Funding from the Australian Research Council (ARC) and National Health and Medical Research Council (NHMRC) is gratefully acknowledged.

The authors have nothing to disclose.

מודל cannulation הלימפה mesenteric העכברוש מאפשר כימות ישירה של הריכוז ושיעור התחבורה של תאים ומולקולות (כגון שומנים ותרופות) מהמעי לימפה ושינויים אלה המתרחשים בתגובה שונים לאתגר של חומרים שונים (תזונה , אנטיגן, תרופות, ניסוחים, וכו &#39;) 10,27 ומחלה (סרטן, וירוסים, קוליט?...

הלימפה זורמת מהמעי הדק באמצעות תהליך חד-כיווני שמקורו בlacteals היחיד שנמצאים בתוך כל אחד villi מעיים הקטן 1. Lacteals יחסית חדירים לנוזלים, מקרו-מולקולות ותאים והיווצרות הלימפה ובכך מתחיל עם כנסתם של הגורמים הללו בlacteals. לימפה הראשונית בlacteals זורמת לאחר מכן מהמעי באמצעות רשת של microvessels הלימפה, איסוף (מביא) כלי הלימפה, סדרה של בלוטות לימפה mesenteric וסופו של דבר כלי הלימפה הודעה קטרי (efferent). בתוך צמתים, הלימפה עוברת דרך סדרה של הסינוסים לשדיים בי חילופי מתרחש בתאי תושב צומת חיסוניים וכן כחומר הזנת הצומת מהדם. כל הלימפה זורמת מהמעי הדק מתכנסת סופו של דבר לצינור לימפה mesenteric מעולה efferent ולאחר מכן ציסטרנה כילי. ציסטרנה כילי גם אוספת לימפה ניקוז הרקמות היקפי הזנב, intestINAL, אזורים וכבדים והמותני מצטרף הצינור לימפה בבית החזה יחד עם הלימפה מחלל החזה וחלקי גולגולת של הגוף. הצינור לימפה בבית החזה מרוקן הלימפה ישירות למערכת הוורידים בצומת של ורידי הצוואר וsubclavian הפנימיים השמאלי. הפרוטוקול המתואר כאן, המאפשר לאוסף של הלימפה ישירות מהצינור לימפה mesenteric מעולה, ובכך מקל על הניתוח של גורמים שונים העוברים ישירות מהמעי למחזור הדם המערכתי (הכללי) באמצעות מערכת הלימפה המעיים. הפונקציות הפיזיולוגיות הגדולות שהוקצו למערכת הלימפה המעיים הן לשמור על מאזן נוזלים, כדי להקל על שומנים בדם וקליטת מולקולת lipophilic, ולאפשר לתגובות חיסוניים מתאימות 1. תאי גידול ווירוסים גם להפיץ באמצעות lymphatics המעיים 2-4 ומפתח שינויים להתרחש בתוך lymphatics בכמה פתולוגיות דלקתיות וחילוף חומרים 5-7. יכולnulation של הצינור לימפה mesenteric לאסוף הלימפה בתוך לפדר מאפשר ניתוח של זרימת נוזל בתפזורת באמצעות lymphatics המעיים כמו גם כימות של שיעור הריכוז והובלה של תאים ומולקולות שונים. שינויים בריכוז או המעבר של גורמים אלה בתגובה לאתגרים שונים (לדוגמא, דיאטות, אנטיגנים, סמים) ובמודלי מחלה (למשל, דלקת המעי הגס, HIV, סוכרת) יכול גם להיות מוערכת. בעוד שזה אי אפשר לתאר כל רכיב לימפה שניתן לנתח ולהשוות כאן בהרחבה, לימפה mesenteric פשטנית מורכבת ממימי, שומנים בדם ושלבים סלולריים. רכיבים של עניין בשלב המימי כוללים פפטידים וחלבונים כגון אנטיגנים או tolerogens 8, שליחים חיסוניים כגון ציטוקינים ותא פיטום מתווכים 9, ומתווכי חילוף חומרים כגון incretins 10. החלק הסלולרי של הלימפה mesenteric פוסט-קטרי מורכב כמעט כולו (מעל 99%) של lymphocytes 11. תאים חיסוניים שונים (תאים דנדריטיים, תאי פיטום, וכו &#39;) להיכנס לlymphatics mesenteric מראש קטרי אבל להישאר בצומת 12. אם התאים בתוך הלימפה מביא הם עניין, ניתן לאסוף תאים אלה באמצעות הסרת הלימפה mesenteric צומת כמה ימים לפני cannulation של הצינור לימפה mesenteric 12. בדרך זו צינוריות הלימפה מביא וefferent מחוברות ישירות ותאי הלימפה בהלימפה מביא לעבור ישירות לתוך הצינור לימפה mesenteric. כך ניתן לבחון את המעבר והפנוטיפ של תאי חיסון שונים עוברים דרך lymphatics המעיים. אולי הסיבה השכיחה ביותר שצוינה עבור איסוף הלימפה mesenteric עד כה, עם זאת, היא ללמוד את העיבוד, קליטה והובלה של שומנים בתזונה ובמולקולות lipophilic 10 מעיים. בעקבות בליעה, שומנים תזונתיים מתעכלים (למשל, מהטריגליצרידים לחומצות שומן ומונוגליצריד, phospholipid לחומצות שומן וlysophospholipid, ואסתר כולסטרול לחומצות שומן וכולסטרול, וכו &#39;) והתפזרו בתוך חלל המעי לmicelle קטנה ומבני לפוחי באמצעות התוספת של amphiphiles ממרה (פוספוליפידים, מלחי מרה וכולסטרול) והפעולה של אנזימי לבלב 10,13. מכאן שהם נספגים לתוך enterocytes. חלקם של הרכיבים נספגים מחדש אסטרי ליצירת הטריגליצרידים, פוספוליפידים ואסטרים כולסטרול בתוך תאי הקליטה (enterocytes). שומנים-אסטרי מחדש אלה מורכבים משילוב של מרכיבים שומניים אקסוגני בלע ומרכיבים שומניים אנדוגני מהמרה המופרשת, בריכות שומנים ריריות או אספקת הדם במעיים 13. מכאן שומני אסטרי מאוחסנים או בתוך enterocytes או התאספו לתוך יפופרוטאינים מעיים (chylomicrons, ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד (VLDL)) יחד עם apoproteins השונים ומולקולות lipophilic אחרות ( <eמ &#39;&gt; למשל, ויטמינים) 10,13. לאחר יציאת enterocytes, ליפופרוטאין באופן ספציפי מועבר מהמעי למחזור המערכתי באמצעות מערכת הלימפה mesenteric כlacteals המעיים הם יותר חדיר לכניסתם מנימי הדם במעיים. חלקם של מרכיבים שומניים נספגים גם מועבר מהמעי למחזור המערכתי באמצעות נימי הדם ווריד שער כלא-lipoprotein היחיד, קשורים, מולקולות 14. באופן כללי, לעומת זאת, מסלול תחבורת וריד השער הוא שחקן משמעותי היחיד בקליטת שומני אורך שרשרת קצרים ובינוניים. האוסף של הלימפה mesenteric כך מאפשר ההערכה של התחבורה של ליפופרוטאין וברכיבים נלווים (שומנים, מולקולות lipophilic, apo-חלבונים) מהמעי. ניתן ונרשמת ליפופרוטאינים ומתאפיינים ביתרון שיפופרוטאינים לימפה mesenteric, באופן כללי, נמצאים בnascenמדינה לא מכיוון שהם לא שונו באופן נרחב על ידי אנזימים מערכתיים כגון lipase ליפופרוטאין 15. בעוד מודל החולדה cannulated הלימפה mesenteric יש אולי מבחינה היסטורית תואר בצורה נרחבת ביותר לניתוח תחבורת השומנים / ליפופרוטאין מהמעי, על שטח של הרחבת העניין הוא התפקיד של lymphatics בהובלה של תרופות lipophilic, prodrugs וxenobiotics האחר 13,16 המהווה את המוקד של המודל שתואר כאן. תרופות lipophilic (בדרך