אנו מכירים בסיוע המיומן של אנני ב &#39;Kristensen, אליזבת V. אנדרסן, לינדה ב&#39; Bringtoft ומטפלים בבעלי החיים במחלקה לרפואה ניסויית, קמפוס פרדריקסברג, הפקולטה לבריאות ומדעי רפואה, אוניברסיטת קופנהגן, דנמרק. יעקב Lønholdt הוא הודה לקבלת הסיוע הטכני מצוין שלו בצילומי הנהלים. מחקר זה נתמך בחלקו על ידי מרכז LIFEPHARM לin vivo פרמקולוגיה ואוניברסיטת קופנהגן.

הנהלים מוצגים בוצעו על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי הדני לניסויים בבע&quot;ח הפקוח תחת משרד המזון, החקלאות והדיג. .1 דגימת דם מsaphenous לרוחב או Tarsal הווריד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע הליך זה ללא הרדמה ואת עזרתו של חוקר אחד, אחד טיפול שפן הניסיונות, ואחד איסוף הדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את אזור הקרסול של הרגל האחורית עם מכונת גילוח חשמלי עד שהוורידים גלויים. ודא האזור הוא גדול מספיק כדי להימנע מפרווה מפריעה לאתר לנקב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הרגל האחורית באמבט מים פושר ולשפשף בעדינות את הרגל, מה שהופך את הוורידים מורחבים יותר וברורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את הרגל במגבת נקייה ולחטא את האתר לנקב עם גזה או מקלון צמר גפן הטבול באלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרסן את פן הניסיונות ולהאריך את הרגל האחורית כלפי מטה תוך הפעלת לחץ עדין באופן מיידי מעל מפרק הברך to לספק קיפאון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקב את הווריד באמצעות מחט 21 G או אזמל. לאסוף למשל דם., על ידי שימוש בצינור איסוף או נימים. בעדינות לתפעל את הרגל כדי לסייע לזרימת הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחרר קיפאון, פעם אחת המדגם הושג. החל פיסת צמר גזה או צמר גפן עם לחץ עדין לאתר לנקב עד דימום הפסק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את החיה לכלוב והצג שלה ל5-10 דקות כדי להבטיח עצירת דימום. </li></ol> 2 דגימת דם מוריד האוזן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע הליך זה ללא הרדמה לבד או עדיף עם עזרתו של חברי אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את פני השטח הגבי של האוזן באמצעות גזה או מקלון צמר גפן טבול באלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפעיל לחץ קל לבסיס של האוזן כדי לספק קיפאון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקב את הווריד באמצעות מחט 21 G או אזמל, ולאסוף דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחרר קיפאון, פעם אחת המדגם הושג, החל פיסת גזה או צמר גפן עם geלחץ ntle לאתר לנקב עד דימום פסק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את החיה לכלוב והצג שלה ל5-10 דקות כדי להבטיח עצירת דימום. </li></ol> .3 דגימת דם מוריד הצוואר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע הליך זה באמצעות העזרה של חוקר אחד נוסף; אחד טיפול שפן ניסיונות ואחד איסוף הדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטשטש פן הניסיונות עם חומר הרדמה מתאימה לכל תקופת של הליך זה. תערובת של tiletamine (0.93 מ&quot;ג / קילוגרם), zolazepam (0.93 מ&quot;ג / קילוגרם), xylazine (1.49 מ&quot;ג / קילוגרם) וbutorphanol (0.06 מ&quot;ג / קילוגרם) יכולה לשמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את פן הניסיונות מורדמים על הגב שלה בעדינות לחזור בי הרגליים הקדמיות caudally. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח ולחטא (למשל., עם 70% אלכוהול) חלק הגחון של הצוואר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל המזרק עם או הפרין או EDTA לפני דגימה על מנת להקטין את הסיכון של קרישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשש את עצם הבריח ולהכניס 25 G (או 23 G) מחט רכובה על ap מזרק 1 מ&quot;לבסמיכות 1 סנטימטר לרוחב קו האמצע ברמה של מפרק כתף. שמור את המזרק בזווית כלפי מעלה והמדיאלי קלה בעת החלת לחץ שלילי קל. למנוע נזק למבני היסוד כמו וריד הצוואר נמצא די שטחי. הטה את הצוואר של חזיר הים מעט לאחור כדי לספק קיפאון מוגבר של הווריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את הרגליים הקדמיות כאשר דגימת הדם שהושגה, ולהקל על קיפאון לפני המחט חזר בו. השתמש בפיסת גזה או צמר גפן יבש להפעיל לחץ עדין לאתר לנקב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את בעלי החיים לכלוב התאוששות ולפקח על מנת להבטיח עצירת דימום והתאוששות מן ההרדמה. </li></ol>

