We thank the Northwestern University Mouse Histology and Phenotyping Laboratoryfor technical support and assistance, and Noboru Mizushima (University of Tokyo) for providing GFP-LC3 transgenic mice. A. R. and C. H. were supported by the startup funds from Northwestern University and the grant from National Institutes of Health (DK094980).

כל הנהלים הקשורים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות שאושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים אוניברסיטת נורת&#39;ווסטרן ועדת שימוש (IACUC). 1. מודלים עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 8-12 עכברים שבועות בן באימון התעמלות. כדי לזהות autophagy למימוש מושרה in vivo, השתמשו העכברים המהונדסים GFP-LC3 (C57BL / 6 רקע) עבור בדיקות הדמיה ועכברי C57BL / 6 עבור ניתוחים ביוכימיים. </li></ol> Autophagy 2. הנגרמת ממאמץ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנת הליכון - נאלץ תרגיל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאקלם ולאמן את העכברים על הליכון פתוח במעלה ההר 10 מעלות במשך 2 ימים. ביום 1, לממש את העכברים במשך 5 דקות ב 8 מ &#39;/ דקה, וביום 2, לממש את העכברים במשך 5 דקות ב 8 מ&#39; / דקה ואחריו 5 דקות אחר ב -10 מ &#39;/ דקה 10. עודד העכברים המנוהל על ידי דחיפת יד עדינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 3 rd, מלאפשר לעכברים לעבור התקף יחיד של ריצה במשך 90 דקות על 10 ° הליכון במעלה ההר, starting במהירות של 10 מ &#39;/ דקה. לאחר 40 דקות, להגביר את מהירות הליכון בקצב של 1 מ &#39;/ דקה כל 10 דקות עבור סכום כולל של 30 דקות, ולאחר מכן להגביר את המהירות בשיעור של 1 מ&#39; / דקה כל 5 דקות עד שהוא מגיע 17 מ &#39;/ דקה, עבור סכום כולל של 90 דקות של זמן אימון ל -1,070 מטרים של מרחק ריצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הגירוי החשמלי מגוון בעצימות נמוכה (1.2 הרץ), ולעודד העכברים לרוץ כדי למנוע הלם ברגל חזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת אוסף רקמות, להרדים את העכברים משאיפת isoflurane, ואחריו נקע בצוואר הרחם מיד לאחר פעילות גופנית. שיטות מתת חסד אשרו אחרים יכולות לשמש גם, כגון CO2 או הזרקת IP של הרדמה אחרת. רמת autophagy לא נראית להיות מושפעת שיטות של המתת חסד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנת גלגל ריצה - גופני רצונית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים גלגל ריצה-עכבר (11.4 ס&quot;מ קוטר) בתוך כלוב עם העכבר חד שוכנו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הקיבולת פועלת באמצעות מד מרחק אופניים.הגדרת פרמטר הגלגל [מרחק (במ&quot;מ) לכל סיבוב מלא של ההגה], בעמ &#39;358 (11.4 * π). למדוד את מרחק הריצה לאחר 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנו עכבר להפעיל בהתנדבות עבור 2 שבועות עם גלגל ריצה. לקבלת אוסף רקמות, להקריב את העכבר בבוקר לאחר תקופת הריצה. </li></ol></li></ol> 3. Autophagy הערכת שטף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד את השטף autophagic בתנאים מנוחה ופעילות גופנית, טיפול בעכברים עם chloroquine autophagy מעכב במשך שלושה ימים ולהשוות אותם העכברים שטופלו PBS. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים chloroquine PBS (5 מ&quot;ג / מ&quot;ל), ולהזריק chloroquine לעכברים intraperitoneally במינון של 50 מ&quot;ג / ק&quot;ג / יום, במשך שלושה ימים רצופים. קורבן עכברים ולאסוף רקמות 3 שעות לאחר הזריקה האחרונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור עכברים למימוש, pretreat אותם עם chloroquine במשך יומיים רצופים במינון של 50 מ&quot;ג / ק&quot;ג / יום. ביום השלישי, להזריק עכברים עם ריכוז זהה של chloroquine, ואחרי90 דקות ולתת להם לרוץ על הליכון למשך 90 דקות אחרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים משאיפת isoflurane, ואחריו נקע בצוואר הרחם. דגימות של רקמות ומייד לאחר הפעלתו, כך שבפעם הדגירה הכוללת של chloroquine זהה עכברים שליטים (מנוחה) (3 שעות). הערה: לחילופין, להשתמש זריקה אחת של chloroquine לקבוע את השטף autophagy ברקמות העכבר. </li></ol></li></ol> רקמות 4. קציר קיבוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הקציר רקמות להכין פוספט בופר (PBS) ו paraformaldehyde 4% טרי (PFA, זהירות: ציוד מיגון אישי חובה) ב PBS ב- pH הסופי של 7.4. לאחסן הוא פתרונות על 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו 30 מזרק מ&quot;ל עם 15 - 20 מ&quot;ל של 4% PFA (עבור עכברים GFP-LC3). חבר את המזרק עם מחט קטטר 20 G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פעילות גופנית, להרדים את העכברים משאיפת isoflurane, ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את החיה על משטח עבודה נקי על ba שלהck. גזור לפתוח את חלל בית החזה על ידי חיתוך הסרעפת כדי לחשוף את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן על הכבד לתת את הדם לצאת, ולהזריק סך של 15 מ&quot;ל 4% PFA לאט לתוך החדר הימני של הלב באמצעות קטטר, עד הריאות והכבד להחוויר לחלוטין. Perfuse העכבר מיד לאחר האימון, באמצעות משאבת מזרק עם קצב הזרימה המתמדת של 90 מ&quot;ל / שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר זלוף, להוציא את המחט ולאסוף רקמות עניין (מוח למשל 11 שרירי שלד). עבור שרירי השלד, לנתח את lateralis vastus. בקצרה, למשוך את העור של הרגל לאחור כדי לחשוף את השרירים, למקם את שריר הירך femoris 12, ו לנתח את lateralis vastus, המהווה את השריר החיצוני עם חיבור אל החלק העליון של עצם הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור קיבוע והתייבשות נוספים, למקם את הרקמות של עכברים-LC3 GFP ב PFA 4% למשך 24 שעות ב 4 ° C, ולאחר מכן להעביר אותם עד 15%סוכרוז- PBS ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה או עד שהשתקעו הרקמות, ולאחר מכן ל -30% סוכרוז-PBS ב 4 מעלות צלזיוס למשך לילה או לאחסון ארוך יותר. שמור את הדגימות בחושך ככל האפשר מכיוון שהם עלולים להיות רגישים לאור חזק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח כתם המערבי הצמד להקפיא את רקמות מן C57BL / 6 עכברים ישירות בחנקן נוזלי, ולאחסן אותם ב -80 ° C. </li></ol> 5. ניתוח הדמיה של ה- GFP-LC3 puncta <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תהליך רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום לטפל ברקמות (הקבועים בעבר PFA ומאוחסנים סוכרוז 30%) ב הטבעה בינונית כגון &quot;מתחם טמפרטורת חיתוך אופטימלי&quot; (אוקטובר) במשך כמה דקות בצלחת פטרי קטנה שכותרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הרקמה בתוך cryomold שכותרתו המכיל מספיק אוקטובר הטרי כדי לכסות את הרקמה. אוריינט פני השטח חתך לכיוון החלק התחתון של cryomold (חתך עבור vastus lateralis שרירים קטע sagittal עבור המוח חמי). למנוע היווצרות של בועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> freEze דגימות ידי הצבת cryomold במשך כמה דקות בתוך צידנית קצף ממולאת קרח יבש, עד ב- OCT הופך לבן. עוטפים דגימות בודדות רדידי שכותרתו, לאטום אותם בשקית ניילון, ולאחסן אותם ב -80 מעלות צלזיוס למשך הלילה או יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש cryostat לחתוך חלקים מדגם בעובי של 10 מיקרומטר, ו הר בסעיפים בשקופיות. אחסן את השקופיות ב -20 ° C, ותמיד לשמור את השקופיות מן האור בכל הזדמנות אפשרית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת שקופיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סר שקופית מהמקפיא להפשיר אותם בטמפרטורת חדר. מכסים את קטע רקמה עם ירידה של התקשורת גובר עם DAPI. מניחים coverslip בגודל המתאים על גבי למנוע היווצרות בועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח לק על הציפורניים כדי לאטום את הקצוות של coverslip, לאפשר לק להתייבש בחושך בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן לאחסן את השקופיות במיכל אור חזק על 4 מעלות צלזיוס, או להמשיך עם לכידת הדמיה של puncta GFP-LC3. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> &lt;strong&gt; כימות GFP - LC3 puncta ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע מיקרוסקופיה epifluorescence, לכידת תמונות באותו מצב (חשיפה והגדרות) עבור כל הדגימות. עבור GFP, להשתמש אורך גל פליטה של ​​525 ננומטר; עבור DAPI, השתמש 490 ננומטר. רוכש לפחות עשר תמונות לדגימה באמצעות מטרת 60X עבור lateralis vastus ואזור האונה הקדמי של המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את מספר puncta GFP-LC3 באזור רקמות של 2,500 מיקרומטר 2 בכל תמונה לניתוח סטטיסטי, עיוור לקבוצות הניסוי. חשבתי את המספר הממוצע מ 10 תמונות של כל דגימה, באמצעות פונקצית המדידה האוטומטית של &quot;רוזן אובייקט&quot;. הגדרות עבור vastus lateralis שרירים הם: L סף = 10, H = 200; 2X להחליק; 1X נקי, והגדרות עבור האונה הקדמית במוח הם: L סף = 11, H = 200; 2X להחליק; 1X נקי. </li></ol></li></ol> 6. ניתוח כתם המערבי על מרקרים Autophagy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> &lt;תהליך strong&gt; רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את החיץ תמוגה: 50 mM Tris-HCl; 150 מ&quot;מ NaCl; 1 mM EDTA; 1% Triton X-100; מעכב פרוטאז מעכב phosphatase (הוסיף טרי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת הרקמה של C57BL / 6 עכברים מ -80 ° C אחסון. חותכים את רקמת השריר לחתיכות קטנות עם סכין גילוח לפני התהליך הבא. להוסיף 800 μl (עבור מוח חם) או 500 μl (עבור lateralis vastus) של חיץ תמוגה קר המדגם. Homogenize המדגם ב 4 ° C עם homogenizer במהירות בינונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא lyse את התערובת הומוגני במשך 30 דקות אחרות כדי השעה 1 ב 4 ° C עם רוטציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין למטה homogenate ב XG 12,000 במשך 10 דקות ב 4 ° C, וזורקים את הכדור, ולאסוף את supernatant בצינור חדש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח autophagy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קביעת ריכוז החלבון של lysates רקמות באמצעות ערכת assay חלבון BCA על פי המפרט של היצרן. נרמל כל דגימהלאותו ריכוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את המדגם עם חיץ מדגם 2x Laemmli ביחס של 1: 1, להרתיח אותו ב 95 מעלות צלזיוס במשך 5 - 10 דק &#39;, והמשך עם ניתוח כתם המערבי על autophagy סמנים 13, 14, כגון p62 (נוגדן אנטי p62, 1: 500 דילול) ו LC3 (נוגדן אנטי LC3, 1: 500 דילול). מרתיח את הדגימות מייד לאחר תוספת של חיץ המדגם, כפי דגירה כבר על קרח עשויה ליצור להקות מושפלות מרובות של LC3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת להקות p62 ו LC3 ידי ניתוח צפיפות באמצעות ImageJ, לנרמל את הערך הלהקה אקטין המקביל. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Mizushima, N., Yamamoto, A., Matsui, M., Yoshimori, T., Ohsumi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+autophagy+in+response+to+nutrient+starvation+using+transgenic+mice+expressing+a+fluorescent+autophagosome+marker%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of autophagy in response to nutrient starvation using transgenic mice expressing a fluorescent autophagosome marker.</a> Mol Biol Cell. 15, 1101-1111 (2004).</li>
<li>Tracy, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BNIP3+is+an+RB%2FE2F+target+gene+required+for+hypoxia-induced+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+cellular+biology%22%5BJournal%5D)">BNIP3 is an RB/E2F target gene required for hypoxia-induced autophagy.</a> Molecular and cellular biology. 27, 6229-6242 (2007).</li>
<li>Mizushima, N., Komatsu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy%3A+renovation+of+cells+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Autophagy: renovation of cells and tissues.</a> Cell. 147, 728-741 (2011).</li>
<li>Nikoletopoulou, V., Papandreou, M. E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+the+physiology+and+pathology+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Autophagy in the physiology and pathology of the central nervous system.</a> Cell Death Differ. 22, 398-407 (2015).</li>
<li>Rocchi, A., He, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+roles+of+autophagy+in+metabolism+and+metabolic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+biology%22%5BJournal%5D)">Emerging roles of autophagy in metabolism and metabolic disorders.</a> Frontiers in biology. 10, 154-164 (2015).</li>
<li>Mathew, R., Karantza-Wadsworth, V., White, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+autophagy+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Role of autophagy in cancer.</a> Nature reviews. Cancer. 7, 961-967 (2007).</li>
<li>He, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-induced+BCL2-regulated+autophagy+is+required+for+muscle+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Exercise-induced BCL2-regulated autophagy is required for muscle glucose homeostasis.</a> Nature. 481, 511-515 (2012).</li>
<li>He, C., Sumpter, R. J., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+induces+autophagy+in+peripheral+tissues+and+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Exercise induces autophagy in peripheral tissues and in the brain.</a> Autophagy. 8, 4(2012).</li>
<li>Kuramoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+activation+by+novel+inducers+prevents+BECN2-mediated+drug+tolerance+to+cannabinoids%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy activation by novel inducers prevents BECN2-mediated drug tolerance to cannabinoids.</a> Autophagy. 12, 1460-1471 (2016).</li>
<li>Dougherty, J. P., Springer, D. A., Gershengorn, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Treadmill+Fatigue+Test%3A+A+Simple%2C+High-throughput+Assay+of+Fatigue-like+Behavior+for+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse.</a> JoVE. , (2016).</li>