כלל אלה עם P יומן&gt; 5 ומסיסות בהטריגליצרידים&gt; 50 מ&quot;ג / g ארוכת שרשרת למרות שהיוצאים מן הכלל לכאורה) 17,18, prodrugs 19 וxenobiotics האחר 13,16 יכולים לקבל גישה לlymphatics המעיים או באופן פסיבי או על ידי פעיל להשתלב במסלולי תחבורה ליפופרוטאין במעיים 19. טכניקת cannulation הלימפה mesenteric העכברוש לכן יש יישומים רבים. Bollman et al. תאר techniq הראשוןue לcannulate הצינור לימפה mesenteric בחולדות בשנת 1948 20. מאז מספר הווריאציות על המודל שתואר. לדוגמא, אוסף יכול להתרחש כאשר החולדה מורדמת עם הרדמה שונות 21,22, או במדינה המודעת תוך מאופק 15 או באופן חופשי לנוע 23,24. יכולות להינתן חולדות פתרונות להחזרה נוזלים שונים וחומרים אחרים כגון שומנים וניסוחי סמים בשיעורים שונים לקיבה, המעי או parenterally (בדרך כלל 0-5 מיליליטר / hr) 25. בחלק ממחקרי הצינור לימפה בבית החזה ולא דביקה לימפה mesenteric הוא cannulated להעריך הובלה מהמעי באמצעות lymphatics אם כי זה עשוי להפריז בהערכת מעבר מהמעי הדק, תלוי בגורם של עניין, כצינור לימפה בבית החזה גם מקבל הלימפה מאחרת אזורי 22,26. מודלים cannulation הלימפה גם תוארו בכמה מינים אחרים, כוללים עכברים 15,27, מיני-pi12 GS, הכבשים 28,29, 30 חזירים וכלבים 31. עם זאת, מודל החולדה הוא נרחב ועקבי ביותר שצוטט. פרוטוקולים מפורטים לcannulation של הצינור לימפה mesenteric אחריה אוסף של הלימפה במודעת או 25 מורדמים 22 חולדות ועכברים 15,27 כבר פורסמו בעבר והקורא המעוניין מופנה לפרוטוקולים אלה. פרוטוקול זה הוא ראשון כדי להדגים את הטכניקה בפורמט דמיין. יש מודל העכברים לימפה cannulated יתרונות על פני מודלים של בעלי חיים גדולים יותר במונחים של הוצאה, את הקלות של הניתוח ושיקולים אתיים. בהשוואה למודל של העכברים, ניתוח cannulation לימפה mesenteric הוא גם קל יותר בחולדה למרות מודל העכבר מאפשר מחקרים מפורטים יותר בבעלי חיים מהונדסים 27. יחד עם זאת, יש כמה מגבלות מודל החולדה, במיוחד אלה הקשורים להבדלים בפיזיולוגיה, שextrapolat הגבוליון למצבים פרה-קליניים וקליניים אחרים. לדוגמא, בזרימת המרה החולדה הוא קבוע ובלתי תלוי של צריכת מזון ואילו במזון מינים גבוה או שומנים לעורר את זרימת מרה 32. זה יוצר אתגרים להשגת סביבות לפני ואחרי ארוחת נציג בחולדה שמשקפות את מה שראה במינים ובני אדם גדולים יותר. ללימודי משלוח סמים, מין גדול יותר יכול להיות גם העדיף בעת הערכת תחבורת הלימפה לאחר שהממשל של מינון אנושי מציאותי מהווה 25. במחקר שנערך לאחרונה, שיעורי תחבורת שומנים בהלימפה mesenteric נמצאו דומה בין מינים (עכבר, חולדה, כלב) לאחר מתן של מסה שווה ערך וסוג של שומנים בדם המספק קצת ביטחון באקסטרפולציה של נתונים תחבורת שומנים על פני מינים 27. עם זאת, ההובלה של מודל lipophilic סמים, halofantrine, מדורגת לפי סדר הגודל של בעלי חיים (כלומר, כלב&gt; חולדה&gt; עכבר). גורם קנה מידה ניתן אפוא נדרש לשעברtrapolate נתוני תחבורת סמים הלימפה מחולדה למינים אחרים. הגבלה של דגמי cannulation לימפה, באופן כללי, היא שאוסף פסיבי הלימפה ישירות מצינור הלימפה רשאי לשנות זרימת הלימפה ותחבורה מאז כלי הלימפה לעבוד נגד פרש לחצים שמשתנה ברגע שהספינה היא cannulated 33. מודל cannulation הלימפה יכול להיות גם קשה לקבוע במעבדות שאינן מכיר את הטכניקה. מודלים חלופיים וכך תוארו. לדוגמא, המעבר של גורמים באמצעות מערכת הלימפה המעיים, כגון יפופרוטאינים ומולקולות lipophilic, נחקר באופן עקיף באמצעות אוסף של דם. מודל כזה כרוך השוואת ריכוזי שומנים ו / או סמים דם לאחר נטילה דרך פה בנוכחות והיעדרות של מעכבים (למשל, קולכיצין, pluronic L81, cycloheximide) של ייצור ליפופרוטאין במעיים, החוסמים תחבורת הלימפה 34. יתרוןדגמים שלכמת תחבורת הלימפה בעקיפין באמצעות איסוף דגימות דם הוא שהיא מאפשרת כמה הערכה של תחבורת הלימפה בבני אדם כניתוח פולשני לא נדרש 35. עם זאת, מעכבי תחבורת הלימפה אינם ספציפיים וגורמים המועברים באמצעות lymphatics הם בדילול ושינוי במחזור המערכתי אשר מסבך הערכות אלה. חלופות במבחנה גם תוארו. לדוגמא, תרבויות קאקו-2 תאים או אנתרוציט המבודדת כבר נוצלו כדי ללמוד ביתר פירוט את הפרשת המעיים של מולקולות שנכנסות lymphatics 36-38. מודל במבחנה מתקדם שמייצגים יותר ממייקרו-סביבת המעיים האנושי גם תאר לאחרונה את 39. במודל זה שכבת תאי האנדותל הלימפה היא שיתוף תרבותי עם קאקו-2 תאים המאפשרים ניתוח מפורט יותר של העברת חומרים מהמעי לlymphatics. עם זאת, בvitro מערכות תא חסרות זרימת חליפין ולהעביר כלומר חיבור עם חלל מעי ודם בסיסי ואספקת דם לימפטי. בגישה חלופית, קסיס et al. הוקם ערוץ כפול (וידאו במהירות גבוהה בהיר שדה וקרינה) במערכת הדמיה באתר המאפשרת השוואות כמותיות בין התכווצות כלי דם, זרימת הלימפה וריכוזי שומנים ניאון בכלי הלימפה mesenteric 33. יתרון של מודל זה על האמור במערכות חוץ גופית הוא שזה מאפשר מעקב מדויק של המעבר של תאי מערכת חיסון באמצעות lymphatics. מדידות מוחלטות של שומנים בדם המוניים (או סמים) תחבורה, לעומת זאת, עדיין לא הוקמו תוך שימוש בשיטות הדמיה. במבחנה ובסיליקון ומתקרבים לחזות באופן ספציפי את היקף תחבורת סמים lipophilic באמצעות lymphatics המעיים פורסמו גם 40-42. לדוגמא, את הזיקה vivo לשעבר של מספר גompounds לchylomicrons פלזמה נמצא לתאם בצורה סבירה עם תחבורת הלימפה שלהם in vivo 41. בהמשך לכך, אותה הקבוצה שהוקמה במודל סיליקו לחזות זיקת תרופה לchylomicrons מבוסס על מאפייני physicochemical מרובים 40. Holm et al. גם הוקם מורכב יחסית במודל סיליקו לחזות הסף תחבורת הלימפה של תרכובות lipophilic על בסיס מתארים מולקולריים 42. מודלים אלה עשויים לספק גישה שימושית לחזות את היקף תחבורת הלימפה של תרופות לא ידועות. אימות של המודלים עם מגוון רחב של תרופות ועל פני מעבדות שונות, עם זאת, תידרש לאשר את הדיוק ושחזורם. Cannulation של הצינור לימפה mesenteric כך נשאר רק האמצעי כדי לבחון את התוכן של ימפה ניקוז המעי הדק ושיעור המעבר של המערך המורכב של גורמים (תאים, חלבונים ישירות,פפטידים, שומנים, תרופות) לימפה במצב in vivo. במסמך זה אנו מתארים פרוטוקול לcannulation של עורק התרדמה והצינור לימפה mesenteric שמאפשר האיסוף של הלימפה mesenteric ודם מערכתי מחולדות מורדמות. נציגי נתונים להדגים כיצד המודל יכול לשמש כדי לבחון שומנים ותחבורה סמים מהמעי דרך מערכת הלימפה mesenteric. זה ואחריו דיון בקשיים שניתן נתקלו בהקמת המודל ומדריך לפתרון בעיות. ברגע שהקים את המודל הוא כלי רב עוצמה כדי לחקור תחבורת הלימפה מעיים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" >
