המחברים מודים ריאן צ&#39;פלין וד&quot;ר גרג Rentfrow של אוניברסיטת קנטאקי המעבדה בשרים והמחלקה לבעלי החיים ומדעי מזון למתן הזדמנויות לאיסוף רקמות ניסיוניות מנוצלות במסמך זה.

נהלים המשמשים במחקר זה לא דורשים אישור מאוניברסיטת קנטאקי טיפול בבעלי חיים ועדת שימוש משום שאין בעלי חיים היו בשימוש. לפני האוסף של כל מדגם המשמש במסמך זה, כל בעלי החיים היו המומים עם בורג בשבי וexsanguinated. זה נערך במתקן בית מטבחיים בדק פדרלי באוניברסיטת קנטאקי. נציג רשמי של משרד החקלאות האמריקאי בטיחות מזון ופיקוח השירות נצפה כל הפעילויות שעסקו בבעלי החיים וטיפול בשידור חי של הפגר. .1 הכנת מכשור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למזער את כמות הזמן בין האוספים של דגימות רקמה לתחילת ניסוי, להגדיר את הציוד ולהכין מאגרים לפני איסוף רקמות ניסיוניות (או אם אנשים נוספים זמינים, משימות אלה יכולים להתרחש בו זמנית). הערה: זה לא רק מספק את הכמות הגדולה ביותר של זמן שהרקמה נשארת קיימא לבצע ניסויים, אבל חלקניסויים יכולים לרוץ במשך תקופות זמן ארוכות (או יש רצון להשלים ניסויים מרובים ביום), ולכן זה בדרך כלל רצוי להתחיל מוקדם ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יחידת כוח את המחשב קשור, ציוד רכישות נתונים, אמבט מים (לחיץ (ים)) וmyograph (ים). הנח את ציוד הכיול ביחידת myograph (ים) ולהדליק חום myograph (מוגדר מראש כדי 37.5 ° C) ולאפשר יחידות וציוד כיול לחמם למראש טמפרטורות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח קובץ הגדרות תוכנת תרשים שנוצר בעבר על המחשב ולהתחיל לרוץ (אך לא רכישת נתונים). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את הציוד עבור 10 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחיל לרכוש נתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפס כל הערוצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו, ולנהל כיול (במידת צורך) על כל ערוץ (4 ערוצים לכל multimyograph) לתקנן את האות החשמלית המסופקת ממתמר הכוח המתאים הקשורים לערוץ זה על כוח 2-g מסופק על ידי משקל מוסמך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הכיול והמרת יחידות הושלמו, לאחסן את כל הנתונים שלאחר מכן כגרם. תשתנה בהתאם מבוסס על רצונות של כל מעבדה נפרדת; הציוד והתוכנה מתירים את השימוש ביחידות אחרות, כגון milliNewtons ווולט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שקווי הגז ברורים של חסימות ולהדליק אספקת גז (95% O 2/5% CO 2) לmyograph יחידות (ים). ברציפות בגז את כל המאגרים (בתאי myograph) במהלך ההליך כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למלא את כל תאי myograph עם 70% אתנול ולספוג עבור 10 דקות, להסיר את אתנול, ולחזור לרגע 10 דקות לספוג. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת אתנול, לשטוף שלוש פעמים עם מים ללא יונים, ואחריו שלוש שטיפות עם חיץ מוכן (ראה סעיף 2 להכנת חיץ), שעזב את התוספת השלישית של חיץ בתאי. הערה: בשלב זה את הציוד יכולה להישאר ללא פעילות במדינה זו עד חיץ ורקמה מוכנה וצוות מוכן להמשיך בexperiment. </li></ol></li></ol> 2 הכנת חוצצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון חיץ L קרבס-Henseleit 1 לשימוש בתחבורה ועיבוד של דגימות רקמה מנת להגיע לריכוזים סופיים של 11.1 מ&quot;מ D-גלוקוז; 1.2 מ&quot;מ MgSO 4; 1.2 מ&quot;מ KH 2 PO 4; 4.7 מ&quot;מ KCl; 118.1 mM NaCl; 3.4 מ&quot;מ CaCl 2; 24.9 מ&quot;מ NaHCO 3. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 9.6 גרם של מלחי קרבס לתוך כ 900 מ&quot;ל של מים ללא יונים על צלחת ומערבבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים במייבש סידן כלוריד 0.373 גרם ואחריו סודיום ביקרבונט 2.1 גרם לכל ליטר של החיץ הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון חיץ גז ל20 דקות עם 95% O CO 2/5% 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר המתה בגז, כדי להתאים את pH 7.05 (סינון של חיץ מגביר pH; pH היעד סופי צריך להיות 7.4) ולהתאים את עוצמת קול עד 1 ל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן לעקר חיץ לחיץ נקי autoclaved 1 ליטר תקשורת בקבוק ולאחסן ב 4 ° C עד מוכן לשימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן קרבס-H הנפרדפתרון enseleit חיץ לשימוש בניסויי myograph כמתואר בשלב 2.1 לתחבורה קרבס-Henseleit חיץ עם תרכובות נוספות הנוגעות לניסויי ההתכווצות. הערה: בדרך כלל 2 L יספיק לניסויים מתוארים במאמר זה, אבל זה נפח ייתכן שיהיה צורך מוגבר או מופחת המבוסס על האורך של הניסוי, מספר תאי myograph, והחלפות חיץ מספר (יחסית לתוספות טיפול). