חלבון קינאז C-דלתא מעכב פפטיד ניסוח באמצעות חלקיקי זהב

מערכת אספקת התרופות הייחודית שלנו, המשתמשת ב-20 חלקיקי זהב ננומטר בשני פפטידים קצרים ספציפיים, יכולה לייצב חלקיקי ננו זהב בת פתרון פיזיולוגי ולשפר את ספיגת התאים שלה, ובכך, לספק ביעילות תרופות מבוססות פפטיד או תרופות אחרות לתאים. ההיברידית פפטיד GNP שלנו קל לסנתז ויציב. באמצעות זהב ננו-חלקיקים פפטיד היברידית כמו נשאי סמים, אנחנו יכולים להעביר תרופות פפטיד לתוך התאים ביעילות בשפע.

טיפלנו בפגיעה אצ'מיה-reperfusion בריאות עם GNP שלנו / PKCi היברידית. GNP מביא פפטידים מעכבי PKC לתוך הציטופלסמה. שיטת מסירה זו הצליחה להפחית פגיעה חמורה יותר ריאות באמצעות מינון נמוך יותר של PKCi מאשר שיטות משלוח אחרות.

כדי להתחיל בהליך זה, לאחזר את הפפטידים ממקפיא במינוס 20 מעלות צלזיוס, ולהפשיר אותם בטמפרטורת החדר. השתמש בסולם מיקרו כדי לשקול 0.01 גרם של כל פפטיד מופשר, ולהעביר כל פפטיד לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר נפרד. הוסף 18.74 מיליליטר של מים deionized לצינור P2, ו 16.93 מיליליטר של מים deionized לצינור P4.

הוסף 8.21 מיליליטר של 50% אצטוניטריל מדולל במים deionized לצינור מעכבי הדלתא PKC. וורטקס פתרונות הפפטיד בקצרה. ואז למקם את הצינורות לתוך sonicator ב 40 מגה הרץ במשך חמש דקות.

לאחר מכן, להעביר את הפתרונות לארון biosafety. זה קריטי לשים את הצינור חרוט 50 מ"ל ב sonicator במשך חמש דקות. אם המערכת תדלג על שלב זה, ה- GNP/PKCi יתגבשו צבירה.

מעבירים מיליליטר אחד של כל פתרון פפטיד לצינור חרוט חדש של 50 מיליליטר. הוסף 19 מיליליטר של מים deionized לצינורות המכילים P2 ו P4. ולהוסיף 19 מיליליטר של 50% אצטוניטריל לצינור המכיל מעכבי דלתא PKC. הוסף 475 מיליליטר של פתרון P2, 25 מיקרוליטרים של פתרון P4, 500 מיקרוליטרים של פתרון מעכבי הדלתא PKC לצינור 15 מיליליטר.

לאחר מכן להוסיף תשעה מיליליטר של פתרון GNP 20 ננומטר לאותו צינור. הסר את הפתרון המשולב מן הארון biosafety ולעטוף את הצינור בנייר אלומיניום. מניחים את הצינור על שייקר לילה.

למחרת, תחזיר את הדגימות לארון הביו-בטיחות. העבר aliquots מיליליטר אחד של פתרון GNP / PKCi לתוך צינורות מיקרו 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה צינורות מיקרו במיקרו צנטריפוגה ב 15294 פעמים g וב ארבע מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.

מעבירים את צינורות המיקרו בחזרה לארון ה-biosafety, ומסירים את העל-טבעי מכל צינור, תוך הבטחה שכדור ה-GNP לא יופרע. תן מחדש כל גלולה בממס הרצוי על פי הריכוז הנדרש. כדי להעריך את המבודדות ההיברידית GNP/PKCi, יוצקים 0.5 מיליליטר של פתרון GNP/PKCi לקובטה צבירה.

מניחים את הקוט על ספקטרופוטומטר UV-Vis ולבדוק את ספיגת השיא. במחקר זה, מעכבי חלבון קינאז C-delta הוא מצומד עם חלקיקי זהב כדי ליצור GNP / PKCi היברידית. יש לדאוג עם הערכת המאפיינים הביופיזיים של היברידית, כמו חלקיקי זהב נוטים לצבור ממס.

כאשר הננו-חלקיקים מצטברים, צבע הפתרון ישתנה וריוד לסגול. הדגימות מנותחות עם ספקטרופוטומטר UV-Vis אשר מסוגל לזהות עם רמה גבוהה של רגישות. אם ההיברידי אינו מצטבר, שיא הספיגה צריך להיות ב 525 ננומטר.

אם ה-GNP יצטבר, שיא הספיגה יועבר ימינה. כפי שניתן לראות, כאשר נוצרו אגרגטים, הצפיפות האופטית דלתא פוחתת. בעת גיבוש היברידיות פפטיד GNP, חשוב לזכור את היחס בין פפטידים לפתרון GNP צריך להיות אחד עד תשע.

נוסחת GNP/PKCi זו יכולה לשמש לפגיעה בעיסכמיה במערכות איברים שאינן הריאה. כל פפטידים יכולים לצרף GNP אם פפטידים אלה יש שאריות ציסטאין ב N-terminus. משמעות הדבר היא GNP פפטיד היברידית ניתן להשתמש כדי להעביר תרופות פפטיד אחרים לתוך התא.

פפטידים שתוכננו באופן רציונלי הם טכנולוגיה חדשה שיכולה להביא אינטראקציה ספציפית בין חלבון לחלבון בתוך תאים אלה. טכניקה זו, שפותחה כאן, יכולה לשמש לאספקת תרופות פפטיד חדשות או לגרסאות מותאמות של תרופות קיימות.