<li>Navone, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+expansion+of+human+and+mouse+brain+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation and expansion of human and mouse brain microvascular endothelial cells.</a> Nature protocols. 8, 1680-1693 (2013).</li>
<li>Liu, L., Cheung, T. H., Charville, G. W., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+skeletal+muscle+stem+cells+by+fluorescence-activated+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation of skeletal muscle stem cells by fluorescence-activated cell sorting.</a> Nature protocols. 10, 1612-1624 (2015).</li>
<li>Eslami, A., Lujan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blotting%3A+sample+preparation+to+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Western blotting: sample preparation to detection.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).</li>
<li>Bjørkøy, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0076687908036124">Chapter 12 Monitoring Autophagic Degradation of p62/SQSTM1.</a> Methods Enzymol. 452, 181-197 (2009).</li>
<li>Klionsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+assays+for+monitoring+autophagy+%283rd+edition%29%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition).</a> Autophagy. 12, 1-222 (2016).</li>
<li>Levine, B., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+the+Pathogenesis+of+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Autophagy in the Pathogenesis of Disease.</a> Cell. 132, 27-42 (2008).</li>
<li>Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+fights+disease+through+cellular+self-digestion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Autophagy fights disease through cellular self-digestion.</a> Nature. 451, 1069-1075 (2008).</li>
<li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Duration+of+rapamycin+treatment+has+differential+effects+on+metabolism+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Duration of rapamycin treatment has differential effects on metabolism in mice.</a> Cell Metab. 17, 456-462 (2013).</li>
<li>Thomson, A. W., Turnquist, H. R., Raimondi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoregulatory+functions+of+mTOR+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunoregulatory functions of mTOR inhibition.</a> Nature reviews. Immunology. 9, 324-337 (2009).</li>
<li>Miller, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin-mediated+lifespan+increase+in+mice+is+dose+and+sex+dependent+and+metabolically+distinct+from+dietary+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Rapamycin-mediated lifespan increase in mice is dose and sex dependent and metabolically distinct from dietary restriction.</a> Aging Cell. 13, 10(2014).</li>
<li>Grumati, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+exercise+stimulates+autophagy+in+normal+skeletal+muscles+but+is+detrimental+for+collagen+VI-deficient+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Physical exercise stimulates autophagy in normal skeletal muscles but is detrimental for collagen VI-deficient muscles.</a> Autophagy. 7, 1415-1423 (2011).</li>
<li>Lira, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+is+required+for+exercise+training-induced+skeletal+muscle+adaptation+and+improvement+of+physical+performance%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal+%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Autophagy is required for exercise training-induced skeletal muscle adaptation and improvement of physical performance.</a> FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 27, 4184-4193 (2013).</li>
<li>Lo Verso, F., Carnio, S., Vainshtein, A., Sandri, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25483961">Autophagy is not required to sustain exercise and PRKAA1/AMPK activity but is important to prevent mitochondrial damage during physical activity.</a> Autophagy. 10, 1883-1894 (2014).</li>
<li>Kregel, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.the-aps.org/mm/SciencePolicy/AnimalResearch/Publications/Animal-Exercise-Protocols">Resource book for the design of animal exercise protocols.</a> American Physiological Society. , 152(2006).</li>
<li>Lightfoot, J. T., Turner, M. J., Debated, K. S., Kleeberg, S. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11740298">Interstrain variation in murine aerobic capacity.</a> Med Sci Sports Exerc. 33, 5(2001).</li>
<li>Rezende, E. L., Chappell, M. A., Gomes, F. R., Malisch, J. L., Garland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximal+metabolic+rates+during+voluntary+exercise%2C+forced+exercise%2C+and+cold+exposure+in+house+mice+selectively+bred+for+high+wheel-running%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+biology%22%5BJournal%5D)">Maximal metabolic rates during voluntary exercise, forced exercise, and cold exposure in house mice selectively bred for high wheel-running.</a> The Journal of experimental biology. 208, 2447-2458 (2005).</li>
<li>Kayatekin, B. M., Gonenc, S., Acikgoz, O., Uysal, N., Dayi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sprint+exercise+on+oxidative+stress+in+skeletal+muscle+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+applied+physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of sprint exercise on oxidative stress in skeletal muscle and liver.</a> European journal of applied physiology. 87, 141-144 (2002).</li>
<li>Kawanaka, K., Tabata, I., Tanaka, A., Higuchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+high-intensity+intermittent+swimming+on+glucose+transport+in+rat+epitrochlearis+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of high-intensity intermittent swimming on glucose transport in rat epitrochlearis muscle.</a> J Appl Physiol. 84, 4(1998).</li>
<li>Fernando, P., Bonen, A., Hoffman-Goetz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+submaximal+oxygen+consumption+during+treadmill+running+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Predicting submaximal oxygen consumption during treadmill running in mice.</a> Can J Physiol Pharmacol. 71, 4(1993).</li>
</ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Autophagy הוא תהליך קטבולי המספק אנרגיה ומפחית רעילות על ידי השפלה lysosomal של רכיבים הציטופלסמה או אברונים פגומים. לימוד autophagy חשוב להבין הסדרת הומאוסטזיס הסלולר מנגנוני תגובת לחץ. מודלים ומתודולוגיות חדשים צצים בתחום המחקר 15, כדי ללמוד כיצד autophagy לקוי תורם תה?...