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני צעד ההמתה בגז (שלב 2.1.3), להוסיף 9.1 מ&quot;ג (מחיר לליטר של חיץ שמכין) של desipramine-HCl למאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 1.0 מיקרומטר של propranolol-HCl ולהוסיף 1 מ&quot;ל (מחיר לליטר של חיץ שמכין) של פתרון זה לפתרון חיץ קרבס-Henseleit. הפוך חיץ זה ביום של שימוש ולשמור בטמפרטורות myograph הפעלה (טמפרטורה שמניבה טמפרטורת C ° 37.5 בmyograph). הערה: desipramine מתווספת למעכבת את הספיגה החוזרת של המנגנונים האמינים יוגנייםותאפשר סליקה של תוספות ניסיוניות ממאגר הרחצה כלי הדם להתרחש במהירות רבה יותר. התוספת של propranolol מונעת הלא ספציפי מחייב של תרכובות טיפול לβ-adrenergic receptors. </li></ol></li></ol> .3 איסוף והכנה של כלי דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהקדם האפשרי, להסיר את מערכת העיכול מהפגר. ברגע שבעלי החיים כבר לא מציג שום רפלקס לא רצוני, להסיר את הראש ולהסתיר ולאחר מכן להעלות את הפגר בצורה אנכית. הסרת הקרביים של מערכת העיכול (ושט אל פי הטבעת) מהפגר צריכה להתבצע על ידי אנשי בית מטבחיים מאושרים (&lt;20 דקות מהזמן של מדהים). הערה: תוך כמה זמן, מוגבל בדרך כלל על ידי המיקום / המתקן שבו מערכת העיכול שנאספה ומנהלי הפעלה סטנדרטיים או נהלי מנדט פדרלי ואחריו את הסגל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברוב המתקנים, לנהל מניפולציות של מערכת העיכולבמיקום נפרד מעיבוד של הפגר שנועד להזין את אספקת מזון. השתמש במיקום סמוך נוח שבו מערכת העיכול ניתן לקחת ופרושה לבדיקה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמערכת העיכול פרושה, לזהות את המעי הדק, פי ileocecal חיבור המעי הדק לcecum, ומקורבות ileal הארכה הפרוקסימלי לחיק ileocecal (איור 1 א). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל או סכין, מאוד קל לעשות חתך בקרום mesenteric במרכז אוגן ileal. באמצעות שתי אצבעות מורות, בבוטות לנתח את רקמת השומן וחיבור החושפת את כלי דם mesenteric (איור 1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאוגן או בליטה זו בלפדר המעיים, לנתח את ענפים מרובים (~ 2 סנטימטר אורך) של חבילות עורק ווריד mesenteric החשופות התומכות בחלק זה של המעי (איור 1 ג). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם uלשיר במלקחיים כדי לתפוס רקמות, לדאוג שלא לתפוס באופן ישיר או למשוך את כלי דם בכל עת הסרתם ככל סוג של מתיחה יכול לגרום נזק ובאופן שלילי משפיע ביצועי רקמה 14. הסרת כלי דם נעשית הטובה ביותר, על ידי חיתוך על פני כל קצה של הקטע שיש להסיר ולאחר מכן חיתוך לצד או במקביל לסעיף עכשיו מבודד. על מנת להקל, להסיר חלק מהרקמה הסובבת יחד עם כלי לספק כמה רקמה לתפוס עם זוג המלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם זוג המלקחיים, לצלול דגימת רקמה בצינור המכיל חיץ קרבס-Henseleit קרח קר ולאחסן על קרח עד עיבוד יכול להתרחש במעבדה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח דגימת רקמה על משטח חיתוך או בצלחת פטרי ובחלקו לצלול בקרח קר קרבס-Henseleit. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת 5 מלקחיים תכשיטנים #, איריס מספריים נויס, ומגדלת מנורה או לנתח היקף (2.5 להגדלת 5.0x היא מספיק), לנתח בזהירות את connecti השומן והסביבהve רקמות ולהפריד בין העורק לוריד. זיהוי פתיחת הכלי בקצה אחד של הקטע ולתפוס את fascia המקיף את הכלי עם המלקחיים בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך עם המספריים במקביל לספינה על ידי הזזה קצה המספריים מתחת fascia העלה. לאחר החתך הראשוני, השומן ורקמות חיבור יכולים להיות מנותקות עוד יותר מהספינה על ידי גדיעה כל צד עם המספריים. ודא שהכולים הם נקיים ככל האפשר, תוך מזעור כמות זמן כלי מבלים על הספסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור כלי דם לצינורות של חיץ קרבס-Henseleit הטרי ולאחסן ב 4 ° C (דגימות יכולות להישאר לאחסן עד 24 שעות לאחר איסוף ועדיין לייצר נתונים התכווצות בתוקף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות סכין גילוח, כלי