	<tbody>
		<tr >
			<td >Sterile saline</td>
			<td>Baxter healthcare</td>
			<td>AHB 1307</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Baxter 100 ml saline bags, box of 50</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >70 % ethanol in water</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chlorhexidine gluconate solution (Microshield 4)</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>JJ60243L</td>
			<td>Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=JJ60243L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Betadine solution</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>BU0510</td>
			<td>Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=BU0510</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ilium Ketamil (Ketamine 100 mg/ml)</td>
			<td >PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td >KETA I 1</td>
			<td>http://www.provet.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml)</td>
			<td >PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td >TRO-3828</td>
			<td>http://www.provet.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ACP 10 Injection (Acepromazine 10 mg/ml)</td>
			<td >PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td >VTG-DACP010020</td>
			<td>http://www.provet.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium pentobarbitone</td>
			<td>PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td>24529</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Lethabarb&#174; 325 mg/ml sodium pentobarbitone, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heparin (35000I.U. in 35 mL)</td>
			<td>Sigma Pharmaceuticals</td>
			<td>337220</td>
			<td>http://sigmaco.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >E1644</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is disodium salt of EDTA from Sigma.&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.96 mm x i.d. 0.58 mm</td>
			<td>Microtube extensions</td>
			<td>PE8050</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.8x0.5 mm, 30 m</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm</td>
			<td>Microtube extensions</td>
			<td>PE9658</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.96x0.58 mm, 30 m</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ruler</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Markers</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cigarette lighter</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >23 gauge needles</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>DN23GX0.75LV</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT= 
			6&#38;search=DN23GX0.75LV</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >25 gauge needles</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>DN25GX1.0LV</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search= 
			DN25GX1.0LV</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 ml syringe</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>T3SS01TA</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=T3SS01TA</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 ml syringe</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>T3SS10SA</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=T3SS10SA</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Gauze swabs</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>GSC075</td>
			<td>Any brand can be used and cut to required size. Example here is gauze swabs cotton filled 7.5x7.5 cm, 8 ply. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=GSC075</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton buds</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>CTAST075DP</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Livingstone cotton applicator plastic double tipped. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=CTAST075DP</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heating pad</td>
			<td>Ratek</td>
			<td>WT1</td>
			<td>Any brand that keeps temperature at 37C can be used. Example here is Ratek warming tray.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical light</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0215 with 72-0267</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Harvard apparatus V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ 
			-1_HAI_ProductDetail and&#160; http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ 
