Funding from the Australian Research Council (ARC) and National Health and Medical Research Council (NHMRC) is gratefully acknowledged.

Bu yazıda anlatılan çalışmalar yerel hayvan etik komitesi tarafından onaylanmış ve Araştırma ve Öğretim kurallarda Hayvanlarının Bakımı için Avustralya ve Yeni Zelanda Konseyi çerçevesinde yapılmıştır. Herhangi bir hayvan prosedürü başlamadan önce, uygun izin yerel kurum / kuruluş aracılığıyla elde emin olun. Bütün hayvan cerrahi ile olduğu gibi, cerrahi, aseptik koşullar altında ve etik ve başarılı sonuçların elde edilmesi için gerekli olan zaman anestetikler, analjezik ve antibiyotik tatbik edilen, uygun bir eğitimli operatörler tarafından yapılır olduğundan emin olun. 1. Hazırlıklar Günü Cerrahi Prosedür önce <ol><li> Gerekirse ameliyat öncesi siçana gece Hızlı. Sıçan olun suya ücretsiz erişimi vardır. </li><li> Hazırlama çözeltiler fareye tatbik edilecek. <ol><li> Bu tür steril serum fizyolojik veya Ringer solüsyonu gibi bir rehidrasyon solüsyonu hazırlayın. </li><li> Hazırlayın birestetik çözümler gerektiği gibi. Burada tarif edilen deneylerde kullanılan anestezik &quot;ketamin 100 mg 1.9 ml / ml, iksilazin 100 mg / ml, 0.5 ml, ml asepromazin 10 mg / 0.2 ml tuzlu su içinde 2.5 ml birleştirerek&quot; Kokteyl 1 &quot;hazırlanmıştır oluşuyordu ketamin 100 mg / ml ve 0.1 ml asepromazin 10 mg / ml 1 ml oluşan kokteyl 2 &quot;. NOT: o zaman uzun bir süre için anestezi cerrahi uçağı sağlayabilir olarak İnhale izofluran veya sevofluran tercih edilebilir. </li><li> İsteğe bağlı olarak, örneğin, bir yağ emülsiyonu içinde ilaç ihtiva eden bir formülasyonun hazırlanması. Depolanması ve uygulanması süresince formülasyonun stabilitesini sağlamak için uygun bir stabilite çalışmaları yapın. Not: formülasyon ve ilacın kesin doğası lenfatik ilaç taşıma çalışmaların amacı olarak, her çalışma ile değişecektir tatbik edilecek bir formülasyon ve ilaç Admini bir fonksiyonu olarak lenfatik ilaç taşıma etkinliğini değerlendirmek için en sık sıkstered. <ol><li> Daha önce tarif edildiği gibi 43, Şekil 4 ve buraya 5 temsili deneylerde kullanılan formülasyon hazırlanır. Kısaca, fosfat tamponlu tuzlu su (pH 6.9), 5 mM sodyum taurokolat oluşan, sulu bir faz 5.6 ml dispersiyona önce 14 ° C, oleik asit (2-5 uCi) ve 40 mg oleik asit içine halofantrin (200 ug) içermektedir. </li><li> 2-monoolein içeren formülasyonlar için, oleik asit fazı ihtiva eden halofantrin aynı zamanda sulu faza, diğer bileşenler ile birlikte 2-monoolein 7.1 mg ekleyin. 2-Monoolein nispeten kararsızdır ve 1-monoolein ile isomerises olarak farenin hemen önce uygulamadan 2-monoolein içeren formülasyonlar hazırlayın. </li><li> Daha sonra, oda sıcaklığında 2 dakika boyunca ultrasonikasyon ile formülasyonları emülsifiye. Not: Daha önce 43 tarif edildiği gibi), emul görsel muayene: i formülasyonların stabilitesinin gözlenmesipolarize ışık altında yon hazırlandıktan hemen sonra herhangi bir faz değişim ve / veya ayırma bir gösterge sağlamak için dinamik ışık saçılması ile dozlamadan sonra emülsiyon ayrılır faz bağlantılı değildir ki, ii) partikül boyutu analizi sağlar ve halofantrin konsantrasyonları iii) analizi kullanarak Doğrulanmış bir HPLC analizi. </li></ol></li></ol></li><li> Lenf kanülün fışkırması için tuz içerisinde anti-koagülan 10 mg çözelti / ml EDTA, steril su içinde ya da 10 lU / ml heparin hazırlayın. Karotid arter kanülün fışkırması için tuzlu su içinde 10 lU / ml heparin - aynı zamanda 2.5 ihtiva eden bir anti-koagülan çözelti hazırlayın. </li><li> Mezenterik lenf kanalı (0.8 mm OD, 0.5 mm ID), karotid arter (0.96 mm OD, 0.58 mm ID veya 0.8 mm OD, 0.5 mm ID) ve duodenum (0.96 mm OD, 0.58 mm ID içine yerleştirilmesi için polietilen kanüller hazırlayın ) <ol><li> Lenf Cann için 15 cm - karotis arter ve duodenal kanül ve 10 30 cm - Gerekli uzunlukta (genellikle 25 kanüller kesinula) ve () Şekil 1 bir steril cerrahi bıçak kullanarak kanüller ucunda bir eğim yerleştirin. NOT: Bu kanül yerleştirme kolaylığı artırır ve kanül tıkanma sonrası ekleme insidansını azaltır. </li><li> Boyutuna kesme sonra, kendi üzerinde geri kanül küçük bir bölümünü döngü bir çakmak ya da sıcak plaka ile ısıtılarak tarafından intraduodenal kanül bir J şekil çapa noktasını yerleştirin (Şekil 1). </li></ol></li><li> (Adım 1.3 hazırlandı), bir anti-koagülan çözelti ihtiva eden bir 25 G iğne ve şırınga lenf kanül takın. Anti-pıhtılaşma çözeltisi ile lenf kanül doldurun ve kanül O çözümü bırakın / N lenf toplama sırasında lenf kanül içinde pıhtı oluşumu insidansını azaltmak için. </li><li> Lenf ve kan örneği toplama tüpleri hazırlayın. Lenf ve kan örneği alındıktan lenf toplama tüpleri, etiket tüpleri önceden ağırlığında ve anti-koagülan çözelti ilave edin. Yeterli anti-koagülan solut eklemeToplanan lenf veya kan 20 lU / ml heparin - iyon steril su içinde 1 mg / ml EDTA nihai konsantrasyon veya 10 elde etmek. </li></ol> Cerrahi Prosedür başlayan 2. Hazırlıklar hemen önce <ol><li> Patent olduğundan emin olmak için, steril tuzlu su ya da anti-koagülan çözelti ile yıkama tüm kanülü kontrol edin. </li><li> Cerrahi prosedür için sıçan hazırlayın. NOT: mezenterik lenf kanalı yedim veya mezenterik lenf sütlü ve yüksek lipid yükü ile opak hale geldikçe yağ doz edilmiş sıçanlarda daha görünür. Önce başlayan ameliyat 2 saat - Zeytin veya soya yağı 0,5 olarak - (1 ml 0.1 civarında) Bazı operatörler, özellikle ameliyat yeni olanlar, bu nedenle fareler bir yağ ile ön-dozlandığında zaman daha kolay mezenterik lenf kanalı cannulate bulmak . Bununla birlikte, ön-doz yağı yağ, doz öncesi ideal olmayabilir, öyle ki, lenf içinde lipid, lipofilik ilaç ve diğer faktörlere lenfatik naklini etkilerDeneyin amacı, bağlı olarak değişir. <ol><li> Cerrahi ve örnek toplama dönemi boyunca sıçan anestezisi. <ol><li> Örneğin, Kokteyl, 1.5 ml / kg deri altından enjeksiyon ile anestezi başlatmak bir 25 G iğne takılı bir 1 ml şırınga kullanılarak sıçan boynun arkasındaki bir deri içine kat (aşama 1.2.2 itibaren). (Aşama 