פרוס לשימוש בmyograph למספר רצוי של סעיפי 2 מ&quot;מ (כדאי להשתמש מבצעה רקמה להשיג חתכים עולים בקנה אחד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבחון כל סעיף תחת SCO לנתחPE (הגדלה 12.5X) כדי להבטיח כי לכל סעיף לא חריג, סניפים, שסתומים, או נזק שטחי בטעות שנעשה במהלך נתיחה וניקוי. החלף את סעיף הכלי אם יש חריגות, סניף, שסתום, או נזק שטחי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סעיפי חנות מקובלים פרוסים כלי (שקועים בחיץ קרבס-Henseleit) על קרח או על 4 מעלות צלזיוס עד מוכן להרכבה בתאי myograph (בדרך כלל &lt;30 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לעלות על כלי השיט בmyograph ידי ההכנסה תומכת בלום ולהגדיל את המתח (באמצעות micropositioner על myograph) להיות זהיר, כדי לא למתוח את כלי מעל קריאת 2 עד 3 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שכל התאים מכוסים, לשאוב חיץ מכל התאים ולמלא עם 5.0 מ&quot;ל של חיץ ולהתחיל טיימר 15 דקות כדי להתחיל את תקופת האיזון והניסוי. </li></ol> ניסוי .4 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן את כל חלקי הספינה ל1.5 שעות כדי להשיג מיל יציבמתח טינג של 1.0 גרם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את חיץ הדגירה קרבס-Henseleit כל 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך האיזון, כל הזמן להתאים את המתח בחלקי כלי דם עד 2 גרם ולאחר מכן לאפשר להירגע עד כ 0.80 גרם. נסה שלא לאפשר כלי להירגע יותר מדי (הם עשויים לשמוט את mounts). נסה להשיג מתח בסיס יציב, שבו הכלי מחזיק מתח 1 גרם ללא צורך בהתאמה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך האיזון, להכין 1.32 M תמיסה מימית של KCl כדי לשמש כנקודת התייחסות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות השלמת איזון משביע רצון, להוסיף 500 μl של פתרון M KCl 1.32 להביא לפתרון 0.12 M בפתרון 5.5 מ&quot;ל רחצה הכלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות התוספת של 1.32 M KCl, לא להתאים את המתח באופן ידני כתגובה המקסימלי מתוספת זו משמשת להערכת כדאיות רקמות והוא יכול לשמש כדי לנרמל נתונים טיפול (לדוגמא תגובות ריכוז לgonist). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את החיץ במרווחי 15 דקות, עד המתח חזר לערך הבסיסי של 1.0 גרם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמגיעה נקודת ההתחלה, לשנות את החיץ ובו זמנית להתחיל טיימר 1 דקות. האם זה עבור כל התאים בו זמנית, כדי למנוע מדהים של זמני הפעלה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבולת הסטנדרטי שיש להוסיף ולהכין תגובה לקאמרית 1 במהלך הספירה לאחור 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף את הסטנדרטים ב25 aliquots μl לכל תא כתכתיבי ניסוי (זה שומר על הטיפול בהמשך 0.5% מהנפח הכולל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התקן האחרון נוסף, להתחיל טיימר 9 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של הדגירה סטנדרטית 9 דקות, להסיר את החיץ המכיל טיפול מהתאים ולהוסיף 5.0 מ&quot;ל של חיץ טרי, ולהתחיל את הטיימר 2.5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 4.4.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של שטיפת 2.5 דקות השניה, לשאוב התאים ולהוסיף למאגר טרי, ולהתחיל טיימר 1 דקות לספירה לאחור לתחילת seconבנוסף סטנדרטי ד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמשיך את המעגל הזה לכל תוספות סטנדרטי של היום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך התוספת סטנדרטית הסופית ודגירת 9 דקות לאחר מכן להכין את תרכובת התייחסות M KCl 1.32 לסוף בנוסף מינון התייחסות ריצה של 500 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות מרווח 1 דקות לאחר תוספת הטיפול הסופית, להוסיף KCl ולהתחיל טיימר 9 דקות. הערה: בנוסף KCl הוא לאשר כדאיות רקמות בסיומו של הניסוי ושימושי אם מתן טיפול שגורם לתגובה זניחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסיומו של הדגירה מתחם התייחסות 9 דקות הסופיות, ואקום או להסיר חיץ מכל התאים. אל תוסיף חיץ טרי. מסקנת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את קובץ תרשים, להסיר חלקים של כלי דם ולהיפטר כראוי, ולעקוב אחר הפרוטוקול הנקי עד (המסופק על ידי יצרן ויכול להיות ספציפי במעבדה) לציוד myograph. </li></ol>