			-1_HAI_ProductDetail___</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>495005-0014-000</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C with Stand S Double Spot and KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&#38;p=us&#38;f=e&#38;i=10143</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silk suture</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>DTSK163019F4</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is *&#160; 
			Email this item to my friend 
			3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=DTSK163019F4</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scalpel blades</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td >10020-00</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Blade #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scalpel handle</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>10004-13</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&#38;CategoryId=51</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Small surgical scissors</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>14060-09</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Fine Scissors, 9 cm with 21 mm cutting edge, sharp, straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&#38;CategoryId=17</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2 x Forceps with serrated curved tip</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td >11001-13</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST 13 cm standard pattern forceps with curved 2.8x1.4 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&#38;CategoryId=32</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Iridectomy scissors</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>15000-08</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge, Straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&#38;CategoryId=16&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Forceps with straight serated tip</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11650-10</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Graefe 10 cm straight with serrated 1 x 0.99 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&#38;CategoryId=32</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Forceps with smooth sharp straight fine tip</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Dumont #5 forceps straight 11cm with 0.08 x 0.04mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&#38;CategoryId=29</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Forceps with smooth fine curved forceps</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11063-07</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Delicate Forceps 9 cm with smooth 0.4 x 0.3mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2 x Hemostats</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td >13010-12</td>
			<td>Any brand can be used. Not all operators use the hemostats. Example here is FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats with 20 mm length x 1.3 mm width serrated, straight tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&#38;CategoryId=33</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Suture needle holder</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>12001-13</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST 13cm Hasley Needle Holder with 16 mm length x 1.9 mm width tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&#38;CategoryId=70</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Artery clamp</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>18050-28</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Bulldog Serrefines straight, 28 mm long, 9x1.6 mm jaw dimension with medium clamp press. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&#38;CategoryId=82</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Oleic acid</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >O1008</td>
			<td>When required, any brand can be used. Example here is 99% pure oleic acid. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >14C-oleic acid</td>
			<td >Perkin&#160;</td>
			<td>NEC317050UC&#160;</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Oleic Acid, [1-14C]-, 50&#181;Ci (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium taurocholate</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >T4009</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is taurocholic acid sodium salt hydrate &#8805;95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Halofantrine</td>
			<td >Glaxo Smith Kline</td>
			<td ></td>
			<td>Halofantrine was kindly provided as a gift from Glaxo Smith Kline</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium phosphate monobasic</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >71507</td>
			<td >Any brand can be used. Example here is sodium phosphate monobasic monohydrate, BioXtra, for molecular biology, &#62;99.5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium phosphate dibasic</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >71643</td>
			<td >Any brand can be used. Example here is sodium phosphate dibasic dihydrate, BioUltra, for molecular biology, &#62;99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the mesenteric lymph duct cannulated rat model: application to the assessment of intestinal lymphatic drug transport