<ol>
	<li>DeOgburn, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+increased+dietary+cholesterol+with+carbohydrate+restriction+on+hepatic+lipid+metabolism+in+Guinea+pigs.">Effects of increased dietary cholesterol with carbohydrate restriction on hepatic lipid metabolism in Guinea pigs.</a> Comp.Med. 62 (2), 109-115 (2012).</li><li>Fernandez, M., Volek, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guinea+pigs+a+suitable+animal+model+to+study+lipoprotein+metabolism,+atherosclerosis+and+inflammation.">Guinea pigs a suitable animal model to study lipoprotein metabolism, atherosclerosis and inflammation.</a> Nutr Metab (Lond). 3 (17), (2006).</li><li>Frikke-Schmidt, H., Tveden-Nyborg, P., Birck, M. M., Lykkesfeldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+dietary+fat+and+cholesterol+exacerbates+chronic+vitamin+C+deficiency+in+guinea+pigs.">High dietary fat and cholesterol exacerbates chronic vitamin C deficiency in guinea pigs.</a> Br J Nutr. 105 (1), 54-61 (2011).</li><li>Hem, A., Smith, A. J., Solberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saphenous+vein+puncture+for+blood+sampling+of+the+mouse,+rat,+hamster,+gerbil,+guinea+pig,+ferret+and+mink.">Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink.</a> Lab Anim. 32 (4), 364-368 (1998).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Guillen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FELASA+guidelines+and+recommendations.">FELASA guidelines and recommendations.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 311-321 (2012).</li><li>Ye, P., Cheah, I. K., Halliwell, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diets+and+pathology+in+the+guinea+pig+Atherosclerosis+or+liver+damage.">High fat diets and pathology in the guinea pig Atherosclerosis or liver damage.</a> Biochim Biophys Acta. 1832 (2), 355-364 (2013).</li><li>Tveden-Nyborg, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+vitamin+C+deficiency+during+pregnancy+persistently+impairs+hippocampal+neurogenesis+in+offspring+of+guinea+pigs.">Maternal vitamin C deficiency during pregnancy persistently impairs hippocampal neurogenesis in offspring of guinea pigs.</a> PLoS One. 7 (10), 12-18391 (2012).</li><li>Schjoldager, J. G., Tveden-Nyborg, P., Lykkesfeldt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+maternal+vitamin+C+deficiency+overrides+preferential+fetal+ascorbate+transport+but+does+not+influence+perinatal+survival+in+guinea+pigs.">Prolonged maternal vitamin C deficiency overrides preferential fetal ascorbate transport but does not influence perinatal survival in guinea pigs.</a> Br J Nutr. 110 (9), 1573-1579 (2013).</li><li>Greulich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretory+products+of+guinea+pig+epicardial+fat+induce+insulin+resistance+and+impair+primary+adult+rat+cardiomyocyte+function.">Secretory products of guinea pig epicardial fat induce insulin resistance and impair primary adult rat cardiomyocyte function.</a> J Cell Mol Med. 15 (11), 2399-2410 (2011).</li><li>Swifka, J., Weiss, J., Addicks, K., Eckel, J., Rosen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+fat+from+guinea+pig+a+model+to+study+the+paracrine+network+of+interactions+between+epicardial+fat+and+myocardium.">Epicardial fat from guinea pig a model to study the paracrine network of interactions between epicardial fat and myocardium.</a> Cardiovasc Drugs Ther. 22 (2), 107-114 (2008).</li><li>Pilny, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+hematology+of+rodent+species.">Clinical hematology of rodent species.</a> Vet.Clin North Am Exot Anim Pract. 11 (3), 523-vii (2008).</li><li>Franco, N. H., Olsson, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientists+and+the+3Rs:+attitudes+to+animal+use+in+biomedical+research+and+the+effect+of+mandatory+training+in+laboratory+animal+science.">Scientists and the 3Rs: attitudes to animal use in biomedical research and the effect of mandatory training in laboratory animal science.</a> Lab Anim. 48 (1), 50-60 (2014).</li><li>Van, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=eAssessing+the+application+of+the+3Rs+a+survey+among+animal+welfare+officers+in+The+Netherlands.">eAssessing the application of the 3Rs a survey among animal welfare officers in The Netherlands.</a> Lab Anim. 47 (3), 210-219 (2013).</li><li>Sloan, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+doses+of+ketamine-xylazine+anesthesia+reduce+cardiac+ischemia-reperfusion+injury+in+guinea+pigs.">High doses of ketamine-xylazine anesthesia reduce cardiac ischemia-reperfusion injury in guinea pigs.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (3), 349-354 (2011).</li><li>Jacobson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+anaesthetic+regimen+for+surgical+procedures+in+guinea+pigs.">A novel anaesthetic regimen for surgical procedures in guinea pigs.</a> Lab Anim. 35 (3), 271-276 (2001).</li><li>Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+hyperglycemia+induced+by+ketamine+xylazine+anesthesia+in+rats+mechanisms+and+implications+for+preclinical+models.">Acute hyperglycemia induced by ketamine xylazine anesthesia in rats mechanisms and implications for preclinical models.</a> Exp Biol Med(Maywood). 230 (10), 777-784 (2005).</li></ol>

יש לי המחברים אין לחשוף. כל ההליכים אושרו על ידי הניסויים בבעלי חי החוק של דנמרק, אשר הנו בהתאם למועצת אירופה אמנת ETS 123.