1.2.2 itibaren) kokteyl 2, 0.44 ml / kg bir 25 G iğne takılı bir 1 ml şırınga ile, gerekli yaklaşık olarak her bir saatte bir intraperitoneal enjeksiyon ile anestezi bakımı. </li><li> Cerrahi anestezi derinliği solunum hızı, bıyık hareket, kas tonusu ve ayağın kıstırma gibi bir uyarıcıya tepkileri gözlemleyerek yeterli olduğundan emin olmak başlamadan önce. Gerekli ek anestezi uygulayın. </li></ol></li><li> Karotis arter kanül için lenf ve duodenum kanülasyon için batın sağ tarafını dahil cerrahi bölgelerden gelen kürk ve boyun ve sol klavikula bölgesini Tıraşyon. </li><li> Aseptik povidine-iyot solüsyonu veya klorheksidin solüsyonu ve% 70 etanol fırçalayın kullanarak cerrahi bölgeleri temizleyin. % 70 etanol ile bir nihai temizlik ile terbiye, her bölge için bu 3 kez tekrarlayın. </li></ol></li><li> Isıtılmış bir cerrahi pedi (37 ° C) üzerinde temiz bir kağıda dorsal recumbence hayvan yerleştirin. </li></ol> Mesenterik lenf kanalının 3. kanülasyonu <ol><li> Sağ tarafı operatörü doğru bakacak hayvan yerleştirin. Veya gerektiği gibi bir cerrahi mikroskop yardımı olmadan ameliyat. </li><li> Düz 4 cm&#39;lik kesi yaklaşık 2 cm göğüs kafesi (kot marjı) sağ alt kanadına orta hat (xiphoid süreç) uzanan bir steril neşter bıçak kullanarak karın kas duvarının üst tabaka açın (Şekil 2B bakınız). </li><li> Küçük bir çift sağ kanadına orta hatta yan 5 mm - 4 arası karın kas duvarının kalan katmanları açınCerrahi makas (Şekil 2B bakınız). </li><li> Sol karın kas duvarı altındaki küçük bağırsağa çekin ve 2 kullanarak bir yerde saklayın - normal tuzlu su ile doymuş steril gazlı bez 3 adettir. </li><li> Mezenterik lenf kanalı görselleştirme kolaylaştırmak için sağ böbrek düzeyinde sıçan arkasına altına yatay olarak yerleştirilmiş bir 10 ml&#39;lik plastik şırınga üzerine sıçan Köprü. </li><li> - (Şekil 2C görmek titreşimli koyu kırmızı kan damarı) mezenterik arterin sağ böbrek dik ve hemen rostral ve paralel çapı 1 mm gemi, yaklaşık 0.5: superior mezenterik lenf kanalı bulun. Not: aç bırakılmamış veya yağ önceden verilen sıçanlarda kap, beyaz opak ve oldukça saydam olduğu aç farelerde daha görselleştirmek için daha kolaydır. </li><li> İkinci, daha küçük aksesuar lenf kanalı olup olmadığını belirlemek için geniş superior mezenterik lenf kanalı ve mezenterik arterin hemen kaudal alanını kontrol edinMevcut. Varsa, kanalı severing ve superglue ile tıkayıp, ya da kanal etrafında bir dikiş atılarak kanal içinden lenf akışını engellemek bağırsak akan lenf tüm hacmi superior mezenterik lenf kanalı toplanan emin olmak için. </li><li> Sağ böbreğin alt kenarında peri-böbrek yağ yatağından düz forseps bir çift geçirin ve superior mezenterik lenf kanalı ile paralel bir doğrultuda hemen vena kava altında bağ dokusu katmanları aracılığıyla. </li><li> Forseps ucu lenf kanül tutun ve bir ucu hemen mezenterik lenf kanalına bitişik ve sağ böbrekte düzeyinde hayvandan dışarı çıkarılmış diğer peri-böbrek yağ yatağından çekin kullanma. </li><li> Künt diseksiyon ile bağ ve yağ dokusu katmanları örten mezenterik lenf kanalı izole edin. Delmek veya lenf kanalı zarar vermemeye özen gösterin. </li><li> Lenf kanalı izole sonra, küçük bir ho yapmakmikro-makas, kuyumcu forseps keskin ucu veya 25 G iğne ile ya lenf kanalı le. Tamamen gemiyi sever dikkat edin. </li><li> Lenf kanül tamamen hava boşlukları anti-pıhtılaşma solüsyonu (bir şırınga kullanarak ve 25 G iğne) ile dolu olduğundan emin olun. Forseps küçük bir çift yardımı ile küçük bir delik aracılığıyla mezenterik lenf kanalı içinde 4 mm - lenf kanül yaklaşık 2 yerleştirin. </li><li> Birkaç dakika için lenf kanül gözlemleyin. Kanülasyon başarılı olursa kanül serbest toplama ucundan bağırsak lenf kademeli akışını gözlemleyin. 3.12 - kanülasyon başarılı değilse, tekrar 3.8 adımları. </li><li> Kanülasyon başarılı olursa, lenf kanalı içine giriş deliğinin üzerine veteriner yapıştırıcı küçük bir damla koyarak kanül sabitleyin. Aşırı veteriner yapıştırıcı uygulanması yoluyla gemi tıkamak için özen gösterin. </li><li> Veteriner yapıştırıcı ayarlamak için bekleyen, glikozu ikenkanülasyon prosedürü başarılı olmasını sağlamak için birkaç dakika lenf akışını ettik. Kanülasyon başarısı bazı kere, dikkatle karın boşluğunda yerleştirildi gazlı parçaları kaldırmak ve orijinal konumuna ince bağırsak yerleştirin. </li><li> Pıhtılaşmaya karşı maddeyi ihtiva lenf toplama tüpü yerleştirin serbest akan lenf toplamak için kanül ucunda (adım 1.6). </li><li> Daha sonra, rehidrasyon çözeltiler ve / veya formülasyonlar infüzyonu için duodenum kanül. </li></ol> Duodenum 4. Kanülasyon <ol><li> Rehidrasyon solüsyonu ile doldurulmuş bir şırınga (örneğin, 10 mi) ile on iki parmak bağırsağı kanül takın. </li><li> Çekerek nazik aşağı üzerine mide ortaya ince bağırsak bölümünde, (daha fazla kan damarları ile) parlak pembe olarak duodenum tanımlayın. </li><li> Yaklaşık 2 cm mide ve duodenum (pilor) kavşağında altında duodenum küçük bir delinme delik açın kullanaraksteril 23 G iğne. </li><li> Delinme delikten duodenal kanül J şeklindeki çengel ucunu. Siyanoakrilat yapıştırıcı bir damla ile yerde sabitleyin. </li><li> Bir infüzyon pompası yüklü rehidrasyon şırıngaya kanül takarak sıçan hidrasyon başlar. Literatüre göre rehidrasyon oranları aralığı 0,5-3 ml / saat 15,25. </li><li> Lenf ve onikiparmak bağırsağı kanülasyon tamamlanmasından sonra, sütür ile karın kas duvarında kesi kapatın. Daha sonra insizyon tarafı boyunca doku yapıştırıcısı (siyanoakrilat) birkaç damla tatbik birlikte kesiğin her iki yanı üzerinde derinin sıkıştırarak cilt insizyonu kapatın. </li></ol> Karotis Arter 5. Kanülasyon karotid arter kanülasyonu önce veya mezenterik lenf kanalının kanül sonra gerçekleştirilebilir. Bazı operatörler önce po azaltmak amacıyla lenf kanalı cannulating karotis arter cannulate tercihhayvan taşırken tentially lenf kanül yerinden oynatmamaya. <ol><li> Artere eklemek için boru bölümünü tanımlamak için konik ucundan karotis arter kanül 2.5 cm bir işareti koyun. Anti-pıhtılaşma