מערכת הלימפה המעיים משחקת תפקידי מפתח בהובלת נוזלים, קליטת שומנים ותפקוד מערכת חיסון. הלימפה זורמת ישירות למעי הדק באמצעות סדרה של כלי הלימפה ובלוטות שיתכנסו לצינור לימפה mesenteric מעולה. Cannulation של הצינור לימפה mesenteric כך מאפשר האיסוף של הלימפה mesenteric זורמת מהמעי. לימפה mesenteric מורכבת מחלק תאי של תאי מערכת חיסון (לימפוציטים 99%), חלק המימי (נוזל, פפטידים וחלבונים כגון ציטוקינים והורמוני בטן) וחלק קטן ליפופרוטאין (שומנים, מולקולות lipophilic וapo-חלבונים). מודל cannulation הצינור לימפה mesenteric לכן יכול לשמש למדידת הריכוז ושיעור התחבורה של מגוון רחב של גורמים מהמעי באמצעות מערכת הלימפה. שינויים בגורמים אלה בתגובה לאתגרים שונים (לדוגמא, דיאטות, אנטיגנים, סמים) ובמחלה (למשל, מחלת מעי דלקתית, HIV, סוכרת) יכולה גם סעיף ב &#39;דואר נקבע. אזור של הרחבת עניין תפקידה של תחבורת הלימפה בספיגה של תרופות אוראליות lipophilic וprodrugs שמקשרות עם מסלולי קליטת שומנים במעי. כאן אנו מתארים, בפירוט, מודל חולדה cannulated צינור לימפה mesenteric המאפשר הערכה של השיעור ושל שומנים בדם ותחבורה סמים המידה באמצעות מערכת הלימפה במשך כמה שעות לאחר לידה במערכת העיכול. השיטה היא להתאמה בקלות למדידת פרמטרים אחרים לימפה. אנו מספקים תיאורים מפורטים של הקשיים שעלולים להיוצר בעת הקמת שיטה כירורגית מורכבת זו, כמו גם נתוני נציג מניסויים כושלים ומוצלחים כדי לספק הדרכה על איך לאשר הצלחת ניסוי ולפרש את הנתונים שהתקבלו.