בהשוואה לעכברים וחולדות, חזירי ים חוששים ידי הטבע ויש לגשת בשלווה ולטפל בו כראוי על מנת להפחית את הלחץ. מנקודת מבט של רווחת בעלי חיים, הפועלות בזהירות הוא באופן טבעי בראש סדר עדיפויות; עם זאת, זה יהיה גם להפחית את הסיכון לתופעות הקשורים חרדה בלמשל הנתונים שנאסף., רמות דם מוגברות של סטרואידים וגלוקוז 12. כמו כן, טיפול יומי יהיה להרגיל את החיות לנהלים רגילים ויכול לשמש כדי להפחית את הלחץ עוד יותר. מומחיות מעשית בטכניקת דגימת דם מסוימת צריכה להיות שנרכש על ידי ההתבוננות ראשונה מפעיל מנוסה ולאחר מכן נהל את הטכניקה תחת פיקוח עד יכולת מושגת. הטכניקה שנבחרה צריכה באופן אידיאלי שתי להפחית את הלחץ ואי נוחות למינימום, אלא גם כדי להבטיח את הישרדות, כמו גם עמידה בדרישות של גודל מדגם ונגישות. לכל שיטות דגימת הדם הציגו טכניקות ספטית צריכה להיותלהשתמש כדי למזער את הסיכון לזיהום ולהבטיח איסוף דגימות מזוהמים. גישות מאוירות לדגימת דם להבטיח את הישרדותו של בעל החיים ובלבד שנפח הדגימה והתדירות מושגת על פי הנחיות וכולם יכולות להיות מיושמת על דגימה חוזרת ונשנית בשני מחקרים לטווח קצרים וארוכים 6. זה מאפשר מעקב העקבי של בעלי חיים בודדים לאורך זמן הפחתה בזאת שונות ומספר בעלי החיים שנכללו בעמידה ב&#39;3Rs (הפחתה) 13,14. יש לי הטכניקות שהוצגו כאן טווחים שונים של השגה נפח דגימה (כמה μl עד 1-2 מ&quot;ל) שיש לשקול לפני תחילת ניסוי. למרות שנהלים לאיסוף דם מוריד הצוואר בשרקנים-מורדם בלתי תוארו 12, אנו ממליצים בחום על השימוש בהרדמה כדי להפחית את הלחץ ואי נוחות ככל האפשר. כאשר עושים זאת, הבחירה של הרדמה צריכה להיות carefully התייחס, וציין כי רקנים הם קשים לשמצה לטשטש ולהציג יעילות רבה וריאציה של ההרדמה, כמו גם רגישות גבוהה כלפי דיכאון נשימה הנגרמת 15,16. כוריד הצוואר בחזירי ים אינו נראה לעין ולא מוחשי הפחתה כלשהי בקיפאון / התרחבות ורידים עשויים להגדיל קשיי דגימה, ולכן הוא מומלץ בדרך כלל להימנע מסוכני הרחבת כלי דם-ההצרה בהרדמה-תערובות. . יתר על כן, השפעות ידועות של סוכנים מאלחשים ספציפיים שעלולים להפריע לדוגמא איסוף נתונים הרצויה, אפקטי לב וכלי דם ו / או רמות סוכר בדם מוגברות הבאות α 2 - יש לבחון פעולות אגוניסט במכרסמים 16,17. השימוש בהרדמת משאיפת כגון isoflurane יכול להיות גם אפשרות, עם זאת כאינטובציה בחזירי ים הוא יש לקחת טיפול משימה קשה מאוד כדי למנוע הפרעה על ידי שאיפה המסכה עם עמדת הראש / צוואר כמו זה עשוי complicאכלתי את ההליך שלא לצורך. למשל כללי הרדמה., על ידי שאיפה נדרש גם עבור לנקב לב אשר עשוי לספק יותר נפח דגימה. עם זאת, לנקב לב הוא הליך מסוף ולכן אינו ישים עבור דגימה חוזרת ונשנית ולא ניתן לתאר נוסף. השפעות פוטנציאליות שליליות כגון דימום, שטפי דם, פקקת, זיהום ומפחיד עלולות להתרחש בעקבות ניקוב וריד. מניסיוננו, חזיר הים אינו תערוכת סיכון מוגבר לסיבוכים לא רצויים כגון בהשוואה למודלים של מכרסמים אחרים ובלבד שההליך מתבצע כפי שתואר בכתב היד הנוכחית. כוריד הצוואר לא יכול להיות דמיינו מהמשטח החיצוני, זה מאוד חשוב כדי להקל על קיפאון לפני נסיגת המחט ולספק עצירת דימום נאותה על מנת למזער את הסיכון של דימום ושטפי דם פרי ורידים. במקרה של תופעות לוואי, טיפול צריך להיות תמיד חיפש מוטרינריה האחראיםnarian. מסיבות של רווחת בעלי חיים טובה ולמדע, שיקולים רציניים יש לתת להשפעה המשולבת של נפח דגימה ותדרים ובחירה של טכניקת דגימה. כל טכניקות דגימת דם שתוארו נבדקו ביסודיות והגישו בקשה לחזרו בדגימת דם vivo במחקרים בתוך מתקן המחקר שלנו.