solüsyonu ile dolu bir şırınga bağlı 23 veya 25 G iğne (Fasetsiz yani) kanül diğer ucunu ve anti-pıhtılaşma çözüm hava boşlukları bulunduğundan emin yapma kanül doldurun. </li><li> Kanül kolaylaştırmak için, operatör doğru işaret gergin boyun ve kafa ile sırt yatma anestezi sıçan yerleştirin. Bazı operatörler sıçan kuyruğu operatörü doğru bakacak şekilde bu tekniği gerçekleştirmek için tercih unutmayın. </li><li> Sagital düzlemde trakea sol üstünde deri tabakası ile 1,5 cm boyuna kesi - 1 koyun. </li><li> Altta yatan eşli boyun kasları ortaya çıkarmak için künt uçlu forseps kullanarak cilt altı bağ dokusu incelemek. </li><li> Boyun kasları t geri çekino (~ 1 cm&#39;lik cilt yüzeyi ve darbelerin altında bulunan) sol karotis arter ortaya koymaktadır. Künt diseksiyon ile arter örten bağ dokusu temizleyin. </li><li> Dikkatle komşu vagus sinir parça zarar vermemeye özen, künt doku forseps kullanarak arterin bir ~ 1 cm bölümünü izole edin. Açılış ve çevre dokuya ve vagus siniri kurtarmak için arterin iki yanı boyunca dikey olarak künt ucu forseps kapatarak bu gerçekleştirin. </li><li> Ince uçlu forseps kullanarak, karotis arter altında iki ipek sütür iplik ve izole arter bölümünün her iki ucunda koyun. Sıçan kalbi ve klavikula (Şekil 3A) operatörün ve sağdaki için dikiş yakın kapalı kravat. </li><li> Arter (Şekil 3B) altında düz ince uçlu forseps bir çift yerleştirerek arter yoluyla kan akışını tıkamak. </li><li> Ince uçlu iris makas kullanarak, arter (yaklaşık 1/3 üst yüzeyinde küçük bir kesi yerleştirinyol aşağı izole bölgenin üstünden). Heparinize tuzlu su ile arter yüzeyinde Dökülen kan yıkayın ve yavaşça pamuk ipuçlarını kullanarak silin. </li><li> Kavisli ucu forseps bir çift ile artere kanül ucu yerleştirin. Bir kez takılı, kan akışını kapatılmasıy düz ince uçlu forseps kaldırmak ve kanül eklemek için sırt ve diğer sızıntı kan durdurmak için arterin içine kanül tutmak için iki forseps çiftleri, birini kullanarak artere kanül 2.5 cm ilerlemek. </li><li> Arterin içine kanül tutun ve kan akışını tıkamak için adım 5.8 arter altına yerleştirildi düz ince uçlu forseps kaldırmak için küçük bir arter kelepçe kullanın. </li><li> Kanül içine anti-koagülan çözelti enjekte etme ve kan küçük bir miktar (Şekil 3C) geri çekilmesi ile kanülün açıklığını teyit edin. Sonra antikoagülan solüsyonu ile kanül yıkayın ve bir çakmak alevi veya kanül fişi kullanarak ucunu mühür. </li><li> Inci KravatAdım 5.8 arter altına yerleştirilen iki sütür ile yerde e kanül. </li><li> Arter kelepçesini çıkarın ve arter ve kanül etrafında üçüncü dikiş sabitleyin. Dikişlerle yara boyun kapatın. </li></ol> 6. Post-cerrahi Dönemi ve Formülasyon İnfüzyon <ol><li> Anestezi altında ve ısıtmalı pad üzerinde fare tutmak için devam edin. </li><li> Kanüllerinin tamamlanmasından sonra en az 0.5 saat duodenuma rehidrasyon solüsyonu infüzyonu yoluyla sıçan rehydrate. Kanülasyon sonrası ilk döneminde - (0.5 ml / saat ~ 0.1) ve yakında sabit taban yükselmesi lenf akış hızı azalma uyun (0,4-2,5 ml / saat rehidrasyon hızına bağlı olarak). </li><li> Geri kazanma periyodunu takiben, kanül yoluyla duodenuma (lipidler, uyuşturucu, vs. ihtiva eden) ilgili bir formülasyon aşılamak. İsteğe bağlı olarak, formülasyonun akış hızını ayarlamak için bir enfüzyon pompası kullanılır. NOT: protokol burada açıklanan hayvanlar ANAES kalırCerrahi ve lenf toplama süresi boyunca thetised ve ek analjezi gerekli değildir, öyle ki anestezi altında ötenazi edilir. Protokol değiştirilmiş ve hayvanlar uygun analjezi ve post-operatif bakım gerekecektir sonra bilincini kazanmak için etkin ise. </li><li> Formülasyon, aşılama tamamlanmasından sonra su kaybını önlemek için duodenuma, normal tuzlu su ile 1.5-3 ml / saat oranında sıçan rehidrate devam etmektedir. </li><li> Gerektiği gibi alt karın yumuşak aşağı itme yoluyla mesane, (adım 2.3 göre) sıcaklığını korumak için 37C ısıtılmış cerrahi pad üzerinde ekspres idrar sıçan tutmak ve adım 2.2 uyarınca (oftalmik merhem her saat yeniden devam. 3). Hayvan işleminden sonra bilincini kazanmak için ise düzenli vücut pozisyonu değişir tavsiye edilir. </li></ol> Lenf ve kan Örneklerinin 7. Koleksiyon lipid ve İlaç emilimi değerlendirmek için <ol><li> Sürekli olarak lenf toplayınpıhtılaşmayı önleyici ihtiva eden tüpler. Gerekli zaman aralıklarında Değişim tüpleri (örneğin, saatlik). </li><li> Ayarlanan zaman noktalarında kan örnekleri toplayın. <ol><li> Geri yaklaşık mühürlü sonundan itibaren 2 cm kanül bükerek kanül aracılığı ile kan akışını tıkamak. Mühürlü ucunu keserek veya kanül fişi çıkartarak kanül açmak. </li><li> Kan tüm kanül doldurana kadar boş bir şırınga kullanarak, kanül heparinize tuzlu çekme. </li><li> Yeni bir boş şırınga kullanarak, pıhtılaşmayı önleyici içeren bir tüp kan ve yerin istenilen hacmi çekme. </li><li> İlk şırınga kullanarak, gereksiz kan kaybını azaltmak için örnekleme önce alınan kan değiştirin. Dik hava kabarcığı kanül girmek sağlamak için tutarken enjeksiyondan önce, şırınga fiske. </li><li> Bir şırınga kullanılarak, anti-koagülan çözelti ile sıçandan çıkarıldı kan hacmini değiştirmek. Herhangi bir pıhtı olabilir kalan hiçbir kalıntı kan kanül görünür olduğundan emin olunve kanül engellemek. </li><li> Bend kanül mühürlenmemiş ucundan yaklaşık 2 cm kan akışını engellemek ve şırınga kaldırmak için. Bir çakmak alevi veya bir kanül fiş kullanarak, kanül kapatın. </li></ol></li><li> Sıçandan alınan kan ve lenf toplama tamamlanmasından sonra,&gt; 100 mg / kg sodyum pentobarbıton intraperitonal uygulama yoluyla fare euthanize. </li><li> Her dönemde toplanan lenf kütlesini ölçerek lenf akış hızını belirleyin. </li><li> Lipid ve ilaç emilme etkinliğini değerlendirmek için, örneğin HPLC, HPLC-MS ya da, ticari kitler kullanılarak, lenf ve kan kullanarak ilaç ve lipid konsantrasyonu ölçümü. </li><li> Toplanan ölçülen konsantrasyon ve lenf hacminin üründen lenf ilaç ve lipidlerin kitle ulaşım hesaplayın. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