Autophagy הינו מסלול השפלה שמור באבולוציה, אשר נגרמת בתגובה לתנאי קיצון שונים כגון הרעבה היפוקסיה 1, 2. במהלך autophagy, שלפוחית כפולת הממברנה, שנקראה autophagosomes, לשלב רכיבי subcellular מיותרים או פגומים ולהעביר אותם לתוך lysosomes שפל 3. Autophagy בסל חיוני לתפקוד הסלולר ופיתוח האורגניזם, autophagy הבסיס לקוי הוא מעורב הפרעות רבות, כולל ניוון מוחיים, tumorigenesis וסוכרת מסוג 2 4, 5, 6. Inducer autophagy הפיזיולוגי הידוע ביותר הוא רעב. עם זאת, יש לו שתי מגבלות עיקריות. ראשית, רעב לוקח תקופה ארוכה כדי לגרום autophagy ביעילות בבעלי חיים, למשל, 48 שעות של הגבלת מזון בעכבריםברוב האיברים. שנית, רעב בקושי גורם autophagy המוח, בשל אספקת חומרי מזון יציבה יחסית במוח. למעשה, זה גם קשה לזהות אינדוקצית autophagy ידי מעורר-מולקולה קטנה, כמו תרופות רבות לא יכולות לעבור את מחסום דם המוח. לכן, כדי לנתח טוב יותר את הפונקציה של הפעלת autophagy בהיווצרות מחלה, גילינו לאחרונה כי פעילות גופנית היא שיטה פיזיולוגית חזקה יותר כדי לגרום autophagy בתוך פרק הזמן קצר 7, 8, 9. בהשוואה רעבה, autophagy מושרה ביעילות על ידי הפעלת הליכון מהר ככל 30 דקות. וכך, פעילות גופנית היא גישה פיזיולוגית נוחה ורב-עצמה כדי ללמוד את המנגנון של autophagy בתיווך יתרונות בריאות ולמניעת מחלות. ישנן מספר סמנים חלבוניים לצורך זיהוי של פעילות autophagy, כולל LC3 ו p62. LC3 (1A חלבון הקשורים microtubule / 1B-אור גהיין 3) הוא חלבון cytosolic (LC3-אני טופס) כי הוא מצומדות כדי PE (phosphatidylethanolamine) על אינדוקציה autophagy. PE-lipidated LC3 (טופס LC3-II) מגויס על ממברנות autophagosomal וניתן להשתמש בו כדי להמחיש autophagosomes כאשר שכותרתו עם GFP. טרנסלוקציה שלה מן cytosol כדי punctate מבנים של autophagosomes תחת מיקרוסקופ הוא אינדיקציה אינדוקציה autophagy. p62 הוא קולטן מטענים עבור מצעים autophagy (כגון חלבונים ubiquitination), והוא שולב autophagosomes גם כן. מאחר והחלבון נפגע lysosomes יחד עם autophagosomes, רבדיו ניתן להשתמש כדי למדוד את שטף autophagy. כאן אנו מראים כיצד להשתמש סמנים אלה לכמת autophagy ברקמות עכבר שונים המושרה על ידי פעילות גופנית אירובית, כולל פעילות גופנית כפויה (הליכון) ופעילות גופנית מרצון (ריצה גלגלים). אותו הנהלים יכולים לחול גם על in vivo מדידת autophagy לאחר הטיפול של מעוררים אחרים.