שפן הניסיונות הוא מודל חיה ניסיוני יקר ומאומתים בשל מספר קווי דמיון ביולוגי לבני אדם כגון דרישה לאספקה ​​תזונתית של ויטמין C, ליפופרוטאין פלזמה הדומה חילוף חומרים של אנזימים ופרופילי ליפופרוטאין, כמו גם קווי דמיון משותפים עם placentation ואנושי פיתוח טרום לידתי 1-3,7,8. זה הופך את חזיר ים מודל אטרקטיבי ומתאים ללימוד השפעות של מחלות הקשורות דיאטה כגון מחלת שאינה אלכוהוליים כבד שומני, מחלות לב וכלי דם והשפעות המשוערות של מחסור בויטמין C, אלא גם את ההשפעה של לדוגמא., התערבות תזונתית אימהית על הפיתוח צאצאים. דגימת דם חוזרת נדרשה לעתים קרובות בשני הטווח הארוך וקצר במחקרי vivo. בשל הבדלים אנטומיים מינים ספציפיים אפנון של טכניקת הדגימה הוא הכרחי על מנת להשיג דגימות דם בחזירי ים בהשוואה למודלים של מכרסמים אחרים <sup&gt; 4,5. זה כולל שינוי בקורס של ורידים ועורקים, וגם לא צריכים שרקנים זנב, יש לי כך דרישות ואפשרויות שונות לשניהם דגימה וטיפול. דגימה מsaphenous או וריד קרסול, גורם אי נוחות מינימאלית ולחץ בבעלי החיים ואינו דורש הרדמה 3,9. טכניקה זו מאפשרת לי חזרו דגימות של כמויות קטנות של דם (100-400 μl), למשל., כדי לקבוע סמנים ביוכימיים בפלזמה. אם גודל מדגם קטן עוד יותר הוא מספיק (50-100 μl), יכולה די בקלות ניתן להשיג זאת על ידי ניקוב וריד האוזן. טכניקה זו יכולה גם להתבצע בבעלי חיים מודעים ושימושית לדוגמא בעת מדידת רמת סוכר בדם 10,11. דגימה מוריד הצוואר מאפשרת לאוסף של כמויות גדולות יותר של דם (1-2 מ&quot;ל) אבל דורשת הרדמה. כאן, אנו מציגים ארבע טכניקות דגימת דם שונות לאו חזירי ים מודעים או מורדם. Procedures כל הנהלים שאינם המסוף ובלבד שכרכי המדגם ומספר הדגימות לא יעלו על הנחיות לאיסוף דם בחיות מעבדה 6. זה באינטרסים של מדע טוב, כמו גם לרווחת בעלי החיים שלחץ צריך להיות כל הזמן למינימום. כתוצאה מכך, מאומן היטב בלבד ואישי מוסמך צריך לבצע את ההליכים בבעלי החיים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="944">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:295px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:315px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Electric shaver</td>
			<td style="width:295px;">Wella (Contura), Denmark</td>
			<td style="width:119px;">273207</td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Syringes&#160;</td>
			<td style="width:295px;">B.Braun-Omnifix-F, Germany</td>
			<td style="width:119px;">9161406V</td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Needles</td>
			<td style="width:295px;">BD Microlance,Spain</td>
			<td style="width:119px;">301156</td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Microvette collection tube&#160;</td>
			<td style="width:295px;">Sarstedt, D-51588N&#252;mbrecht, Germany</td>
			<td style="width:119px;">201,288,100</td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Accu-Check analyzer</td>
			<td style="width:295px;">Roche A/S Diagnostics, Denmark</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Heparin 5000 IE/ml</td>
			<td style="width:295px;">LEO Pharma, Denmark</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Anesthesia</td>
			<td style="width:295px;">Zoletil 50, Chemvet, Denmark</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Anesthesia</td>
			<td style="width:295px;">Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Anesthesia</td>
			<td style="width:295px;">Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Neutral eye ointment</td>
			<td style="width:295px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gauze or a cotton swab&#160;</td>
			<td style="width:295px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disinfectant (70% alcohol)</td>
			<td style="width:295px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Alternative product may be used. Multiple suppliers</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-terminal blood sampling techniques in guinea pigs