sıçan mezenterik lenf kanülasyon modeli çeşitli maddelerin meydan konsantrasyon ve çeşitli hücreler ve barsaktan lenf içine ve tepki olarak ortaya bu değişiklikler (örneğin lipidler ve uyuşturucu gibi) moleküllerin taşınması oranının doğrudan ölçümü sağlar (diyet antijen, ilaç formülasyonları, vs.) 10,27 ve hastalığın (kanser, virüs, kolit, insülin direnci, vb), 5-7. lenf içinde toplanan parçalar ayrıca ek deneyler kullanılabilmektedir. Örne?...

Lenf her ince bağırsak villus 1 içinde bulunan tek lacteals de kaynaklanan bir tek yönlü süreci ile ince bağırsakta akar. Lacteals böylece sıvı, makro moleküllerin, hücre ve lenf oluşumuna nispeten geçirgendir lacteals bu faktörlere girişi ile başlar. lacteals ilk lenf sonradan lenfatik mikrodamarlar ağı, toplama (afferent) lenf damarları, mezenterik lenf düğümleri ve sonuçta sonrası düğüm (efferent) lenf damarlarının bir dizi aracılığıyla bağırsak akar. Düğümleri içinde, lenf değişimi kandan düğüm giren düğüm yerleşik bağışıklık hücreleri hem de malzeme oluşur medüller sinüslerin dizisinden geçmektedir. Ince bağırsakta akan tüm lenf sonunda efferent superior mezenterik lenf kanalı ve sonradan sisterna chyli içine yakınlaşıyor. Sisterna chyli da lenf kaudal periferal dokulara drenaj, INTEST toplarinal, karaciğer ve bel bölgeleri ve mediasten ve vücudun kafatası parçaları gelen lenf birlikte göğüs lenf kanalı katıldı. Torasik lenf kanalı sol internal juguler ve subklavian damarları kavşakta venöz sisteme doğrudan lenf boşaltır. superior mezenterik lenf kanalı doğrudan lenf toplama sağlar Burada açıklanan protokol, böylece bağırsak lenf sistemi yoluyla sistemik (genel) dolaşıma bağırsak doğrudan transit çeşitli faktörlerin analizini kolaylaştırır. bağırsak lenf sistemi tahsis ana fizyolojik fonksiyonları, sıvı dengesini korumak için lipid ve bir lipofilik molekül absorpsiyonunu kolaylaştırmak için uygun bağışıklık karşılıklarının 1 sağlamak için bulunmaktadır. Tümör hücreleri ve virüsler de 2-4 ve anahtar değişiklikler çeşitli inflamatuar ve metabolik patolojiler 5-7 lenfatikler içinde meydana bağırsak lenfatikler yoluyla yaymak. Kutumezenter çeşitli hücrelerin ve moleküllerin konsantrasyonu ve taşıma hızı bir bağırsak lenfatikler yoluyla toplu sıvı akışının analizi yanı sıra kantifikasyonunu sağlayan içinde mezenterik lenf kanalı nulation lenf toplamak için. Çeşitli zorluklar (örneğin, diyetler, antijenler, ilaçlar) ve hastalık modellerinde yanıt olarak konsantrasyon veya bu faktörlerin transit değişiklikler (örneğin, kolit, HIV, diyabet) de değerlendirilebilir. Bu kapsamlı analiz ve burada mukayese edilebilir her lenf bileşeni tanımlamak mümkün iken, mezenterik lenf basitçe sulu, lipid ve hücresel aşamadan oluşmaktadır. Sulu fazda ilgi bileşenleri gibi antijenler veya tolerogenler 8 gibi sitokinlerin ve mast hücresi aracılarının 9 ve bu inkretinlerin 10 gibi metabolik mediatörleri olarak bağışıklık haberci olarak peptidler ve proteinler bulunmaktadır. Post-düğüm mezenterik lenf hücresel fraksiyon lenfosit (99 üzerinden%) neredeyse tamamen oluşures 11. Çeşitli bağışıklık hücreleri (dendritik hücreler, mast hücreleri, vs), önceden düğüm mezenterik Lenfatikleri butonu ama düğüm 12 içinde kalır. Afferent lenf içindeki hücreler ilgi iseniz, mezenterik lenf çıkarılması yoluyla bu hücreleri toplamak mümkündür mezenterik lenf kanalı 12 kanülasyondan önce birkaç gün düğümleri. Bu şekilde afferent ve efferent lenf kanalları doğrudan bağlı olan ve afferent lenf lenf hücrelerinin mezenterik lenf kanalına doğrudan geçer. bağırsak lenfatiklerin geçen çeşitli bağışıklık hücreleri geçiş ve fenotipin bu şekilde kontrol edilebilir. Belki bugüne kadar mezenterik lenf toplamak için belirtilen en yaygın nedeni, ancak, bağırsak işleme, emilimi ve diyet lipidler ve lipofilik moleküllerin 10 naklini incelemektir. Alımından sonra, diyet lipidler, örneğin trigliserit yağ asitlerinin ve monogliserit, fosfonat için (sindiriliryağlı asitler ve lizofosfolipidin, ve yağ asidi ve kolesterol gibi), kolesterol estere holipid ve safradan amfifillerin ilave edilerek küçük bir misel ve vesiküler yapılarına bağırsak lümeni içinde dağılmış (fosfolipidler, kolesterol ve safra tuzları) ve eylem Pankreas enzimleri 10,13. Buradan onlar enterositler içine emilir. Absorbe bileşenlerin bir kısmı emici hücreleri (enterositler) içinde trigliseritleri, fosfolipitleri ve kolesterol ester meydana getirmek üzere yeniden esterleştirilirler. Bu yeniden esterifiye lipitler salgılanan safra mukozal lipit havuzları veya bağırsak kan kaynağı 13 den alınan eksogen lipid bileşeni ve endojen yağ bileşenlerinin bir kombinasyonu monte edilir. Buradan esterlenmiş lipidler ya enterositler saklanır ya da birlikte, çeşitli apoprotein ve diğer lipofil moleküller ile bağırsak lipoproteinlerin (kilomikronlar, çok düşük yoğunluklu lipoproteinlerin (VLDL)) (içine yerleştirilebilir <em&gt; gibi, vitaminler) 10,13. Bağırsak lacteals bağırsak kan kılcal daha kendi giriş daha geçirgen olduğu gibi enterositlerin çıktıktan sonra, lipoproteinler özellikle mezenterik lenf sistemi yoluyla sistemik dolaşıma bağırsaklardan taşınır. Emilen yağ bileşenlerinin bir kısmı, aynı zamanda, ortaya çıkan yegane olmayan lipoprotein olarak kılcal kan damarlarının ve portal damarı yoluyla sistemik dolaşıma bağırsaktan taşınan 14 moleküllerdir. Bununla birlikte, genelde, portal ven taşıma güzergahı, kısa ve orta zincir uzunluğuna sahip lipid absorpsiyon sadece önemli bir oyuncu. mezenterik lenf toplanması ve böylece bağırsak ile ilgili lipoproteinler ve ilgili bileşenleri (lipitler, lipofilik moleküller, apo-proteinleri) sevk değerlendirilmesini sağlar. lipoproteinler miktarı ve mezenterik lenf lipoproteinler, genel olarak, bir nascen içinde avantajlı olarak karakterize edilebilirt devlet onlar yaygın tür lipoprotein lipaz 15 gibi sistemik enzimler tarafından modifiye edilmiş değil çünkü. Mezenterik lenf kanüle sıçan modeli tarihsel olarak, belki de en yaygın olarak bağırsaktan lipit / lipoprotein taşıma analizi için tarif edilmiş olmasına rağmen, ilgi genişleyen bir alan lipofilik ilaçlar, ön ilaçları ve diğer ksenobiyotiklerin 13,16 taşınmasında lenfatiklerin rolü hangi Burada anlatılan modelin odak noktasıdır. (Genellikle uzun zincirli trigliserid&gt; 50 mg / g olarak log P&gt; 5 ve çözünürlüğe sahip olanlar istisna belirgin olmakla birlikte) lipofilik ilaçlar 17,18, 19 ve diğer ksenobiyotikler 13,16 ya pasif ya da bağırsak lenfatiklerin erişebilir ön-ilaçları aktif bağırsak lipoprotein taşıma yollarının 19 entegre. sıçan mezenterik lenf kanülasyon tekniği böylece birçok uygulamalar vardır. Bollman ve diğ., Bir TECHNIQ tarifmodeline varyasyonları daha sonra tarif edilmiştir yana vi. 1948 20 sıçanlarda mezenterik lenf kanalı cannulate. Sıçan çeşitli anestezik 21,22 ile anestezi edilir Örneğin, toplama oluşabilir, ya da bilinçli halde iken 23,24 hareketli 15 veya serbestçe ölçülü. (- 5 mi / saat, tipik olarak 0) 25 Sıçanlar farklı rehidrasyon çözümleri ve mide, bağırsak veya parenteral, farklı oranlarda lipit ve ilaç formülasyonlarında başka maddeleri tatbik edilebilir. Bazı çalışmalarda göğüs lenf kanalı ziyade mezenterik lenf kanalı göğüs lenf kanalı da diğerinden lenf aldıkça bu, ilgi faktörüne bağlı olarak, ince bağırsaktan geçiş abartma olsa lenfatikler yoluyla bağırsak ulaşım tahmin etmek kanüle bölgeler 22,26. Lenf kanülasyon modelleri de farelerde 15,27, mini-pi dahil olmak üzere çeşitli başka türlerde de tarif edilmiştirgs 12, koyun 28,29, domuzlar ve köpekler 30 31. Ancak, sıçan modeli en yaygın ve tutarlı atıf olduğunu. Bilinçli 25&#39;inde lenf toplanması ardından veya 22 sıçan ve fareler 15,27 anestezi mezenterik lenf kanalı kanülasyon için detaylı protokoller daha önce yayınlanmış olan ve ilgi okuyucu bu protokollere yöneliktir. Bu protokol görüntülenmiştir biçimde tekniği göstermek için ilk. lenf kanüle sıçan modeli, gider açısından cerrahi ve etik hususlar kolaylığı büyük hayvan modelleri üzerinde avantajları vardır. Fare modeli ile karşılaştırıldığında fare modeli transgenik hayvanların 27 daha detaylı çalışmalar olanak rağmen, mezenterik lenf kanülasyon cerrahi de sıçanlarda kolaydır. Bununla birlikte, sıçan modelinde, fizyoloji farklılıklar ile ilişkili, özellikle de, bu sınır extrapolat bazı sınırlamalar vardırDiğer ön-klinik ve klinik durumlara iyon. Örneğin, fare safra akışı sabit ve daha yüksek tür gıda ise gıda alımından bağımsız olması, lipidler safra akışını 32 harekete geçirir. Bu daha büyük türler ve insanlarda görülen ne yansıtan sıçan temsilcisi öncesi ve sonrası tokluk ortamları elde etmek zorluklar yaratır. Gerçekçi insan dozajı 25 oluşturur lenfatik taşıma değerlendirilirken ilaç verme çalışmaları için, daha büyük bir türleri de tercih edilebilir. Yeni bir çalışmada, mezenterik lenf lipid ulaşım oranları türler 27 arasında lipit ulaşım verilerinin değerlendirilmesiyle bazı güven sağlayan eşdeğer kütle ve lipid Çeşidi verilmesinden sonra türlerin (fare, sıçan, köpek) arasında karşılaştırılabilir olduğu görülmüştür. Ancak, hayvan boyutu (yani, köpek&gt; rat&gt; fare) sırasına göre bir modeli lipofilik ilaç, Halofantrin taşınımı. Bir ölçekleme faktörü böylece ex gerekebilirDiğer türlere sıçan lenfatik ilaç taşıma verilerini trapolate. Lenf kanülasyon modelleri bir sınırlama, genel olarak, lenf damarları damar 33 kanüle sonra değişmiş bir basınç gradyanı karşı çalışmak beri lenf akışını ve taşıma değiştirebilir lenfatik kanal doğrudan pasif lenf koleksiyonu. Lenf kanülasyon modeli aynı tekniği ile yabancı laboratuarlarda kurmak zor olabilir. Alternatif model de tarif edilmiştir. Örneğin, lipoproteinler ve lipofilik moleküller olarak bağırsak lenf sistemi yoluyla faktörler, geçiş, dolaylı olarak kan toplama ile incelenmiştir. Bu tür bir model, ağızdan mevcudiyetinde uygulama ve inhibitör yokluğunda, aşağıdaki lipid ve / veya ilaçların kan düzeylerinin karşılaştırılmaktadır (örneğin, kolşisin, Pluronik L81, sikloheksimid) lenfatik taşıma 34 blok bağırsak lipoprotein üretiminin. Bir avantajıKan örneklerinin toplanması yoluyla dolaylı lenfatik taşıma miktarını modellerin invaziv cerrahi 35 gerekmez gibi insanlarda lenfatik taşıma bazı değerlendirilmesini sağlar olmasıdır. Bununla birlikte, lenfatik taşıma inhibitörleri, özel değildir ve lenfatiklerin ile taşınır faktörler seyreltildi ve bu değerlendirmede zorlaştırmaktadır sistemik dolaşımda modifiye edilmiştir. İn vitro alternatifler de tarif edilmiştir. Örneğin, Caco-2 hücre veya izole edilmiş enterosit kültürleri daha ayrıntılı olarak Lenfatikleri 36-38 butonu moleküllerin bağırsak salgılanmasını çalışma için kullanılmıştır. İnsan bağırsak mikroçevresinin daha temsilcisi gelişmiş in vitro modeli yakın zamanda 39 tanımlanmıştır. Bu modelde, bir lenfatik endotel hücre tabakası lenfatik bağırsaklarda maddelerin transferi daha ayrıntılı bir analizini sağlar Caco-2 hücreleri ile birlikte kültürlenir. Bununla birlikte, vitr içindeo hücre sistemleri döviz akışını eksikliği ve bağırsak lümen ve altta yatan kan ve lenfatik vasküler kaynağı ile yani arabağlantı aktarın. Alternatif bir yaklaşımda, Klassis ark. Damar kasılması, lenf akışı ve mezenterik lenf damarları 33 floresan lipid konsantrasyonları arasında kantitatif karşılaştırmalar sağlayan yerinde görüntüleme sisteminde bir çift kanal (yüksek-hızlı parlak alan görüntü ve floresan) kurdu. Vitro sistemlerde bahsedilen boyunca bu modelin bir avantajı, lenfatik yoluyla bağışıklık hücrelerinin geçişine doğru izleme mümkün kılmasıdır. Kütle lipid (ya da ilaç) taşıma mutlak ölçümleri, ancak, yine de görüntüleme yöntemleri kullanılarak elde edilmiştir. In vitro ve in silico özellikle de 40-42 yayınlanmıştır bağırsak lenfatiklerin ile lipofilik ilaç taşıma ölçüde tahmin yaklaşımlar değildir. Birkaç c Örneğin, ex vivo olarak afinitePlazma şilomikronların için iyodu in vivo 41 kendi lenfatik taşıma oldukça iyi korelasyon bulunmuştur. Daha sonra, aynı grup birden fizikokimyasal özellikleri 40 dayalı şilomikronların için ilaç afinite tahmin etmek siliko modelde kurulu. Holm ve ark., Aynı zamanda doğrudan moleküler tanımlayıcılar 42 dayanarak lipofilik bileşiklerin lenfatik taşıma tahmin siliko modelinde nispeten karmaşık bir tesis. Bu modeller, bilinmeyen ilaçlar lenfatik taşıma ölçüde tahmin etmek için kullanışlı bir yaklaşım sağlayabilir. Ilaç ve farklı laboratuarlarda genelinde geniş modellerin Doğrulama, ancak onların doğruluğu ve tekrarlanabilirliği onaylamak için gerekli olacaktır. Mezenterik lenf kanalı kanülasyon böylece doğrudan ince bağırsağa ve faktörler (hücre, proteinlerin karmaşık dizi transit oranını drenaj lenf içeriğini incelemek için tek yolu kalır,in vivo bir durumda lenf içinde peptidler, lipidler, ilaçlar). Bu yazıda mezenterik lenf ve anestezi sıçanların sistemik kan toplama sağlar mezenterik lenf kanalı ve karotis arter kanülasyon için bir protokol açıklar. Örnek veri modeli mezenterik lenf sistemi ile bağırsaktan bir lipid ve ilaç taşıma incelemek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir. Bu model ve sorun giderme kılavuzunu kurulmasında karşılaşılan zorluklar olabilir bir tartışma izler. Kurulan kez modeli bağırsak lenfatik taşıma araştırmak için güçlü bir araçtır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" >
