The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

הפרוצדורות השונות והמתת החסד ההומנית מאושרים על ידי הוועדה האתית מוסדות מארחים ועל ידי הגופים רגולטוריים המתאימים. המתת חסד מושגת בדרך כלל באמצעות CO 2 מחנק ואחריו נקע בצוואר הרחם. 1. התקן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכונת החלק העיקרי של הבסיס של המכשיר מחוץ לגוש מוצק של שרף אצטיל צפיפות גבוהה, כפי שתוארו בכתב היד הזה. בכל קצה ליצור רצועות 3 מ&quot;מ גבוה גבוהות, וחלק מכונה מתוך 2.5 מ&quot;מ מטעים אלה לקחת את המוטות (ראה איור 2 ואיור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך מוטות מפלדת אל-חלד בקוטר 2.4 מ&quot;מ עם קצוות מעוגלים. הערה: המסגרת העיקרית של המכסה הייתה במכונה מתוך צלחת duralumin. מספר מוגבל של מכשירים סיימו זמינים ד&quot;ר Goodlad. </li></ol> 2. שימוש במכשיר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את המעי הדק ומעי גס מחלל הבטן באמצעות מספרייםואצבעות בכפפות. הסר את לפדר על ידי מחזיק אותו עם מלקחיים מעוקלים ומשייכתו בעדינות מהמעי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את המעיים עם נאגר מלוח פוספט הקר (PBS, pH 7.4) באמצעות קצה פיפטה סוג Gilson, שנכרת בסופו של הדבר הרחב יותר שלה, כך שניתן להתאים אותו מזרק פלסטיק הולם 10 או 20 מיליליטר luer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המעי דק (SB) לגיליון של נייר מגבת ומתחלקים לשלושה חלקים שווים באורך (הפרוקסימלי, אמצע, ודיסטלי - SB1, SB2 וSB3) באמצעות מספריים. הסר את cecum ולפרוס את המעי הגס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך כמה חתכים קטנים מאוד למגזרי מעיים עם מספריים כדי לאפשר הנוזל לברוח והנח גיליון של נייר מגבת על המעיים ובעדינות לרוץ אצבע על ההכנות לסחוט את הנוזל ולמחוק יבשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את החלקים ולהכניס את מוטות הנירוסטה שהרטיבו בעבר על ידי שריה בכוס של פוספט שנאגרו מלוח. הערה: המעי יכול להיות בverted אם כך רצוי (הפוך לחלוטין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תווית חתיכה לחתוך נייר כרטיס או מסנן לגודל שיתאים לבסיס של המכשיר. העיפרון הוא הטוב ביותר, כפי שהוא אינו מושפע על ידי כמעט כל הפתרונות. תאריך נתיחה שלאחר המוות, קוד ניסיוני ומספר זיהוי של בעלי החיים שהציע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הכרטיס או נייר סינון לתוך הבסיס של המכשיר. הכנס את המוטות ומעיים לתוך החריצים בבסיס של המכשיר. ודא שהקצה הפרוקסימלי של המגזרים ממוקם באופן אחיד. הקצוות הפרוקסימלי צריכים להיות ליד תוויות הכרטיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החתיכה של המכשיר על הבסיס העליונה. השתמש בברים בזווית כדי להדריך את להב סכין מנתחים לחתוך longitudinally הסעיפים. הערה: אם זה עוזר לי הרקמה היא בעדינות ובזהירות שנערכה עם אצבע כדי לוודא שהוא לא זז עם הסכין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את חתיכת המכשיר העליונה. מוציא בזהירות את נייר הסינון ורקמות (עדיין על המוטות שלהם). הערה: פיסת נוקשה כרטיס ממוקמת מתחת לfilנייר ter יסייע להרמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעט רטוב (עם אצבע עטויה בכפפה הטבולה בPBS) המגזרים. מגלגל את המוט, צד לצד כדי לפתוח את הבטן ולהפיץ אותו שטוח. אז הרקמה תדבק נייר הסינון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחינה ויזואלית לבחון את ההיערכות לכל נגעי ברוטו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הרקמה דבקה נייר הסינון למקבע מכיל אמבטיה רדודה (או תיבת כריך). הערה: לאחר הרקמות שומרת על נייר הסינון או לכרטיס הוא יישאר מחובר היטב. מגוון רחב של fixatives יכול לשמש כדי לשמר את ההכנה. מומלץ שהנוזל של Carnoy צריך לשמש למחקר של proliferations תא המעיים 6, המהווה את הקיבעון האידיאלי לשיטות התפשטות תאים הטובות ביותר; עם זאת פורמלין או יכול לשמש גם רב fixatives אחר אם נקודות קצה אחרות נדרשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הקיבוע (3 שעות בדרך כלל), להעביר את ההכנות לאתנול 70%. אז יכולות להיות מאוחסנות הדגימות עד נדרשת. הכנות גלהיחקר en פנים ו / או המשמש להכנת דגימות היסטולוגית עבור H &amp; E או טכניקות צביעה היסטולוגית אחרות, אימונוהיסטוכימיה ו / או הכלאה באתר. הערה: קיבעון ממושך יכול להפחית תגובתיות immunohistochemical ו / או בתגובתיות הכלאה באתר. תיבות כריך פוליפרופילן הן אידיאליים לאחסון מספר רב של ההכנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם נדרש רקמות קבועות מהמגזרים השונים במערכת העיכול יכול להפוך להיות &quot;לחמניות שוויצרי &#39;ומוכתם במגוון השלם של שיטות היסטולוגית 6 כוללים אלה שתוארו לעיל. כדי להפוך &#39;רול שוויצרי&#39; מגזרי המעיים יוסרו מנייר הסינון, התגלגל מקל קוקטייל או קיסם, מאובטח עם סיכת אנטומולוגיה ומעובד לשעוות הטבעת 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם נדרש, להכתים את הרקמה בתפזורת עם תילן הכחול לדמיין מוקדי קריפטה הסוטים 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון ההכנות קבועות בפנאי. </li></ol>

