Bu işlemin genel amacı, küçük hayvan dış ışın radyasyon tedavisinin in vivo etkinliğinin değerlendirilmesi için farelerde kök hücre kaynaklı teratomları seçici olarak hedeflemektir. Harici radyasyon ışını tedavisinin en büyük avantajı, sistemsel olarak yapılan tedavilerin hedef dışı yan etkilerinden kaçınan kök hücre ilişkili teramtomalar için hedeflenen bir tedavi olmasıdır. Dış ışın radyasyon terapisindeki gelişmeler, normal dokulara zarar vermemek için küçük teratomların özel hedeflemesini sağlayarak radyasyona duyarlı teratomların tedavisinde ideal hale getirilmiştir.
Bu yöntem sadece hücre tedavileri için optimize stratejileri içgörü sağlamak değil, aynı zamanda klinik insan tedavileri uygulanabilir olma potansiyeline sahiptir. IPSC'ler içeren altı kuyulu bir plaka alarak başlayın. İmmün yetmezlikli hayvanlarda tetratoma oluşumunu indüklemek için oda sıcaklığında beş dakikalık kuluçka için bir çift füzyon muhabiri gen ile transduced insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri içeren 6-iyi plaka iyi başına rekombinant hücre dissosiasyon enzim karışımı bir mililitre ekleyin.
Kuluçka sonunda borulama hücreleri dağıtmak ve her kuyuya hücre kültürü orta eşit hacimli ekleyerek enzimatik reaksiyonu durdurmak. Saymak için 15 mililitrelik konik bir tüpteki tek hücreli süspansiyonları çekin. Santrifüj tamamlandıktan sonra, supernatant aspire ve Matrigel matris çözeltisi 30 mikrolitre pelet resuspend ve buz üzerinde tüp yerleştirin.
Çift füzyon reportagen transfected hücreleri kullanıyorsanız, Bu çift pozitif etkiler hücreleri de matris 30 mikrolitre askıya alınmalıdır. Daha sonra, her hücre popülasyonunu 28,5 ölçü iğnesi ile donatılmış bir mililitreşşile yükleyip, anesteziye göre sekiz ila 10 haftalık atilik çıplak alıcı farede parmak ucurluğuna tepki eksikliğini doğrulayın. Daha sonra, subkutan her alıcı hayvanın dorsal kanadına bir hücre matris karışımı enjekte edin.
Aşılamadan sonra uygun deneysel zaman noktasında her alıcıya kilogram deluciferon intraperitoneally 375 miligram enjekte edin. 10 dakika görüntü sonra her anestezi muhabir sonda biyolüminesans sinyali standart biyolüminesans görüntüleme protokollerine göre, beş dakikalık aralıklarla bir dakika edinme pencereleri kullanarak 30 dakika boyunca hayvan enjekte. Teratom ışınlaması için, uygun deneysel zaman noktasında, ilk olarak bir görüntü güdümlü preklinik ışınlayıcının yatağına anestezili alıcı bir hayvan yerleştirin ve 40 pik kilovoltaj, 2 miliamper x-ışını kullanarak 360 derecenin üzerinde 400 projeksiyon mikro-bilgisayarlı tomografi görüntüleri elde edin ve görüntüyü 0,2 milimetrelik izotropik piksel boyutuyla hacimsel görüntülere yeniden dönüştürün.
Teratomların hacimsel görüntülerini yeniden oluşturmak çok önemlidir. Bu görüntüler, tedavinin sadece teratomlara özel olarak verilmesi için radyasyon tedavilerinin planlanmasına yardımcı olurken, çevre dokuların hedef dışı radyasyonunu en aza indirir. Sonra bir radyasyon tedavi protokolü planlamak için mikro-CT görüntüleri ve RT görüntü yazılım paketi kullanın.
Hedef tümöre toplam 18 gri vermek için tedaviyi üç gün üst üste uygulayın. Enjekte edilen fareler genellikle biyolüminesans görüntüleme ile doğrulanan tümör hücre enjeksiyonundan 4 ila eigth hafta sonra teratom büyüme oluşumunu gösterirler. Hücre doğumundan bir ay sonra kümülatif 18 gri ile ışınlandığında tümörler önemli ölçüde küçülerek luciferase sinyalinde önemli bir tesadüfi azalmaya neden olur.
Daha da önemlisi, bu görüntülerin de gösterdiği gibi, ışınlanmış bölgeden beş mililitre hasat edilen normal doku biyopsilerinin önemli bir hasara yol açmıyor. Bu videoyu izledikten sonra, kök hücre in vivo türetilmiş teratomlar oluşturmak ve etkili ve güvenli bir şekilde dış ışın radyasyonu ile tedavi etmek için nasıl net bir anlayışa sahip olmalıdır. Bu basit yaklaşım, bir konunun yüksek çözünürlüklü CT görüntülerinin elde edilmesi için bir dizi radyasyon ışını tedavisinin hedef tümörleri ışınlaması için reçete edilebildiği, komşu dokulardan kaçınılması nı gerektirir.
Radyasyonla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken uygun kalkanların kullanılması gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.
