Notre système unique d’administration de médicaments, qui utilise des particules d’or de 20 nanomètres dans deux peptides courts spécifiques, peut stabiliser les nanoparticules d’or dans la solution physiologique et améliorer son absorption cellulaire, et ainsi, livrer efficacement à base de peptide ou d’autres médicaments dans les cellules. Notre hybride peptidique PNB est facile à synthétiser et stable. En utilisant l’hybride peptide nanoparticule d’or comme porteurs de médicaments, nous pouvons transférer des médicaments peptidiques dans les cellules efficacement et en abondance.
Nous avons traité des dommages d’ischémie-reperfusion dans les poumons avec notre hybride de PNB/PKCi. Le PNB apporte des peptides inhibiteurs du PKC dans le cytoplasme. Cette méthode de livraison a pu réduire des dommages pulmonaires plus graves utilisant une dose inférieure de PKCi que d’autres méthodes d’accouchement.
Pour commencer cette procédure, récupérez les peptides d’un congélateur à moins 20 degrés Celsius et décongelez-les à température ambiante. Utilisez une micro balance pour peser 0,01 gramme de chaque peptide décongelé et transférez chaque peptide dans un tube conique séparé de 50 millilitres. Ajouter 18,74 millilitres d’eau déionisée au tube P2 et 16,93 millilitres d’eau déionisée au tube P4.
Ajouter 8,21 millilitres de 50% d’acétylonitrile dilués dans de l’eau déionisée au tube inhibiteur du delta du PKC. Vortex les solutions peptidique brièvement. Ensuite, placez les tubes dans un sonicator à 40 mégahertz pendant cinq minutes.
Après cela, transférez les solutions à une armoire de biosécurité. Il est essentiel de mettre le tube conique de 50 mL dans un sonicator pendant cinq minutes. Si cette étape est ignorée, le PNB/PKCi formera des agrégations.
Transférer un millilitre de chaque solution peptidique sur son nouveau tube conique de 50 millilitres. Ajouter 19 millilitres d’eau déionisée aux tubes contenant du P2 et du P4. Et ajouter 19 millilitres de 50% d’acétylonitrile au tube contenant inhibiteur du delta du PKC. Ajoutez 475 millilitres de la solution P2, 25 microlitres de la solution P4, 500 microlitres de la solution inhibiteur du delta du PKC à un tube de 15 millilitres.
Ajoutez ensuite neuf millilitres d’une solution PNB de 20 nanomètres au même tube. Retirez la solution combinée de l’armoire de biosécurité et enveloppez le tube dans du papier d’aluminium. Placer le tube sur un shaker toute la nuit.
Le lendemain, retournez les échantillons à l’armoire de biosécurité. Transférer un millilitre aliquots de la solution GNP/PKCi en micro tubes de 1,5 millilitre. Centrifuger les micro tubes à une micro centrifugeuse à 15294 fois g et à quatre degrés Celsius pendant 30 minutes.
Transférez les micro tubes dans l’armoire de biosécurité et retirez le supernatent de chaque tube, tout en veillant à ce que la pastille du PNB ne soit pas dérangée. Resuspendez chaque granulé dans le solvant désiré en fonction de la concentration requise. Pour évaluer la solubilité hybride PNP/PKCi, versez 0,5 millilitres de la solution PNP/PKCi dans une cuvette d’accumulation.
Placez la cuvette sur un spectrophotomètre UV-Vis et testez l’absorption maximale. Dans cette étude, l’inhibiteur de la protéine kinase C-delta est conjugué avec des nanoparticules d’or pour former un hybride PNP/PKCi. Il faut prendre soin d’évaluer les propriétés biophysiques de l’hybride, car les nanoparticules d’or ont tendance à s’agréger dans un solvant.
Lorsque les nanoparticules s’agrègent, la couleur de la solution passe du rose au violet. Les échantillons sont analysés avec un spectrophotomètre UV-Vis qui est capable de détecter avec un haut degré de sensibilité. Si l’hybride n’est pas agrégé, le pic d’absorption devrait être de 525 nanomètres.
Si le PNB est agrégé, le pic d’absorption sera déplacé vers la droite. Comme on peut le voir, lorsque les agrégats se sont formés, la densité optique delta diminue. Lors de la formulation des hybrides peptidiques PNB, il est important de se rappeler que le rapport peptides/solution PNB devrait être de un à neuf.
Cette formule PNP/PKCi peut être utilisée pour les lésions ischémiques-reperfusion dans les systèmes organiques autres que le poumon. Tous les peptides peuvent s’attacher au PNB si ces peptides ont un résidu de cystéine au N-terminus. Cela signifie que le peptide hybride PNB peut être utilisé pour transporter d’autres peptides dans la cellule.
Les peptides conçus rationnellement sont de nouvelles technologies qui peuvent apporter une interaction protéine-protéine spécifique à l’intérieur de ces cellules. Cette technique, développée ici, peut être utilisée pour la livraison de nouveaux peptides ou pour des versions modifiées de médicaments existants.