תוצאותיו של ניסוי נציג לכמת את המידה המצטברת ושיעור של שומנים בדם ותחבורה סמים באמצעות מערכת הלימפה לאחר לידת מעיים באמצעות מודל cannulation הלימפה mesenteric מוצגות באיור 4 ואיור 5. בניסוי זה, 200 מיקרוגרם של lipophilic המודל halofantrine תרופה מוחדר לתריסריון של חולדות על שעה 2 ב?...

Watch this Scientific Journal Video about The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport at JoVE.com

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

לימפה Duct cannulated עכברוש דגם mesenteric: בקשה להערכה של המעיים הלימפה תרופות תחבורה

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

the-mesenteric-lymph-duct-cannulated-rat-model-application-to

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

28.3K Views.  Monash University (Parkville Campus). Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

Video: The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune response and therefore, the development of effector cells. As such, LNs are key to fighting invading pathogens and maintaining health. The choice of LN to study is dictated by accessibility and the desired model; the inguinal lymph node is well situated and easily supports studies of biologically relevant models of skin and genital mucosal infection.
The inguinal LN, like all LNs, has an extensive microvascular network supplying it with blood. In general, this microvascular network includes the main feed arteriole of the LN that subsequently branches and feeds high endothelial venules (HEVs). HEVs are specialized for facilitating the trafficking of immune cells into the LN during both homeostasis and infection. How HEVs regulate trafficking into the LN under both of these circumstances is an area of intense exploration. The LN feed arteriole, has direct upstream influence on the HEVs and is the main supply of nutrients and cell rich blood into the LN. Furthermore, changes in the feed arteriole are implicated in facilitating induction of adaptive immune response. The LN microvasculature has obvious importance in maintaining an optimal blood supply to the LN and regulating immune cell influx into the LN, which are crucial elements in proper LN function and subsequently immune response. 
The ability to study the LN microvasculature in vivo is key to elucidating how the immune system and the microvasculature interact and influence one another within the LN. Here, we present a method for in vivo imaging of the inguinal lymph node. We focus on imaging of the microvasculature of the LN, paying particular attention to methods that ensure the study of healthy vessels, the ability to maintain imaging of viable vessels over a number of hours, and quantification of vessel magnitude. Methods for perfusion of the microvasculature with vasoactive drugs as well as the potential to trace and quantify cellular traffic are also presented. 
Intravital microscopy of the inguinal LN allows direct evaluation of microvascular functionality and real-time interface of the direct interface between immune cells, the LN, and the microcirculation. This technique potential to be combined with many immunological techniques and fluorescent cell labelling as well as manipulated to study vasculature of other LNs.

A technique for performing intravital microscopy of the inguinal lymph node (LN) is outlined. Such technique allows for real-time, in vivo study of the lymph node microvasculature and structure both during homeostasis and infection. This technique can be adapted to cell trafficking studies and to other lymph node sites.

מיקרוסקופית Intravital של הצומת לימפה מפשעתי

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below 50-75 copies/ml) is necessary to gain insight to viral dynamics and virus host interactions in patients who naturally control the infection and those who are on combination antiretroviral therapy (cART). 
Here we describe how to amplify viral genomes by single genome sequencing (the SGS protocol) 13, 19 and how to accurately quantify HIV-1 RNA in patients with low viral loads (the single-copy assay (SCA) protocol) 12, 20. 
The single-copy assay is a real-time PCR assay with sensitivity depending on the volume of plasma being assayed. If a single virus genome is detected in 7 ml of plasma, then the RNA copy number is reported to be 0.3 copies/ml. The assay has an internal control testing for the efficiency of RNA extraction, and controls for possible amplification from DNA or contamination. Patient samples are measured in triplicate.
The single-genome sequencing assay (SGS), now widely used and considered to be non-labor intensive 3, 7, 12, 14, 15,is a limiting dilution assay, in which endpoint diluted cDNA product is spread over a 96-well plate. According to a Poisson distribution, when less than 1/3 of the wells give product, there is an 80% chance of the PCR product being resultant of amplification from a single cDNA molecule. SGS has the advantage over cloning of not being subjected to resampling and not being biased by PCR-introduced recombination 19. However, the amplification success of SCA and SGS depend on primer design. Both assays were developed for HIV-1 subtype B, but can be adapted for other subtypes and other regions of the genome by changing primers, probes, and standards.

Quantifying levels of HIV-1 RNA in plasma and sequencing single HIV-1 genomes from individuals with viral loads below the limit of detection (50-75 copies/ml) is difficult. Here we describe how to extract and quantify plasma viral RNA using a real time PCR assay that reliably measures HIV-1 RNA down to 0.3 copies/ml and how to amplify viral genomes by single genome sequencing, from samples with very low viral loads.

הגברה וכימות HIV-1 RNA אצל אנשים שנדבקו ב-HIV עם המון ויראלי מתחת לגבול של זיהוי על ידי מבחני קלינית רגילה

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign antigens from peripheral tissues to prime the adaptive immune response. Juxtaposed between innate and adaptive immune responses, the LN is an ideal site to study immune cell interactions1,2. Lymphocytes (T cells, B cells and NK cells), dendritic cells (DCs), and macrophages comprise the bulk of bone marrow-derived cellular elements of the LN. These cells are strategically positioned in the LN to allow efficient surveillance of self antigens and potential foreign antigens3-5. The process by which lymphocytes successfully encounter cognate antigens is a subject of intense investigation in recent years, and involves an integration of molecular contacts including antigen receptors, adhesion molecules, chemokines, and stromal structures such as the fibro-reticular network2,6-12. 
Prior to the development of high-resolution real-time fluorescent in vivo imaging, investigators relied on static imaging, which only offers answers regarding morphology, position, and architecture. While these questions are fundamental in our understanding of immune cell behavior, the limitations intrinsic with this technique does not permit analysis to decipher lymphocyte trafficking and environmental clues that affect dynamic cell behavior. Recently, the development of intravital two-photon laser scanning microscopy (2P-LSM) has allowed investigators to view the dynamic movements and interactions of individual cells within live LNs in situ12-16. In particular, we and others have applied this technique to image cellular behavior and interactions within the popliteal LN, where its compact, dense nature offers the advantage of multiplex data acquisition over a large tissue area with diverse tissue sub-structures11,17-18. It is important to note that this technique offers added benefits over explanted tissue imaging techniques, which require disruption of blood, lymph flow, and ultimately the cellular dynamics of the system. Additionally, explanted tissues have a very limited window of time in which the tissue remains viable for imaging after explant. With proper hydration and monitoring of the animal's environmental conditions, the imaging time can be significantly extended with this intravital technique. Here, we present a detailed method of preparing mouse popliteal LN for the purpose of performing intravital imaging.