<table><tbody><tr><td>Treadmill</td><td>Columbus Instruments</td><td>150-RM Exer 3/6</td><td></td></tr><tr><td>Mouse running wheel</td><td>Super Pet</td><td>100079365</td><td>diameter 11.4 cm</td></tr><tr><td>Odometer</td><td>Bell</td><td>DASHBOARD 100</td><td></td></tr><tr><td>Syringe pump</td><td>KD Scientific</td><td>KDS100</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence microscope</td><td>Nikon</td><td>Model: inverted microscope ECLIPSE</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 1850UV</td><td></td></tr><tr><td>Homogenizer</td><td>IKA</td><td>003737001 / Model: T10 Basic S1</td><td></td></tr><tr><td>Chloroquine</td><td>CAYMAN CHEMICAL COMPANY</td><td>14194</td><td></td></tr><tr><td>Parafolmaldehye</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P6148</td><td>Personal protection equipment required. This product may release formaldehyde gas, a chemical known to cause cancer.</td></tr><tr><td>Mounting media</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>p62 antibody</td><td>BD Biosciences</td><td>610833</td><td></td></tr><tr><td>LC3 antibody</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB100-2220</td><td></td></tr><tr><td>2x Laemmli Sample Buffer</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>161-0737</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

activating autophagy by aerobic exercise in mice

Autophagy is a lysosomal degradation pathway essential for cell homeostasis, function and differentiation. Under stress conditions, autophagy is induced and targets various cargos, such as bulk cytosol, damaged organelles and misfolded proteins, for degradation in lysosomes. Resulting nutrient molecules are recycled back to the cytosol for new protein synthesis and ATP production. Upregulation of autophagy has beneficial effects against the pathogenesis of many diseases, and pharmacological and physiological strategies to activate autophagy have been reported. Aerobic exercise is recently identified as an efficient autophagy inducer in multiple organs in mice, including muscle, liver, heart and brain. Here we show procedures to induce autophagy in vivo by either forced treadmill exercise or voluntary wheel running. We also demonstrate microscopic and biochemical methods to quantitatively analyze autophagy levels in mouse tissues, using the marker proteins LC3 and p62 that are transported to and degraded in lysosomes along with autophagosomes.

פרוטוקול זה מתאר שתי שיטות שונות כדי לגרום autophagy ברקמות עכבר על ידי פעילות אירובית: סך של 90 דקות של פעילות גופנית כפויה על הליכון רב-ליין ולפניו ימים של הסתגלות; או שבועות של פעילות גופנית מרצון על גלגל ריצה שמוצג עכברים חד שוכן. בכל פרוטוקול פעילות ג?...

Watch this Scientific Journal Video about Activating Autophagy by Aerobic Exercise in Mice at JoVE.com

Activating Autophagy by Aerobic Exercise in Mice

Autophagy ההפעלה מועילה במניעת מספר מחלות. אחת הגישות הפיזיולוגיות לגרום autophagy in vivo הוא פעילות גופנית. כאן אנו מראים כיצד להפעיל autophagy ידי פעילות אירובית ולמדוד רמות autophagy בעכברים.

