L’objectif global de cette procédure est de cibler sélectivement les tératomes dérivés des cellules souches chez la souris pour l’évaluation de l’efficacité in vivo de la radiothérapie externe des petits faisceaux animaux. Le principal avantage de la radiothérapie externe est qu’il s’agit d’une thérapie ciblée pour les téramtomes associés aux cellules souches qui évite les effets indésirables hors cible des thérapies administrées de façon systémique. Les progrès de la radiothérapie externe ont permis le ciblage spécifique des petits tératomes tout en évitant les dommages aux tissus normaux, ce qui rend cette thérapie idéale pour le traitement des tératomes sensibles aux radiations.
Cette méthode peut non seulement fournir un aperçu de l’optimisation des stratégies pour les thérapies cellulaires, il a également le potentiel de devenir cliniquement applicable dans les thérapies humaines. Commencez par prendre une plaque de six puits contenant des iPSC. Pour induire la formation de tératome chez les animaux immunodéficients ajouter un millilitre de mélange d’enzymes de dissociation cellulaire recombinante par puits de la plaque de 6 puits contenant des cellules souches pluripotentes induites par l’homme transduced avec un gène de reporter de fusion double pour une incubation de cinq minutes à température ambiante.
À la fin de l’incubation disperser les cellules par pipetting et arrêter la réaction enzymatique en ajoutant un volume égal de milieu de culture cellulaire à chaque puits. Tirez les suspensions à cellule unique dans un tube conique de 15 millilitres pour le comptage. Une fois la centrifugation terminée, aspirez le supernatant et réutilisez la pastille dans 30 microlitres de la solution matricielle Matrigel et placez le tube sur la glace.
Si l’utilisation de cellules transfectées à double fusion reportagen, ces cellules à double effet positif devraient également être suspendues dans 30 microlitres de matrice. Ensuite, chargez chaque population cellulaire dans une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 28,5 et confirmez un manque de réponse au pincement des pieds dans chaque souris anesthésiée de huit à dix semaines. Ensuite, injectez subcutanément un mélange de matrice cellulaire dans le flanc dorsal de chaque animal receveur.
Au moment expérimental approprié après l’inoculation injecter 375 milligrammes par kilogramme de deluciféron intraperitoneally dans chaque destinataire. Après 10 minutes d’image, le signal de bioluminescence de chaque sonde de reporter anesthésiée a injecté de l’animal pendant 30 minutes à l’aide de fenêtres d’acquisition d’une minute à intervalles de cinq minutes, selon les protocoles standard d’imagerie par bioluminescence. Pour l’irradiation du tératome, au moment opportun, placez d’abord un animal receveur anesthésié sur le lit d’un irradiateur préclinique guidé par l’image et acquérez un ensemble de 400 images de tomographie micro-calculée de projection de plus de 360 degrés à l’aide d’un kilovoltage de pointe de 40 pics, d’un faisceau de rayons X de 2 milliamps et reconstruisez l’image en images volumétriques d’une taille de pixel istropique de 0,2 millimètre.
Il est essentiel de reconstruire les images volumétriques des tératomes. Ces images aideront à planifier les traitements de radiothérapie pour la livraison spécifique de la thérapie aux tératomes seulement, tout en minimisant tout rayonnement hors cible des tissus environnants. Utilisez ensuite les images micro-CT et le logiciel d’image RT pour planifier un protocole de radiothérapie.
Administrer le traitement pendant trois jours consécutifs pour livrer un total de 18 gris à la tumeur cible. Les souris injectées démontrent typiquement la formation de croissance de teratoma quatre à eigth semaines après injection de cellules de tumeur comme confirmé par la formation image de bioluminescence. Une fois irradié avec un fait cumulatif de 18 gris un mois après livraison de cellules les tumeurs rétréciront considérablement ayant pour résultat une diminution coïncidente significative du signal de luciferase.
Fait important, comme ces images l’illustrent, les biopsies normales des tissus récoltées cinq millilitres à partir du site irradié ne semblent pas subir de dommages importants. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une compréhension claire de la façon de créer des tératomes dérivés de cellules souches in vivo et de les traiter efficacement et en toute sécurité avec le rayonnement faisceau externe. Cette approche simple exige l’acquisition des images de CT à haute résolution d’un sujet après quoi une série de thérapies de faisceau de rayonnement pourraient être prescrites pour irradier les tumeurs cibles, tout en évitant le tissu adjacent.
N’oubliez pas que travailler avec les radiations peut être extrêmement dangereux et que des précautions, telles que l’utilisation des boucliers appropriés, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.