גינאה חזירים יש כמה קווי דמיון ביולוגיים לבני אדם והן תוקפים מודלים של בעלי חיים ניסיוניים 1-3. עם זאת, השימוש בחזירי ים מהווה כיום אזור צר יחסי של נתוני מחקר ותיאורים על מתודולוגיה מסוימת היא בהתאמה נדירה. התכונות האנטומי של שרקנים שונות מעט ממודלים של מכרסמים אחרים, ומכאן אפנון של טכניקות דגימה כדי להתאים להבדלי מינים ספציפיים, למשל., בהשוואה לעכברים וחולדות, נחוצים כדי להשיג דגימות באיכות מספקות וגבוהות. כשני לטווח הארוך וקצר במחקרי vivo לעתים קרובות דורש חוזר ונשנה דם דגימת הבחירה של טכניקה יש לשקול היטב על מנת להפחית את הלחץ ואי נוחות בבעלי החיים, אלא גם כדי להבטיח את הישרדות, כמו גם עמידה בדרישות של גודל מדגם ונגישות. ניתן להשיג דגימות דם ורידים במספר האתרים בשרקנים למשל., saphenous וצווארורידים, כל טכניקה המכילה את שני יתרונות וחסרונות 4,5. כאן, אנו מציגים ארבע טכניקות דגימת דם שונות לאו חזירי ים מודעים או מורדם. הנהלים כל הנהלים שאינם המסוף ובלבד שכרכי המדגם ומספר הדגימות לא יעלו על הנחיות לאיסוף דם בחיות מעבדה 6. כל השיטות שתוארו נבדקו ביסודיות והגישו בקשה לחזרו בדגימת דם vivo במחקרים בתוך מתקן המחקר שלנו.

ארבע גישות שונות בטכניקות דגימת דם שאינו מסוף vivo באו חזירי ים מודעים או מורדם הוצגו. איור 1 מדגים את מהלך saphenous לרוחב ווריד קרסול בפן הניסיונות והאתרים לנקב אפשריים. ורידי אוזן גלויים על פני השטח הגבי של אוזן חזיר ים הם באיור 2 ורידים אלה יכולים לשמש לדגימת דם כאשר נדרש רק נפח קטן מאוד. עמדתו של פן הניסיונות לדגימת דם הצוואר היא מופע באיור 3. במהלך וריד הצוואר בא לידי ביטוי בחיצים עם החץ מצביע העליון באתר לנקב המומלץ. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51982/51982fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1 הווריד saphenous וקרסול לרוחב שבפן הניסיונות. התמונה מתארת ​​את המסלול ואתאתר לנקב לדגימת דם מsaphenous לרוחב (החץ העליון) או וריד הקרסול (חץ תחתון) שבפן הניסיונות. <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51982/51982fig2highres.jpg" width="500" /> איור 2 ורידי אוזן. תמונה זו ממחישה ורידי אוזן (חיצים) נראו על פני השטח הגבי של אוזן שפן ניסיונות. ורידים אלו יכולים לשמש לדגימת דם כאשר נדרש רק נפח קטן מאוד. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51982/51982fig3highres.jpg" width="500" /> תפקיד איור 3 של פן הניסיונות לדגימת דם וריד הצוואר. זה ממחיש את עמדתו של חזיר הים והאתר לנקב לדגימת דם וריד הצוואר. החיצים מצביעים על מהלך וריד הצוואר עם החץ מצביע לכיוון העליון האתר לנקב המומלץ.

Watch this Scientific Journal Video about Non-Terminal Blood Sampling Techniques in Guinea Pigs at JoVE.com

Non-Terminal Blood Sampling Techniques in Guinea Pigs

למרות שמודל ידוע, שפן הניסיונות כיום מייצגים נישה במדעי בעלי חיים ניסיוניים ונתונים מוגבלים נגיש בביצוע של רוב ההליכים. כאן אנו מציגים ארבע גישות שונות למי שאינו מסוף בטכניקות דגימת דם vivo באו חזירי ים מודעים או מורדם.

טכניקות דגימת דם ללא מסוף בגינאה חזירים

Guinea pigs possess several biological similarities to humans and are validated experimental animal models1-3. However, the use of guinea pigs currently ...

non-terminal-blood-sampling-techniques-in-guinea-pigs

Google

Research

JoVE Journal

Biology

37.1K Views.  University of Copenhagen.  למרות שמודל ידוע, שפן הניסיונות כיום מייצגים נישה במדעי בעלי חיים ניסיוניים ונתונים מוגבלים נגיש בביצוע של רוב ההליכים. כאן אנו מציגים ארבע גישות שונות למי שאינו מסוף בטכניקות דגימת דם vivo באו חזירי ים מודעים או מורדם. 