<ol>
	<li>Goodlad, R. A., Alison, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Cancer+Handbook."> Cancer Handbook.</a> , 243-262 (2007).</li><li>Ward, J. M., Treuting, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+intestinal+epithelial+carcinogenesis:+pathology+and+preclinical+models.">Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models.</a> Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).</li><li>Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Training+mouse+pathologists:+ten+years+of+workshops+on+the+Pathology+of+Mouse+Models+of+Human+Disease.">Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease.</a> Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).</li><li>Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+influences+on+polyp+phenotype+in+multiple+intestinal+neoplasia+mice.">Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice.</a> Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).</li><li>Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+device+to+rapidly+prepare+whole+mounts+of+murine+intestine.">A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine.</a> Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).</li><li>Alferez, D., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+best+measure+cell+proliferation+in+samples+from+the+intestine.">To best measure cell proliferation in samples from the intestine.</a> Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).</li><li>Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+aberrant+crypt+foci+and+colonic+carcinoma+in+dimethylhydrazine-treated+rats+varies+in+a+site-specific+manner+and+depends+on+tumor+histology.">The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology.</a> Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).</li><li>Park, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+epidermal+growth+factor+and+dimethylhydrazine+on+crypt+size,+cell+proliferation,+and+crypt+fission+in+the+rat+colon.+Cell+proliferation+and+crypt+fission+are+controlled+independently.">Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently.</a> Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).</li><li>Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-depleted+foci+(MDF)+in+the+colon+of+rats+treated+with+azoxymethane+(AOM)+are+useful+biomarkers+for+colon+carcinogenesis.">Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis.</a> Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li><li>Goodlad, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+signaling+reduces+tumor+burden+in+the+ApcMin/++mouse+model+of+early+intestinal+cancer.">Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer.</a> Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).</li><li>Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistant+carbohydrates+stimulate+cell+proliferation+and+crypt+fission+in+wild-type+mice+and+in+the+Apc(Min/+)+mouse+model+of+intestinal+cancer,+association+with+enhanced+polyp+development.">Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development.</a> Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

המכשיר מאוד מאיץ את התהליך, כך ששני מפעילים יכולים נתיחה לאחר מוות בעכבר באופן מלא בתוך 6 דקות. זה יכלול בדיקה חזותית לנגעי ברוטו ברורים ומשקל ותיקון האיברים העיקריים. זה גם יאפשר למפעילים לשטוף, למחוק ולשקול את הקיבה, מעי אטום, מעי דק ומעי גס ולהכין את כל mounts. הרקמה שיט...