הפעלת Autophagy ידי פעילות גופנית אירובית בעכברים

Autophagy is a lysosomal degradation pathway essential for cell homeostasis, function and differentiation. Under stress conditions, autophagy is induced ...

activating-autophagy-by-aerobic-exercise-in-mice

Research

JoVE Journal

Biology

12.2K Views.  Northwestern University.  Autophagy ההפעלה מועילה במניעת מספר מחלות. אחת הגישות הפיזיולוגיות לגרום autophagy in vivo הוא פעילות גופנית. כאן אנו מראים כיצד להפעיל autophagy ידי פעילות אירובית ולמדוד רמות autophagy בעכברים. 

Video: Activating Autophagy by Aerobic Exercise in Mice

Assessment of Murine Exercise Endurance Without the Use of a Shock Grid: An Alternative to Forced Exercise

Using laboratory mouse models, the molecular pathways responsible for the metabolic benefits of endurance exercise are beginning to be defined. The most common method for assessing exercise endurance in mice utilizes forced running on a motorized treadmill equipped with a shock grid. Animals who quit running are pushed by the moving treadmill belt onto a grid that delivers an electric foot shock; to escape the negative stimulus, the mice return to running on the belt. However, avoidance behavior and psychological stress due to use of a shock apparatus can interfere with quantitation of running endurance, as well as confound measurements of postexercise serum hormone and cytokine levels. Here, we demonstrate and validate a refined method to measure running endurance in na&#239;ve C57BL/6 laboratory mice on a motorized treadmill without utilizing a shock grid. When mice are preacclimated to the treadmill, they run voluntarily with gait speeds specific to each mouse. Use of the shock grid is replaced by gentle encouragement by a human operator using a tongue depressor, coupled with sensitivity to the voluntary willingness to run on the part of the mouse. Clear endpoints for quantifying running time-to-exhaustion for each mouse are defined and reflected in behavioral signs of exhaustion such as splayed posture and labored breathing. This method is a humane refinement which also decreases the confounding effects of stress on experimental parameters.

A method to assess exercise endurance in laboratory mice without the use of a shock grid is demonstrated. This method is a humane refinement that can decrease the confounding effects of stress on experimental parameters.

הערכה של Murine תרגיל סיבולת ללא השימוש ברשת הלם: אלטרנטיבי לתרגיל בכפייה

Using laboratory mouse models, the molecular pathways responsible for the metabolic benefits of endurance exercise are beginning to be defined. The most ...

Behavior

Exploring the Regulation of Lipid Droplet Catabolism through Lipophagy

Macroautophagy, commonly referred to as autophagy, is a highly conserved cellular process responsible for the degradation of cellular components. This process is particularly prominent under conditions such as fasting, cellular stress, organelle damage, cellular damage, or aging of cellular components. During autophagy, a segment of the cytoplasm is enclosed within double-membrane vesicles known as autophagosomes, which then fuse with lysosomes. Following this fusion, the contents of autophagosomes undergo non-selective bulk degradation facilitated by lysosomes. However, autophagy also exhibits selective functionality, targeting specific organelles, including mitochondria, peroxisomes, lysosomes, nuclei, and lipid droplets (LDs). Lipid droplets are enclosed by a phospholipid monolayer that isolates neutral lipids from the cytoplasm, protecting cells from the harmful effects of excess sterols and free fatty acids (FFAs). Autophagy is implicated in various conditions, including neurodegenerative diseases, metabolic disorders, and cancer. Specifically, lipophagy -- the autophagy-dependent degradation of lipid droplets -- plays a crucial role in regulating intracellular FFA levels across different metabolic states. This regulation supports essential processes such as membrane synthesis, signaling molecule formation, and energy balance. Consequently, impaired lipophagy increases cellular vulnerability to death stimuli and contributes to the development of diseases such as cancer. Despite its significance, the precise mechanisms governing lipid droplet metabolism regulated by lipophagy in cancer cells remain poorly understood. This article aims to describe confocal imaging acquisition and quantitative imaging analysis protocols that enable the investigation of lipophagy associated with metabolic changes in cancer cells. The results obtained through these protocols may shed light on the intricate interplay between autophagy, lipid metabolism, and cancer progression. By elucidating these mechanisms, novel therapeutic targets may emerge for combating cancer and other metabolic-related diseases.

Lipophagy is a selective form of autophagy that involves the degradation of lipid droplets. Dysfunctions in this process are associated with cancer development. However, the precise mechanisms are not yet fully understood. This protocol describes quantitative imaging approaches to better understand the interplay between autophagy, lipid metabolism, and cancer progression.

חקר הוויסות של קטבוליזם טיפות שומנים באמצעות ליפופגיה

Macroautophagy, commonly referred to as autophagy, is a highly conserved cellular process responsible for the degradation of cellular components. This ...