Video: Non-Terminal Blood Sampling Techniques in Guinea Pigs

Optical Recording of Electrical Activity in Guinea-pig Enteric Networks using Voltage-sensitive Dyes

The enteric nervous system (ENS) is a self-contained network with identified functions, capable of performing complex behaviors in isolation. Its neurons (10 to 25 &mu;m in diameter) are arranged in plexuses that are confined to distinct planes of the gut wall 1; the myenteric plexus can be found between the longitudinal and circular muscle layers, and the submucous plexus between the circular muscle layer and the mucosa. Since the effector systems for these plexuses (transporting epithelium, endocrine cells, immune elements, blood vessels and smooth muscle) are also contained within the gut wall, semi-intact preparations can be dissected that preserve individual components of different reflex pathways. The behavior of the effector systems is controlled by the submucous and myenteric plexuses acting in concert. Therefore, detailed knowledge of synaptic interactions within and between ganglia, and of communication between the plexuses, is essential for understanding normal gastrointestinal function. The ENS, as an intact nervous system, is a unique experimental model in which one can correlate molecular and cellular events with the electrical behavior of the neuronal network and its physiological outputs. Because of the quasi-two-dimensional organization of its plexuses, the ENS is particularly well suited for the study of neural networks using multiple site optical recording techniques that employ voltage-sensitive dyes 2,7,8,9. We will illustrate here the use of a relatively new naphthylstyryl-pyridinium dye (di-4-ANEPPDHQ) 3 that offers multiple advantages over its predecessors, including very low phototoxicity, slow rate of internalization, and remarkable chemical stability. When used in conjunction with a camera that permits sub-millisecond time resolution, this dye allows us to monitor the electrical activity of all the neurons in the field of view with a maximal spatial resolution of ~ 2.5 &mu;m at 100X magnification. At lower magnification (10X or 20X), the sacrifice of single-cell resolution is compensated by a gain in perspective, revealing the intricacies of the inter-ganglionic circuitry.

This protocol illustrates how voltage-sensitive dyes enable optical recording of electrical activity from intact neural networks such as the plexuses of the guinea-pig enteric nervous system, with an adjustable resolution that ranges from single-cells to multi-ganglionic circuitry.

הקלטה אופטית של הפעילות החשמלית גינאה חזיר רשתות enteric באמצעות מתח רגיש צבעים

The enteric nervous system (ENS) is a self-contained network with identified functions, capable of performing complex behaviors in isolation. Its neurons ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may also be used to study the structure-function relationship for other ion channels and neurotransmitter receptors1. BK channels are widely expressed in different tissues and have been implicated in many physiological functions, including regulation of smooth muscle contraction, frequency tuning of inner hair cells and regulation of neurotransmitter release2-6. BK channels are activated by membrane depolarization and by intracellular Ca2+ and Mg2+ 6-9. Therefore, the protocol is designed to control both the membrane voltage and the intracellular solution. In this protocol, messenger RNA of BK channels is injected into Xenopus laevis oocytes (stage V-VI) followed by 2-5 days of incubation at 18&deg;C10-13. Membrane patches that contain single or multiple BK channels are excised with the inside-out configuration using patch clamp techniques10-13. The intracellular side of the patch is perfused with desired solutions during recording so that the channel activation under different conditions can be examined. To summarize, the mRNA of BK channels is injected into Xenopus laevis oocytes to express channel proteins on the oocyte membrane; patch clamp techniques are used to record currents flowing through the channels under controlled voltage and intracellular solutions.

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Ionic current of BK channels is recorded using patch clamp techniques. BK channels are expressed in Xenopus oocytes by injecting messenger RNA. The intracellular solution during patch clamp recordings is controlled by a perfusion system.

הצמד תיקון וטכניקות זלוף עבור לימוד תעלות יונים מתבטא Xenopus ביציות

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) have shown to be convenient, easy to obtain and culture, and thus are the most widely studied endothelial cells. However, for research focused on processes like angiogenesis, permeability or many others, microvascular endothelial cells (ECs) are a much more physiologically relevant model to study 2. Furthermore, ECs isolated from knockout mice provide a useful tool for analysis of protein function ex vivo. Several approaches to isolate and culture microvascular ECs of different origin have been reported to date 3-7, but consistent isolation and culture of pure ECs is still a major technical problem in many laboratories. Here, we provide a step-by-step protocol on a reliable and relatively simple method of isolating and culturing mouse lung endothelial cells (MLECs). In this approach, lung tissue obtained from 6- to 8-day old pups is first cut into pieces, digested with collagenase/dispase (C/D) solution and dispersed mechanically into single-cell suspension. MLECS are purified from cell suspension using positive selection with anti-PECAM-1 antibody conjugated to Dynabeads using a Magnetic Particle Concentrator (MPC). Such purified cells are cultured on gelatin-coated tissue culture (TC) dishes until they become confluent. At that point, cells are further purified using Dynabeads coupled to anti-ICAM-2 antibody. MLECs obtained with this protocol exhibit a cobblestone phenotype, as visualized by phase-contrast light microscopy, and their endothelial phenotype has been confirmed using FACS analysis with anti-VE-cadherin 8 and anti-VEGFR2 9 antibodies and immunofluorescent staining of VE-cadherin. In our hands, this two-step isolation procedure consistently and reliably yields a pure population of MLECs, which can be further cultured. This method will enable researchers to take advantage of the growing number of knockout and transgenic mice to directly correlate in vivo studies with results of in vitro experiments performed on isolated MLECs and thus help to reveal molecular mechanisms of vascular phenotypes observed in vivo.