<ol>
	<li>Matheson, P. J., Wilson, M. A., Garrison, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+intestinal+blood+flow.">Regulation of intestinal blood flow.</a> The Journal of surgical research. 93, 182-196 (2000).</li><li>Dobson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+and+absorption+from+the+rumen.">Blood flow and absorption from the rumen.</a> Quarterly journal of experimental physiology. 69, 599-606 (1984).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Nielsen-Kudsk, F., Poulsen, B., Ryom, C., Nielsen-Kudsk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strain-gauge+myograph+for+isometric+measurements+of+tension+in+isolated+small+blood+vessels+and+other+muscle+preparations.">A strain-gauge myograph for isometric measurements of tension in isolated small blood vessels and other muscle preparations.</a> Journal of pharmacological. 16, 215-225 (1986).</li><li>Mulvany, M. J., Aalkjaer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+small+arteries.">Structure and function of small arteries.</a> Physiological reviews. 70, 921-961 (1990).</li><li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+vasoconstrictive+potential+of+D-lysergic+acid+using+an+isolated+bovine+lateral+saphenous+vein+bioassay.">Assessment of vasoconstrictive potential of D-lysergic acid using an isolated bovine lateral saphenous vein bioassay.</a> Journal of animal science. 84, 3167-3175 (2006).</li><li>Klotz, J. L., Bush, L. P., Strickland, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+vascular+contractility+bioassay+using+bovine+right+ruminal+artery+and+vein.">A vascular contractility bioassay using bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 1944-1951 (2011).</li><li>Westendorf, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+ruminal+and+physiological+responses+to+endophyte-infected+tall+fescue.">In vitro and in vivo ruminal and physiological responses to endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of dairy science. 76, 555-563 (1993).</li><li>Strickland, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Board-invited+review:+St.+Anthony&amp;#34;s+Fire+in+livestock:+causes,+mechanisms,+and+potential+solutions.">Board-invited review: St. Anthony&amp;#34;s Fire in livestock: causes, mechanisms, and potential solutions.</a> Journal of animal science. 89, 1603-1626 (2011).</li><li>Eckert, H., Kiechel, J. R., Rosenthaler, J., Schmidt, R., Schreier, E., B, B. e. r. d. e., HO, S. c. h. i. l. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+11.">Ch. 11.</a> Ergot Alkaloids and Related Compounds. , (1978).</li><li>Rhodes, M. T., Paterson, J. A., Kerley, M. S., Garner, H. E., Laughlin, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+blood+flow+to+peripheral+and+core+body+tissues+in+sheep+and+cattle+induced+by+endophyte-infected+tall+fescue.">Reduced blood flow to peripheral and core body tissues in sheep and cattle induced by endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 69, 2033-2043 (1991).</li><li>Foote, A. P., Harmon, D. L., Strickland, J. R., Bush, L. P., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ergot+alkaloids+on+contractility+of+bovine+right+ruminal+artery+and+vein.">Effect of ergot alkaloids on contractility of bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 2944-2949 (2011).</li><li>Foote, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ergot+alkaloids+from+endophyte-infected+tall+fescue+decrease+reticuloruminal+epithelial+blood+flow+and+volatile+fatty+acid+absorption+from+the+washed+reticulorumen.">Ergot alkaloids from endophyte-infected tall fescue decrease reticuloruminal epithelial blood flow and volatile fatty acid absorption from the washed reticulorumen.</a> Journal of animal science. 91, 5366-5378 (2013).</li><li>Hocking, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+mechanical+stretch+on+smooth+muscle+function+in+saphenous+veins.">Detrimental effects of mechanical stretch on smooth muscle function in saphenous veins.</a> Journal of vascular surgery. 53, 454-460 (2011).</li><li>Smith, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+intestinal+surgery.">Bovine intestinal surgery.</a> Modern veterinary practice. 65, 705-710 (1984).</li><li>Budras, K. D., Habel, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bovine Anatomy An Illustrated Text. , (2003).</li><li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+of+lateral+saphenous+vein+serotonin+receptors+from+steers+grazing+endophyte-free,+wild-type,+or+novel+endophyte-infected+tall+fescue.">Antagonism of lateral saphenous vein serotonin receptors from steers grazing endophyte-free, wild-type, or novel endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 91, 4492-4500 (2013).</li><li>Egert, A. M., Kim, D. H., Schrick, F. N., Harmon, D. L., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+exposure+to+ergot+alkaloids+decreases+contractility+of+bovine+mesenteric+vasculature.">Dietary exposure to ergot alkaloids decreases contractility of bovine mesenteric vasculature.</a> Journal of animal science. 92, 1768-1779 (2014).</li></ol>