	<tbody>
		<tr >
			<td >Sterile saline</td>
			<td>Baxter healthcare</td>
			<td>AHB 1307</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Baxter 100 ml saline bags, box of 50</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >70 % ethanol in water</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chlorhexidine gluconate solution (Microshield 4)</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>JJ60243L</td>
			<td>Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=JJ60243L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Betadine solution</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>BU0510</td>
			<td>Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=BU0510</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ilium Ketamil (Ketamine 100 mg/ml)</td>
			<td >PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td >KETA I 1</td>
			<td>http://www.provet.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml)</td>
			<td >PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td >TRO-3828</td>
			<td>http://www.provet.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ACP 10 Injection (Acepromazine 10 mg/ml)</td>
			<td >PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td >VTG-DACP010020</td>
			<td>http://www.provet.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium pentobarbitone</td>
			<td>PROVET VICTORIA&#160;</td>
			<td>24529</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Lethabarb&#174; 325 mg/ml sodium pentobarbitone, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heparin (35000I.U. in 35 mL)</td>
			<td>Sigma Pharmaceuticals</td>
			<td>337220</td>
			<td>http://sigmaco.com.au/</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >E1644</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is disodium salt of EDTA from Sigma.&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.96 mm x i.d. 0.58 mm</td>
			<td>Microtube extensions</td>
			<td>PE8050</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.8x0.5 mm, 30 m</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm</td>
			<td>Microtube extensions</td>
			<td>PE9658</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.96x0.58 mm, 30 m</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ruler</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Markers</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cigarette lighter</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cyanoacrylate glue</td>
			<td>Any</td>
			<td ></td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >23 gauge needles</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>DN23GX0.75LV</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT= 
			6&#38;search=DN23GX0.75LV</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >25 gauge needles</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>DN25GX1.0LV</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search= 
			DN25GX1.0LV</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 ml syringe</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>T3SS01TA</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=T3SS01TA</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 ml syringe</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>T3SS10SA</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=T3SS10SA</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Gauze swabs</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>GSC075</td>
			<td>Any brand can be used and cut to required size. Example here is gauze swabs cotton filled 7.5x7.5 cm, 8 ply. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=GSC075</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton buds</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>CTAST075DP</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Livingstone cotton applicator plastic double tipped. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=CTAST075DP</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heating pad</td>
			<td>Ratek</td>
			<td>WT1</td>
			<td>Any brand that keeps temperature at 37C can be used. Example here is Ratek warming tray.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical light</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-0215 with 72-0267</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Harvard apparatus V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ 
			-1_HAI_ProductDetail and&#160; http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ 
			-1_HAI_ProductDetail___</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>495005-0014-000</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C with Stand S Double Spot and KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&#38;p=us&#38;f=e&#38;i=10143</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Silk suture</td>
			<td>Livingstone International</td>
			<td>DTSK163019F4</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is *&#160; 
			Email this item to my friend 
			3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&#38;CAT=6&#38;search 
			=DTSK163019F4</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scalpel blades</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td >10020-00</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Blade #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scalpel handle</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>10004-13</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&#38;CategoryId=51</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Small surgical scissors</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>14060-09</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Fine Scissors, 9 cm with 21 mm cutting edge, sharp, straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&#38;CategoryId=17</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2 x Forceps with serrated curved tip</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td >11001-13</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST 13 cm standard pattern forceps with curved 2.8x1.4 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&#38;CategoryId=32</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Iridectomy scissors</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>15000-08</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge, Straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&#38;CategoryId=16&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Forceps with straight serated tip</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11650-10</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Graefe 10 cm straight with serrated 1 x 0.99 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&#38;CategoryId=32</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Forceps with smooth sharp straight fine tip</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Dumont #5 forceps straight 11cm with 0.08 x 0.04mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&#38;CategoryId=29</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Forceps with smooth fine curved forceps</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11063-07</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Delicate Forceps 9 cm with smooth 0.4 x 0.3mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2 x Hemostats</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td >13010-12</td>
			<td>Any brand can be used. Not all operators use the hemostats. Example here is FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats with 20 mm length x 1.3 mm width serrated, straight tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&#38;CategoryId=33</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Suture needle holder</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>12001-13</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST 13cm Hasley Needle Holder with 16 mm length x 1.9 mm width tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&#38;CategoryId=70</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 x Artery clamp</td>
			<td >Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>18050-28</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is FST Bulldog Serrefines straight, 28 mm long, 9x1.6 mm jaw dimension with medium clamp press. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&#38;CategoryId=82</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Oleic acid</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >O1008</td>
			<td>When required, any brand can be used. Example here is 99% pure oleic acid. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >14C-oleic acid</td>
			<td >Perkin&#160;</td>
			<td>NEC317050UC&#160;</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is Oleic Acid, [1-14C]-, 50&#181;Ci (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium taurocholate</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >T4009</td>
			<td>Any brand can be used. Example here is taurocholic acid sodium salt hydrate &#8805;95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Halofantrine</td>
			<td >Glaxo Smith Kline</td>
			<td ></td>
			<td>Halofantrine was kindly provided as a gift from Glaxo Smith Kline</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium phosphate monobasic</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >71507</td>
			<td >Any brand can be used. Example here is sodium phosphate monobasic monohydrate, BioXtra, for molecular biology, &#62;99.5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium phosphate dibasic</td>
			<td >Sigma Aldrich</td>
			<td >71643</td>
			<td >Any brand can be used. Example here is sodium phosphate dibasic dihydrate, BioUltra, for molecular biology, &#62;99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&#38;region=AU</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the mesenteric lymph duct cannulated rat model: application to the assessment of intestinal lymphatic drug transport