Recent advances in 2-photon microscopy have enabled real-time in situ imaging of live tissues in animal models, thereby enhancing our ability to investigate cellular behavior in both physiologic and pathologic conditions. Here, we outline the preparations required to perform intravital imaging of the mouse popliteal lymph node.

Intravital הדמיה של בלוטות לימפה popliteal עכבר

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

The lymphatic vascular system is an important component of the circulatory system that maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and mediates fat absorption in the gut. Yet despite its critical function, there is comparatively little understanding of how the lymphatic system adapts to serve these functions in health and disease1. Recently, we have demonstrated the ability to dynamically image lymphatic architecture and lymph "pumping" action in normal human subjects as well as in persons suffering lymphatic dysfunction using trace administration of a near-infrared fluorescent (NIRF) dye and a custom, Gen III-intensified imaging system2-4. NIRF imaging showed dramatic changes in lymphatic architecture and function with human disease. It remains unclear how these changes occur and new animal models are being developed to elucidate their genetic and molecular basis. In this protocol, we present NIRF lymphatic, small animal imaging5,6 using indocyanine green (ICG), a dye that has been used for 50 years in humans7, and a NIRF dye-labeled cyclic albumin binding domain (cABD-IRDye800) peptide that preferentially binds mouse and human albumin8. Approximately 5.5 times brighter than ICG, cABD-IRDye800 has a similar lymphatic clearance profile and can be injected in smaller doses than ICG to achieve sufficient NIRF signals for imaging8. Because both cABD-IRDye800 and ICG bind to albumin in the interstitial space8, they both may depict active protein transport into and within the lymphatics. Intradermal (ID) injections (5-50 &mu;l) of ICG (645 &mu;M) or cABD-IRDye800 (200 &mu;M) in saline are administered to the dorsal aspect of each hind paw and/or the left and right side of the base of the tail of an isoflurane-anesthetized mouse. The resulting dye concentration in the animal is 83-1,250 &mu;g/kg for ICG or 113-1,700 &mu;g/kg for cABD-IRDye800. Immediately following injections, functional lymphatic imaging is conducted for up to 1 hr using a customized, small animal NIRF imaging system. Whole animal spatial resolution can depict fluorescent lymphatic vessels of 100 microns or less, and images of structures up to 3 cm in depth can be acquired9. Images are acquired using V++ software and analyzed using ImageJ or MATLAB software. During analysis, consecutive regions of interest (ROIs) encompassing the entire vessel diameter are drawn along a given lymph vessel. The dimensions for each ROI are kept constant for a given vessel and NIRF intensity is measured for each ROI to quantitatively assess "packets" of lymph moving through vessels.

Recently developed imaging techniques using near-infrared fluorescence (NIRF) may help elucidate the role the lymphatic system plays in cancer metastasis, immune response, wound repair, and other lymphatic-associated diseases.

דימות אופטי לא פולשנית של כלי דם הלימפה של עכבר

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the mechanisms governing its formation. Lymph nodes are always encapsulated in adipose tissue and we recently demonstrated the importance of this relation for the formation of lymph node stroma. Adipocyte precursor cells migrate into the lymph node during its development and upon engagement of the Lymphotoxin-b receptor switch off adipogenesis and differentiate into lymphoid stromal cells (B&#233;n&#233;zech&#160;et al.14). Based on the lymphoid stroma potential of adipose tissue, we present a method using a lymph node/fat pad chimera that allows the lineage tracing of lymph node stromal cell precursors. We show how to isolate newborn lymph nodes and EYFP+ embryonic adipose tissue and make a LN/ EYFP+ fat pad chimera. After transfer under the kidney capsule of a host mouse, the lymph node incorporates local adipose tissue precursor cells and finishes its formation. Progeny analysis of EYFP+ fat pad cells in the resulting lymph nodes can be performed by flow-cytometric analysis of enzymatically digested lymph nodes or by immunofluorescence analysis of lymph nodes cryosections. By using fat pads from different knockout mouse models, this method will provide an efficient way of analyzing the origin of the different lymph node stromal cell populations.

Generation of lymph node/fat pad chimeras for the study of lymph node stromal cell origin is described. The method involves the isolation of lymph nodes from newborn mice and embryonic fat pads, the generation of chimeric lymph node-fat pads, and their transfer under the kidney capsule of a host mouse.

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode larvae of the genus Trichinella. The most important sources of human infections worldwide are game meat and pork or pork products. In many countries, the prevention of human trichinellosis is based on the identification of infected animals by means of the artificial digestion of muscle samples from susceptible animal carcasses.
There are several methods based on the digestion of meat but the magnetic stirrer method is considered the gold standard. This method allows the detection of Trichinella larvae by microscopy after the enzymatic digestion of muscle samples and subsequent filtration and sedimentation steps. Although this method does not require special and expensive equipment, internal controls cannot be used. Therefore, stringent quality management should be applied throughout the test. The aim of the present work is to provide detailed handling instructions and critical control points of the method to analysts, based on the experience of the European Union Reference Laboratory for Parasites and the National Reference Laboratory of Germany for Trichinella.

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

The prevention of human trichinellosis in many countries worldwide is based on the laboratory examination of muscle samples from susceptible animals by methods of digestion, of which the magnetic stirrer method is considered the gold standard.