אזכור של שם המסחרי, מוצר קנייני, או ציוד שצוין אינו מהווה ערובה או אחריות על ידי משרד החקלאות ואינו מעיד על אישור להרחקה של מוצרים אחרים שעשויה להיות זמין.

האתגר הראשוני בפיתוח של המבדק זה היה הקמתו של אתר אוסף הדיר לכלי דם mesenteric. עקביות אתר מדגם היא קריטית, כחלק מהפונקציות של שינוי המעי הדק במהלך ההתקדמות מהמעי הריק דרך המעי וכתוצאה מכך לפדר להשתנות בדפוס דומה. סניפי ileal של עורק ווריד mesenteric היו הכי מזוהה באמצעות ציוני דר...

שינויים בזרימת דם למיטת רקמה יכולים להיות השפעה גדולה על תפקוד איבר. תפקידו עיקרי של המעי הדק הוא מזין קליטה. זרימת דם העורקי למשטח הקליטה של המעי נדרש לעליית קליטה וזרימת דם מזינה כדי לסייע בקליטת חומרים מזינים כמו digesta נע לאורך המשטח 1. ירידה בזרימת דם יכולה לגרום לירידה בספיגת חומרי מזון בשל ירידה בשיפוע transepithelial 2. בנוסף לחומרים מזינים, המעי הדק יכול גם להיות חשוף למטבוליטים משניים, תרופות, או רעלים שיפעילו השפעה על זרימת דם מקומי בלפדר. במקרה של החיים מעלה הגירה, יכולות להיות משוחררות תרכובות מfeedstuff (למשל, חומרים מזינים כגון חומצות אמינו, או רעלים כגון אלקלואידים ergot) באמצעות תהליכי תסיסה של המעי הקדמי. אם תרכובות אלו לשרוד את חילוף החומרים של חיידקים תסיסה בכרס, הם זמינים כעת לקליטהאו אינטראקציה כשהם נוסעים דרך מערכת העיכול של בעלי החיים. ישנן מספר השיטות שונות זמין כדי למדוד את זרימת דם בגוף חי (למשל, אולטראסאונד דופלר, שכינת מדידת תצרוכת דם, microspheres radiolabeled, וטכניקות מחוון דילול) שתאפשר הערכה של תרחישים ניסיוניים שונים או טיפולים. עם זאת, כדי להשיג מידע לגבי התכונות מכאניות או תרופתית של שריר חלק בכלי הדם, שיטות נותרת מוגבלות לכלי גדול עד Mulvany והלפרן 3 פרסמו מאמר המתאר את הטכניקה באמצעות חוט רכוב הכנות טבעת כלי דם בmyograph. מאז הפיתוח של טכניקה זו, שינויים ימשיכו להתבצע למערכות myograph הקשורות המאפשרות מגוון רחב של יישומים שונים להערכת מבנים צינוריים. המערכת גם הותאמה לנצל מוטות קבועות להרכבת כלי גדול יותר 4 שבו זלוףטכניקות לא רצויים. בגלל השוני בכלי ממקורות שונים אנטומיים והבחנות באותו כלי ממינים שונים של בעלי חיים, נתונים מכלי שיט והסוג של בעלי חיים לא יכול בקלות להיות אקסטרפולציה על פני כלי שונים או אותו כלי השיט בסוגים שונים של בעלי חיים 5. כתוצאה מכך, bioassays הנפרד חייב להיות מפותח ומאומתים בכל עת היבטים אלה השתנו. לאחרונה כמה bioassays פותחו עם טכנולוגיות אלה לשימוש בבקר לרוחב וריד saphenous ועורק כרס תקין ווריד 6,7. המבדק זה פותח כדי לחקור באופן ספציפי את ההשפעות שיש לי אלקלואידים ergot על כלי דם התומכים במעי הדק. נמסר כי 50-60% מאלקלואידים האכילו מופיעים בתוכן abomasal, אבל רק 5% הם התאוששו בצואת 8. סטריקלנד et al. 9 האמור בסקירה של אלקלואידים ergot, שsugg נתונים זמיןבהערכה שהמעי דקה עשויה להיות האתר החשוב ביותר לקליטת ergopeptine. אקרט et al. 10 היבטים ביולוגיים בביקורת של אלקלואידים ergot וקבע כי ברגע שהם חוצים את מחסום האפיתל, אלקלואידים ergot מועברים גם על ידי מערכת הלימפה לוריד subclavian או באמצעות וריד mesenteric ולדם פורטל. רודוס et al. 11 דיווח על ירידה בזרימת דם לתריסריון ומעי גס בפרים רב דיאטה עתירת נגוע endophyte (אלקלואיד ergot הגבוה). באמצעות המבדק עורק ווריד הכרס תקין, פוט et al. 12 הוכיחו כי אלקלואידים ergot הם vasoactive בכלי דם בכרס. פוט et al. 13 הפגינו לאחר מכן in vivo כי חשיפת כרס לתוצאות אלקלואידים ergot בזרימה דם אפיתל כרס פנימית ירד. ירידה בזרימת דם אל פני השטח הקליטה של ​​הכרס הפנימי זו בו זמנית, גרמה לירידה במזין שטף (חומצת שומן נדיפות). בהתחשב quantity של אלקלואידים ergot מעבירים למעי הדק מהמעי הקדמי; זה היה שיערו כי השפעה דומה על מערכת כלי דם של מעי דק ומזין קליטה תתרחש. הדבר זה הצריך את הפיתוח של המבדק ileal הפרוקסימלי שור עורק mesenteric ווריד.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="611">
	<tbody>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:105px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:127px;">Company</td>
			<td style="width:120px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:259px;">Comment/Description (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Multi Myograph</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">610M</td>
			<td style="width:259px;">A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">Powerlab 8/sp</td>
			<td style="width:127px;">ADIntruments</td>
			<td style="width:120px;">ML785</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">LabChart 7</td>
			<td style="width:127px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:120px;">Version 7</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Force Calibration Kit</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">100055</td>
			<td style="width:259px;">Specific to DMT myographs</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Bottle-top Filter</td>
			<td style="width:127px;">Nalgene</td>
			<td style="width:120px;">595-4520</td>
			<td style="width:259px;">0.22 um pore size; 45 mm neck size</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">#5 Jewler&#8217;s Forceps</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">555008FT</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of forceps can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Noyes Iris Scissors</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">18-1510</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of scissors can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Dissecting Scope</td>
			<td style="width:127px;">Zeiss</td>
			<td style="width:120px;">Stemi 2000-C</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of dissecting light microscope will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Adjustable Tissue Matrice</td>
			<td style="width:127px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:120px;">TM C12</td>
			<td style="width:259px;">This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Krebs-Hensleit Buffer</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">K3753-10x1L</td>
			<td style="width:259px;">It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:105px;">Calcium chloride dehydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">C7902-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">S5761-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Desipramine-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">D3900-5G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Propranolol-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P0884-1G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">KCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P9333-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:105px;">95% O2/5% CO2</td>
			<td style="width:127px;">Scott Gross</td>
			<td style="width:120px;">UN3156</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolating and using sections of bovine mesenteric artery and vein as a bioassay to test for vasoactivity in the small intestine