bağırsak lenf sistemi sıvı taşıma, lipit emilimi ve immün fonksiyonu önemli roller oynar. Lenf superior mezenterik lenf kanalı yakınsama lenf damarlarının ve düğümlerin bir dizi üzerinden ince bağırsaktan doğrudan akar. Mezenterik lenf kanalı kanülasyon böylece bağırsak akan mezenterik lenf toplama sağlar. Mezenterik lenf ve lipoprotein fraksiyonu (lipidler, lipofilik moleküller ve apo-proteinleri) (örneğin, sitokinler ve bağırsak hormonları olarak sıvı, peptidler ve proteinler) bağışıklık hücreleri (% 99 lenfositler), sulu kısmın bir hücre fraksiyonu oluşur. mezenterik lenf kanalı kanülasyon model bu nedenle lenf sistemi yoluyla konsantrasyon ve barsaktan faktörlerin bir dizi taşıma hızını ölçmek için kullanılabilir. Farklı ihtiyaçlara cevap vermek üzere bu faktörlere değişiklikler (örneğin, diyetler, antijenler, ilaçlar) ve hastalık (örneğin, iltihabi bağırsak hastalığı, HIV, diyabet) de olabilir bE tespit edilmiştir. Ilgi genişleyen bir alan bağırsak emilim lipit yollar ile ilişkilendirmek oral lipofilik ilaçların ve ön ilaçların emilimini lenfatik ulaşım rolüdür. Burada tarif, detaylı, bağırsak doğumu takiben birkaç saat için lenf sistemi yoluyla oranı ve lipid ve ilaç taşıma ölçüde değerlendirilmesini sağlayan bir mezenterik lenf kanalı kanüllü sıçan modeli. yöntem lenf diğer parametrelerin ölçümü için de uyarlanabilir. Biz deneysel başarısını teyit ve elde edilen verileri yorumlamak için nasıl talimat sağlamak için bu karmaşık cerrahi yöntemi kurarken karşılaşılabilecek zorluklar ayrıntılı açıklamaları yanı sıra başarısız ve başarılı deneyler temsilcisi veriler sağlamaktadır.