העכבר והעכבר המהונדס גנטי 1-3 הם מודל לא יסולא בפז ללימוד פתולוגיות שונות במיוחד סרטן והקשר שלה לדלקת במערכת העיכול. זה בדרך כלל דורש ההכנה של mounts של המעי דק ו / או מעי גס כולו. ההכנה של כל mounts ניתן לעשות עם זוג דיוק מספריים לקזז אבל זה יכול לקחת כ -20 דקות לכל עכבר 4. זה לא מעשי מאוד למחקרים השוואתיים, הדורשים כמות משמעותית של עכברים (10 אומרים לנושא הקבוצה לניתוח סטטיסטי). בנוסף, אורך הזמן שלוקח מגביר את הסיכון של השפלה רקמה. ניסיון להקל על בעיה זו הוביל למשפטו של עזרי הכנת חיתוך שונים. הראשון היה מבוסס על סדרה של לוחות מתכת, עם מטעי חיתוך, אבל הצלחות טשטשו את הרקמה והחיתוך היה קשה ובכך לשלוט. Conventionaעיפרון שישה-צדדי l לבסוף סיפק השראה למכשיר החיתוך, כפי שאנו יכולים לראות כיצד צורת חצי עיפרון תעשה מדריך טוב לאזמל (איור 1). זה הביא לעיצוב מסגרת עם ארבעה מדריכי חיתוך 5. היעילות של מכשיר זה הייתה דרמטית כמו ההכנות באיור 4 מדגימות את ההבדל בין הכנת המספריים והכנת ההתקן. צמרות המכשירים המקוריים נבנו מכמה חתיכות של מתכת, אך מאוחר יותר אלה, והמודל הנוכחי מכונה מתוך פיסת duralumin מוצקה. הבסיס היה במכונה מתוך שרף בצפיפות גבוהה באיכות הגבוהה ביותר. המכשיר הוכיח להיות תועלת רבה להכנת mounts של מעי עכבר כל שהיא במידה רבה מאיצה את ומשפרת את האיכות ועקביות של ההכנות, שיש מגוון רחב של יישומים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Delrin</td>
			<td>Ryan Plastics, Earls Barton, UK</td>
			<td>N/A</td>
			<td>High-density acetal resin similar material would suffice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duralumin plate</td>
			<td>Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finished device(s) ready for use</td>
			<td>Contact Dr Goodlad&#160; r.goodlad@imperial.ac.uk</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Contact&#160; r.goodlad@imperial.ac.uk&#160; for supply details</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine

הכנת mounts של מעי הדק ומעי גס עכבר לניתוח או כימות שלאחר מכן כל יכולה להיות זמן רב וקשה. אנו מתארים את השימוש במכשיר פשוט לחתוך ומעיים עכבר &#39;גליל&#39; להכין במהירות הכנות הר שלמות של איכות מעולה ואחידה לזה שיכול להיות מושגת על ידי יד. המכשיר כולל בסיס שמחזיק 4 מוטות נירוסטה ועליונה, הפועל מדריך חיתוך. המוטות מוכנסות לתוך חלל המעי הקטן [מחולק לשלישים] והמעי הגס. המוטות והדגימות לאחר מכן הניחו על פיסת נייר סינון או כרטיס לחריצי ההחזקה בבסיס של המכשיר. חלקיו העליונים של המכשיר ולאחר מכן ממוקם ומשמש כמדריך חיתוך. שני הסעיפים בזווית במרכז פיסה העליונה משמשים כדי להנחות את סכין או אזמל ולחתוך את המעיים longitudinally בחלק העליון של המוטות. ברגע שחלקי המעי קוצצו, העליון מוסר ואת הכרטיס, TissUE ומוטות להסיר בעדינות את המכשיר והניח על הספסל. המוטות אז בעדינות התגלגלו הצידה כדי לשטח ואת מקל מגזרי מעיים על פיסת נייר סינון או כרטיס הבסיסית. ההכנה הסופית ואז ניתן לבדוק או קבועה ומאוחסנות לניתוח מאוחר יותר. ההכנות רבות ערך לחקר שינויים במעי במודלים של עכברים נורמלים או מהונדסים גנטי. ההכנות כבר בשימוש למחקר וכימות של ההשפעות של דלקת (דלקת המעי הגס), נזק, נגעים טרום סרטניים (מוקדי קריפטה הסוטים (ACFs) וmucin מדולדלים מוקדים (MDFs)) ופוליפים או גידולים.

