שיטה זו יכולה לשפר את ההקרנה ואת הבחירה של רקמות תורם הקרנית בבנקי העין, לשפר את התוצאות של השתלת קרנית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא יכולת הערכת הרזולוציה הגבוהה שלה וכי הקרנית נשארת שקועה בתא סגור מלא באמצעי אחסון לאורך כל רכישת התמונה, מה שמקטין כל סיכון פוטנציאלי לזיהום. מי שתדגים את ההליך תהיה מאלה וילברט, בוגרת דוקטורט מהמעבדה שלנו.
כדי להתחיל, מקם את הקרנית שקועה באמצעי אחסון במחזיק הדגימה כאשר האפיתל פונה כלפי מעלה. הניחו את החליק הנקי מכיסוי סיליקה המסופק עם מחזיק הדגימה על גבי הקרנית. לאחר מכן, סגור את המחזיק על ידי סיבוב עדין של בסיסו עד שהדגימה משוטחת מעט ומשותקת מתחת להחלקת הכיסוי, מה שמספק משטח הדמיה אחיד יחסית.
נקוט אמצעי זהירות כדי למנוע בועות אוויר. יש למרוח שכבה עבה של ג'ל עיניים או אופטי על החלקת הכיסוי כמדיום טבילה. אתחל את ההתקן על-ידי הפעלת מתג ההפעלה בגב ההתקן.
תאורה של נורית LED ירוקה בחזית המכשיר מעידה על כך שהחשמל דולק. ודא ששלב ההדמיה ברור, למעט המגש הנייד. לאחר מכן לחץ על אישור בתוכנת הרכישה כדי לאתחל את המנועים בפקודה.
כדי להגדיר את ההתקן, הזן מזהה לדוגמה בשדה הייעודי וההכרחי. ואופציונלי להזין תיאור לדוגמה ותיאור המחקר. לאחר מכן, לחץ על קבל תמונת מאקרו כדי ליצור תמונה של הדגימה שתוכל לשמש מאוחר יותר למטרות מיקום וניווט רוחביים.
לאחר שביעות רצון, אמת את התמונה בשורת הפקודה על-ידי לחיצה על כן. לאחר מכן המכשיר יזיז את מגש הדגימה מתחת למטרה ויבצע התאמה אוטומטית. ודא כי מטרת המיקרוסקופ שקועה היטב בג'ל האופטי לפני שתמשיך הלאה.
הכן את הרכישה על-ידי מעבר אל הכרטיסיה סייר. לפני רכישת ערימת תמונות, נווט למרכז הקרנית באמצעות הג'ויסטיק או הבחירה הידנית על המסך. שנה את עומק ההדמיה באמצעות סיבוב של הג'ויסטיק, התאמת המחוון או קלט מקלדת ידני בממשק המשתמש הגרפי.
לאחר מכן התאם את הערך הממוצע ל -40 להדמיית קרנית אופטימלית. הזן את ערך פני הקרנית או את מיקום התמונה הראשונה בשדה העומק. לאחר מכן בחר בכרטיסיה רכישה כדי להשיג תמונות.
בחרו והגדירו את מרווח הפרוסה בהתאם לרזולוציה הצירית של ההתקן. הזן את ערך עובי הקרנית תחת מספר פרוסות. סקירת פרמטרים וזמן רכישה.
וכאשר אתה מרוצה, לחץ על אישור כדי להשיק את הרכישה. במהלך הרכישה, הימנעו ממגע עם השולחן שעליו ממוקם המיקרוסקופ. כדי להעריך את עובי השכבה של סטרומה ובאומן, מדדו מרחקים של חתכי הקרנית.
לדוגמה, הוסף חמש נקודות במרווחים שווים על פני חתך הרוחב כמתואר בכתב היד של הטקסט. צייר קו בין שתי נקודות של מרחק ידוע בהתאם לשדה הראייה של ברירת המחדל. לאחר מכן עבור אל לנתח הכרטיסייה ובחר הגדר קנה מידה.
הזן את המרחק ויחידת האורך הידועים בשדות המתאימים. הגדר על 1024 פיקסלים או 780 מיקרומטר ולחץ על אישור. צייר קו בין שתי נקודות של מרחק לא ידוע וקרא את האורך או המרחק שנמדדו ישירות משורת המצב. רשום את הממוצע והמקדם של השונות.
לחץ על הכרטיסייה תמונה ובחר פרוס Z תחת ערימות כדי לקבוע את צפיפות הקרטינוציטים. זה יסכם את תמונות הפנים של סטרומה בקבוצות של שבע כדי לייצר פרוסות בעובי דומה. לניתוח נוסף, כלול את כל פרוסות הפנים הזמינות עבור הסטרומה הקדמית ביותר, 15 תמונות עבור הסטרומה הקדמית, חמש תמונות עבור הסטרומה האמצעית וחמש תמונות עבור הסטרומה האחורית.
בכל תמונה עם פנים, בחר אזור עניין בגודל 300 על 300 מיקרומטר. כדי לשפר את התצוגה החזותית של הגרעין, הפוך את התמונה באמצעות היפוך תחת הכרטיסיה עריכה. התאם את הניגודיות והבהירות על-ידי לחיצה על הכרטיסיה תמונה וניווט אל בהירות-ניגודיות.
כדי לספור גרעיני תאים באופן ידני, עבור אל תוספים ונווט אל מונה תאים תחת הכרטיסיה נתח. הקש Initialize ולאחר מכן בחר סוג מונה. לאחר מכן ספרו את גרעיני התא על ידי לחיצה על מאפיינים אליפטיים כהים בתמונה ההפוכה, בהתחשב באלה שנוחתים על גבול תמונה רק עבור שניים מארבעת צידי התמונה.
הקרנית התורמת האנושית שנבחרה הייתה נפוחה לאחר אחסון בתווך תרבית איברים, מה שנתן מודל פתופיזיולוגי של הקרנית הבצקתית ומנע רכישת תמונה דרך כל עובי הקרנית עקב עומק חדירה מוגבל. העברה לדקסטרין בתוספת מדיום תרבית איברים, הפחיתה את הנפיחות והביאה לקרניות תורם בעובי תקין. קרניות חולות זוהו על ידי שינויים מורפולוגיים ותכונות סטרומה אופייניות, כולל ירידה בעובי סטרומה משתנה או שכבת באומן.
הערכה של צפיפות קרטינוציטים והשתקפות סטרומה סייעה עוד יותר בניתוח דמוי היסטולוגיה והבחנה של נורמלי מרקמות קרנית פתולוגיות עם מיקרוסקופ קוהרנטיות אופטית בשדה מלא, שהוא מעבר ליכולות של מערכות טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית קלינית. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך להבין היטב כיצד לבצע ניתוח איכותי וכמותי דמוי היסטולוגיה של סטרומה הקרנית המאפשר הבחנה של מחלה מרקמות הקרנית האנושיות הרגילות.