מערכות עיכול של יונקים כל הזמן נחשפות לתרכובות (רצויות ולא רצויים), כי יכולה להיות השפעה על זרימת דם ומהמערכת ש. שינויים בזרימת דם למעי דק עלולים לגרום להשפעות על פונקציות הקליטה של ​​האיבר. עניין מיוחד ברעלים שוחררו ממספוא באמצעות תהליכי תסיסה ועיכול פיתח במעלי גירה כאזור שבו אפשר לשפר את היעילות יצרנית. הווידאו הקשורים במאמר זה מתאר המבדק במבחנה פותח לתרכובות מסך לvasoactivity בחתכים מבודדים של עורק mesenteric שור והווריד באמצעות multimyograph. ברגע שכלי הדם הם רכובים וequilibrated בmyograph, המבדק עצמו יכול להיות בשימוש: ככלי מיון כדי להעריך את תגובת ההתכווצות או vasoactivity של תרכובות של עניין; לקבוע את הנוכחות של סוגי קולט ידי פרמקולוגית מיקוד קולטנים עם אגוניסט הספציפיים; לקבוע את תפקידו של קולטן עם הנוכחות של יריבים אחד או יותר; או לקבוע אינטראקציות פוטנציאליות של תרכובות של עניין עם יריבים. דרך כל זה, הנתונים נאספים בזמן אמת, רקמה שנאספו מבעלי חיים יחידים יכולה להיות חשופה למספר רב של טיפולים ניסיוניים שונים (יתרון במבחנה), ומייצגת את כלי דם בכל צד של מיטת הנימים לספק מדויק תמונה של מה שיכול להיות שזה קורה באספקת הדם מביא וefferent תמיכה המעי הדק.