פוליפים הם קלים לזהות תחת סטראו עם מקור אור קר לצד להאיר את הרקמה (איור 4). זה מועיל כדי לסמן את הכרטיס עם סימני עיפרון כאשר פוליפ הוא ציין כדי שהניקוד ניתן לדון בהמשך ומפעילים שונים יכולים להגיע להסכם. הרקמה יכולה להיות גם בתפזורת מוכתמת [עם מתילן הכחול] לזהות ...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine at JoVE.com

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

מכשיר פשוט להכין במהירות mounts כל ממעי העכבר

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

a-simple-device-to-rapidly-prepare-whole-mounts-of-the-mouse-intestine

Research

JoVE Journal

Medicine

19.4K Views.  National Institutes of Health. The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Video: A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

מדידה מדויקת ופשוטה 1β-IL Pro-ציטוקין דלקתי באמצעות גירוי Assay Whole Blood

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

שיטה פשוטה של ​​אינטובציה ריאות המאוסות

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

דגם פגם עצם הירך קריטית בגודל פשוט בעכברים

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with conjunctiva. Patients suffer from recurrent corneal defects, pain, inflammation, and loss of vision.
Previously, a murine model of LSCD was described and compared to two other models. The goal was to produce a consistent mouse model of LSCD that both mimics the phenotype in humans and lasts long enough to make it possible to study the disease pathophysiology and to evaluate new treatments. Here, the technique is described in more detail.
A motorized tool with a rotating burr has been designed to remove the rust rings from the corneal surface or to smooth the pterygium bed in patients. It is a suitable device to create the desired LSCD model. It is a readily available, easy-to-use tool with a fine tip that makes it appropriate for working on small eyes, as in mice. Its application prevents unnecessary trauma to the eye and it does not result in unwanted injuries, as often is the case with chemical injury models. As opposed to a blunt scraper, it removes the epithelium with the basement membrane. In this protocol, the limbal area was abraded two times, and then the whole corneal epithelium was shaved from limbus to limbus. To avoid stroma injury, care was taken not to brush the corneal surface once the epithelium was already removed.

The following article provides an easy, reproducible technique to effectively create a sustainable mouse model of limbal stem cell deficiency (LSCD). This animal model is useful in testing and comparing the efficacy of treatments for limbal stem cell diseases.

נוהל מכני פשוט ליצור מחסור בתאי גזע limbal עכבר

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have immunosuppressive potential and have been shown to suppress inflammation in mouse models of intestinal inflammation, even though the route of administration can limit their homing and effectiveness 1,3,4,5. Local application of MSCs to colonic injury models has shown greater efficacy at ameliorating inflammation in the colon. However, there is paucity of data on techniques to enhance the localization of human bone marrow-derived MSCs (hMSCs) to the small intestine, the site of inflammation in the SAMP-1/YitFc (SAMP) model of experimental Crohn&#39;s disease. This work describes a novel technique for the ultrasound-guided intracardiac injection of hMSCs in SAMP mice, a well-characterized spontaneous model of chronic intestinal inflammation. Sex- and age-matched, inflammation-free AKR/J (AKR) mice were used as controls. To analyze the biodistribution and the localization, hMSCs were transduced with a lentivirus containing a triple reporter. The triple reporter consisted of firefly luciferase (fl), for bioluminescent imaging; monomeric red fluorescent protein (mrfp), for cell sorting; and truncated herpes simplex virus thymidine kinase (ttk), for positron emission tomography (PET) imaging. The results of this study show that 24 h after the intracardiac administration, hMSCs localize in the small intestine of SAMP mice as opposed to inflammation-free AKR mice. This novel, ultrasound-guided injection of hMSCs in the left ventricle of SAMP mice ensures a high success rate of cell delivery, allowing for the rapid recovery of mice with minimal morbidity and mortality. This technique could be a useful method for the enhanced localization of MSCs in other models of small-intestinal inflammation, such as TNF&#916;RE6. Future studies will determine if the increased localization of hMSCs by intra-arterial delivery can lead to increased therapeutic efficacy.

