המטרה הכוללת של הליך זה היא למקד באופן סלקטיבי טרטומות שמקורן בתאי גזע בעכברים להערכת האפקטיביות in vivo של הקרנות קרן חיצונית של בעלי חיים קטנים. היתרון העיקרי של טיפול קרן קרינה חיצונית הוא שזה טיפול ממוקד עבור teramtomas הקשורים לתאי גזע שנמנע את ההשפעות השליליות מחוץ ליעדים של טיפולים המועברים באופן מערכתי. ההתקדמות בהקרנות קרן חיצונית אפשרה מיקוד ספציפי של טרטומות קטנות תוך הימנעות מפגיעה ברקמות נורמליות, מה שהופך את הטיפול הזה לאידיאלי לטיפול בטרטומות רגישות לקרינה.
שיטה זו יכולה לא רק לספק תובנה לתוך אופטימיזציה אסטרטגיות עבור טיפולים בתא, יש לו גם את הפוטנציאל להיות ישים קלינית בטיפולים אנושיים. התחל על ידי לקיחת צלחת שש באר המכיל iPSCs. כדי לגרום להיווצרות tetratoma בבעלי חיים immunodeficient להוסיף מיליליטר אחד של תערובת אנזים דיסוציאציה תאים רקומביננטי לכל באר של צלחת 6 באר המכיל תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרה אנושית מתמר עם גן כתב היתוך כפול עבור דגירה של חמש דקות בטמפרטורת החדר.
בסוף הדגירה לפזר את התאים על ידי pipetting ולעצור את התגובה אנזימטית על ידי הוספת נפח שווה של מדיום תרבות התא לכל באר. משוך את המתלים תא יחיד בצינור חרוט 15 מיליליטר לספירה. לאחר השלמת הצנטריפוגה, יש לשאוף את העל-טבעי ולתלות מחדש את גלולת הכדור ב-30 מיקרוליטרים של פתרון מטריצת מטריגל ולמקם את הצינור על הקרח.
אם מנצלים תאים מנומרים של היתוך כפול, יש להשעות את תאי ההיתוך הכפולים החיוביים האלה גם ב-30 מיקרוליטרים של מטריצה. לאחר מכן, לטעון כל אוכלוסיית תא לתוך מזרק אחד מיליליטר מצויד מחט מד 28.5 ולאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן בכל עכבר נמענים עירום הרדמה בן שמונה עד 10 שבועות. לאחר מכן, באופן תת עורי להזריק תערובת מטריצת תא אחד לתוך האגף הגבי של כל חיה הנמען.
בנקודת הזמן הניסיונית המתאימה לאחר החיסון להזריק 375 מיליגרם לקילוגרם של deluciferon intraperitoneally לתוך כל נמען. לאחר 10 דקות תמונה אות bioluminescence בכל גשוש כתב הרדמה מוזרק בעלי חיים במשך 30 דקות באמצעות חלונות רכישה דקה אחת במרווחי זמן של חמש דקות, על פי פרוטוקולי הדמיה bioluminescence סטנדרטיים. להקרנת טרטומה, בנקודת הזמן הניסיונית המתאימה, במקום הראשון חיה נמען הרדמה על המיטה של הקרנה פרה-קלינית מונחה תמונה ולרכוש קבוצה של 400 תמונות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבות הקרנה מעל 360 מעלות באמצעות 40 קילו-וולטאז' שיא, קרן רנטגן 2 מיליאמפר, ולשחזר את התמונה לתמונות נפחיות עם גודל פיקסל איזוטרופי של 0.2 מילימטרים.
זה קריטי כדי לשחזר תמונות נפחיות של הטרטומות. תמונות אלה יסייעו לתכנן את טיפולי הקרינה למסירה ספציפית של הטיפול לטרטומות בלבד, תוך מזעור כל קרינה מחוץ ליעד של הרקמות שמסביב. לאחר מכן השתמש בתמונות המיקרו-CT ובחבילת תוכנת התמונה של RT כדי לתכנן פרוטוקול לטיפול בקרינה.
לנהל את הטיפול במשך שלושה ימים רצופים כדי לספק סך של 18 אפורים לגידול היעד. העכברים מוזרק בדרך כלל להדגים היווצרות צמיחה טרטומה ארבעה כדי eigth שבועות לאחר הזרקת תא הגידול כפי שאושר על ידי הדמיה bioluminescence. כאשר מוקרן עם מצטבר עושה של 18 אפור חודש לאחר משלוח התא הגידולים יתכווצו באופן דרמטי וכתוצאה מכך ירידה מקרית משמעותית אות luciferase.
חשוב לציין, כפי שתמונות אלה ממחישות, ביופסיות רקמות נורמליות שנקטפו חמישה מיליליטר מהאתר המוקרן אינן נראות כפוגשות נזק משמעותי. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה ברורה של איך ליצור תא גזע נגזר טרטומות ב vivo ולטפל בהם ביעילות ובבטחה עם קרינת קרן חיצונית. גישה פשוטה זו דורשת רכישה של תמונות CT ברזולוציה גבוהה של נושא שלאחריו ניתן לרשום סדרה של טיפולים קרן קרינה כדי לקרינה את הגידולים היעד, תוך הימנעות רקמה סמוכה.
אל תשכח כי עבודה עם קרינה יכול להיות מסוכן מאוד, כי אמצעי זהירות, כגון שימוש המגנים המתאימים, תמיד יש לנקוט בעת ביצוע הליך זה.