temsili bir deneyin sonuçları, Şekil 4 ve 5&#39;te gösterilmiştir mezenterik lenf kanülasyon modeli kullanılarak bağırsak doğum sonrası lenf sistemi ile kümülatif boyut ve lipid ve ilaç taşıma hızını ölçmek için. Bu deneyde, örnek lipofilik 200 ug fosfat tamponlu 5.6 mi, 5 mM sodyum taurokolat dağıtılır ve 7.1 mg 2-monoolein - ilaç halofantrin, 40 mg, oleik (5 uCi 14C-oleik asit 2 de dahil olmak üzere), asit ihtiva eden bir formülasyon içinde 2 ...

Watch this Scientific Journal Video about The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport at JoVE.com

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

Mezenterik Lenf Kanal Kanüllü Rat Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Ulaştırma Değerlendirilmesine Uygulaması

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

the-mesenteric-lymph-duct-cannulated-rat-model-application-to

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

28.3K Görüntüleme.  Monash University (Parkville Campus). Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

Video: The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune response and therefore, the development of effector cells. As such, LNs are key to fighting invading pathogens and maintaining health. The choice of LN to study is dictated by accessibility and the desired model; the inguinal lymph node is well situated and easily supports studies of biologically relevant models of skin and genital mucosal infection.
The inguinal LN, like all LNs, has an extensive microvascular network supplying it with blood. In general, this microvascular network includes the main feed arteriole of the LN that subsequently branches and feeds high endothelial venules (HEVs). HEVs are specialized for facilitating the trafficking of immune cells into the LN during both homeostasis and infection. How HEVs regulate trafficking into the LN under both of these circumstances is an area of intense exploration. The LN feed arteriole, has direct upstream influence on the HEVs and is the main supply of nutrients and cell rich blood into the LN. Furthermore, changes in the feed arteriole are implicated in facilitating induction of adaptive immune response. The LN microvasculature has obvious importance in maintaining an optimal blood supply to the LN and regulating immune cell influx into the LN, which are crucial elements in proper LN function and subsequently immune response. 
The ability to study the LN microvasculature in vivo is key to elucidating how the immune system and the microvasculature interact and influence one another within the LN. Here, we present a method for in vivo imaging of the inguinal lymph node. We focus on imaging of the microvasculature of the LN, paying particular attention to methods that ensure the study of healthy vessels, the ability to maintain imaging of viable vessels over a number of hours, and quantification of vessel magnitude. Methods for perfusion of the microvasculature with vasoactive drugs as well as the potential to trace and quantify cellular traffic are also presented. 
Intravital microscopy of the inguinal LN allows direct evaluation of microvascular functionality and real-time interface of the direct interface between immune cells, the LN, and the microcirculation. This technique potential to be combined with many immunological techniques and fluorescent cell labelling as well as manipulated to study vasculature of other LNs.

A technique for performing intravital microscopy of the inguinal lymph node (LN) is outlined. Such technique allows for real-time, in vivo study of the lymph node microvasculature and structure both during homeostasis and infection. This technique can be adapted to cell trafficking studies and to other lymph node sites.

Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below 50-75 copies/ml) is necessary to gain insight to viral dynamics and virus host interactions in patients who naturally control the infection and those who are on combination antiretroviral therapy (cART). 
Here we describe how to amplify viral genomes by single genome sequencing (the SGS protocol) 13, 19 and how to accurately quantify HIV-1 RNA in patients with low viral loads (the single-copy assay (SCA) protocol) 12, 20. 
The single-copy assay is a real-time PCR assay with sensitivity depending on the volume of plasma being assayed. If a single virus genome is detected in 7 ml of plasma, then the RNA copy number is reported to be 0.3 copies/ml. The assay has an internal control testing for the efficiency of RNA extraction, and controls for possible amplification from DNA or contamination. Patient samples are measured in triplicate.
The single-genome sequencing assay (SGS), now widely used and considered to be non-labor intensive 3, 7, 12, 14, 15,is a limiting dilution assay, in which endpoint diluted cDNA product is spread over a 96-well plate. According to a Poisson distribution, when less than 1/3 of the wells give product, there is an 80% chance of the PCR product being resultant of amplification from a single cDNA molecule. SGS has the advantage over cloning of not being subjected to resampling and not being biased by PCR-introduced recombination 19. However, the amplification success of SCA and SGS depend on primer design. Both assays were developed for HIV-1 subtype B, but can be adapted for other subtypes and other regions of the genome by changing primers, probes, and standards.

Quantifying levels of HIV-1 RNA in plasma and sequencing single HIV-1 genomes from individuals with viral loads below the limit of detection (50-75 copies/ml) is difficult. Here we describe how to extract and quantify plasma viral RNA using a real time PCR assay that reliably measures HIV-1 RNA down to 0.3 copies/ml and how to amplify viral genomes by single genome sequencing, from samples with very low viral loads.

Standart Klinik Tahliller Algılama Sınırı Aşağıda Viral Yükler HIV enfekte kişilerde kuvvetlendirme ve HIV-1 RNA miktarının

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign antigens from peripheral tissues to prime the adaptive immune response. Juxtaposed between innate and adaptive immune responses, the LN is an ideal site to study immune cell interactions1,2. Lymphocytes (T cells, B cells and NK cells), dendritic cells (DCs), and macrophages comprise the bulk of bone marrow-derived cellular elements of the LN. These cells are strategically positioned in the LN to allow efficient surveillance of self antigens and potential foreign antigens3-5. The process by which lymphocytes successfully encounter cognate antigens is a subject of intense investigation in recent years, and involves an integration of molecular contacts including antigen receptors, adhesion molecules, chemokines, and stromal structures such as the fibro-reticular network2,6-12. 
Prior to the development of high-resolution real-time fluorescent in vivo imaging, investigators relied on static imaging, which only offers answers regarding morphology, position, and architecture. While these questions are fundamental in our understanding of immune cell behavior, the limitations intrinsic with this technique does not permit analysis to decipher lymphocyte trafficking and environmental clues that affect dynamic cell behavior. Recently, the development of intravital two-photon laser scanning microscopy (2P-LSM) has allowed investigators to view the dynamic movements and interactions of individual cells within live LNs in situ12-16. In particular, we and others have applied this technique to image cellular behavior and interactions within the popliteal LN, where its compact, dense nature offers the advantage of multiplex data acquisition over a large tissue area with diverse tissue sub-structures11,17-18. It is important to note that this technique offers added benefits over explanted tissue imaging techniques, which require disruption of blood, lymph flow, and ultimately the cellular dynamics of the system. Additionally, explanted tissues have a very limited window of time in which the tissue remains viable for imaging after explant. With proper hydration and monitoring of the animal's environmental conditions, the imaging time can be significantly extended with this intravital technique. Here, we present a detailed method of preparing mouse popliteal LN for the purpose of performing intravital imaging.

Recent advances in 2-photon microscopy have enabled real-time in situ imaging of live tissues in animal models, thereby enhancing our ability to investigate cellular behavior in both physiologic and pathologic conditions. Here, we outline the preparations required to perform intravital imaging of the mouse popliteal lymph node.

Intravital Görüntüleme Fare Popliteal Lenf Nodu

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

The lymphatic vascular system is an important component of the circulatory system that maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and mediates fat absorption in the gut. Yet despite its critical function, there is comparatively little understanding of how the lymphatic system adapts to serve these functions in health and disease1. Recently, we have demonstrated the ability to dynamically image lymphatic architecture and lymph "pumping" action in normal human subjects as well as in persons suffering lymphatic dysfunction using trace administration of a near-infrared fluorescent (NIRF) dye and a custom, Gen III-intensified imaging system2-4. NIRF imaging showed dramatic changes in lymphatic architecture and function with human disease. It remains unclear how these changes occur and new animal models are being developed to elucidate their genetic and molecular basis. In this protocol, we present NIRF lymphatic, small animal imaging5,6 using indocyanine green (ICG), a dye that has been used for 50 years in humans7, and a NIRF dye-labeled cyclic albumin binding domain (cABD-IRDye800) peptide that preferentially binds mouse and human albumin8. Approximately 5.5 times brighter than ICG, cABD-IRDye800 has a similar lymphatic clearance profile and can be injected in smaller doses than ICG to achieve sufficient NIRF signals for imaging8. Because both cABD-IRDye800 and ICG bind to albumin in the interstitial space8, they both may depict active protein transport into and within the lymphatics. Intradermal (ID) injections (5-50 &mu;l) of ICG (645 &mu;M) or cABD-IRDye800 (200 &mu;M) in saline are administered to the dorsal aspect of each hind paw and/or the left and right side of the base of the tail of an isoflurane-anesthetized mouse. The resulting dye concentration in the animal is 83-1,250 &mu;g/kg for ICG or 113-1,700 &mu;g/kg for cABD-IRDye800. Immediately following injections, functional lymphatic imaging is conducted for up to 1 hr using a customized, small animal NIRF imaging system. Whole animal spatial resolution can depict fluorescent lymphatic vessels of 100 microns or less, and images of structures up to 3 cm in depth can be acquired9. Images are acquired using V++ software and analyzed using ImageJ or MATLAB software. During analysis, consecutive regions of interest (ROIs) encompassing the entire vessel diameter are drawn along a given lymph vessel. The dimensions for each ROI are kept constant for a given vessel and NIRF intensity is measured for each ROI to quantitatively assess "packets" of lymph moving through vessels.