כלי הדם המשמשים לייצור התוצאות כללו נאספו מ6 שוורי הולשטיין (425 קילוגרם ± 8) בתוך מרווח 3 שבוע. דוגמא לתגובה התכווצות וריד mesenteric האופייני לKCl ותוספות טיפול ההולך וגוברות בריכוז מוצגת באיור 2. סדר הגודל של תגובה ישתנה חלקם עם הגודל של כלי השיט (מתואם עם הגודל של ה?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine at JoVE.com

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

המעי הדק הוא לעתים קרובות נחשף לרעלים שיכולים להשפיע על זרימת דם ולהשפיע לרעה על מזין קליטה. שימוש בעורק multimyograph וmesenteric ווריד מבודד, תרכובות או רעלים של עניין יכול להיות מוקרן לvasoactivity.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

isolating-using-sections-bovine-mesenteric-artery-vein-as-bioassay-to

Research

JoVE Journal

Medicine

9.6K Views.  USDA-Agricultural Research Service.  המעי הדק הוא לעתים קרובות נחשף לרעלים שיכולים להשפיע על זרימת דם ולהשפיע לרעה על מזין קליטה. שימוש בעורק multimyograph וmesenteric ווריד מבודד, תרכובות או רעלים של עניין יכול להיות מוקרן לvasoactivity. 

Video: Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, the de novo mutation rate in humans is relatively high, so new mutations are generated at a high frequency in the population. However, de novo mutations have not been reported in most common diseases. Mutations in genes leading to severe diseases where there is a strong negative selection against the phenotype, such as lethality in embryonic stages or reduced reproductive fitness, will not be transmitted to multiple family members, and therefore will not be detected by linkage gene mapping or association studies. The observation of very high concordance in monozygotic twins and very low concordance in dizygotic twins also strongly supports the hypothesis that a significant fraction of cases may result from new mutations. Such is the case for diseases such as autism and schizophrenia. Second, despite reduced reproductive fitness1 and extremely variable environmental factors, the incidence of some diseases is maintained worldwide at a relatively high and constant rate. This is the case for autism and schizophrenia, with an incidence of approximately 1% worldwide. Mutational load can be thought of as a balance between selection for or against a deleterious mutation and its production by de novo mutation. Lower rates of reproduction constitute a negative selection factor that should reduce the number of mutant alleles in the population, ultimately leading to decreased disease prevalence. These selective pressures tend to be of different intensity in different environments. Nonetheless, these severe mental disorders have been maintained at a constant relatively high prevalence in the worldwide population across a wide range of cultures and countries despite a strong negative selection against them2. This is not what one would predict in diseases with reduced reproductive fitness, unless there was a high new mutation rate. Finally, the effects of paternal age: there is a significantly increased risk of the disease with increasing paternal age, which could result from the age related increase in paternal de novo mutations. This is the case for autism and schizophrenia3. The male-to-female ratio of mutation rate is estimated at about 4&#x2013;6:1, presumably due to a higher number of germ-cell divisions with age in males. Therefore, one would predict that de novo mutations would more frequently come from males, particularly older males4. A high rate of new mutations may in part explain why genetic studies have so far failed to identify many genes predisposing to complexes diseases genes, such as autism and schizophrenia, and why diseases have been identified for a mere 3% of genes in the human genome. Identification for de novo mutations as a cause of a disease requires a targeted molecular approach, which includes studying parents and affected subjects. The process for determining if the genetic basis of a disease may result in part from de novo mutations and the molecular approach to establish this link will be illustrated, using autism and schizophrenia as examples.

Molecular genetic strategy for finding de novo mutations causing common disorders such as autism and schizophrenia.

אסטרטגיה לזהות מוטציות דה נובו בהפרעות נפוצות כגון אוטיזם וסכיזופרניה

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

התכווצות העורקים mesenteric ללימודי הרפיה באמצעות Myography בנקאית אוטומטית

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model creating an artificial fistula between the common carotid artery (CCA) and the external jugular vein (EJV) has been widely described and proved technically feasible. This construct provokes a consistent cerebral venous hypertension (CVH), and therefore has helped studying the contribution of venous hypertension to formation, clinical symptoms, and prognosis of brain AVMs and dural AVFs. Equivalent mice models have been only scarcely described and have shown trouble with stenosis of the fistula. An established murine model would allow the study of not only pathophysiology but also potential genetic therapies for these cerebrovascular diseases.
We present a model of arteriovenous fistula that produces a durable intracranial venous hypertension in the mouse. Microsurgical anastomosis of the murine CCA and EJV can be difficult due to diminutive anatomy and frequently result in a non-patent fistula. In this step-by-step protocol we address all the important challenges encountered during this procedure. Avoiding excessive retraction of the vein during the exposure, using 11-0 sutures instead of 10-0, and making a carefully planned end-to-side anastomosis are some of the critical steps. Although this method requires advanced microsurgical skills and a longer learning curve that the equivalent in the rat, it can be consistently developed.
This novel model has been designed to integrate transgenic mouse techniques with a previously well-established experimental system that has proved useful to study brain AVMs and dural AVFs. By opening the possibility of using transgenic mice, a broader spectrum of valid models can be achieved and genetic treatments can also be tested. The experimental construct could also be further adapted to the study of other cerebrovascular diseases related with venous hypertension such as migraine, transient global amnesia, transient monocular blindness, etc.

