפשר אחד כדי ללמוד את הפתוגנזה של גורמים סביבתיים הקשורים IBD כגון מתח ודיאטה, את ההשפעות של טיפולים פוטנציאליים, ואת מנגנוני פציעת דלקת ברירית מעי בסיסית. במאמר זה, אנחנו בדקנו את ההשפעות של חומצות n-3 ו-n-6 חומצות שומן תזונתיות בתגובה הדלקתית ברירית המעי הגס לקוליטיס-Induced DNBS בחולדות. כל החולדות קבלו תזונה זהה למעט סוגים שונים של חומצות שומן מ[ שמן חריע (SO), שמן קנולה (CO), או שמן דגים (FO)] במשך שלושה שבועות לפני החשיפה לintrarectal DNBS. חולדות בקרה נתון אתנול intrarectal המשיכו לעלות במשקל על המחקר של 5 ימים, ואילו, חולדות שטופלו DNBS דיאטות שומנים האכילו את כל losמשקל לא עם חולדות FO וCO הפד הוכחת ירידה משמעותית במשקל על ידי 48 שעות וחולדות שהוזנו זאת על ידי 72 שעה. עלייה במשקל התחדשה לאחר 72 ההודעה hr DNBS, ועל ידי 5 הודעה ימי DNBS, קבוצת FO הייתה משקל גוף גבוה מכך או קבוצות CO. סעיפים במעי הגס שנאספו 5 ימים לאחר DNBS הטיפול הראה כיב מוקד, הרס קריפטה, דלדול תא גביע, וחדירה רירית של שני תאים דלקתיים חריפים וכרוניים, שהשוני בחומרה בין קבוצות דיאטה. הקבוצה כל כך שיגע הראתה נזק החמור ביותר ואחריו CO, וFO האכיל קבוצות שהראו את המידה המתונה ביותר של פגיעה ברקמות. כמו כן, פעילות myeloperoxidase הגס (MPO), סמן של פעילות נויטרופילים היה גבוהה באופן משמעותי בכל כך אחרי חולדות CO הפד, עם חולדות שהוזנו FO שיש פעילות MPO נמוכה באופן משמעותי. תוצאות אלו מראות את השימוש של קוליטיס-Induced DNBS, כפי שתואר בפרוטוקול זה, על מנת לקבוע את ההשפעה של תזונה בפתוגנזה של מחלת מעי דלקתי.

אתגר של חולדות (ספראג-Dawley) או עכברים (C57BL / 6) עם DNBS בדרך כלל תוצאות בירידה במשקל זמנית ושלשולים, לפעמים עם הווה דם בצואה. עם זאת, גורמים כגון גנטיקה, תזונה וחיידקי מעיים יכולים לשנות את רגישות לקוליטיס DNBS המושרה. לכן, בעלי החיים שנכללו בניסויים צריכים להיות מאותו המוסד, א?...

Watch this Scientific Journal Video about DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat at JoVE.com

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

קוליטיס המושרה DNBS / TNBS מציע אלטרנטיבה ושיטה זולה ללמוד pathobiology של מחלות מעי דלקתיות. הפרוטוקול שנדון במאמר זה מתאר את היישום המוצלח של DNBS כדי לגרום לדלקת מעי גסה בעכברים וחולדות ומאפשר לאדם ללמוד ביסודיות את תגובות מעיים בתיווך מארחת.

מודלים DNBS / TNBS קוליטיס: מתן תובנות מחלת מעי דלקתי והשפעות של התזונה שומן

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

dnbstnbs-colitis-models-providing-insights-into-inflammatory-bowel

Research

JoVE Journal

Medicine

46.8K Views.  BC Children's Hospital.  קוליטיס המושרה DNBS / TNBS מציע אלטרנטיבה ושיטה זולה ללמוד pathobiology של מחלות מעי דלקתיות. הפרוטוקול שנדון במאמר זה מתאר את היישום המוצלח של DNBS כדי לגרום לדלקת מעי גסה בעכברים וחולדות ומאפשר לאדם ללמוד ביסודיות את תגובות מעיים בתיווך מארחת. 

Video: DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

מדידה מדויקת ופשוטה 1β-IL Pro-ציטוקין דלקתי באמצעות גירוי Assay Whole Blood

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

פילוח ומדידה של כמויות השומן מודלים השמנת יתר Murine באמצעות קרני רנטגן טומוגרפיה ממוחשבת

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease (PD) pathogenesis are less understood. Gene-environment interaction models have utility in unmasking the impact of specific cellular pathways in toxicity that may not be observed using a solely genetic or toxicant disease model alone.&#160;To evaluate if distinct LOX isozymes selectively contribute to PD-related neurodegeneration, transgenic (i.e. 5-LOX and 12/15-LOX deficient) mice can be challenged with a toxin that mimics cell injury and death in the disorder.&#160;Here we describe the use of a neurotoxin, 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP), which produces a nigrostriatal lesion to elucidate the distinct contributions of LOX isozymes to neurodegeneration related to PD. The use of MPTP in mouse, and nonhuman primate, is well-established to recapitulate the nigrostriatal damage in PD.&#160;The extent of MPTP-induced lesioning is measured by HPLC analysis of dopamine and its metabolites and semi-quantitative Western blot analysis of striatum for tyrosine hydroxylase (TH), the rate-limiting enzyme for the synthesis of dopamine. To assess inflammatory markers, which may demonstrate LOX isozyme-selective sensitivity, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Iba-1 immunohistochemistry are performed on brain sections containing substantia nigra, and GFAP Western blot analysis is performed on striatal homogenates.&#160;This experimental approach can provide novel insights into gene-environment interactions underlying nigrostriatal degeneration and PD.

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson&#039;s Disease

Lipoxygenase (LOX) isozymes can generate products that may increase or decrease neuroinflammation and neurodegeneration.&#160;A gene-environment interaction study could identify LOX isozyme-specific effects. Using the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model of nigrostriatal damage in two LOX isozyme-deficient transgenic lines allows for comparison of the contribution of LOX isozymes on dopaminergic integrity and inflammation.

מודלים לאינטראקציה בין סביבת גנים כדי לחשוף מנגנוני רגישות במחלת פרקינסון

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

הזרקת orthotopic של תאי סרטן השד לחלב שומן Pad של עכברים לחקר התפתחות גידול.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

הערכה של יכולת הקיום של הזרקת שומן האנושי בעכברי עירום עם מיקרו-טומוגרפיה ממוחשבת

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

יעילות טיפולית של תוסף תזונה לניהול של באשת בכלבים

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to induce reflux of gastric contents, duodenal contents or mixed contents. Surgical procedures and general principles have been described in detail. A researcher with surgical experience should be able to grasp the technique after a short period of practice. After surgery, most mice can survive and develop reflux esophagitis similar to that in humans. However, it should be noted that histological differences between mouse and human esophagus are the inherent limitations of these surgical models. If used for research on Barrett&#8217;s esophagus and adenocarcinoma, these procedures may need to be combined with genetic modifications.

This article demonstrates surgical procedures of gastroesophageal reflux with mice. These models are useful tools for research on mechanisms and treatment of gastroesophageal reflux disease and potentially Barrett&#8217;s esophagus and esophageal adenocarcinoma.

מודלי כירורגי של Gastroesophageal Reflux עם עכברים

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

Sacs Ex Vivo המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

השתלת לתוך כרית עכבר השחלות שומן

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

ניתוח מועיל אפקטים של תוספי תזונה על פונקציות מעיים אפיתל מכשול במהלך ניסיוני קוליטיס

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...