Here, we describe a protocol for isolation and culture of murine pulmonary endothelial cells. This method comprises mechanic and enzymatic lung tissue dissociation as well as a 2-step purification process using anti-PECAM-1 and anti-ICAM-2 antibodies conjugated to magnetic beads, which produces a pure endothelial cell population of mostly microvascular origin.

בידוד תרבות לתאי אנדותל ריאתי מעכברים ילודים

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help regulate a diverse range of biological processes. Analysis of EVs using flow cytometry (FCM) has been notoriously difficult due to their small size and lack of discrete populations positive for markers of interest. Methods for EV analysis, while considerably improved over the last decade, are still a work in progress. Unfortunately, there is no one-size-fits-all protocol, and several aspects must be considered when determining the most appropriate method to use. Presented here are several different techniques for processing EVs and two protocols for analyzing EVs using either individual detection or a bead-based approach. The methods described here will assist with eliminating the antibody aggregates commonly found in commercial preparations, increasing signal&#8211;to-noise ratio, and setting gates in a rational fashion that minimizes detection of background fluorescence. The first protocol uses an individual detection method that is especially well suited for analyzing a high volume of clinical samples, while the second protocol uses a bead-based approach to capture and detect smaller EVs and exosomes.

Many different methods exist for the measurement of extracellular vesicles (EVs) using flow cytometry (FCM). Several aspects should be considered when determining the most appropriate method to use. Two protocols for measuring EVs are presented, using either individual detection or a bead-based approach.

טכניקות לניתוח של תאית שלפוחית ​​שימוש cytometry הזרימה

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

Dried Blood Spots - Preparing and Processing for Use in Immunoassays and in Molecular Techniques

The idea of collecting blood on a paper card and subsequently using the dried blood spots (DBS) for diagnostic purposes originated a century ago. Since then, DBS testing for decades has remained predominantly focused on the diagnosis of infectious diseases especially in resource-limited settings or the systematic screening of newborns for inherited metabolic disorders and only recently have a variety of new and innovative DBS applications begun to emerge. For many years, pre-analytical variables were only inappropriately considered in the field of DBS testing and even today, with the exception of newborn screening, the entire pre-analytical phase, which comprises the preparation and processing of DBS for their final analysis has not been standardized. Given this background, a comprehensive step-by-step protocol, which covers al the essential phases, is proposed, i.e., collection of blood; preparation of blood spots; drying of blood spots; storage and transportation of DBS; elution of DBS, and finally analyses of DBS eluates. The effectiveness of this protocol was first evaluated with 1,762 coupled serum/DBS pairs for detecting markers of hepatitis B virus, hepatitis C virus, and human immunodeficiency virus infections on an automated analytical platform. In a second step, the protocol was utilized during a pilot study, which was conducted on active drug users in the German cities of Berlin and Essen.

The preparing and processing of dried blood spots (DBS) for their final analysis are still poorly standardized for most diagnostic applications. To overcome this shortcoming, a comprehensive step-by-step protocol is suggested and subsequently evaluated with regard to its effectiveness for detecting markers of viral infections.

כתמי דם מיובשים - הכנה ועיבוד לשימוש ב- Immunoassays וב -טכניקות מולקולריות

The idea of collecting blood on a paper card and subsequently using the dried blood spots (DBS) for diagnostic purposes originated a century ago. Since ...

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.

Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.

דגימת דם מוריד הזנב לרוחב של העכברוש

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

Micron-scale Phenotyping Techniques of Maize Vascular Bundles Based on X-ray Microcomputed Tomography

It is necessary to accurately quantify the anatomical structures of maize materials based on high-throughput image analysis techniques. Here, we provide a 'sample preparation protocol' for maize materials (i.e., stem, leaf, and root) suitable for ordinary microcomputed tomography (micro-CT) scanning. Based on high-resolution CT images of maize stem, leaf, and root, we describe two protocols for the phenotypic analysis of vascular bundles: (1) based on the CT image of maize stem and leaf, we developed a specific image analysis pipeline to automatically extract 31 and 33 phenotypic traits of vascular bundles; (2) based on the CT image series of maize root, we set up an image processing scheme for the three-dimensional (3-D) segmentation of metaxylem vessels, and extracted two-dimensional (2-D) and 3-D phenotypic traits, such as volume, surface area of metaxylem vessels, etc. Compared with traditional manual measurement of vascular bundles of maize materials, the proposed protocols significantly improve the efficiency and accuracy of micron-scale phenotypic quantification.

We provide a novel method to improve the X-ray absorption contrast of maize tissue suitable for ordinary microcomputed tomography scanning. Based on CT images, we introduce a set of image-processing workflows for different maize materials to effectively extract microscopic phenotypes of vascular bundles of maize.