סטירר שיטה מגנטית לצורך זיהוי של<em&gt; Trichinella</em&gt; זחלים בדגימות שריר

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple condensation reactions. DHDDS (dehydrodolichyl diphosphate synthase) is a eukaryotic long-chain cis-PT (forming cis double bonds from the condensation reaction) that catalyzes chain elongation of farnesyl diphosphate (FPP, an allylic diphosphate) via multiple condensations with isopentenyl diphosphate (IPP). DHDDS is of biomedical importance, as a non-conservative mutation (K42E) in the enzyme results in retinitis pigmentosa, ultimately leading to blindness. Therefore, the present protocol was developed in order to acquire large quantities of purified DHDDS, suitable for mechanistic studies. Here, the usage of protein fusion, optimized culture conditions and codon-optimization were used to allow the overexpression and purification of functionally active human DHDDS in E. coli. The described protocol is simple, cost-effective and time sparing. The homology of cis-PT among different species suggests that this protocol may be applied for other eukaryotic cis-PT as well, such as those involved in natural rubber synthesis.

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

A simple protocol for overexpression and purification of codon-optimized, human cis-prenyltransferase, under non-denaturing conditions, from Escherichia coli, is described, along with an enzymatic activity assay. This protocol can be generalized for production of other cis- prenyltransferase proteins in quantity and quality suitable for mechanistic studies.

Overexpression וטיהור האדם<em&gt; Cis</em&gt; פרנליטרונפרפרז ב<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor microenvironment and the underlying mechanism is still largely unknown. The lack of a consistent and reliable source of NK cells limits the research progress of NK cell immunity. Here, we report an in vitro system that can provide high quality and quantity of bone marrow-derived murine NK cells under a feeder-free condition. More importantly, we also demonstrate that siRNA-mediated gene silencing successfully inhibits the E4bp4-dependent NK cell maturation by using this system. Thus, this novel in vitro NK cell differentiating system is a biomaterial solution for immunity research.

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Here, we present a protocol to mass-produce gene-silencing murine NK cells by using a feeder-free differentiation system for mechanistic study in vitro and in vivo.

הרומן מזין ללא מערכת לייצור המוני של תאים רוצח טבעי מאתר במבחנה

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...

Quantitative Polymerase Chain Reaction-based Analyses of Murine Intestinal Microbiota After Oral Antibiotic Treatment

The gut microbiota has a central influence on human health. Microbial dysbiosis is associated with many common immunopathologies such as inflammatory bowel disease, asthma and arthritis. Thus, understanding the mechanisms underlying microbiota-immune system crosstalk is of crucial importance. Antibiotic administration, while aiding pathogen clearance, also induces drastic changes in the size and composition of intestinal bacterial communities which can have an impact on human health. Antibiotic treatment in mice recapitulates the impact and long-term changes in human microbiota from antibiotic treated patients, and enables investigation of the mechanistic links between changes in microbial communities and immune cell function. While several methods for antibiotic treatment of mice have been described, some of them induce severe dehydration and weight-loss complicating the interpretation of the data. Here, we provide two protocols for oral antibiotic administration which can be used for long-term treatment of mice without inducing major weight-loss. These protocols make use of a combination of antibiotics that target both Gram-positive and Gram-negative bacteria and can be provided either ad libitum in the drinking water or by oral gavage. Moreover, we describe a method for the quantification of microbial density in fecal samples by qPCR which can be used to validate the efficacy of the antibiotic treatment. The combination of these approaches provides a reliable methodology for the manipulation of the intestinal microbiota and the study of the effects of antibiotic treatment in mice.

Here we provide detailed protocols for the oral administration of antibiotics to mice, collection of fecal samples, DNA extraction and quantification of fecal bacteria by qPCR.

פולימראז כמותי המבוסס על תגובת שרשרת ניתוחים של מאתר Microbiota מעיים לאחר טיפול אנטיביוטי דרך הפה

The gut microbiota has a central influence on human health. Microbial dysbiosis is associated with many common immunopathologies such as inflammatory ...

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and dysregulated repair. In inflammatory bowel disease (IBD), fibrosis leads to recurrent stricture formations for which there is no effective therapy other than surgical resection. Due to its late onset, the processes that drive fibrosis is less studied and largely unknown. Therefore, fibrotic complications represent a major challenge in IBD. In this protocol, a robust in vivo model of intestinal fibrosis is described where streptomycin pre-treatment of C57Bl/6 mice followed by oral gavage with vaccine grade Salmonella Typhimurium &#916;AroA mutant leads to persistent pathogen colonization and fibrosis of the cecum. Methodologies for preparing S. Typhimurium &#916;AroA for inoculation, quantifying pathogen loads in the cecum and spleen, and evaluating collagen deposition in intestinal tissues are explained. This experimental disease model is useful for examining host factors that either enhance or exacerbate CD-like intestinal fibrosis.

This protocol describes a mouse model of Salmonella driven intestinal fibrosis that resembles key pathological hallmarks of Crohn&#8217;s disease including transmural inflammation and fibrosis. This method can be used to evaluate host factors that alter fibrotic outcomes using mutant mice maintained on a C57Bl/6 genetic background.

סלמונלה כרונית זיהום דלקת מעיים פיברוזיס

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...