Cancer Research

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a wide variety of disorders including metabolic diseases, premature aging syndromes, and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). Maintenance of mitochondrial health depends on mitochondrial biogenesis and the efficient clearance of dysfunctional mitochondria through mitophagy. Experimental methods to accurately detect autophagy/mitophagy, especially in animal models, have been challenging to develop. Recent progress towards the understanding of the molecular mechanisms of mitophagy has enabled the development of novel mitophagy detection techniques. Here, we introduce several versatile techniques to monitor mitophagy in human cells, Caenorhabditis elegans (e.g., Rosella and DCT-1/ LGG-1 strains), and mice (mt-Keima). A combination of these mitophagy detection techniques, including cross-species evaluation, will improve the accuracy of mitophagy measurements and lead to a better understanding of the role of mitophagy in health and disease.

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitophagy, the process of clearing damaged mitochondria, is necessary for mitochondrial homeostasis and health maintenance. This article presents some of the latest mitophagy detection methods in human cells, Caenorhabditis elegans, and mice.

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Medicine

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via the lysosome and are recycled. During autophagy, cytoplasmic LC3 protein is lipidated and recruited to the autophagosomal membranes. The autophagosome then fuses with the lysosome to form the autolysosome, where the breakdown of the autophagosome vesicle and its contents occurs. The ubiquitin-associated protein p62, which binds to LC3, is also used to monitor autophagic flux. Cells undergoing autophagy should demonstrate the co-localization of p62, LC3, and lysosomal markers. Immunofluorescence microscopy has been used to visually identify LC3 puncta, p62, and/or lysosomes on a per-cell basis. However, an objective and statistically rigorous assessment can be difficult to obtain. To overcome these problems, multispectral imaging flow cytometry was used along with an analytical feature that compares the bright detail images from three autophagy markers (LC3, p62 and lysosomal LAMP1) and quantifies their co-localization, in combination with LC3 spot counting to measure autophagy in an objective, quantitative, and statistically robust manner.

Here, multispectral imaging flow cytometry with an analytical feature that compares bright detail images of 3 autophagy markers and quantifies their co-localization, along with LC3 spot counting, was used to measure autophagy in an objective, quantitative, and statistically robust manner.

הערכת השטף autofagic ידי מדידת LC3, p62, ו LAMP1 Co-localization באמצעות multispectral הדמיה cytometry

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

Study of Protein-protein Interactions in Autophagy Research

Protein-protein interactions are important for understanding cellular signaling cascades and identifying novel pathway components and protein dynamics. The majority of cellular activities require physical interactions between proteins. To analyze and map these interactions, various experimental techniques as well as bioinformatics tools were developed. Autophagy is a cellular recycling mechanism that allows the cells to cope with different stressors, including nutrient deprivation, chemicals, and hypoxia. In order to better understand autophagy-related signaling events and to discover novel factors that regulate protein complexes in autophagy, we performed protein-protein interaction screens. Validation of these screening results requires the use of immunofluorescence and immunoprecipitation techniques. In this system, specific autophagy-related protein-protein interactions that we discovered were tested in Neuro2A (N2A) and HEK293T cell lines. Details of the technical procedures used are explained in this visualized experiment paper.

Presented here are two antibody-based protein-protein interaction research techniques: immunofluorescence and immunoprecipitation. These techniques are suitable for studying physical interactions between proteins for the discovery of novel components of cellular signaling pathways and for understanding protein dynamics.

חקר אינטראקציות חלבון במחקר Autophagy

Protein-protein interactions are important for understanding cellular signaling cascades and identifying novel pathway components and protein dynamics. ...

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal muscle development and regeneration, and the autophagic process has been described in several muscular pathologies and age-related muscle disorders. A recently described block of the autophagic process that correlates with the functional exhaustion of satellite cells during muscle repair supports the notion that active autophagy is coupled with productive muscle regeneration. These data uncover the crucial role of autophagy in satellite cell activation during muscle regeneration in both normal and pathological conditions, such as muscular dystrophies. Here, we provide a protocol to monitor the autophagic process in the adult Muscle Stem Cell (MuSC) compartment during muscle regenerative conditions. This protocol describes the setup methodology to perform in situ immunofluorescence imaging of LC3, an autophagy marker, and MyoD, a myogenic lineage marker, in muscle tissue sections from control and injured mice. The methodology reported allows for monitoring the autophagic process in one specific cell compartment, the MuSC compartment, which plays a central role in orchestrating muscle regeneration.

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

Active autophagy is associated with productive muscle regeneration, which is essential for Muscle Stem Cell (MuSC) activation. Here, we provide a protocol for the in situ detection of LC3, an autophagy marker in MyoD-positive MuSCs of muscle tissue sections from control and injured mice.

ב Situ Immunofluorescent מכתים של autophagy בתאי גזע שריר

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal ...

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay &#8212; A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

Bulk autophagy is characterized by the sequestration of large portions of cytoplasm into double/multi-membrane structures termed autophagosomes. Here a simple protocol to monitor this process is described. Moreover, typical results and experimental validation of the method under autophagy-inducing conditions in various types of cultured mammalian cells are provided. During bulk autophagy, autophagosomes sequester cytosol, and thereby also soluble cytosolic proteins, alongside other autophagic cargo. LDH is a stable and highly abundant, soluble cytosolic enzyme that is non-selectively sequestered into autophagosomes. The amount of LDH sequestration therefore reflects the amount of bulk autophagic sequestration. To efficiently and accurately determine LDH sequestration in cells, we employ an electrodisruption-based fractionation protocol that effectively separates sedimentable from cytosolic LDH, followed by measurement of enzymatic activity in sedimentable fractions versus whole-cell samples. Autophagic sequestration is determined by subtracting the proportion of sedimentable LDH in untreated cells from that in treated cells. The advantage of the LDH sequestration assay is that it gives a quantitative measure of the autophagic sequestration of endogenous cargo, as opposed to other methods that either involve ectopic expression of sequestration probes or semi-quantitative protease protection analyses of autophagy markers or receptors.