We describe a method for creating a reliable model of cerebral venous hypertension in the adult mouse. This model has been widely described and tested in the rat. This new counterpart in the mice opens the possibility of using genetic modified animals and thereby broadens the applications of the model.

למבוגרים עכבר ורידי יתר לחץ דם דגם: עורק תרדמה משותף לחיצוני הצוואר וריד השקה.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

הערכת myogenic תגובה וVasoactivity בעורקי ההתנגדות mesenteric שימוש Myography לחץ

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. Intra-tracheal inoculation of a known amount of bacteria has been successfully used to reproduce the pathogenesis of pneumonia which then develops into sepsis. Monitoring hemodynamic parameters and providing standard clinical treatment including infusion of antibiotics, fluids and drugs to maintain blood pressure is critical to simulate routine supportive care in this model but to do so requires both arterial and venous vascular access. The video details the surgical technique for implanting carotid artery and common jugular vein catheters in an anesthetized rat. Following a 72 hr recovery period, the animals will be re-anesthetized and connected to a tether and swivel setup attached to the rodent housing which connects the implanted catheters to the hemodynamic monitoring system. This setup allows free movement of the rat during the study while continuously monitoring pressures, infusing fluids and drugs (antibiotics, vasopressors) and performing blood sampling.

Vascular accesses to measure hemodynamics, provide fluids and perform blood sampling are important to any small animal model study. We present a technique for implanting catheters into the carotid artery and the common jugular vein in an anesthetized rat for connecting to a system to perform monitoring, infusions and sampling.

צנתור של עורק התרדמה וצוואר הווריד לבצע צעדים המודינמית, חליטות ודגימת דם במודל עכברוש מודע

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe the use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations of superior and uniform quality to that which can be achieved by hand. The device comprises a base that holds 4 stainless steel rods and a top, which acts a cutting guide. The rods are inserted into the lumen of the small intestine [divided into thirds] and the colon. The rods and samples are then placed over a piece of filter paper or card into the holding slots in the base of the device. The top of the device is then positioned and serves as a cutting guide. The two angled sections in the center of the top piece are used to guide a knife or scalpel and cut the intestines longitudinally on the top of the rods. Once the intestinal sections have been cut, the top is removed and the card,&#160;tissue and rods gently removed from the device and placed on the bench. The rods are then gently rolled sideways to flatten and stick the intestinal segments onto the underlying piece of filter paper or card. The final preparation can then be examined or fixed and stored for later analysis. The preparations are invaluable for the study of intestinal changes in normal or genetically modified mouse models. The preparations have been used for the study and quantification of the effects of inflammation (colitis), damage, pre-cancerous lesions (aberrant crypt foci (ACFs) and mucin depleted foci (MDFs)) and polyps or tumors.

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

מכשיר פשוט להכין במהירות mounts כל ממעי העכבר

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

המנגנונים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן באמצעות מבודד את Perfused המעי הדק עכברוש

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a promising therapeutic target in many disorders, such as autoimmune diseases, atherosclerosis, and cancer. RNAi-mediated gene silencing is a valuable approach of choice to probe and manipulate macrophage function; however, the transfection of macrophages with siRNA is often considered to be technically challenging, and, at present, few methodologies dedicated to the siRNA transfer to macrophages are available. Here, we present a protocol of using polyethyleneimine-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles (PEI-SPIONs) as a vehicle for the targeted delivery of siRNA to macrophages. PEI-SPIONs are capable of binding and completely condensing siRNA when the Fe:siRNA weight ratio reaches 4 and above. In vitro, these nanoparticles can efficiently deliver siRNA into primary macrophages, as well as into the macrophage-like RAW 264.7 cell line, without compromising cell viability at the optimal dose for transfection, and, ultimately, they induce siRNA-mediated target gene silencing. Apart from being used for in vitro siRNA transfection, PEI-SPIONs are also a promising tool for delivering siRNA to macrophages in vivo. In view of its combined features of magnetic property and gene-silencing ability, systemically administered PEI-SPION/siRNA particles are expected not only to modulate macrophage function but also to enable macrophages to be imaged and tracked. In essence, PEI-SPIONs represent a simple, safe, and effective nonviral platform for siRNA delivery to macrophages both in vitro and in vivo.

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

We describe a method of using polyethyleneimine (PEI)-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles for transfecting macrophages with siRNA. These nanoparticles can efficiently deliver siRNA to macrophages in vitro and in vivo and silence target gene expression.

חלקיקי תחמוצת ברזל מצופה Polyethyleneimine כרכב למסירה של RNA מפריעות קטן כדי מקרופאגים במבחנה , In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...