Murine studies in models of colonic inflammation have demonstrated that a small percentage (1 - 5%) of mesenchymal stem cells (MSC) injected intravenously or intraperitoneally home to the inflamed colon1,2. This study shows that ultrasound-guided intracardiac injections of MSCs result in increased localization to the intestine.

הזרקת Intracardiac מונחה אולטרה סאונד של גזע Mesenchymal האנושי כדי להגדיל את יונת אל המעי לשימוש במודלים מאתר של מחלות מעי דלקתיות ניסיוני

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer that often results in severe short bowel syndrome-like adverse effects including bile acid diarrhea, dehydration, electrolyte disturbances, and nutrient malabsorption. Here we introduce a murine ileal resection model, termed ileectomy, to evaluate tissue communication and the maintenance of systemic homeostasis. After ileal resection, circulating blood is permanently devoid of the ileum-specific endocrine hormone fibroblast growth factor 15 (FGF15), which releases its endocrinal inhibition of bile acid synthesis in the liver. In combination with the increased production and abolished reabsorption of bile acids after removing the ileum, mice that underwent surgery suffer from bile salt overaccumulation in the intestine and associated diarrhea, morbidity, and mortality. Novel usage of the surgery model introduced in this study may provide mechanistic and functional insights into ileal control of systemic metabolic regulation in physiology and disease.

Small intestine-dependent bile acid reabsorption and feedback inhibition of hepatic bile acid synthesis is important for systemic homeostasis and health. In this study, we describe a mouse model for ileal resection to evaluate ileectomy-induced bile malabsorption, overaccumulation, and toxicity in mouse intestine.

Ileectomy-induced מרה Overaccumulation במעי העכבר

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

המנגנונים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן באמצעות מבודד את Perfused המעי הדק עכברוש

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

A Modified Simple Method for Induction of Myocardial Infarction in Mice

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI remodeling and evaluation of novel therapeutics. Different methods (e.g., isoproterenol treatment, cryoinjury, coronary artery ligation, etc.) have been used to induce MI. Compared with isoproterenol treatment and cryoinjury, coronary artery ligation may better reflect the ischemic response and chronic remodeling after MI. However, traditional methods for coronary ligation in mice are technically challenging. The current study describes a simple and efficient process for induction of MI in mice with readily available materials. The mouse chest skin was cut open under stable anesthesia. The heart was immediately externalized through the intercostal space after blunt separation of the pectoralis major and pectoralis minor. The left anterior descending branch (LAD) was ligated with a 6-0 suture 3 mm from its origin. Following LAD ligation, staining with 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) indicated successful induction of MI and temporal changes of post-MI scar size. Meanwhile, survival analysis results showed overt mortality within 7 days after MI, mainly due to cardiac rupture. Moreover, post-MI echocardiographic assessment demonstrated successful induction of contractile dysfunction and ventricular remodeling. Once mastered, an MI model can be established in mice within 2-3 min with readily available materials.

Under adequate anesthesia, the mouse heart was externalized through the intercostal space, and myocardial infarction was successfully induced by ligating the left anterior descending artery (LAD) using materials readily available in most laboratories.

שיטה פשוטה שונה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI ...

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images from which the retinal thickness can be calculated. Although OCT is widely used in clinical practice, its application in basic research is not as prevalent, especially in small animals such as mice. Because of the small size of their eyeballs, it is challenging to conduct fundus imaging examinations in mice. Therefore, a specialized retinal imaging system is required to accommodate OCT imaging on small animals. This article demonstrates a small-animal-specific system for OCT examination procedures and a detailed method for image analysis. The results of retinal OCT examination of very-low-density lipoprotein receptor (Vldlr) knockout mice and C57BL/6J mice are presented. The OCT images of C57BL/6J mice showed retinal layers, while those of Vldlr knockout mice showed subretinal neovascularization and retinal thinning. In summary, OCT examination could facilitate the noninvasive detection and measurement of retinopathy in mouse models.

Here, we describe an in vivo imaging technique using optical coherence tomography to facilitate the diagnosis and quantitative measurement of retinopathy in mice.

יישום טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית למודל עכבר של רטינופתיה

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...