טכניקות Phenotyping בקנה מידה מיקרון של חבילות וסקולריים תירס מבוסס על צילום רנטגן טומוגרפיה Microcomputed

It is necessary to accurately quantify the anatomical structures of maize materials based on high-throughput image analysis techniques. Here, we provide a ...

Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka (Oryzias latipes)

Sex steroids, produced by the gonads, play an essential role in brain and pituitary tissue plasticity and in the neuroendocrine control of reproduction in all vertebrates by providing feedback to the brain and pituitary. Teleost fishes possess a higher degree of tissue plasticity and variation in reproductive&#160;strategies compared to mammals and appear to be useful models to investigate the role of sex steroids and the mechanisms by which they act. The removal of the main source of sex steroid production using gonadectomy together with blood sampling to measure steroid levels has been well-established and fairly feasible in bigger fish and is a powerful technique to investigate the role and effects of sex steroids. However, these techniques raise challenges when implemented in small size teleost models. Here, we describe the step-by-step procedures of gonadectomy in both males and female Japanese medaka followed by blood sampling. These protocols are shown to be highly feasible in medaka indicated by a high survival rate, safety for the life span and phenotype of the fish, and reproducibility in terms of sex steroid clearance. The use of these procedures combined with the other advantages of using this small teleost model will greatly improve the understanding of feedback mechanisms in the neuroendocrine control of reproduction and tissue plasticity provided by sex steroids in vertebrates.

Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka Oryzias latipes

The article describes a quick protocol to gonadectomize and sample blood from the small teleost fish, using Japanese medaka (Oryzias latipes) as a model, to investigate the role of sex steroids in animal physiology.

הליכי גונדקטומיה ודגימה בדם במודל טלוסט קטן מדאקה(Oryzias latipes)

Sex steroids, produced by the gonads, play an essential role in brain and pituitary tissue plasticity and in the neuroendocrine control of reproduction in ...

Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Guinea Pig Eyes

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential application in molecular biology studies, including gene expression analyses. In the context of eye growth regulation and myopia, the RPE likely plays a role as a cellular relay for growth modulatory signals, as it is located between the retina and the two walls of the eye, such as the choroid and sclera. While protocols for isolating the RPE have been developed for both chicks and mice, these protocols have proven not to be directly translatable to the guinea pig, which has become an important and widely used mammalian myopia model. In this study, molecular biology tools were used to examine the expression of specific genes to confirm that the samples were free of contamination from the adjacent tissues. The value of this protocol has already been demonstrated in an RNA-Seq study of RPE from young pigmented guinea pigs exposed to myopia-inducing optical defocus. Beyond eye growth regulation, this protocol has other potential applications in studies of retinal diseases, including myopic maculopathy, one of the leading causes of blindness in myopes, in which the RPE has been implicated. The main advantage of this technique is that it is relatively simple and&#160;once perfected, yields high-quality RPE samples suitable for molecular biology studies, including RNA analysis.

We describe a simple and efficient method for isolating cells of the retinal pigment epithelium (RPE) cells from the eyes of young pigmented guinea pigs. This procedure allows for follow-up molecular biology studies on the isolated RPE, including gene expression analyses.

בידוד תאי אפיתל פיגמנט ברשתית מעיני חזיר גינאה

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential ...

Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an In Vitro Spontaneous Death Assay

The average lifespan of a neutrophil is less than 24 h, which limits basic research on neutrophils and the application of neutrophil studies. Our previous research indicated that multiple pathways could mediate the spontaneous death of neutrophils. A cocktail was developed by simultaneously targeting these pathways, caspases-lysosomal membrane permeabilization-oxidant-necroptosis inhibition plus granulocyte colony-stimulating factor (CLON-G), which prolonged the neutrophil lifespan to greater than 5 days without significantly compromising the neutrophil function. Concurrently, a reliable and stable protocol for assessing and evaluating neutrophil death was also developed. In this work, we show that CLON-G can prolong the neutrophil lifespan in vitro to more than 5 days, and we exhibit the lengthening of the neutrophil lifespan with FACS and confocal fluorescence microscopy. This report introduces procedures for the preparation of CLON-G and showcases an in vitro spontaneous death assay of neutrophils, which can be used for the study of neutrophils and for subsequently interrogating neutrophil death, thus providing a reliable resource for the neutrophil community.

Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an In Vitro Spontaneous Death Assay

This protocol details the preparation of CLON-G to extend the neutrophil lifespan to greater than 5 days and provides a reliable procedure for evaluating neutrophil death with flow cytometry and confocal fluorescence microscopy.

הארכת תוחלת החיים של נויטרופילים עם CLON-G ובדיקת מוות ספונטני במבחנה

The average lifespan of a neutrophil is less than 24 h, which limits basic research on neutrophils and the application of neutrophil studies. Our previous ...