Recently developed imaging techniques using near-infrared fluorescence (NIRF) may help elucidate the role the lymphatic system plays in cancer metastasis, immune response, wound repair, and other lymphatic-associated diseases.

Bir Mouse Lenfatik damarları Non-invaziv Optik Görüntüleme

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the mechanisms governing its formation. Lymph nodes are always encapsulated in adipose tissue and we recently demonstrated the importance of this relation for the formation of lymph node stroma. Adipocyte precursor cells migrate into the lymph node during its development and upon engagement of the Lymphotoxin-b receptor switch off adipogenesis and differentiate into lymphoid stromal cells (B&#233;n&#233;zech&#160;et al.14). Based on the lymphoid stroma potential of adipose tissue, we present a method using a lymph node/fat pad chimera that allows the lineage tracing of lymph node stromal cell precursors. We show how to isolate newborn lymph nodes and EYFP+ embryonic adipose tissue and make a LN/ EYFP+ fat pad chimera. After transfer under the kidney capsule of a host mouse, the lymph node incorporates local adipose tissue precursor cells and finishes its formation. Progeny analysis of EYFP+ fat pad cells in the resulting lymph nodes can be performed by flow-cytometric analysis of enzymatically digested lymph nodes or by immunofluorescence analysis of lymph nodes cryosections. By using fat pads from different knockout mouse models, this method will provide an efficient way of analyzing the origin of the different lymph node stromal cell populations.

Generation of lymph node/fat pad chimeras for the study of lymph node stromal cell origin is described. The method involves the isolation of lymph nodes from newborn mice and embryonic fat pads, the generation of chimeric lymph node-fat pads, and their transfer under the kidney capsule of a host mouse.

Lenf düğümü Stromal Hücre Menşe Çalışmaları Lenf-yağ Pad Kimeralar Üretimi

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode larvae of the genus Trichinella. The most important sources of human infections worldwide are game meat and pork or pork products. In many countries, the prevention of human trichinellosis is based on the identification of infected animals by means of the artificial digestion of muscle samples from susceptible animal carcasses.
There are several methods based on the digestion of meat but the magnetic stirrer method is considered the gold standard. This method allows the detection of Trichinella larvae by microscopy after the enzymatic digestion of muscle samples and subsequent filtration and sedimentation steps. Although this method does not require special and expensive equipment, internal controls cannot be used. Therefore, stringent quality management should be applied throughout the test. The aim of the present work is to provide detailed handling instructions and critical control points of the method to analysts, based on the experience of the European Union Reference Laboratory for Parasites and the National Reference Laboratory of Germany for Trichinella.

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

The prevention of human trichinellosis in many countries worldwide is based on the laboratory examination of muscle samples from susceptible animals by methods of digestion, of which the magnetic stirrer method is considered the gold standard.

Tespiti için Manyetik Karıştırıcı Yöntemi<em&gt; Trichinella</emKas Samples&gt; Larva

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple condensation reactions. DHDDS (dehydrodolichyl diphosphate synthase) is a eukaryotic long-chain cis-PT (forming cis double bonds from the condensation reaction) that catalyzes chain elongation of farnesyl diphosphate (FPP, an allylic diphosphate) via multiple condensations with isopentenyl diphosphate (IPP). DHDDS is of biomedical importance, as a non-conservative mutation (K42E) in the enzyme results in retinitis pigmentosa, ultimately leading to blindness. Therefore, the present protocol was developed in order to acquire large quantities of purified DHDDS, suitable for mechanistic studies. Here, the usage of protein fusion, optimized culture conditions and codon-optimization were used to allow the overexpression and purification of functionally active human DHDDS in E. coli. The described protocol is simple, cost-effective and time sparing. The homology of cis-PT among different species suggests that this protocol may be applied for other eukaryotic cis-PT as well, such as those involved in natural rubber synthesis.

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

A simple protocol for overexpression and purification of codon-optimized, human cis-prenyltransferase, under non-denaturing conditions, from Escherichia coli, is described, along with an enzymatic activity assay. This protocol can be generalized for production of other cis- prenyltransferase proteins in quantity and quality suitable for mechanistic studies.

Aşırı Ezme ve İnsanın Saflaştırılması<em&gt; Cis</em&gt; -prenıltransferaz in<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor microenvironment and the underlying mechanism is still largely unknown. The lack of a consistent and reliable source of NK cells limits the research progress of NK cell immunity. Here, we report an in vitro system that can provide high quality and quantity of bone marrow-derived murine NK cells under a feeder-free condition. More importantly, we also demonstrate that siRNA-mediated gene silencing successfully inhibits the E4bp4-dependent NK cell maturation by using this system. Thus, this novel in vitro NK cell differentiating system is a biomaterial solution for immunity research.

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Here, we present a protocol to mass-produce gene-silencing murine NK cells by using a feeder-free differentiation system for mechanistic study in vitro and in vivo.

Roman besleyici-Alerjik sistemi fare doğal katil hücreler Vitro seri üretim için

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...

Quantitative Polymerase Chain Reaction-based Analyses of Murine Intestinal Microbiota After Oral Antibiotic Treatment

The gut microbiota has a central influence on human health. Microbial dysbiosis is associated with many common immunopathologies such as inflammatory bowel disease, asthma and arthritis. Thus, understanding the mechanisms underlying microbiota-immune system crosstalk is of crucial importance. Antibiotic administration, while aiding pathogen clearance, also induces drastic changes in the size and composition of intestinal bacterial communities which can have an impact on human health. Antibiotic treatment in mice recapitulates the impact and long-term changes in human microbiota from antibiotic treated patients, and enables investigation of the mechanistic links between changes in microbial communities and immune cell function. While several methods for antibiotic treatment of mice have been described, some of them induce severe dehydration and weight-loss complicating the interpretation of the data. Here, we provide two protocols for oral antibiotic administration which can be used for long-term treatment of mice without inducing major weight-loss. These protocols make use of a combination of antibiotics that target both Gram-positive and Gram-negative bacteria and can be provided either ad libitum in the drinking water or by oral gavage. Moreover, we describe a method for the quantification of microbial density in fecal samples by qPCR which can be used to validate the efficacy of the antibiotic treatment. The combination of these approaches provides a reliable methodology for the manipulation of the intestinal microbiota and the study of the effects of antibiotic treatment in mice.

Here we provide detailed protocols for the oral administration of antibiotics to mice, collection of fecal samples, DNA extraction and quantification of fecal bacteria by qPCR.

Oral antibiyotik tedavisinden sonra fare bağırsak Microbiota nicel polimeraz zincir reaksiyonu tabanlı analiz

The gut microbiota has a central influence on human health. Microbial dysbiosis is associated with many common immunopathologies such as inflammatory ...

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and dysregulated repair. In inflammatory bowel disease (IBD), fibrosis leads to recurrent stricture formations for which there is no effective therapy other than surgical resection. Due to its late onset, the processes that drive fibrosis is less studied and largely unknown. Therefore, fibrotic complications represent a major challenge in IBD. In this protocol, a robust in vivo model of intestinal fibrosis is described where streptomycin pre-treatment of C57Bl/6 mice followed by oral gavage with vaccine grade Salmonella Typhimurium &#916;AroA mutant leads to persistent pathogen colonization and fibrosis of the cecum. Methodologies for preparing S. Typhimurium &#916;AroA for inoculation, quantifying pathogen loads in the cecum and spleen, and evaluating collagen deposition in intestinal tissues are explained. This experimental disease model is useful for examining host factors that either enhance or exacerbate CD-like intestinal fibrosis.

This protocol describes a mouse model of Salmonella driven intestinal fibrosis that resembles key pathological hallmarks of Crohn&#8217;s disease including transmural inflammation and fibrosis. This method can be used to evaluate host factors that alter fibrotic outcomes using mutant mice maintained on a C57Bl/6 genetic background.

Kronik Salmonella EnfeksiyonuNa Bağlı Bağırsak Fibrozisi

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...