Here a simple and well-validated protocol for measuring bulk autophagic sequestration activity in mammalian cells is described. The method is based on quantifying the proportion of lactate dehydrogenase (LDH) in sedimentable cell fractions compared to total cellular LDH levels.

לקטט דהידרוגנאז פחמיות וזמינותו — שיטה פשוטה ואמינה לקביעת נפח פעילות פחמיות Autophagic בתאים בתרבית

Bulk autophagy is characterized by the sequestration of large portions of cytoplasm into double/multi-membrane structures termed autophagosomes. Here a ...

Flux-Based Assay for the Identification of Autophagy Modulators for Osteoarthritis

Autophagy is a central mechanism to regulate homeostasis. Alterations of autophagy contribute to aging-related diseases. Phenotypic methods to identify regulators of autophagy could be used for the identification of novel therapeutics. This article describes a cell-based imaging screening workflow developed to monitor autophagic flux using LC3 as a reporter of autophagic flux (mCherry-EGFP-LC3B) in human chondrocytes. Data acquisition is performed using an automated High Content Imaging Screening System microscope. An algorithm-based automated image analysis protocol was developed and validated to identify molecules activating autophagic flux. Critical steps, explanatory notes, and improvements over current autophagy monitoring protocols are reported. Physiologically relevant phenotypic screening approaches to target hallmarks of aging can facilitate more effective drug discovery strategies for age-related musculoskeletal diseases.

<meta charset="utf8"></head><body>בדיקה מבוססת שטף לזיהוי מודולטורים של אוטופגיה לדלקת מפרקים ניוונית

This paper details monitoring autophagy flux to identify new molecules by cell-based imaging screening.

בדיקה מבוססת שטף לזיהוי מודולטורים של אוטופגיה לדלקת מפרקים ניוונית

Autophagy is a central mechanism to regulate homeostasis. Alterations of autophagy contribute to aging-related diseases. Phenotypic methods to identify ...

A Simple and Inexpensive Running Wheel Model for Progressive Resistance Training in Mice

Previously developed rodent resistance-based exercise models, including synergistic ablation, electrical stimulation, weighted-ladder climbing, and most recently, weighted-sled pulling, are highly effective at providing a hypertrophic stimulus to induce skeletal muscle adaptations. While these models have proven invaluable for skeletal muscle research, they are either invasive or involuntary and labor-intensive. Fortunately, many rodent strains voluntarily run long distances when given access to a running wheel. Loaded wheel running (LWR) models in rodents are capable of inducing adaptations commonly observed with resistance training in humans, such as increased muscle mass and fiber hypertrophy, as well as stimulation of muscle protein synthesis. However, the addition of moderate wheel load either fails to deter mice from running great distances, which is more reflective of an endurance/resistance training model, or the mice discontinue running nearly entirely due to the method of load application. Therefore, a novel high-load wheel running model (HLWR) has been developed for mice where external resistance is applied and progressively increased, enabling mice to continue running with much higher loads than previously utilized. Preliminary results from this novel HLWR model suggest it provides sufficient stimulus to induce hypertrophic adaptations over the 9 week training protocol. Herein, the specific procedures to execute this simple yet inexpensive progressive resistance-based exercise training model in mice are described.

This procedure describes a translatable progressive loaded running wheel resistance training model in mice. The primary advantage of this resistance training model is that it is entirely voluntary, thus reducing stress for the animals and the burden on the researcher.

דגם גלגל ריצה פשוט וזול לאימוני התנגדות פרוגרסיביים בעכברים

Previously developed rodent resistance-based exercise models, including synergistic ablation, electrical stimulation, weighted-ladder climbing, and most ...

הפעלת Autophagy ידי פעילות גופנית אירובית בעכברים

Summary

Explore More Videos

הערכה של Murine תרגיל סיבולת ללא השימוש ברשת הלם: אלטרנטיבי לתרגיל בכפייה

חקר הוויסות של קטבוליזם טיפות שומנים באמצעות ליפופגיה

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

הערכת השטף autofagic ידי מדידת LC3, p62, ו LAMP1 Co-localization באמצעות multispectral הדמיה cytometry

חקר אינטראקציות חלבון במחקר Autophagy

ב Situ Immunofluorescent מכתים של autophagy בתאי גזע שריר

לקטט דהידרוגנאז פחמיות וזמינותו — שיטה פשוטה ואמינה לקביעת נפח פעילות פחמיות Autophagic בתאים בתרבית

בדיקה מבוססת שטף לזיהוי מודולטורים של אוטופגיה לדלקת מפרקים ניוונית

בדיקה מבוססת שטף לזיהוי מודולטורים של אוטופגיה לדלקת מפרקים ניוונית

דגם גלגל ריצה פשוט וזול לאימוני התנגדות פרוגרסיביים בעכברים