20나노미터의 금 입자를 두 개의 특정 짧은 펩타이드에 사용하는 당사의 독특한 약물 전달 시스템은 생리용으로 금 나노 입자를 안정화하고 세포 섭취를 향상시켜 펩티드 기반 또는 기타 약물을 세포에 효과적으로 전달할 수 있습니다. 우리의 GNP 펩티드 하이브리드는 합성하기 쉽고 안정적입니다. 금 나노입자 펩타이드 하이브리드를 약물 운반체로 사용함으로써 펩티드 약물을 세포로 효과적이고 풍부하게 전달할 수 있습니다.
우리는 우리의 GNP / PKCi 하이브리드로 폐에 있는 허혈 재관류 상해를 취급했습니다. GNP는 세포질로 PKC 억제제 펩티드를 가져옵니다. 이러한 전달 방법은 다른 전달 방법보다 PKCi의 낮은 투여량을 사용하여 더 심한 폐 손상을 감소시킬 수 있었다.
이 절차를 시작하려면 냉동고에서 섭씨 영하 20도에서 펩티드를 회수하고 실온에서 해동하십시오. 마이크로 스케일을 사용하여 해동된 각 펩타이드의 0.01 그램을 계량하고 각 펩티드를 별도의 50 밀리리터 원내 튜브로 옮기는다. P2 튜브에 18.74 밀리리터의 탈이온된 물과 16.93밀리리터의 탈온화된 물을 P4 튜브에 넣습니다.
PKC 델타 억제제 튜브에 탈온화 물에 희석된 50%의 아세토닐트리어 8.21밀리리터를 추가합니다. 펩티드 솔루션을 간략하게 소용돌이시다. 그런 다음 튜브를 40 메가 헤르츠의 초음파 처리기에 5 분 동안 놓습니다.
그 후, 바이오 세이프티 캐비닛으로 솔루션을 전송합니다. 50mL 원상관을 5분 동안 초음파 처리기로 넣는 것이 중요합니다. 이 단계를 건너 뛰면 한나라당/PKCi가 집계를 형성할 것입니다.
각 펩티드 용액의 1밀리리터를 새로운 50밀리리터 원뿔 튜브로 옮기십시오. P2와 P4를 포함하는 튜브에 19 밀리리터의 탈온화된 물을 추가합니다. 그리고 PKC 델타 억제제가 들어 있는 튜브에 50%의 아세토닐릴 19밀리리터를 첨가한다. P2 용액 475밀리리터, P4 용액의 마이크로리터 25개, PKC 델타 억제제 용액 500마이크로리터를 15밀리리터 튜브에 추가합니다.
그런 다음 동일한 튜브에 20 나노미터 GNP 용액의 9 밀리리터를 추가합니다. 생물 안전 캐비닛에서 결합 된 용액을 제거하고 알루미늄 호일로 튜브를 감쌉니다. 하룻밤 동안 튜브를 셰이커에 놓습니다.
다음 날, 생물 안전 캐비닛에 샘플을 반환합니다. GNP/PKCi 용액의 밀리리터 알리쿼트 1개를 1.5밀리리터 마이크로 튜브로 옮기습니다. 마이크로 원심분리기의 마이크로 튜브를 15294g, 섭씨 4도에서 30분 동안 원심분리합니다.
마이크로 튜브를 생물 안전 캐비닛으로 다시 옮기고 각 튜브에서 슈퍼네텐트를 제거하면서 GNP 펠릿이 방해받지 않도록 합니다. 필요한 농도에 따라 원하는 용매에서 각 펠릿을 재연합니다. 한나라당/PKCi 하이브리드 용해도를 평가하기 위해 한나라당/PKCi 솔루션 0.5밀리리터를 누적 큐벳에 부었다.
UV-Vis 분광계에 큐벳을 놓고 피크 흡수를 테스트합니다. 이 연구에서는, 단백질 키나아제 C-델타 억제제는 GNP/PKCi 하이브리드를 형성하기 위하여 금 나노입자와 결합됩니다. 금 나노 입자가 용매로 집계되는 경향이 있기 때문에 하이브리드의 생물 학적 특성을 평가할 때주의를 기울여야합니다.
나노 입자가 집계되면 용액의 색상이 분홍색에서 보라색으로 변경됩니다. 샘플은 높은 수준의 감도로 감지할 수 있는 UV-Vis 분광계로 분석됩니다. 하이브리드가 집계되지 않으면 흡수의 피크는 525 나노미터여야 합니다.
한나라당이 집계되면 흡수의 절정이 오른쪽으로 이동하게 된다. 볼 수 있듯이, 골재가 형성되면 델타 광학 밀도가 감소합니다. 한나라당 펩타이드 하이브리드를 제조할 때, GNP 용액에 대한 펩티드의 비율을 기억하는 것이 중요하다.
이 GNP/PKCi 포뮬러는 폐 이외의 장기 시스템에서 허혈-재관류 손상에 사용될 수 있다. 그 펩티드가 N-종부에서 시스테인 잔류물이 있는 경우 모든 펩티드는 GNP에 부착할 수 있다. 즉, GNP 펩티드 하이브리드는 다른 펩티드 약물을 세포로 수송하는 데 사용될 수 있다.
합리적으로 설계된 펩타이드는 그 세포 안에 특정 단백질 단백질 상호 작용을 가져올 수 있는 새로운 기술입니다. 여기에서 개발된 이 기술은 새로운 펩티드 약물의 전달이나 기존 약물의 수정된 버전에 사용될 수 있다.
